Oznaczanie 45 pestycydów w odmianach awokado metodą QuEChERS i chromatografią gazową ze spektrometrią mas w tandemie

Aby rozpocząć przygotowanie próbki metodą QuEChERS, należy zważyć pięć gramów próbki awokado w 50-mililitrowej probówce wirówkowej. Dodać 50 mikrolitrów proceduralnego wzorca wewnętrznego lub roztworu P-IS do probówki. Dodaj 10 mililitrów acetonu nitrylu do probówki wirówkowej i potrząsaj probówką z prędkością 70 obr./min przez pięć minut.

Następnie dodaj do niego 2,5 grama mrówczanu amonu i ponownie potrząsaj probówką z prędkością 70 obr./min przez pięć minut. Następnie odwirować probówkę o stężeniu 1 800 G przez pięć minut. Następnie do dwumililitrowej probówki wirówkowej należy pobrać odpowiednie ilości odczynników wyświetlanych na ekranie.

Następnie dodaj jeden mililitr ekstraktu do probówki w celu oczyszczenia za pomocą dyspersyjnej ekstrakcji do fazy stałej. Wirować probówkę przez 30 sekund, a następnie odwirować ją do 1,800 G przez pięć minut. Przenieść 200 mikrolitrów oczyszczonego ekstraktu do fiolki z automatycznym samplerem i dodać 20 mikrolitrów roztworu środka ochronnego analitu, a następnie dodać 50 mikrolitrów wstępnie przygotowanego roztworu fosforanu trifenylu.

Na koniec wykonaj analizę instrumentalną za pomocą systemu GC-MS/MS. Analizy należy przeprowadzać za pomocą systemu GC-MS/MS z potrójnym kwadrupolem wyposażonym w interfejs jonizacji elektronów o napięciu 70 elektronowoltów w autosamplerze. Upewnij się, że ciśnienie gazu jest prawidłowe, hel na poziomie 140 PSI, a argon na poziomie 65 PSI.

Włącz główny przełącznik GC znajdujący się na panelu przednim i włącz przełącznik MS znajdujący się z tyłu. Otwórz oprogramowanie do analizy w czasie rzeczywistym GC-MS, które steruje wszystkimi parametrami systemu GC-MS/MS. Kliknij Kontrola podciśnienia, następnie Zaawansowane, a następnie Pompa rotacyjna 1, aby zainicjować system próżniowy.

Kliknij Start, aby włączyć pierwszą i drugą pompę turbomolekularną. Następnie kliknij opcję Start dla podgrzewacza źródła jonów. Ustaw temperaturę interfejsu MS na 250 stopni Celsjusza, a temperaturę źródła jonów na 300 stopni Celsjusza.

Utrzymuj piekarnik GC w początkowej temperaturze 50 stopni Celsjusza przez jedną minutę, a następnie zwiększ go do 180 stopni Celsjusza z szybkością 25 stopni Celsjusza na minutę. Następnie zwiększ temperaturę do 230 stopni Celsjusza przy pięciu stopniach Celsjusza na minutę, a następnie do 290 stopni Celsjusza przy 25 stopniach Celsjusza na minutę. Następnie utrzymuj stałą temperaturę na poziomie 290 stopni Celsjusza przez sześć minut.

Całkowity czas analizy to 24,6 minuty. Po włączeniu wszystkich tych systemów kliknij Zamknij. Następnie kliknij opcję Strojenie w oprogramowaniu do analizy i wybierz Widok monitora pików, aby przeprowadzić wstępną weryfikację warunków spektrometru mas.

Kliknij Przejęcie, a następnie w wyświetlonym oknie kliknij Pobierz parametry początkowe. Sprawdź, czy sprzęt jest gotowy GC i gotowy MS. Aby uzyskać dane, kliknij Nowy plik wsadowy w oprogramowaniu i utwórz sekwencję zawierającą informacje, takie jak nazwa próbki, identyfikator próbki, plik metody, plik danych, wolumin iniekcji i plik strojenia. W razie potrzeby dodaj wiersze i kliknij Zapisz.

Kliknij Batch Start i poczekaj, aby rozpoczął się proces wstrzykiwania. Wykonaj iniekcję w temperaturze 250 stopni Celsjusza w trybie podzielonej listy, utrzymując objętość wstrzyknięcia wynoszącą jeden mikrolitr. Po upływie jednej minuty od wstrzyknięcia należy otworzyć szczelinę.

Analizuj anality przy użyciu trybu monitorowania reakcji wielokrotnych lub MRM, który jest standardowym trybem stosowanym w systemach MS/MS z potrójnym kwadrupolem. Otwórz oprogramowanie do analizy po uruchomieniu w celu analizy danych. Kliknij na wstrzyknięcie, które chcesz przeanalizować, przejdź przez tabelę zawierającą anality i wybierz interesujący nas pik.

Kliknij pik lub obszar zainteresowania, aby zobrazować chromatogram, przejrzeć integracje pików i, jeśli to konieczne, przeprowadzić integrację ręczną. Zweryfikuj obszary wszystkich analitów, aby wykonać niezbędne obliczenia i ocenę metody. Generowanie krzywych kalibracyjnych dopasowanych do matrycy wykazało stosunkowo spójny efekt matrycy wynoszący mniej niż 20%, sklasyfikowany jako miękki ME dla większości kombinacji pestycydów.

Wyniki przedstawione na rysunku wykazały liczbę pestycydów, których średni procent odzysku mieścił się w dopuszczalnym zakresie od 70 do 120% dla każdego rodzaju awokado. Znaczna część badanych pestycydów wykazywała procentowy odzysk mieszczący się w określonym zakresie, przy względnych wartościach odchylenia standardowego poniżej 20%