Name: Opracowanie modelu myszy z przetoką ustno-nosową (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-08T14:25:00.000+00:00
Duration: 3 min 51 s
Description: Poznaj protokół tworzenia modelu myszy z przetoką ustno-nosową przy użyciu kauteryzacji okulistycznej. Ta metoda znacząco zmniejsza krwawienie podczas operacji, minimalizując ryzyko uduszenia i poprawiając dobrostan zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Program Badawczo-Rozwojowy, Zachodniochiński Szpital Stomatologii, Uniwersytet Sichuan (RD-02-202107), Program Wsparcia Nauki i Technologii Prowincji Sichuan (2022NSFSC0743) oraz grant Sichuan Postdoctoral Science Foundation (TB2022005) dla H. Huanga.

Wszystkie procedury na zwierzętach w tym badaniu zostały sprawdzone i zatwierdzone przez Komitet Etyczny Zachodniochińskiej Szkoły Stomatologii, Uniwersytetu Syczuańskiego. Do niniejszego badania wykorzystano dorosłe myszy C57BL/6 (samice).
1. Przygotowanie chirurgiczne
<ol>
	<li>Zbierz niezbędne narzędzia chirurgiczne do zabiegu: kiełkownik, kauteryzację okulistyczną, nożyczki mikrochirurgiczne, pęsety mikrochirurgiczne, strzykawki i igły (26 g x 0,63 cala) (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1A,B) (patrz tabela materiałów). 
	UWAGA: Przed zabiegiem chirurgicznym należy autoklawować narzędzia chirurgiczne, w tym kauteryzację okulistyczną, pęsetę mikrochirurgiczną i nożyczki mikrochirurgiczne, w temperaturze 102,9 kPa (1,05 kg/cm2) i temperaturze 121 °C przez 20 min.</li>
	<li>Zbierz potrzebne materiały chirurgiczne: obłożenia chirurgiczne, rękawiczki lateksowe, sterylną bawełnę, sterylne prześcieradła, sterylną folię metalową, płytę piankową jako platformę chirurgiczną, gumki (które można uzyskać, rozdzierając medyczną rękawicę lateksową) i taśmę (<silna klasa="xfig">Rysunek 1C) (patrz Tabela materiałów). 
	UWAGA: Do każdej myszy należy używać osobnego zestawu materiałów, w tym strzykawek i sterylnych arkuszy do użytku w polu operacyjnym.</li>
	<li>Oczyść obszar operacyjny i aparaturę (źródło światła, płytę piankową i urządzenie do utrzymywania temperatury, patrz Tabela materiałów) za pomocą chusteczek nasączonych alkoholem. Przykryj gałki i uchwyty narzędzi, które mogą być wymagane podczas zabiegu, sterylną folią metalową.</li>
	<li>W asepcie otwórz poszczególne narzędzia i ostrożnie umieść je w obszarze operacyjnym. Aktywuj kiełkownik (patrz Tabela materiałów) i światła do użycia podczas zabiegu. Umieścić kauteryzację okulistyczną w kiełkowniku i podgrzewać ją do 250 °C przez 20 minut.</li>
</ol>
2. Zabieg chirurgiczny
<ol>
	<li>Wykonaj unieruchomienie myszy i otwórz jamę ustną, wykonując poniższe czynności.
	<ol>
		<li>Wybierz suczkę myszy C57BL/6J o wadze 20-25 g i w wieku 8-12 tygodni. Trzymaj mysz przez 7 dni przed wykonaniem jakichkolwiek zabiegów.</li>
		<li>Znieczulić mysz przez dootrzewnowe wstrzyknięcie Zoletil50 (80 mg/kg) i ksylazyny (5 mg/kg) (patrz tabela materiałów). Nałóż maść okulistyczną na oko myszy. Poczekaj, aż nie będzie odpowiedzi na uszczypnięcie palca. 
		UWAGA: Mysz jest gotowa do zabiegu, gdy nie jest w stanie samodzielnie się obrócić.</li>
		<li>Przymocuj mysz do piankowej tablicy wyłożonej sterylnymi prześcieradłami. Użyj taśmy, aby przywiązać mysz do platformy chirurgicznej w pozycji leżącej na plecach (<silna klasa="xfig">Rysunek 2A).</li>
		<li>Otwórz jamę ustną myszy. Umieść dwie igły (26 g x 0,63 cala) przed płaszczyzną ucha oczodołu i dwie kolejne za nią. Umieść gumkę wokół igieł i skrzyżuj siekacze, aby usta były otwarte. Użyj pęsety mikrochirurgicznej, aby podeprzeć kąciki ust (<silna klasa="xfig">Ryc. 2B). 
		UWAGA: Upewnij się, że twarde podniebienie jest wyraźnie odsłonięte. Zamocuj język pod gumką, aby zapobiec zasłanianiu pola widzenia i poparzeniom podczas kolejnych eksperymentów.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Utwórz przetokę ustno-nosową (ONF) na podniebieniu twardym (<silna klasa="xfig">Ryc. 3A-F).
	<ol>
		<li>Pobrać kauteryzację okulistyczną, która była podgrzewana do 250 °C przez 20 minut. Umieść końcówkę kauteryzacyjną w odległości 1 mm od przecięcia linii środkowej podniebienia i linii pierwszego przedtrzonowca, tworząc pełnowymiarowe uszkodzenie błony śluzowej podniebienia twardego w linii środkowej. 
		UWAGA: Unikaj poparzenia języka myszy.</li>
		<li>Po kilku sekundach usuń kauteryzację okulistyczną, gdy błona śluzowa wokół końcówki kauterium zmieni kolor na biały.</li>
		<li>Umieścić kauteryzację okulistyczną w kiełkowniku i kontynuować podgrzewanie do temperatury 250 °C przez 10 minut. Powtórz poprzedni krok, aby powiększyć ranę wokół krawędzi, aż osiągnie długość 2,0 mm i szerokość 1,5 mm. 
		UWAGA: Każde przedłużenie powinno podążać za krawędzią ostatniego urazu. Użyj suwmiarki z noniuszem, aby zmierzyć długość i szerokość urazu. Uraz powinien obejmować 10% podniebienia.</li>
		<li>Użyj nożyczek mikrochirurgicznych, aby usunąć nadmiar zdenaturowanej tkanki miękkiej wokół rany. Używaj sterylnej bawełny, aby zatamować krwawienie i zapobiec uduszeniu wziewnemu myszy. Zmierz ranę, aby upewnić się, że tworzy uraz błony śluzowej twardego podniebienia o pełnej grubości o wymiarach 2,0 x 1,5 mm w linii środkowej.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Meloksykam należy podawać myszy w czasie wybudzenia pooperacyjnego, w dawce 5 mg/kg/d przez 3 dni, podskórnie29.</li>
	<li>Umieść mysz na urządzeniu do utrzymywania temperatury, aż całkowicie odzyska przytomność. 
	UWAGA: Upewnij się, że mysz jest ustawiona w sposób ułatwiający oddychanie. Obracaj myszy co 10-15 minut, aby zapobiec gromadzeniu się krwi lub zapadaniu się płatów płuc. Gdy mysz się rozgrzeje, włóż ją z powrotem do klatki. Na dnie klatki należy zapewnić sterylną galaretkę i napromieniowaną paszę, aby myszy mogły je spożywać.</li>
</ol>
4. Weryfikacja powstania przetoki ustno-nosowej
UWAGA: Powodzenie stworzenia przetoki ustno-nosowej (ONF) jest oceniane w 7 dniu po zabiegu chirurgicznym.
<ol>
	<li>Przygotuj niezbędne materiały chirurgiczne: gumkę, taśmę, strzykawki, obłożenia chirurgiczne, rękawiczki lateksowe, sterylne prześcieradła, sterylną folię metalową i płytę piankową.</li>
	<li>Nosić obłożenia chirurgiczne i sterylne rękawice, aby utrzymać warunki aseptyki. Zdezynfekuj płytę piankową, źródło światła i urządzenie do utrzymywania temperatury alkoholem.</li>
	<li>Wywołać znieczulenie ogólne przez dootrzewnowe wstrzyknięcie Zoletilu50 (80 mg/kg). Poczekaj, aż nie będzie reakcji na uszczypnięcie palca. Użyj tej samej metody, która została opisana w krokach 2.1.3 i 2.1.4, aby unieruchomić mysz i odsłonić twarde podniebienie.</li>
	<li>Przeprowadź anatomiczną weryfikację strukturalną, upewniając się, że przegroda jest nadal widoczna w miejscu rany, co wskazuje na pomyślne utworzenie ONF (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 4A, B).</li>
	<li>Przeprowadź weryfikację funkcjonalną: zamknij jamę ustną myszy i wstrzyknij sterylną wodę do jej jamy ustnej za pomocą sterylnej strzykawki. Pomyślne utworzenie ONF jest potwierdzone, gdy płyn wypływa z nozdrzy myszy.</li>
	<li>Umieść mysz na urządzeniu do utrzymywania temperatury (37 °C), aż całkowicie odzyska przytomność. Obracaj myszy co 10-15 minut, aby zapobiec gromadzeniu się krwi lub zapadaniu się płatów płuc.</li>
</ol>

Development of an Effective Mice Model for Studying Oronasal Fistulas

<ol><li>Alonso, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-layered+repair+with+a+collagen+membrane+and+a+mucosal+rotational+flap+reinforced+with+fibrine+for+palatal+fistula+closure+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pediatric+Otorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children.</a> International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679(2019).</li>
<li>Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+statistical+analysis+of+incidence%2C+etiology%2C+and+management+of+palatal+fistula%5BTitle%5D)+AND+%22National+Journal+of+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula.</a> National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).</li>
<li>Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+retrospective+analysis+of+incidence+and+management+of+palatal+fistula%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula.</a> Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+the+Chinese+Velopharyngeal+Insufficiency+Effects+on+Life+Outcomes+Instrument%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument.</a> Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Postoperative+Outcomes+in+Two+Cleft+Palate+Repair+Techniques+without+Relaxing+Incisions%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+late+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stomatology%2C+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403(2023).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Sommerlad-Furlow+modified+palatoplasty+technique%3A+postoperative+complications+and+implicating+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors.</a> Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cleft+Palate-Craniofacial+Journal%22%5BJournal%5D)">Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).</li>
<li>Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obturator+manufacturing+for+oronasal+fistula+after+cleft+palate+repair%3A+a+review+from+handicraft+to+the+application+of+digital+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Functional+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques.</a> Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251(2022).</li>
<li>Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propylene+mesh+versus+acrylic+resin+stent+for+palatal+wound+protection+following+free+gingival+graft+harvesting%3A+a+short-term+pilot+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Oral+Health%22%5BJournal%5D)">Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial.</a> BMC Oral Health. 21 (1), 208(2021).</li>
<li>Miron, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+fibrin+and+soft+tissue+wound+healing%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+B%3A+Reviews%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).</li>
<li>Ballestas, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+hard+palate+wound+healing+using+immune+modulatory+autotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies.</a> Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).</li>
<li>Ferreira, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+stimulation+enhances+early+palatal+wound+healing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice.</a> Archives of Oral Biology. 122, 105028(2021).</li>
<li>Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+Biomarkers+for+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Biology and Biomarkers for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Additive+Manufacturing+of+a+Superlight+Obturator+for+Large+Oronasal+Fistula+in+Pediatric+Patient%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient.</a> Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).</li>
<li>Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+healing+process+of+palatal+tissues+after+palatal+surgery+with+and+without+implantation+of+membranes%3A+an+experimental+study+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Science%3A+Materials+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs.</a> Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).</li>
<li>In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+wound+contraction+after+palatal+surgery+and+implantation+of+poly-%28L-lactic%29+acid+membranes+in+beagle+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).</li>
<li>Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+carbonated+drink+on+excisional+palatal+wound+healing%3A+A+study+on+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats.</a> Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).</li>
<li>Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dimethyloxalylglycine+on+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Oral+Health%22%5BJournal%5D)">Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model.</a> BMC Oral Health. 15 (1), 60(2015).</li>
<li>Kirschner, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+oronasal+fistulae+with+acellular+dermal+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).</li>
<li>Rohleder, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+oronasal+fistulae+by+interposition+of+multilayered+amniotic+membrane+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).</li>
<li>Kesting, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+oronasal+fistulas+with+human+amniotic+membrane+in+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs.</a> British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).</li>
<li>Ayvazyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-gelatin+scaffold+impregnated+with+bFGF+accelerates+palatal+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs.</a> Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).</li>
<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li>
<li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li>
<li>Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+humanized+mouse+models+for+studying+human+NK+cells+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease.</a> Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).</li>
<li>Keswani, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+salivary+vascular+endothelial+growth+factor+%28VEGF%29+in+palatal+mucosal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).</li>
<li>Amanso, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+delivery+of+FTY720+induces+neutrophil+activation+through+chemokine+signaling+in+an+oronasal+fistula+model%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Engineering+and+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model.</a> Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).</li>
<li>Antiorio, A. T. F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+meloxicam+to+improve+the+welfare+of+mice+in+research%3A+a+systematic+review+%282000+-+2020%29%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 - 2020).</a> Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Naukowcy badali różne materiały, leki i nowatorskie techniki leczenia ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Wraz z postępem w procedurach chirurgicznych zmniejszyła się częstość występowania i nawroty ONF. Jednak ze względu na unikalną charakterystykę choroby, liczb...

Przetoka ustna (ONF), nieprawidłowy otwór między jamą ustną a nosową, klinicznie objawia się jako defekt w obszarze strukturalnym od wyrostka zębodołowego do języczka, który często występuje jako powikłanie po naprawie rozszczepu podniebienia1. Pacjenci z ONF doświadczają refluksu pokarmowego, zaburzeń artykulacji i upośledzenia funkcji gardła, co znacząco wpływa na jakość ich życia2,3,4. Częstość pooperacyjnych ONF waha się od 2,4% do 55% ze względu na takie czynniki, jak szerokość rozszczepu, typ Veau i metoda chirurgiczna5,6,7,8. Ponadto wskaźnik nawrotów po naprawie ONF jest wysoki i wynosi od 0% do 43%9.
Kilka nowatorskich metod leczenia okazało się ostatnio obiecujących w dziedzinie ONF, w tym różne materiały, leki i nowatorskie techniki10,11,12,13,14,15,16,17. Dokładna ocena efektów terapeutycznych jest niezbędna, ponieważ stanowi podstawę do wyboru i dalszego rozwoju terapii ONF. Jednak uzyskanie w krótkim okresie prawidłowej oceny efektów terapeutycznych innych niż chirurgiczne jest trudne, ponieważ charakterystyka ONF różni się u różnych pacjentów. W związku z tym konieczne jest ustalenie modelu choroby ONF w celu zweryfikowania skuteczności tych metod leczenia.
Przez kilka dziesięcioleci badacze tworzyli model przetoki ustno-nosowej (ONF) u różnych gatunków zwierząt, w tym szczurów18,19, prosięta20,21, minipigs22 oraz psy23, ponieważ gatunki te posiadają pokaźne podniebienie twarde nadające się do manipulacji chirurgicznej. Jednak myszy mają sekwencję genetyczną i cały genom podobny do ludzkiego, co czyni je ważnym modelem do badań i opracowywania nowych leków24,25,26. Co więcej, myszy oferują niewielką zmienność między partiami, co czyni je korzystnym wyborem do ustanowienia modelu ONF12,13,27.
Jednak szczegółowe kroki tworzenia ONF nie zostały opisane, a stabilność rozmiaru ONF nie została wzięta pod uwagę. Dodatkowo, weryfikacja powstawania ONF opierała się wyłącznie na obserwacji28, bez zapewnienia bezpośredniej komunikacji między jamą ustną a nosową. Nie wykazano tego za pomocą innych środków, takich jak utrata masy ciała myszy z powodu trudności w jedzeniu spowodowanych przez ONF. Ponadto nie uwzględniono normalnej zmienności wielkości rany, co ma kluczowe znaczenie dla badań nad lekami lub materiałami, które wspomagają lub hamują gojenie się ran. W związku z tym istnieje silna potrzeba ustanowienia stabilnego i zwalidowanego modelu ONF.
Celem tego badania było opracowanie praktycznego modelu ONF, który rozwiązuje wyżej wymienione problemy, z nadzieją, że ten protokół posłuży jako podstawa do przyszłych badań nad mechanizmami gojenia się ran podniebienia i nowymi metodami leczenia ONF.

<table><tbody><tr>Nauka o <td>mikroskopii</td><td>elektronowej kiełków&nbsp;</td><td>66118-20</td><td>Sprzęt do ogrzewania i dezynfekcji</td></tr><tr><td>Rękawice lateksowe</td><td>Allmed</td><td></td><td>lub podobne</td></tr><tr><td>Światła</td><td>Olympus</td><td>A1813</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-B0261</td><td>zgniecione; 5 mg/kg</td></tr><tr><td>Narzędzia mikrochirurgiczne (nożyczki i pęseta)</td> <td>Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.</td><td>M-Y-0087</td><td>Instrument chirurgiczny</td></tr><tr><td>Okulistyczne kauteryzacje</td><td>Suqian Wenchong Medical Equipment Co.</td><td>1.00234E + 13</td><td>Instrument chirurgiczny</td></tr><tr><td>Sterylna bawełna,</td> <td>Yancheng Begu Technology Co.</td><td></td><td>lub podobne</td></tr><tr><td>Sterylna folia metalowa</td><td>Biosharp</td><td></td><td>lub podobne</td></tr><tr><td>Sterylne arkusze</td><td>3M</td><td>XH003801129</td><td>lub podobne</td></tr><tr><td>Serwety chirurgiczne</td><td>Yancheng Begu Technology Co.</td><td></td><td>lub podobne</td></tr><tr><td>strzykawki</td><td>Yancheng Begu Technology Co.</td><td>S-015301</td><td>lub podobny</td></tr><tr><td>Taśma</td><td>Bkmamlab</td><td></td><td>lub podobne</td></tr><tr><td>urządzenie do utrzymywania temperatury</td><td>Aparatura Harvarda&nbsp;</td><td>LE-13-2104</td><td></td></tr><tr><td>Zoletil50</td><td>Virbac</td><td></td><td>80 mg/kg</td></tr></tbody></table>

opracowanie modelu myszy z przetoką ustno-nosową

Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model

To badanie przedstawia metodę wykorzystującą podgrzewaną kauteryzację okulistyczną do opracowania realnego modelu do badania przetok ustnych. Myszy C57BL/6 wykorzystano do ustalenia modelu przetoki ustnej nosowej (ONF). Aby stworzyć ONF, myszy zostały znieczulone, unieruchomione, a ich twarde podniebienia zostały odsłonięte. Podczas zabiegu chirurgicznego za pomocą kauteryzacji okulistycznej wywołano uszkodzenie błony śluzowej o wymiarach 2,0 x 1,5 mm pełnej grubości w linii środkowej podniebienia twardego. Kluczowe było kontrolowanie wielkości ONF i minimalizowanie krwawienia, aby zapewnić sukces eksperymentu. Weryfikacja skuteczności modelu ONF została przeprowadzona w 7. dobie po operacji, obejmując zarówno ocenę anatomiczną, jak i funkcjonalną. Obecność przegrody nosowej w obrębie jamy ustnej oraz odpływ sterylnej wody z nozdrzy po wstrzyknięciu do jamy ustnej potwierdziły pomyślne ustalenie modelu ONF. Model wykazał praktyczną i udaną przetokę ustno-nosową, charakteryzującą się niską śmiertelnością, znacznymi zmianami masy ciała i minimalną zmiennością wielkości ONF. Przyszłe badania mogą rozważyć przyjęcie tej metodologii w celu wyjaśnienia mechanizmów gojenia się ran podniebienia i zbadania nowych metod leczenia przetok ustno-nosowych.

W celu oceny wykonalności i stabilności tej metody eksperymentalnej, tę samą procedurę przeprowadzono na dziesięciu myszach, a następnie dokonano obserwacji dotyczących śmiertelności, zmian w wielkości rany, masy ciała oraz analizy histologicznej. Myszy uśmiercono w 7. dniu.
Procedura ta charakteryzowała się niskim wskaźnikiem śmiertelności. Kluczowymi instrumentami wykorzystanymi w tym eksperymencie były kauteryzator okulistyczny oraz germinator, przedstawione na Ryc. 1A<...

Ten artykuł przedstawia krok po kroku procedurę tworzenia modelu myszy z przetoką ustno-nosową. Przetoka ustno-nosowa została utworzona przez zastosowanie podgrzanej kauteryzacji okulistycznej w celu uszkodzenia środkowej części podniebienia twardego, co spowodowało powstanie otworu między jamą ustną a nosową.

Opracowanie modelu myszy z przetoką ustno-nosową

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used ...

Nasze badania skupiły się na tym, jak ustalić stabilny i standaryzowany mysi model przetoki ustno-nosowej. Protokół ten wykazał również zmiany masy ciała, wszystkie zmiany wielkości oraz cechy histologiczne tworzenia się przetoki ustno-nosowej. Obecne eksperymentalne zmiany w tworzeniu modeli przetok ustnych nosowych to śmiertelność myszy z powodu uduszenia lub utraty krwi, a także standaryzacja wielkości rany.Nasz protokół znacznie zmniejsza ilość krwawienia u myszy podczas operacji, w porównaniu z tradycyjnym stosowaniem stempla biopsyjnego. Zmniejsza to ryzyko uduszenia się z powodu silnego krwawienia. Dodatkowo nasza metoda eksperymentalna jest również prostsza i mniej wrażliwa technicznie.Nasze przyszłe badania mają na celu skupienie się na obserwacji reakcji zapalnej podczas tworzenia się przetoki ustno-nosowej. Planujemy również opracowanie nowatorskich strategii zmniejszania reakcji zapalnej przy jednoczesnym wspomaganiu gojenia się ran podniebienia w celu zmniejszenia częstości występowania przetoki ustno-nosowej. Zacznij od przymocowania znieczulonej samicy myszy do piankowej deski pokrytej sterylnymi prześcieradłami.Następnie ostrożnie przyklej mysz w pozycji leżącej na plecach do platformy chirurgicznej. Umieść dwie igły przed płaszczyzną ucha oczodołowego. Umieść za nim jeszcze dwie igły.Następnie umieść gumkę wokół igieł i skrzyżuj siekacze, aby utrzymać otwarte usta. Użyj pęsety mikrochirurgicznej, aby podeprzeć kąciki ust. Przystąp do pobierania podgrzanej kauteryzacji okulistycznej.Teraz umieść końcówkę kauteryzacyjną jeden milimetr od przecięcia linii środkowej podniebienia i pierwszego przedtrzonowca, aby stworzyć pełnowymiarowe uszkodzenie błony śluzowej podniebienia twardego. Usuń kauteryzację, gdy błona śluzowa wokół końcówki zmieni kolor na biały. Podgrzej kauteryzację okulistyczną do 250 stopni Celsjusza w kiełkowniku przez 10 minut.Następnie umieść go na podniebieniu twardym i powiększ ranę wokół krawędzi. Na koniec użyj nożyczek mikrochirurgicznych, aby wyciąć nadmiar zdenaturowanej tkanki miękkiej otaczającej ranę. Następnie nałóż sterylną bawełnę, aby zatrzymać krwawienie i zapobiec uduszeniu wziewnemu myszy.Zauważalną zmienność zaobserwowano w wielkości generowanej przetoki ustno-nosowej. Rozmiar rany wykazywał znaczne odchylenia w siódmym dniu po operacji. Znaczne zmniejszenie masy ciała myszy zaobserwowano również w siódmym dniu, czyli około 25%Analiza histologiczna przetoki ustnej nosa wykazała utratę błony śluzowej podniebienia twardego, obnażoną kość i tworzenie się przetoki ustno-nosowej.

establishment-of-an-oronasal-fistula-mice-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film demonstruje elektrofizjologiczny zapis węchowych neuronów czuciowych (OSN) u myszy przy użyciu techniki perforowanego patch-clamp. Nabłonek węchowy, zawierający OSN z receptorami zapachowymi znakowanymi fluoroforem, jest izolowany od myszy i umieszczany w komorze rejestracyjnej. Pipeta rejestrująca jest zaciśnięta na dendrytycznym pokrętle OSN, a nystatyna w pipecie perforuje membranę, tworząc połączenie elektryczne z komórką. Na koniec za pomocą kolejnej pipety dostarcza się...

Perforowany zapis węchowych neuronów czuciowych u myszy

Mysi model ludzkiej endoskopowej rekonstrukcji podstawy czaszki został opracowany, który tworzy półprzepuszczalny interfejs między mózgiem a nosem za pomocą przeszczepów błony śluzowej nosa. Metoda ta pozwala naukowcom badać dostarczanie do ośrodkowego układu nerwowego leków o dużej masie cząsteczkowej, które w przeciwnym razie są wykluczane przez barierę krew-mózg, gdy są podawane ogólnoustrojowo.

Heterotopowa procedura wszczepienia błony śluzowej w celu bezpośredniego dostarczania leku do mózgu u myszy

Prezentujemy protokół chirurgiczny szczegółowo opisujący, jak wykonać aksotomię cięcia lub zgniecenia nerwu twarzowego u myszy. Akskotomia nerwu twarzowego może być wykorzystana do badania fizjologicznej reakcji na uszkodzenie nerwu i testowania technik terapeutycznych.

Aksotomia nerwu twarzowego u myszy: model do badania reakcji neuronów ruchowych na uraz

Tutaj tworzymy nowatorski szczurzy model zakrzepicy zatoki strzałkowej (SSS) metodą Sprague'a-Dawleya (SD) za pomocą metody embolizacji nici, a stabilność i niezawodność modelu zostały zweryfikowane.<br...

Ustalenie szczurzego modelu niedrożności zatoki strzałkowej górnej za pomocą metody zatorowości gwintowanej

Ten protokół krok po kroku pokazuje, jak wydobyć pierwszy ząb trzonowy żuchwy u myszy. Stanowi alternatywną metodę dla badaczy zajmujących się gojeniem i regeneracją kości szczęki.

Opracowanie modelu gojenia zębodołu po ekstrakcji zębów trzonowych żuchwy u myszy

Ten protokół demonstruje unikalny model udaru myszy ze średniej wielkości zawałem i doskonałym wskaźnikiem przeżycia. Model ten pozwala przedklinicznym badaczom zajmującym się udarem mózgu wydłużyć czas trwania niedokrwienia, wykorzystać starzejące się myszy i ocenić długoterminowe wyniki funkcjonalne.

Zmodyfikowany przezczaszkowy model niedrożności tętnicy środkowej mózgu do badania wyników udaru u starszych myszy

Ten protokół przedstawia ustanowienie i potwierdzenie modelu poporodowego przeciążenia objętości prawej komory (VO) u myszy z przetoką tętniczo-żylną brzuszną (AVF), który może być zastosowany do zbadania, jak VO przyczynia się do rozwoju serca po urodzeniu.

Ustalenie i potwierdzenie pourodzeniowego mysiego modelu przeciążenia objętości prawej komory

Celem tego protokołu jest stworzenie modelu zwłóknienia mięśni ustno-twarzowych. Porównanie histologii między żwaczem myszy a mięśniem piszczelowym przednim po urazie spowodowanym zamarznięciem potwierdziło zwłóknienie mięśni żwaczy. Model ten ułatwi dalsze badania nad mechanizmem leżącym u podstaw zwłóknienia mięśni ustno-twarzowych.

Zamrożenie urazu mięśnia żwacza myszy w celu ustalenia modelu zwłóknienia mięśni ustno-twarzowych

Ten artykuł przedstawia uproszczony protokół tworzenia modelu zapalenia miazgi u myszy za pomocą innowacyjnego knebla ustnego, po którym następuje analiza histologiczna.

Opracowanie modelu ekspozycji miazgi mysiej z nowatorskim kneblem do badań nad zapaleniem miazgi

Badanie to ustanowiło modele kaszlu i kichania u myszy poprzez zastosowanie specyficznych bodźców do tchawicy i jamy nosowej oraz opracowało metodę opartą na dźwięku do rozróżniania kaszlu od kichania myszy poprzez analizę różnic w ich sygnałach akustycznych.<br...

Precyzyjna indukcja i rozróżnienie odruchów kaszlu i kichania u myszy

Poznaj protokół tworzenia modelu myszy z przetoką ustno-nosową przy użyciu kauteryzacji okulistycznej. Ta metoda znacząco zmniejsza krwawienie podczas operacji, minimalizując ryzyko uduszenia i poprawiając dobrostan zwierząt.

Opracowanie modelu myszy z przetoką ustno-nosową

Przeglądaj więcej filmów