Name: Wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków małocząsteczkowych w kierunku zaburzeń snu związanych z wiekiem przy użyciu Drosophila melanogaster (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-20T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Dowiedz się o wysokoprzepustowym badaniu przesiewowym leków na zaburzenia snu związane z wiekiem przy użyciu Drosophila melanogaster. Ta metoda zwiększa dokładność pomiaru snu i upraszcza procedury operacyjne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy członkom laboratorium prof. Junhai Hana za dyskusję i komentarze. Prace te były wspierane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin 32170970 do Y.T oraz "Cyanine Blue Project" z prowincji Jiangsu do Z.C.Z.

Ten protokół wykorzystuje 30-dniowe muchy w1118 z Bloomington Drosophila Stock Center (BDSC_3605, zobacz Tabelę Materiałów).
1. Przygotowanie dojrzałych muszek owocowych
<ol>
	<li>Przygotowywanie posiłków
	<ol>
		<li>Przygotuj standardowe podłoże do hodowli skrobi kukurydzianej, mieszając 50 g/l płatków kukurydzianych, 110 g/l cukru, 5 g/l agaru i 25 g/l drożdży. Podgrzej płatki kukurydziane i drożdże z wodą do żelatynizacji, a następnie całkowicie rozpuść wszystkie substancje.</li>
		<li>Gdy podłoże ostygnie do 50-60 °C, dodaj 6 ml/l kwasu propionowego i natychmiast zapakuj je do butelek hodowlanych.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Hodowla much i przygotowanie dojrzałych much
	<ol>
		<li>Hoduj szczep muchy w1118 w butelkach zawierających standardowe podłoże do hodowli skrobi kukurydzianej i umieść butelki w inkubatorze o stałej temperaturze w temperaturze 25 ° C, wilgotności względnej 68%, warunkach oświetleniowych 500-1000 luksów i cyklu 12 h: 12 h światło: ciemność.</li>
		<li>Przenieś muchy do nowej butelki co 7 dni zgodnie z cyklem wzrostu much, utrzymując stały wiek osobników w tej samej butelce.</li>
		<li>Zbierz nową partię much, które wykluwają się z oryginalnej butelki 3 dni po ich przeniesieniu i włóż je do nowej butelki. Zgodnie z zasadą wymiany butelki co 7 dni, będą one hodowane do około 30 dnia życia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Przygotowanie żywności leczniczej i szklanych probówek do monitorowania
UWAGA: Procedura przygotowania szklanej rurki jest zgodna z pracami Jin et al. z modyfikacjami34.
<ol>
	<li>Czyszczenie i suszenie rurek szklanych
	<ol>
		<li>Umieść szklaną rurkę (o średnicy 5 mm x długości 65 mm, patrz tabela materiałów) w dużej zlewce, namocz ją i gotuj w wodzie podwójnie destylowanej przez 20 minut. Powtórz 3 razy.</li>
		<li>Wyjmij i zwiń szklaną rurkę, spłucz wnętrze podwójnie destylowaną wodą 3-5 razy i wstaw do piekarnika do wyschnięcia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie prostej pożywki hodowlanej (100 ml)
	<ol>
		<li>Rozpuść 1,5 g agaru i 5 g sacharozy w podwójnie destylowanej wodzie, podgrzej i zagęść do 100 ml.</li>
		<li>Dodać 600 μl kwasu propionowego, gdy podłoże ostygnie do około 70 °C, zapobiegając jego zestaleniu się przy użyciu łaźni wodnej o stałej temperaturze.</li>
		<li>Dodać około 4 ml prostej pożywki i rezerpiny (patrz tabela materiałów) do małej zlewki o pojemności 10 ml, aż lek osiągnie 20 μM lub 50 μM. Dodać dimetylosulfotlenek (DMSO) do stężenia 0,2% w ujemnej grupie kontrolnej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie szklanych probówek zawierających lek
	<ol>
		<li>Aby ułatwić przepływ pożywki, ostrożnie włożyć szklaną rurkę o odpowiedniej długości do małej zlewki. Medium w naturalny sposób dostanie się do szklanej rurki pod wpływem ciśnienia atmosferycznego.</li>
		<li>Wyciągnąć szklaną probówkę, gdy pożywka hodowlana jest całkowicie zestalona i wytrzeć zewnętrzną ściankę, aby uzyskać szklaną probówkę monitorującą z pożywką hodowlaną zawierającą leki na jednym końcu.</li>
		<li>Podgrzać stałą parafinę w zlewce, aż się rozpuści w temperaturze 70 °C, umieścić koniec szklanej rurki blisko żywności w cieczy parafinowej na około 5 mm i szybko ją usunąć. Poczekaj, aż parafina stwardnieje, aby uszczelnić koniec szklanej rurki z żywnością.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Projekt eksperymentalny i leczenie muchy
<ol>
	<li>Zaplanować doświadczenie dotyczące leczenia much, postępując zgodnie z tabelą 1.</li>
</ol>
4. Montaż Drosophila i monitorowanie snu
UWAGA: Procedura składania Drosophila jest zgodna z pracami Jin et al.34 z modyfikacjami.
<ol>
	<li>Znieczulij muchy gazem CO2 , umieść je w szklanych rurkach uszczelnionych parafiną (po jednej na tubkę) i zablokuj koniec niespożywczy chłonnym wacikiem, aby zapobiec ucieczce much i zapewnić cyrkulację powietrza.</li>
	<li>Załaduj lampy na monitor podczerwieni w celu ich monitorowania.
	<ol>
		<li>Zmontuj szklane probówki zawierające muchy na monitorze podczerwieni w tym samym kierunku i zapisz numer monitora i numer otworu odpowiadające każdemu lekowi.</li>
		<li>Dostosuj wyrównanie każdej rurki i spraw, aby promienie podczerwone przechodziły pionowo przez środek zakresu aktywności muchy.</li>
		<li>Umieść monitor w inkubatorze o temperaturze 25 °C znajdującym się w ciemni do spania muchy, zgodnie z określonymi ustawieniami: temperatura 25 °C, Zeitgeber 12 (ZT12) (odpowiednik czasu lokalnego 20:00) i ZT24 (odpowiednik czasu lokalnego 08:00). Taka konfiguracja zapewnia, że muchy doświadczają naprzemiennych okresów 12 godzin światła i ciemności. 
		UWAGA: Staraj się nie otwierać drzwi, dopóki nie zakończy się zbieranie danych z monitorowania, aby utrzymać stabilne środowisko w inkubatorze podczas monitorowania.</li>
		<li>Rozpocznij monitorowanie za pomocą systemu DAM2 (patrz Tabela materiałów).</li>
		<li>Po zakończeniu monitorowania należy pobrać zebrane dane w .txt formacie z systemu.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Przetwarzanie danych
UWAGA: Przetwarzanie danych za pomocą systemu DAM, DAMFileScan107 i SCAMP zostało przeprowadzone zgodnie z instrukcjami na ich oficjalnych stronach internetowych (patrz Tabela materiałów).
<ol>
	<li>Zaimportuj powyższy plik txt do oprogramowania DAMFileScan107 w celu skanowania i podziel go zgodnie z potrzebami, aby uzyskać dane dotyczące snu.
	<ol>
		<li>Ustaw czas rozpoczęcia danych segmentacji na 8:01 (1 min segmentacji) lub 8:00 (30 min segmentacji) trzeciego ranka po uruchomieniu monitorów, a czas zakończenia to 8:00 trzy dni po czasie rozpoczęcia (Rysunek 2A1). 
		UWAGA: Muchy muszą przystosować się do środowiska monitorowania przez co najmniej jeden dzień. Można więc ustawić czas rozpoczęcia podzielonego danych na 8 rano trzeciego dnia po uruchomieniu monitora.</li>
		<li>Podziel dane w odstępach 1 minuty i 30 minut. Zmień opcję "Długość kosza" na 1 minutę, zmień opcję "Typ pliku wyjściowego" na Pliki kanałów, zmień nazwę i wyjście. Metoda 30-minutowej segmentacji danych jest taka sama jak powyżej (<silna klasa="xfig">Rysunek 2A2-5). 
		UWAGA: Podczas wykonywania segmentacji danych w odstępach 1 min i 30 min, ostateczna zmiana nazw obu plików powinna być spójna; w przeciwnym razie może być nieczytelny podczas późniejszego przetwarzania Matlaba. W razie potrzeby nazwa pliku może zostać zmieniona po wydrukowaniu, aby ułatwić rozróżnienie.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przetwarzanie danych za pomocą SCAMP2020
	<ol>
		<li>Otwórz pakiet programu SCAMP2020 w Matlabie i kliknij dwukrotnie Vecsey Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program (SCAMP) (Rysunek 2B).</li>
		<li>Dodaj jego podfolder "Vecsey SCAMP Scripts" do ścieżki, znajdź plik "scamp.m" w tym folderze i uruchom go. W następnym wyskakującym oknie wybierz kolejno foldery procesu 1 min i 30 min (Rysunek 2C,D).</li>
		<li>Wybierz monitor, kliknij Załaduj poszczególne wykresy do podglądu (Rysunek 3A1) i sprawdź obraz, który się pojawi. Odznacz odpowiedni kanał martwych much (Rysunek 3A2, <silna klasa="xfig">Rysunek 3B).</li>
		<li>Powtórz powyższe kroki, aby sprawdzić wszystkie monitory.</li>
		<li>Zmień nazwę każdego kanału w każdym monitorze w oparciu o odpowiedni lek, który ma być testowany (<silna klasa = "xfig" > Rysunek 3A3), wybierz wszystkie monitory i kliknij ANALIZUJ wybrane dane do analizy (<silna klasa = "xfig"> Rysunek 3A4).</li>
		<li>Domyślnie wybierz wybraną opcję, kliknij Analizuj dla wybranego kosza, zaznacz Eksportuj dane, a na koniec kliknij WYKRES 30 min Typy danych dla wszystkich dni dla wybranych grup i EKSPORTUJ wszystkie dane, aby wyświetlić wyniki (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 3C).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wybierz plik o nazwie s30 z pliku CSV, znajdź odpowiednią wartość średnią i dane błędu standardowego dla każdego monitora, wykonaj jego kopię zapasową w programie Excel w celu modyfikacji i regulacji, a następnie wklej go do GraphPad Prism (patrz tabela materiałów), aby narysować diagram stanu uśpienia (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 4A,B).</li>
	<li>Znajdź plik o nazwie "stdur" i oblicz średnie wartości snu dziennego, nocnego i całkowitego dla każdej muchy w ciągu trzech dni (<silna klasa="xfig">Rysunek 4A,C). Wklej dane do oprogramowania Prism, aby wykonać test różnicowy i narysować wykres.</li>
</ol>

Advancing Sleep Disorder Treatments: A Drosophila-Based Screening Approach

<ol><li>Le Bon, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+REM+and+NREM+in+the+NREM-REM+sleep+cycle%3A+a+review+on+competing+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine%22%5BJournal%5D)">Relationships between REM and NREM in the NREM-REM sleep cycle: a review on competing concepts.</a> Sleep Medicine. 70, 6-16 (2020).</li>
<li>Krueger, J. M., Frank, M. G., Wisor, J. P., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+function%3A+Toward+elucidating+an+enigma%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sleep function: Toward elucidating an enigma.</a> Sleep Medicine Reviews. 28, 46-54 (2016).</li>
<li>Ohayon, M. M., Carskadon, M. A., Guilleminault, C., Vitiello, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+quantitative+sleep+parameters+from+childhood+to+old+age+in+healthy+individuals%3A+developing+normative+sleep+values+across+the+human+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of quantitative sleep parameters from childhood to old age in healthy individuals: developing normative sleep values across the human lifespan.</a> Sleep. 27 (7), 1255-1273 (2004).</li>
<li>Li, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperexcitable+arousal+circuits+drive+sleep+instability+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hyperexcitable arousal circuits drive sleep instability during aging.</a> Science. 375 (6583), eabh3021(2022).</li>
<li>Rodriguez, J. C., Dzierzewski, J. M., Alessi, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+problems+in+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Sleep problems in the elderly.</a> Medical Clinics of North America. 99 (2), 431-439 (2015).</li>
<li>Gulia, K. K., Kumar, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disorders+in+the+elderly%3A+a+growing+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Psychogeriatrics%22%5BJournal%5D)">Sleep disorders in the elderly: a growing challenge.</a> Psychogeriatrics. 18 (3), 155-165 (2018).</li>
<li>Wolkove, N., Elkholy, O., Baltzan, M., Palayew, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+and+aging%3A+1.+Sleep+disorders+commonly+found+in+older+people%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Medical+Association+Journal%22%5BJournal%5D)">Sleep and aging: 1. Sleep disorders commonly found in older people.</a> Canadian Medical Association Journal. 176 (9), 1299-1304 (2007).</li>
<li>Suzuki, K., Miyamoto, M., Hirata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disorders+in+the+elderly%3A+Diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+and+Family+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sleep disorders in the elderly: Diagnosis and management.</a> Journal of General and Family Medicine. 18 (2), 61-71 (2017).</li>
<li>Foley, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+complaints+among+elderly+persons+-+an+epidemiologic-study+of+3+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Sleep complaints among elderly persons - an epidemiologic-study of 3 communities.</a> Sleep. 18 (6), 425-432 (1995).</li>
<li>Yu, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insomnia+Severity+Index%3A+psychometric+properties+with+Chinese+community-dwelling+older+people%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Advanced+Nursing%22%5BJournal%5D)">Insomnia Severity Index: psychometric properties with Chinese community-dwelling older people.</a> Journal of Advanced Nursing. 66 (10), 2350-2359 (2010).</li>
<li>Hoevenaar-Blom, M. P., Spijkerman, A. M., Kromhout, D., van den Berg, J. F., Verschuren, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+duration+and+sleep+quality+in+relation+to+12-year+cardiovascular+disease+incidence%3A+the+MORGEN+study%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Sleep duration and sleep quality in relation to 12-year cardiovascular disease incidence: the MORGEN study.</a> Sleep. 34 (11), 1487-1492 (2011).</li>
<li>Rebok, G. W., Rovner, B. W., Folstein, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disturbance+and+Alzheimer%27s+disease%3A+relationship+to+behavioral+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Milano%29%22%5BJournal%5D)">Sleep disturbance and Alzheimer's disease: relationship to behavioral problems.</a> Aging (Milano). 3 (2), 193-196 (1991).</li>
<li>Schroeck, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+safety+and+efficacy+of+sleep+medicines+in+older+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Review of safety and efficacy of sleep medicines in older adults.</a> Clinical Therapeutics. 38 (11), 2340-2372 (2016).</li>
<li>Pericic, D., Strac, D. S., Jembrek, M. J., Vlainic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allosteric+uncoupling+and+up-regulation+of+benzodiazepine+and+GABA+recognition+sites+following+chronic+diazepam+treatment+of+HEK+293+cells+stably+transfected+with+alpha1beta2gamma2S+subunits+of+GABA+%28A%29+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedeberg%27s+Archives+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Allosteric uncoupling and up-regulation of benzodiazepine and GABA recognition sites following chronic diazepam treatment of HEK 293 cells stably transfected with alpha1beta2gamma2S subunits of GABA (A) receptors.</a> Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 375 (3), 177-187 (2007).</li>
<li>Lader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+benzodiazepine+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Substance+Abuse+Treatment%22%5BJournal%5D)">History of benzodiazepine dependence.</a> Journal of Substance Abuse Treatment. 8 (1-2), 53-59 (1991).</li>
<li>Chen, P. L., Lee, W. J., Sun, W. Z., Oyang, Y. J., Fuh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+dementia+in+patients+with+insomnia+and+long-term+use+of+hypnotics%3A+a+population-based+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Risk of dementia in patients with insomnia and long-term use of hypnotics: a population-based retrospective cohort study.</a> Plos One. 7 (11), e49113(2012).</li>
<li>Kang, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zolpidem+use+and+risk+of+fracture+in+elderly+insomnia+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Preventive+Medicine+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Zolpidem use and risk of fracture in elderly insomnia patients.</a> Journal of Preventive Medicine and Public Health. 45 (4), 219-226 (2012).</li>
<li>Kao, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+zolpidem+and+cancer+risk%3A+a+Taiwanese+population-based+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Protocols%22%5BJournal%5D)">Relationship of zolpidem and cancer risk: a Taiwanese population-based cohort study.</a> Mayo Clinic Protocols. 87 (5), 430-436 (2012).</li>
<li>Sateia, M. J., Kirby-Long, P., Taylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+clinical+safety+of+ramelteon%3A+an+evidence-based+review%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Efficacy and clinical safety of ramelteon: an evidence-based review.</a> Sleep Medicine Reviews. 12 (4), 319-332 (2008).</li>
<li>Friedrich, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-induced+liver+injury+during+antidepressant+treatment%3A+results+of+amsp%2C+a+drug+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Drug-induced liver injury during antidepressant treatment: results of amsp, a drug surveillance program.</a> The International Journal of Neuropsychopharmacology. 19 (4), pyv126(2016).</li>
<li>Entzeroth, M., Flotow, H., Condron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Overview of high-throughput screening.</a> Current Protocols in Pharmacology. Chapter 9, (2009).</li>
<li>Ferreira, L. G., Dos Santos, R. N., Oliva, G., Andricopulo, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+docking+and+structure-based+drug+design+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Molecular docking and structure-based drug design strategies.</a> Molecules. 20 (7), 13384-13421 (2015).</li>
<li>Campbell, S. S., Tobler, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+sleep+-+a+review+of+sleep+duration+across+phylogeny%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Animal sleep - a review of sleep duration across phylogeny.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 8 (3), 269-300 (1984).</li>
<li>Hendricks, J. C., Sehgal, A., Pack, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+need+for+a+simple+animal+model+to+understand+sleep%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The need for a simple animal model to understand sleep.</a> Progress in Neurobiology. 61 (4), 339-351 (2000).</li>
<li>Hendricks, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rest+in+Drosophila+is+a+sleep-like+state%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Rest in Drosophila is a sleep-like state.</a> Neuron. 25 (1), 129-138 (2000).</li>
<li>Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlates+of+sleep+and+waking+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster.</a> Science. 287 (5459), 1834-1837 (2000).</li>
<li>Ly, S., Pack, A. I., Naidoo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiological+basis+of+sleep%3A+Insights+from+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The neurobiological basis of sleep: Insights from Drosophila.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 87, 67-86 (2018).</li>
<li>Jeibmann, A., Paulus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism of brain diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 10 (2), 407-440 (2009).</li>
<li>Morse, D., Sassone-Corsi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+after+time%3A+inputs+to+and+outputs+from+the+mammalian+circadian+oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time after time: inputs to and outputs from the mammalian circadian oscillators.</a> Trends in Neuroscience. 25 (12), 632-637 (2002).</li>
<li>De Nobrega, A. K., Lyons, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%3A+an+emergent+model+for+delineating+interactions+between+the+circadian+clock+and+drugs+of+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plasticity%22%5BJournal%5D)">Drosophila: an emergent model for delineating interactions between the circadian clock and drugs of abuse.</a> Neural Plasticity. 2017, 4723836(2017).</li>
<li>Reppert, S. M., Weaver, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+circadian+timing+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coordination of circadian timing in mammals.</a> Nature. 418 (6901), 935-941 (2002).</li>
<li>Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+variability+of+sleep+and+activity+as+biomarkers+of+ageing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila.</a> Biogerontology. 13 (5), 489-499 (2012).</li>
<li>Nall, A. H., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+screen+in+adult+Drosophila+identifies+VMAT+as+a+regulator+of+sleep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Small-molecule screen in adult Drosophila identifies VMAT as a regulator of sleep.</a> Journal of Neuroscience. 33 (19), 8534-8464 (2013).</li>
<li>Jin, X., Gu, P., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+Drosophila+sleep+deprivation+using+single-chip+board%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol for Drosophila sleep deprivation using single-chip board.</a> STAR Protocols. 2 (4), 100827(2021).</li>
<li>Kashyap, A., Singh, P. K., Silakari, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+on+fragment+based+drug+design+approach+for+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Counting on fragment based drug design approach for drug discovery.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 18 (27), 2284-2293 (2018).</li>
<li>Qi, W., Ding, D., Salvi, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effects+of+dimethyl+sulphoxide+%28DMSO%29+on+cochlear+organotypic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effects of dimethyl sulphoxide (DMSO) on cochlear organotypic cultures.</a> Hearing Research. 236 (1-2), 52-60 (2008).</li>
<li>Nishimura, M., Ueda, N., Naito, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dimethyl+sulfoxide+on+the+gene+induction+of+cytochrome+P450+isoforms%2C+UGT-dependent+glucuronosyl+transferase+isoforms%2C+and+ABCB1+in+primary+culture+of+human+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+and+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Effects of dimethyl sulfoxide on the gene induction of cytochrome P450 isoforms, UGT-dependent glucuronosyl transferase isoforms, and ABCB1 in primary culture of human hepatocytes.</a> Biological and Pharmaceutical Bulletin. 26 (7), 1052-1056 (2003).</li>
<li>Solovev, I. A., Shaposhnikov, M. V., Moskalev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronobiotics+KL001+and+KS15+extend+lifespan+and+modify+circadian+rhythms+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Clocks+Sleep%22%5BJournal%5D)">Chronobiotics KL001 and KS15 extend lifespan and modify circadian rhythms of Drosophila melanogaster.</a> Clocks Sleep. 3 (3), 429-441 (2021).</li>
<li>Cavas, M., Beltran, D., Navarro, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+effects+of+dimethyl+sulfoxide+%28DMSO%29%3A+changes+in+sleep+architecture+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioural effects of dimethyl sulfoxide (DMSO): changes in sleep architecture in rats.</a> Toxicology Letters. 157 (3), 221-232 (2005).</li>
<li>Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+activity+level+monitoring+using+the+Drosophila+Activity+Monitoring+%28DAM%29+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Locomotor activity level monitoring using the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2010 (11), 5518(2010).</li>
<li>Gilestro, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video+tracking+and+analysis+of+sleep+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Video tracking and analysis of sleep in Drosophila melanogaster.</a> Nature Protocols. 7 (5), 995-1007 (2012).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nature Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
<li>Kabra, M., Robie, A. A., Rivera-Alba, M., Branson, S., Branson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JAABA%3A+interactive+machine+learning+for+automatic+annotation+of+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">JAABA: interactive machine learning for automatic annotation of animal behavior.</a> Nature Methods. 10 (1), 64-67 (2013).</li>
<li>Donelson, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%26%2334%3Btracker%26%2334%3B+program%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the &#34;tracker&#34; program.</a> Plos One. 7 (5), e37250(2012).</li>
<li>Cichewicz, K., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ShinyR-DAM%3A+a+program+analyzing+Drosophila+activity%2C+sleep+and+circadian+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">ShinyR-DAM: a program analyzing Drosophila activity, sleep and circadian rhythms.</a> Communications Biology. 1, 25(2018).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów.

Opisana metoda nadaje się do szybkiego badania przesiewowego małych i średnich leków nasennych. Obecnie większość popularnych metod wysokoprzepustowych badań przesiewowych leków opiera się na poziomach biochemicznych i komórkowych. Na przykład bada się strukturę i właściwości receptora w celu znalezienia określonych ligandów, które mogą się z nim wiązać22. Inne podejście polega na analizie trybu wiązania i siły fragmentów molekularnych wybranych leków za pomocą magnetycznego rezonansu jądrowego (N...

Sen, jedno z podstawowych zachowań niezbędnych do przetrwania człowieka, charakteryzuje się dwoma głównymi stanami: sen z szybkimi ruchami gałek ocznych (REM) i sen bez szybkich ruchów gałek ocznych (NREM)1. Sen NREM składa się z trzech etapów: N1 (przejście między czuwaniem a snem), N2 (lekki sen) i N3 (głęboki sen, sen wolnofalowy), reprezentujący postęp od stanu czuwania do głębokiego snu1. Sen odgrywa kluczową rolę zarówno w zdrowiu fizycznym, jak i psychicznym2. Jednak starzenie się skraca całkowity czas trwania snu, wydajność snu, procent snu wolnofalowego i procent snu REM u dorosłych3. Osoby starsze mają tendencję do spędzania więcej czasu w lekkim śnie w porównaniu ze snem wolnofalowym, co czyni je bardziej wrażliwymi na nocne przebudzenia. Wraz ze wzrostem liczby przebudzeń średni czas snu skraca się, co skutkuje fragmentarycznym wzorcem snu u osób starszych, co może być związane z nadmiernym pobudzeniem neuronów Hcrt u myszy4. Dodatkowo, związane z wiekiem spadki mechanizmów okołodobowych przyczyniają się do wcześniejszego przesunięcia czasu trwania snu5,6. W połączeniu z chorobami fizycznymi, stresem psychicznym, czynnikami środowiskowymi i stosowaniem leków, czynniki te sprawiają, że osoby starsze są bardziej podatne na zaburzenia snu, takie jak bezsenność, zaburzenia zachowania podczas snu REM, narkolepsja, okresowe ruchy nóg, zespół niespokojnych nóg i zaburzenia oddychania podczas snu7,8.
Badania epidemiologiczne wykazały, że zaburzenia snu są ściśle powiązane z chorobami przewlekłymi u osób starszych9, w tym depresja10, choroby układu krążenia11, oraz demencja12. Przeciwdziałanie zaburzeniom snu odgrywa kluczową rolę w poprawie i leczeniu chorób przewlekłych oraz poprawie jakości życia osób starszych. Obecnie pacjenci polegają głównie na lekach, takich jak benzodiazepiny, nie-benzodiazepiny i agoniści receptora melatoniny, aby poprawić jakość snu13. Jednak benzodiazepiny mogą prowadzić do obniżenia poziomu receptorów i uzależnienia po długotrwałym stosowaniu, powodując poważne objawy odstawienia po odstawieniu14,15. Leki niebędące benzodiazepinami również niosą ze sobą ryzyko, w tym demencję16, złamania17 i raka18. Powszechnie stosowany agonista receptora melatoniny, ramelteon, zmniejsza opóźnienie snu, ale nie wydłuża czasu snu i powoduje problemy związane z funkcjonowaniem wątroby z powodu rozległej eliminacji pierwszego przejścia19. Agomelatyna, agonista receptora melatoniny i antagonista receptora serotoninowego, łagodzi bezsenność związaną z depresją, ale także stwarza ryzyko uszkodzenia wątroby20. W związku z tym istnieje pilne zapotrzebowanie na bezpieczniejsze leki do leczenia lub łagodzenia zaburzeń snu. Jednak obecne strategie badań przesiewowych leków, oparte na eksperymentach molekularnych i komórkowych w połączeniu ze zautomatyzowanymi systemami i analizą komputerową, są kosztowne i czasochłonne21. Strategie projektowania leków oparte na strukturze, opierające się na strukturze i właściwościach receptora, wymagają jasnego zrozumienia trójwymiarowej struktury receptora i nie mają możliwości przewidywania skutków działania leku22.
W 2000 roku, na podstawie kryteriów snu zaproponowanych przez Campbella i Toblera w 1984 roku23, naukowcy stworzyli proste modele zwierzęce do badania snu24, w tym Drosophila melanogaster, który wykazywał stany podobne do snu25,26. Pomimo różnic anatomicznych między Drosophila a ludźmi, wiele składników neurochemicznych i szlaków sygnałowych regulujących sen u Drosophila jest zachowanych we śnie ssaków, co ułatwia badanie chorób neurologicznych u ludzi27,28. Drosophila jest również szeroko stosowana w badaniach rytmu okołodobowego, pomimo różnic w podstawowych oscylatorach między muchami a ssakami29,30,31. Dlatego Drosophila służy jako cenny organizm modelowy do badania zachowań związanych ze snem i przeprowadzania badań przesiewowych leków związanych ze snem.
To badanie proponuje opłacalne i proste podejście oparte na fenotypie do badania przesiewowego leków małocząsteczkowych do leczenia zaburzeń snu przy użyciu starych muszek. Regulacja snu u Drosophila jest wysoce konserwatywna25, a spadek snu obserwowany wraz z wiekiem może być odwracalny poprzez podawanie leków. Tak więc ta metoda badań przesiewowych oparta na fenotypie snu może intuicyjnie odzwierciedlać skuteczność leku. Karmimy muszki mieszanką badanego leku i pożywienia, monitorujemy i rejestrujemy zachowanie podczas snu za pomocą Drosophila Activity Monitor (DAM)32 i analizujemy uzyskane dane za pomocą pakietu danych SCAMP2020 o otwartym kodzie źródłowym w MATLAB (ryc. 1). Analiza statystyczna jest wykonywana za pomocą oprogramowania statystycznego i graficznego (patrz tabela materiałów). Jako przykład pokazujemy skuteczność tego protokołu, przedstawiając dane eksperymentalne dotyczące rezerpiny, małocząsteczkowego inhibitora pęcherzykowego transportera monoamin, o którym mówi się, że zwiększa sen33. Protokół ten stanowi cenne podejście do identyfikacji leków stosowanych w leczeniu problemów ze snem związanych z wiekiem.

<table><tbody><tr><td>Ager</td><td>BIOFROXX</td><td>8211KG001</td><td></td></tr><tr><td>Skrzynka na sztuczny klimat</td><td>PRANDT</td><td>PRX-1000A</td><td>oficjalna strona internetowa:https://www.nbplt17.com/PLTXBS-Products-20643427/</td></tr><tr><td>DAM2 Monitor aktywności Drosophila</td><td>TriKineics</td><td></td><td>Oficjalna strona internetowa:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>DAM2system</td><td>Wersja TriKineics</td><td>:v3.03</td><td>oficjalna strona:https:// www.trikinetics.com/</td></tr> <tr><td>DAMFileScan</td><td>TriKineics</td><td>wersja:1.0.7.0</td><td>oficjalna strona internetowa:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>SIGMA</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator Monitorowania Aktywności Drosophila Tritech</td><td>Research</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td>oficjalna strona internetowa:https://www.tritechresearch.com/DT2-CIRC-TK.html</td></tr><tr><td>Butelki Drosophila</td><td>Biologix</td><td>51-17720</td><td>oficjalna strona internetowa:http://biologixgroup.com/goods.php?id=48</td></tr><tr><td>Drosophila: w1118</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center&nbsp;</td><td></td><td></td>BDSC_3605</tr><tr><td>Excel</td> Wersja <td>Microsoft</td><td>:Oficjalna strona programu Excel 2016</td><td>:https://www.microsoftstore.com.cn/software/office/excel</td></tr><tr><td>Rurki szklane</td><td>TriKinetics</td><td>PPT5x65</td><td>oficjalna strona:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>MATLABR2022b</td><td>Wersja MathWorks</td><td>:9.13.0.2049777</td><td>oficjalna strona:https://ww2.mathworks.cn/products/matlab.html</td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td>Wersja: Prism 8.0.1</td><td>oficjalna strona internetowa: https://www.graphpad.com/features</td></tr><tr><td>Reserpine</td><td>MACKLIN</td><td>R817202-1g</td><td></td></tr><tr><td>Sacharoza</td><td>SIGMA</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>SCAMP</td><td>Vecsey Lab</td><td>N/A</td><td>oficjalna strona internetowa:https://academics.skidmore.edu/blogs/cvecsey/</td></tr></tbody></table>

wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków małocząsteczkowych w kierunku zaburzeń snu związanych z wiekiem przy użyciu drosophila melanogaster

High-Throughput Small Molecule Drug Screening For Age-Related Sleep Disorders Using Drosophila melanogaster

Sen, niezbędny składnik zdrowia i ogólnego samopoczucia, często stanowi wyzwanie dla osób starszych, które często doświadczają zaburzeń snu charakteryzujących się skróconym czasem snu i fragmentarycznymi wzorcami. Te zakłócenia snu korelują również ze zwiększonym ryzykiem różnych chorób u osób starszych, w tym cukrzycy, chorób sercowo-naczyniowych i zaburzeń psychicznych. Niestety, istniejące leki na zaburzenia snu wiążą się ze znacznymi skutkami ubocznymi, takimi jak upośledzenie funkcji poznawczych i uzależnienie. W związku z tym pilnie potrzebne jest opracowanie nowych, bezpieczniejszych i skuteczniejszych leków na zaburzenia snu. Jednak wysokie koszty i długi czas trwania eksperymentów związanych z obecnymi metodami badań przesiewowych leków pozostają czynnikami ograniczającymi.
Ten protokół opisuje opłacalną i wysokoprzepustową metodę badań przesiewowych, która wykorzystuje Drosophila melanogaster, gatunek o wysoce konserwatywnym mechanizmie regulacji snu w porównaniu ze ssakami, co czyni go idealnym modelem do badania zaburzeń snu u osób starszych. Podając różne małe związki starzejącym się muszkom, możemy ocenić ich wpływ na zaburzenia snu. Zachowania podczas snu tych much są rejestrowane za pomocą urządzenia monitorującego w podczerwieni i analizowane za pomocą pakietu danych typu open source Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program 2020 (SCAMP2020). Protokół ten oferuje tanie, powtarzalne i skuteczne podejście do badań przesiewowych w celu regulacji snu. Muszki owocowe, ze względu na krótki cykl życia, niskie koszty hodowli i łatwość obsługi, są doskonałymi obiektami tej metody. Na przykład Rezerpina, jeden z testowanych leków, wykazała zdolność do wydłużania czasu snu u starszych muszek, podkreślając skuteczność tego protokołu.

Rezerpina jest małocząsteczkowym inhibitorem transporterów monoamin pęcherzykowych (VMAT), który hamuje wychwyt monoamin do pęcherzyków presynaptycznych, co prowadzi do wydłużenia snu33. Wpływ rezerpiny na promowanie snu badano u 30-dniowych much, przy czym grupa kontrolna była karmiona wyłącznie rozpuszczalnikiem w postaci dimetylosulfotlenku (DMSO). W grupie otrzymującej rezerpinę starsze muchy wykazywały znacznie zwiększoną ilość snu zarówno w dzień, jak i w nocy w porównaniu z grupą DMSO. <str...

Prezentowany jest protokół wysokoprzepustowych badań przesiewowych leków w celu poprawy snu poprzez monitorowanie zachowania podczas snu muszek owocowych w starszym modelu Drosophila.

Wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków małocząsteczkowych w kierunku zaburzeń snu związanych z wiekiem przy użyciu Drosophila melanogaster

Sleep, an essential component of health and overall well-being, often presents challenges for older individuals who frequently experience sleep disorders ...

Techniki badań przesiewowych leków obejmują wysokoprzepustowe badania przesiewowe, które wykorzystują automatyzację do odkrywania leków, projekty oparte na strukturze i znajdowanie cząsteczek wiążących receptory na podstawie struktury, oraz projektowanie oparte na fragmentach, które wykorzystuje magnetyczny rezonans jądrowy i spektrometrię mas do optymalizacji fragmentów molekularnych i identyfikacji związków. System DAM mierzy uśpienie muchy, wykrywając cegły wiązki podczerwieni. Jednak ta metoda może przeszacować sen, jeśli muchy pozostają statyczne na jednym końcu rurki lub jeśli mucha nie jest bardzo ruchliwa.Co więcej, kolejność każdego testowanego leku może mieć wpływ na spożycie owoców muchy, potencjalnie zniekształcając wyniki eksperymentalne. Dlatego nasz eksperyment będzie zawierał różne odcinki, aby złagodzić te czynniki i zwiększyć dokładność. W porównaniu z metodami opartymi na analizie wideo, nasza metoda oferuje wysoką przepustowość, obniża koszty i upraszcza obsługę.Tak więc proces zbierania danych eksperymentalnych jest również stosunkowo prosty, a wynikowy wykres wizualnie przedstawia działanie leku.

high-throughput-small-molecule-drug-screening-for-age-related-sleep

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Opisujemy procedury rejestracji dobowych rytmów aktywności lokomocyjnej Drosophila oraz późniejszej analizy danych. Rytmy aktywności lokomocyjnej są wiarygodnym behawioralnym wskaźnikiem zegarów okołodobowych zwierząt i są wykorzystywane jako standardowy odczyt funkcji zegara podczas badania mutantów okołodobowych lub analizowania wpływu środowiska na regulację systemu okołodobowego.

Oznaczanie aktywności lokomotorycznej w celu badania rytmów okołodobowych i parametrów snu u Drosophila

Opisano szybki test in vivo służący do badania związków neuromodulacyjnych z wykorzystaniem systemu włókien olbrzymich (Giant Fiber System, GFS) u Drosophila melanogaster. Nanowstrzyknięcia do głowy zwierzęcia wraz z rejestracją elektrofizjologiczną GFS mogą ujawnić bioaktywność związków w obrębie neuronów lub mięśni.

Połączony test nanoiniekcji i elektrofizjologii do przesiewowej oceny bioaktywności związków z wykorzystaniem systemu włókien olbrzymich Drosophila melanogaster

Proste testy do pomiaru wrażliwości etanolu i szybkiej tolerancji u Drosophila ułatwiają wykorzystanie tego organizmu modelowego do badania tych ważnych zachowań związanych z etanolem. W tym miejscu opisano stosunkowo prosty, skalowalny test do pomiaru wrażliwości etanolu i szybkiej tolerancji u much.

Niedrogi, skalowalny test behawioralny do pomiaru wrażliwości i szybkiej tolerancji sedacji etanolem u Drosophila

Ten protokół opisuje test o wysokiej przepustowości do testowania preferencji składania jaj przez Drosophila melanogaster w rozdzielczości pojedynczego zwierzęcia.  Ten test zapewnia prostą, wydajną i skalowalną platformę do identyfikacji genów i składników obwodów, które kontrolują prosty proces podejmowania decyzji.

Wysokoprzepustowy test do badania preferencji składania jaj u poszczególnych Drosophila melanogaster

Prezentujemy protokół wykorzystujący zaawansowane podejście genetyczne do badań przesiewowych w kierunku mutantów wykazujących neurodegenerację u Drosophila melanogaster. Obejmuje on test wspinaczkowy, analizę histologiczną, mapowanie genów i sekwencjonowanie DNA, aby ostatecznie zidentyfikować nowe geny związane z procesem neuroprotekcji.

Genetyczne badania przesiewowe in vivo w celu identyfikacji nowych genów neuroprotekcyjnych u Drosophila melanogaster

Drosophila to szeroko stosowany model eksperymentalny, odpowiedni do badania przesiewowego leków o potencjalnym zastosowaniu w terapii raka. W tym miejscu opisujemy zastosowanie barwnych fenotypów oczu Drosophila jako metody badań przesiewowych związków małocząsteczkowych, które sprzyjają tworzeniu heterochromatyny.

Metoda przesiewowa do identyfikacji leków promujących heterochromatynę przy użyciu Drosophila

Obecne metody pomiaru wrażliwości na alkohol u Drosophila są przeznaczone do testowania grup much. Przedstawiamy prosty, tani, wysokoprzepustowy test do oceny wrażliwości na sedację alkoholową u dużej liczby pojedynczych much. Metoda nie wymaga specjalistycznych narzędzi i może być wykonywana w dowolnym laboratorium przy użyciu powszechnie stosowanych materiałów.

Wysokoprzepustowa metoda pomiaru czasu sedacji alkoholowej u poszczególnych osobników Drosophila melanogaster

Obecny protokół ocenia aktywność lokomotoryczną Drosophila poprzez śledzenie i analizowanie ruchu much na ręcznie wykonanej arenie za pomocą oprogramowania typu open source Fiji, kompatybilnego z wtyczkami do segmentacji pikseli każdej klatki na podstawie nagrania wideo w wysokiej rozdzielczości w celu obliczenia parametrów prędkości, odległości itp.

Prosta technika oznaczania aktywności lokomotorycznej u Drosophila

Protokół ten szczegółowo opisuje zastosowanie larw Drosophila do identyfikacji unikalnych związków przeciwpadaczkowych w leczeniu padaczki.

Aktywność napadowa wywołana elektrowstrząsami u larw Drosophila

Protokół przedstawia wysokoprzepustową, opłacalną metodę oceny neurotoksyczności u muszki owocowej poprzez kwantyfikację dysfunkcji lokomotorycznej jako alternatywę dla tradycyjnych modeli ssaków. Ma na celu ocenę neurotoksycznego wpływu związków farmaceutycznych, czynników środowiskowych lub modyfikacji genetycznych przy użyciu czułego, powtarzalnego i etycznie korzystnego modelu.

Analiza behawioralna dysfunkcji narządu ruchu u Drosophila melanogaster jako odczyt neurotoksyczności

Dowiedz się o wysokoprzepustowym badaniu przesiewowym leków na zaburzenia snu związane z wiekiem przy użyciu Drosophila melanogaster. Ta metoda zwiększa dokładność pomiaru snu i upraszcza procedury operacyjne.

Wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków małocząsteczkowych w kierunku zaburzeń snu związanych z wiekiem przy użyciu Drosophila melanogaster (Wideo) | JoVE Journal

Wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków małocząsteczkowych w kierunku zaburzeń snu związanych z wiekiem przy użyciu Drosophila melanogaster

Przeglądaj więcej filmów