Name: Strategia zgłębnika dla formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej u myszy modelowych kostniakomięsaka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 11 s
Description: Poznaj standaryzowaną metodę przygotowania wywaru Yiqi Jiedu i technikę zgłębnika u myszy z kostniakomięsakiem. Protokół zapewnia równomierne dawkowanie i ochronę zwierząt, poprawiając niezawodność badań nad skutecznością terapeutyczną formuł tradycyjnej medycyny chińskiej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Obecna praca jest wspierana przez granty z (1) National Nature Science Foundation (81973877 i 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) projektu budowy Centrum Badawczego Shanghai Top Priority (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation oraz (5) Projektów badawczych w ramach budżetu Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju (2021LK047).

Ten protokół opisuje szczegółową technikę zgłębnika u myszy modelujących kostniakomięsaka, używając wywaru Yiqi Jiedu jako próbki. W tym eksperymencie wykorzystano czterotygodniowe samce myszy atymimiczne (BALB/c nago) i trzymano w pomieszczeniu hodowlanym klasy SPF w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych na Uniwersytecie Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Zarząd Zwierząt i Komitet Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju, były zgodne z Kodeksem Etyki dla Zwierząt Laboratoryjnych (Numer Zatwierdzenia Etyki Zwierząt: PZSHUTCM2304060007) i przeprowadzone w ścisłej zgodności z międzynarodowymi wymaganiami dotyczącymi zwierząt laboratoryjnych.
1. Materiały
<ol>
	<li>Zaopatrz się w następujące materiały: zioła chińskie (żeń-szeń 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, ziele tarczycy kolczastej 31,5 g), strzykawkę 1 ml i igłę do głębków łokciowych 12 G/55 mm (<klasa silna="xfig">Rysunek 1).</li>
</ol>
2. Określenie dawki
<ol>
	<li>Oblicz dzienną dawkę w następujący sposób: dzienna dawka dla dorosłych o standardowej masie ciała 60 kg to żeń-szeń 12 g, Hedyotis diffusa 15 g i ziele tarczycy kolczastej 9 g, o łącznej zawartości 36 g leku gotowego do wywaru, czyli 0,6 g leków gotowych do wywaru/kg masy ciała. Odnosząc się do 12 razy dla dawki równoważnej, 6 razy dla niskiej dawki i 24 razy dla wysokiej dawki między dorosłymi o standardowej masie ciała 60 kg a myszami o standardowej masie ciała 25 g zgodnie z powierzchnią ciała11, a także naszymi wstępnymi danymi, użyj 20-krotnego stosunku dawki wywaru Yiqi Jiedu dla myszy w obecnym badaniu, W związku z tym dawka dla myszy wynosiła 12 g leków gotowych do sporządzenia wywaru/kg masy ciała.</li>
	<li>Oblicz dawkę dla każdej myszy, korzystając z równania: 
	Dawkowanie dla myszy (masa ciała w pozycji stojącej) = Dawkowanie dla osoby dorosłej (masa ciała w pozycji stojącej) x 20 (wyznaczony stosunek dawki równoważnej). 
	Dzienna dawka każdej myszy wynosi 0,3 g [(12 g leków gotowych do wywaru/1000 g masy ciała) x 25 g masy ciała] w 200 μl przy końcowym stężeniu 1,5 g/ml.</li>
	<li>Oblicz całkowitą ilość leków gotowych do spożycia wywaru dla myszy (n=7) w grupie wywaru Yiqi Jiedu z podawaniem przez zgłębnik przez 28 dni na 58,8 g. Stęż to do 39,2 ml, aby osiągnąć końcowe stężenie 1,5 g/ml.</li>
	<li>Biorąc pod uwagę możliwą utratę leku podczas wywaru i zgłębnika oraz dla wygody obliczeń, przygotuj łącznie 126 g (żeń-szeń 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, ziele tarczycy kolczastej 31,5 g) leku gotowego do wywaru, skoncentruj do końcowej objętości 84 ml.</li>
</ol>
3. Źródło komórek i hodowla
<ol>
	<li>Kup komórki kostniakomięsaka 143B pochodzenia ludzkiego z banku komórek ATCC.</li>
	<li>Zasiewaj 1 x 106 komórek 143B w 10 ml pożywki MEM zawierającej 10% FBS, 100 U/ml penicyliny i 100 μg/ml streptomycyny w 10-centymetrowym naczyniu do hodowli komórkowej.</li>
	<li>Hodować komórki 143B w temperaturze 37 °C w inkubatorze o stężeniu 5% CO2 do momentu, aż komórki zlewają się w 80%-90%.</li>
</ol>
4. Metody modelowania
<ol>
	<li>Zebrać 80% zlewających się komórek 143B z hodowli konfluentnej, ponownie zawiesić w 6 ml 10% pożywki MEM zawierającej surowicę i wymieszać z żelem macierzy błony podstawnej w stosunku objętościowym 1:1, aby uzyskać zawiesinę komórek o końcowym stężeniu 1 x 107 komórek/ml.</li>
	<li>Wstrzyknij 10 μl zawiesiny komórkowej do lewej kości piszczelowej każdej myszy atymicznej, aby ustalić model myszy kostniakomięsaka in situ ksenoprzeszczepu, jak opisano w naszej poprzedniej publikacji12. Kroki w skrócie są następujące.
	<ol>
		<li>Umyj komórki 2x PBS. Trypsynizuj komórki 1,5 ml 0,25% trypsyny przez 3 min. Dodaj 6 ml 10% pożywki MEM zawierającej surowicę. Zebrać komórki w probówce wirówkowej o pojemności 15 ml.</li>
		<li>Odessać 20 μl zawiesiny komórek do komory płytki do zliczania komórek i obliczyć stężenie komórek za pomocą automatycznego licznika komórek. Odwirować komórki przy 800 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.</li>
		<li>Odrzucić supernatant za pomocą pipety, ponownie zawiesić osad komórkowy w matrycy błony podstawnej o stężeniu 8,5 mg/ml i umieścić go na lodzie.</li>
		<li>Znieczulij myszy, wystawiając je na działanie 2% izofluranu i 98% tlenu (natężenie przepływu tlenu, 2 l/min). Nałóż niewielką ilość maści weterynaryjnej na oczy, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia.</li>
		<li>Całą procedurę należy wykonać w dobrze wentylowanym pomieszczeniu. Przed wstrzyknięciem komórek kostniakomięsaka upewnij się, że każda mysz jest w głębokim znieczuleniu, delikatnie dotykając stopy; Jeśli mysz nadal ma odpowiedzi, takie jak drgnięcie lub szarpnięcie. Poczekaj dłużej, jeśli mysz nadal ma odpowiedzi, takie jak drgnięcie lub szarpnięcie, aż te odpowiedzi znikną.</li>
		<li>Umieść mysz w pozycji leżącej. Przytrzymaj kostkę myszy za pomocą kciuka i palca wskazującego i zdezynfekuj miejsce wstrzyknięcia kości piszczelowej trzema naprzemiennymi rundami betadyny i wacika z 70% etanolu.</li>
		<li>Przymocować igłę do strzykawki o pojemności 1 ml i skierować końcówkę igły w stronę miejsca wstrzyknięcia, równolegle do osi kości piszczelowej. Przezskórnie wprowadzić igłę, aby wywiercić otwór przez platformę piszczelową w kierunku dystalnego końca kości piszczelowej.</li>
		<li>Załaduj zawiesinę komórek kostniakomięsaka, która została wcześniej umieszczona na lodzie, do strzykawki do mikroobjętości i zastąp strzykawkę o pojemności 1 ml w kości piszczelowej strzykawką mikroobjętościową z komórkami kostniakomięsaka. Powoli wstrzyknąć około 10 μl (1 x 107 komórek/ml) zawiesiny komórek kostniakomięsaka do kości piszczelowej każdej myszy atymicznej.</li>
		<li>Wyjąć strzykawkę z mikroobjętością z miejsca wstrzyknięcia i uciskać miejsce wstrzyknięcia bawełnianym wacikiem przez około 30 sekund. Umieść mysz z powrotem w czystej klatce i obserwuj jej regenerację przez 10 minut.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Przygotowanie formuły wywaru z tradycyjnej medycyny chińskiej do zgłębnika ( <silna klasa="xfig">Rysunek 2)
<ol>
	<li>Oblicz dawkę zgodnie z krokiem 2.</li>
	<li>Namocz wszystkie zioła lecznicze na wywar, z wyjątkiem drogiego zioła żeń-szenia, w wodzie pitnej o poziomie 3 cm wyższym niż powierzchnia leku, przez 30 minut, a następnie wykonaj wywar 2x, jak opisano poniżej.</li>
	<li>Wykonaj pierwszy wywar, podgrzewając do wrzenia na silnym ogniu, a następnie podgrzewając przez 15-25 minut na łagodnym ogniu. Łagodny ogień odnosi się do ciepła o niskiej mocy o temperaturze zwykle od 80 °C do 100 °C, podczas gdy silny ogień odnosi się do ciepła o dużej mocy, zwykle w zakresie od 200 °C do 300 °C.</li>
	<li>Wlej płyn wywarowy do jednego pojemnika.</li>
	<li>Wykonaj drugi wywar, podgrzewając zioła lecznicze w wodzie pitnej, o objętości wystarczającej do zanurzenia powierzchni leku, do wrzenia na silnym ogniu, a następnie podgrzewania przez 15-25 minut na łagodnym ogniu.</li>
	<li>Wlej płyn z wywaru do tego samego pojemnika, co w kroku 5.4.</li>
	<li>Namocz i odejmij 42 g żeń-szenia osobno, popijając wodą pitną o 3 cm wyżej niż powierzchnia leku, ponieważ jest to drogie.</li>
	<li>Wykonaj pierwszy wywar z namoczonego żeń-szenia, podgrzewając go na silnym ogniu przez 60 min. 
	Wlej płyn z wywaru do tego samego pojemnika, co w kroku 5.4.</li>
	<li>Wykonaj drugi wywar z żeń-szenia w wodzie pitnej o objętości wystarczającej do zanurzenia powierzchni leku, podgrzewając go na łagodnym ogniu przez 40 minut. Wlej płyn z wywaru do tego samego pojemnika, co w kroku 5.4. 
	UWAGA: Pojemniki używane do wywaru powinny być stabilne chemicznie, takie jak zapiekanki (najczęściej stosowane w praktyce klinicznej), ceramika, szkło i stal nierdzewna, aby uniknąć ewentualnych reakcji chemicznych z substancjami leczniczymi. Cały płyn wywarowy uzyskany z różnych etapów należy umieścić w tym samym pojemniku.</li>
	<li>Wymieszaj i przefiltruj płyn wywarowy za pomocą trzech warstw gazy przymocowanej do wylotu miarki za pomocą gumowych opasek.</li>
	<li>Przefiltrowany wywar zagotuj na silnym ogniu w garnku, a następnie zmień ogień na łagodny i utrzymuj łagodny ogień aż do osiągnięcia docelowego stężenia (końcowa objętość 84 ml przy końcowym stężeniu 1,5 g/ml).</li>
	<li>Przygotować 21 ml porcji zagęszczonego wywaru zgodnie z dawką wymaganą do podawania dożołądkowego przez 1 tydzień i przechowywać podwielokrotności w lodówce w temperaturze -20 °C.</li>
</ol>
6. Podawanie zgłębnika u myszy za pomocą urządzenia do gavage
<ol>
	<li>Umieść mysz na powierzchni klatki myszy lub innej bardziej szorstkiej powierzchni.</li>
	<li>Chwyć ogon myszy kciukiem i palcem wskazującym prawej ręki. Następnie chwyć szyję myszy kciukiem, palcem wskazującym i środkowym palcem lewej ręki.</li>
	<li>Przytrzymaj ogon myszy pozostałymi dwoma palcami lewej ręki, aby głowa, szyja i tułów myszy były w linii prostej. 
	UWAGA: Upewnij się, że mysz jest zrelaksowana podczas całego procesu chwytania. Jeśli mysz nadal ma trudności z poruszaniem się, proces chwytania należy wykonywać, dopóki mysz nie zostanie zrelaksowana.</li>
	<li>Trzymaj zgłębnik w prawej ręce i załaduj 200 μl wywaru dla myszy o masie ciała 20 g (100 μl wywaru / 10 g masy ciała myszy).</li>
	<li>Włóż igłębkę do ust od kącika oka i dociśnij język do górnej szczęki myszy.</li>
	<li>Trzymaj ciało myszy w tym samym kierunku i delikatnie popchnij igłębnik w kierunku żołądka wzdłuż przełyku, aż około 10 mm igły do zgłębnika pozostanie na zewnątrz. 
	UWAGA: Pojawia się uczucie pustki, gdy igła do zgłębnika wchodzi do przełyku. Długość igły do głębka wbitej w mysz powinna być mierzona do szczytu mostka. Całkowita długość igły do zgłębnika wynosi 60 mm (<klasa silna = "xfig" >Rysunek 3), dlatego około 50 mm igły do zgłębnika należy wprowadzić do ciała myszy przed wstrzyknięciem wywaru do żołądka myszy.</li>
	<li>Wstrzyknij formułę wywaru do żołądka myszy. Napotkanie oporu lub płynu wydostającego się z kącika ust oznacza niewłaściwe umieszczenie igły do wbijania, czego należy unikać. Ponadto należy zmniejszyć prędkość wtrysku, jeśli formuła wywaru jest gęsta.</li>
	<li>Zwolnij mysz i obserwuj je przez 10 minut. Zgłębnik jest udany, jeśli nie zaobserwuje się żadnych nieprawidłowości w oddychaniu i wróci mysz do klatki (<silna klasa="xfig">Rysunek 4).</li>
</ol>
7. Przebieg leczenia
<ol>
	<li>Aby zbadać skuteczność terapeutyczną wywaru Yiqi Jiedu, należy utworzyć grupę kontrolną i grupę wywaru Yiqi Jiedu. W przypadku myszy z grupy kontrolnej podawać sól fizjologiczną raz dziennie przez 28 dni. W przypadku myszy z grupy wywaru Yiqi Jiedu należy podawać wywar Yiqi Jiedu raz dziennie przez 28 dni.</li>
</ol>
8. Działania niepożądane
<ol>
	<li>Uważnie obserwuj stan myszy po ponownym umieszczeniu w klatce, w tym utratę wagi i obniżony stan psychiczny z powodu niemożności dostania się pokarmu do żołądka.</li>
	<li>Myszy będą odczuwać trudności w oddychaniu i duszność z powodu niedrożności tchawicy spowodowanej pokarmem i będą kaszleć, próbując usunąć tchawicę. Jeśli którykolwiek z tych objawów zostanie zaobserwowany podczas zgłębnika, natychmiast przerwij zgłębnik i poddaj myszy eutanazji.</li>
</ol>

Herb Decoction Formulation and Gavage Standardization in Osteosarcoma Mice

<ol><li>Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGao%2C+S+%22Chinese+Community+Physicians+%28Comprehensive+Edition%29%22">Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition)</a>. (21), 12(2005).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).</li>
<li>An, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpretation+on+specification+of+traditional+Chinese+medicine+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Herald+Med%22%5BJournal%5D)">Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction.</a> Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+strategies+in+standard+decoction+of+medicinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22China+J+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Research strategies in standard decoction of medicinal slices.</a> China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).</li>
<li>Luo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+soaking+traditional+Chinese+medicine+before+decoction+on+active+components%5BTitle%5D)+AND+%22Shanghai+Yiyao%22%5BJournal%5D)">Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components.</a> Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).</li>
<li>Liu, F., Chen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+standardization+of+decocting+methods+of+modern+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Global+Trad+Chinese+Med%22%5BJournal%5D)">On the standardization of decocting methods of modern decoction.</a> Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+decocting+times+and+instrument+on+the+quality+of+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trad+Chinese+Med%22%5BJournal%5D)">Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction.</a> J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbal+decoctosome+is+a+novel+form+of+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Herbal decoctosome is a novel form of medicine.</a> Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).</li>
<li>Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+PK+-+PD+model+based+on+animal+experiments+for+study+of+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizen+Med+Materia+Medica+Res%22%5BJournal%5D)">Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine.</a> Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).</li>
<li>Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+and+reflection+on+standard+decoction+of+Chinese+materia+medica%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Trad+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica.</a> Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).</li>
<li>Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers. , https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005).</li>
<li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratibial+osteosarcoma+cell+injection+to+generate+orthotopic+osteosarcoma+and+lung+metastasis+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models.</a> J Vis Exp. (176), 63072(2021).</li>
<li>He, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+animal+science%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Laboratory animal science.</a> , (2006).</li>
<li>Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+the+different+animal+models+of+fetal+alcohol+spectrum+disorders+and+their+use+in+studying+complex+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Fronti+Pedia%22%5BJournal%5D)">A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors.</a> Fronti Pedia. 2, 93(2014).</li>
<li>Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+mice+undergoing+serial+oral+gavage+while+awake+or+anesthetized%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Animal+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).</li>
<li>Recena Aydos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonalcoholic+fatty+liver+disease+induced+by+high-fat+diet+in+C57bl%2F6+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models.</a> Nutrients. 11 (12), 3067(2019).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają nic do ujawnienia.

Skuteczność kliniczna przepisywanych ziół w tradycyjnej medycynie chińskiej jest w dużej mierze związana z podawaną dawką i postacią dawkowania; Dlatego w praktyce klinicznej konieczne jest ustanowienie ustandaryzowanej strategii wywaru i wykwalifikowanego procesu podawania, a także poprawa wiarygodności wyników eksperymentalnych.
W tym badaniu najpierw przedstawiliśmy szczegółową strategię standaryzowanego wywaru z chińskich ziół stosowanych w praktyce klinicznej tradycyjnej medycyny chińskiej, która ułatwia prowadzenie ludzi w naukowym dekoktowaniu leków, a także praktycznie poprawia jakość formuły wywaru i skuteczność kliniczną leków ziołowych; W związku z tym, gdy standaryzacja zostanie osiągnięta, poprawi to dokładność i spójność skuteczności ziołolecznictwa w praktyce klinicznej.
Strategia zgłębnika jest szeroko stosowana jako metoda przyjmowania doustnego w badaniach przedklinicznych i ma zastosowanie do różnych zwierząt doświadczalnych, w tym myszy, szczurów i królików, co oferuje pewne korzyści, takie jak łatwość podawania, dokładna kontrola dawki i zdolność do naśladowania klinicznej drogi podawania leku13. Jednak zwierzęta będą miały problemy, jeśli zostaną unieruchomione w niewłaściwej pozycji bez znieczulenia, co może zagrozić zdrowiu badaczy i zmniejszyć wiarygodność eksperymentów. Dlatego ważne jest ustanowienie znormalizowanej metody zgłębnika, aby zmniejszyć te możliwości i uniknąć przypadkowego dostania się wywaru do przełyku lub uszkodzenia przełyku, co z kolei powoduje śmierć zwierząt i niepowodzenie eksperymentalne.
W tym przypadku wybraliśmy drogę zgłębnika, aby dostarczyć formułę wywaru do myszy modelowych kostniakomięsaka, ponieważ pozwoliło nam to precyzyjnie odmierzyć dawkę i zagwarantować stałe dostarczanie leku przez cały czas trwania eksperymentu. Aby przygotować formułę wywaru, najpierw obliczyliśmy ilość gotowych do wywaru leków dla myszy w oparciu o stosunek 20 razy większy niż ilość stosowana dla dorosłych o masie ciała 60 kg; namoczone i zdektowane 2x przez podgrzanie do wrzenia; filtrować zagęszczony i przechowywać wywar w porcjach w temperaturze -20 °C. Aby wykonać podanie przez zgłębnik, załaduj 200 μl skoncentrowanej formuły wywaru do urządzenia do zgłębnika, włóż igłębnik do ust, delikatnie popchnij igłębnik w kierunku żołądka i wstrzyknij formułę wywaru do żołądka myszy. Jednym z naszych ustaleń jest znaczące zahamowanie wzrostu guza obserwowane w grupie otrzymującej formułę wywaru Yiqi Jiedu przez zgłębnik. Zaobserwowaliśmy wyraźne zmniejszenie objętości guza w grupie wywaru Yiqi Jiedu w porównaniu z grupą kontrolną. Wyniki te wskazują, że strategia gavage skutecznie dostarcza aktywne składniki formuły wywaru do miejsca docelowego, co skutkuje silnym działaniem przeciwnowotworowym. Ponadto oceniliśmy profil bezpieczeństwa strategii zgłębnika, monitorując ogólny stan i masę ciała myszy przez cały okres eksperymentalny. Nie znaleźliśmy istotnych różnic w zmianach masy ciała ani oznak toksyczności między grupą spożywającą zgłębnik z wywaru Yiqi Jiedu a grupą kontrolną, co wskazuje, że podawanie przez zgłębnik formuły wywaru jest dobrze tolerowane i nie powoduje oczywistych działań niepożądanych.
Chociaż strategia gaveage okazała się skuteczna w dostarczaniu formuły wywaru zwierzętom doświadczalnym, ważne jest, aby zdać sobie sprawę z potencjalnych działań niepożądanych i pewnych ograniczeń związanych z tą metodą podawania. Aby uniknąć niedrożności tchawicy spowodowanej pokarmem, uważnie obserwuj stan myszy podczas i po zgłębniku, taki jak trudności w oddychaniu, duszność i kaszel. Gdy pojawi się którykolwiek z nich, natychmiast zatrzymaj zgłębnik i wykonaj uciskanie klatki piersiowej na poziomym twardym pulpicie; Ponadto w przypadku każdego poważnego schorzenia konieczna jest natychmiastowa pomoc weterynaryjna. Ponadto musimy zwrócić szczególną uwagę na następujące ograniczenia. Po pierwsze, zgłębnik może wywoływać stres u zwierząt, potencjalnie wpływając na ich ogólną fizjologię i reakcję na leczenie. Podjęliśmy jednak działania mające na celu zminimalizowanie stresu, używając małej igły do karmienia i delikatnie obchodząc się z myszami podczas procedury zgłębnika. Co więcej, zgłębnik może być wykonywany wyłącznie przez osobę, która została specjalnie przeszkolona i wykwalifikowana, aby zapewnić, że stosowana jest znormalizowana technika w celu uniknięcia możliwej szkody dla zwierząt14. Po drugie, dokładny mechanizm, za pomocą którego aktywne składniki formuły wywaru wywierają działanie przeciwnowotworowe, pozostaje niejasny. Możliwe jest, że strategia zgłębnika może zmienić farmakokinetykę i farmakodynamikę związków ziołowych, potencjalnie wpływając na ich biodostępność i skuteczność terapeutyczną. Przyszłe badania powinny koncentrować się na wyjaśnieniu dokładnych mechanizmów leżących u podstaw przeciwnowotworowych efektów formuły wywaru dostarczanej przez zgłębnik. Co więcej, badania wykazały, że zastosowanie znieczulenia izofluranem podczas długotrwałego zgłębnika zmniejsza niepełne spożycie wywaru i śmierć zwierzęcia z powodu niewykwalifikowanej techniki zgłębnika15. Tymczasem dodanie oleju spożywczego do wywaru zmniejsza stres zwierząt związany z zgłębkiem16.
Podsumowując, przedstawiliśmy standaryzowany proces wywaru z chińskich ziół i umiejętną strategię gavage dla myszy. Wysiłki te nie tylko pozwalają uniknąć możliwych urazów przełyku i śmierci myszy doświadczalnych, ale także pozwalają uniknąć przepełnienia lekami, zapewniając, że każde zwierzę doświadczalne podaje równą ilość leków ziołowych, poprawiając w ten sposób dokładność i spójność wyników eksperymentalnych, a także efektów terapeutycznych. Nasze badanie wykazało skuteczność i bezpieczeństwo strategii zgłębnika do podawania formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej w mysim modelu kostniakomięsaka. Wyniki te podkreślają potencjał tej metody podawania w leczeniu kostniakomięsaka i stanowią podstawę do dalszych badań nad optymalizacją strategii podawania przez zgłębnik w tradycyjnej medycynie chińskiej. Ponadto przyszłe badania powinny zbadać dokładne mechanizmy działania aktywnych składników w formule wywaru i zbadać potencjalne efekty synergiczne z innymi metodami leczenia w celu poprawy wyników terapeutycznych u pacjentów z kostniakomięsakiem. Dlatego odkrycia te rzucają światło na potencjalne korzyści i ograniczenia tej metody podawania oraz dostarczają cennych informacji na temat jej zastosowania w leczeniu kostniakomięsaka.

Formuła wywaru jest najczęściej używaną formą dawkowania tradycyjnej medycyny chińskiej i płynnych leków leczniczych1,2. Formuła wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej jest przetwarzana przez dekodację ziół w wodzie po namoczeniu, a następnie filtrowanie w celu odrzucenia osadów.
Ponieważ formuła wywaru może być zindywidualizowana w zależności od potrzeb klinicznych, szczególnie zgodnie z charakterystyką leczenia opartego na dowodach w tradycyjnej medycynie chińskiej, ta forma dawkowania poprzez podanie przezoralne jest stosowana w praktyce klinicznej od tysięcy lat z konkretnymi i niezastąpionymi zaletami3,4. Jakość formuły wywaru jest bezpośrednio związana ze skutecznością kliniczną. Dlatego formuła wywaru musi być przygotowana w oparciu o zasady standardowych metod wywaru, aby zapewnić maksymalną ekstrakcję i ochronę składników aktywnych3. Tymczasem leki gotowe do wywaru są główną formą surowych chińskich ziół stosowanych w praktyce klinicznej; standardy jakości i metody produkcji leków gotowych do spożycia na receptę muszą być zgodne z przepisami Farmakopei Chińskiej2. Co więcej, przepisane leki gotowe do spożycia muszą być namoczone w zimnej wodzie pitnej przez co najmniej 30 minut, zanim zostaną zdekodowane w specjalnym garnku farmaceutycznym przez podgrzanie5. Badania wykazały, że większość składników aktywnych można ekstrahować przez dwukrotne odkrawanie, a Kodeks Postępowania w Podawaniu Pomieszczeń Do Sporządzania Wywarów Tradycyjnych Leków Chińskich w Placówkach Medycznych również zaleca, aby wywar był sporządzany dwukrotnie4,6,7. Jeśli przepisane są specjalne chińskie zioła, takie jak zioła o twardej konsystencji lub toniki, zaleca się wydłużenie czasu wywaru. Przybory do wywaru i pojemniki do przechowywania, które mają bezpośredni kontakt z formułą wywaru, począwszy od pojemnika, w którym moczy się przepisane leki gotowe do wywaru, powinny być stabilne chemicznie i mieć pokrywki, takie jak zapiekanki, ceramika, szkło i stal nierdzewna. Nie należy jednak używać aluminium i zwykłych produktów z tworzyw sztucznych, a żelazo i inne przybory powinny być zabronione, aby uniknąć możliwych reakcji chemicznych, które zmniejszą skuteczność terapeutyczną, a nawet wywołają szkodliwe skutki4,6,7.
Ze względu na ograniczenia związane z przeprowadzaniem eksperymentów klinicznych, małe zwierzęta przenoszące ludzkie choroby, takie jak myszy, są często wykorzystywane w badaniach medycznych do badania skuteczności terapeutycznej i kompleksowych mechanizmów różnych interwencji, w tym formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej8,9; Jednak w przeciwieństwie do ludzi, formuły wywarów powinny być przygotowywane codziennie, mieszane ze sobą i świeżo podawane 2x dziennie w praktyce klinicznej. Zwierzęta nie są w stanie dobrowolnie przyjąć leków na czas z wymaganą dawką, a większość eksperymentów na zwierzętach związanych z tradycyjną medycyną chińską polega obecnie na doustnym podawaniu formuł wywarów na zasadzie zgłębnika. Formuły wywarów stosowane w doświadczeniach na zwierzętach in vivo powinny być przygotowane z wyprzedzeniem, porcjowane, przechowywane w temperaturze -20 °C i rozmrożone tuż przed użyciem3,4,10. Co więcej, niespełniające norm unieruchomienie zwierząt i manipulacja igłą zwiększa ryzyko niepotrzebnych urazów i negatywnych emocji. Dlatego, jako ważna metoda przezdoustnego dostarczania leków, wykwalifikowana technika zgłębnika jest szczególnie ważna, aby uniknąć możliwego uszkodzenia przełyku i rozlania leku, zapewniając w ten sposób, że każde zwierzę modelowe otrzyma równą ilość przepisanego leku ziołowego, aby osiągnąć dokładne wyniki eksperymentalne. Tutaj przedstawiamy protokół zgłębnika dla formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej.

<table><tbody><tr><td>Linia komórkowa 143B</td><td>ATCC</td><td>CRL-8303</td><td>linia komórkowa kostniakomięsaka</td></tr><tr><td>Maszyna anestezjologiczna</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IP</td><td>Sprzęt myszy anestezjologicznych</td></tr><tr><td>Automatyczny licznik komórek</td><td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td><td>IC1000</td><td>Liczenie komórek</td></tr><tr><td>Myszy atymiczne BALB / c</td><td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td><td>Samiec</td><td>Zwierzę</td></tr><tr><td>Kolczasta jarmułka Zioło</td><td>Shanghai Yanghetang Tradycyjna Medycyna Chińska Tablet Co., Ltd.</td><td>20230606</td><td>Leki gotowe do wywaru&nbsp;</td></tr><tr><td>Matryca membrany podstawnej</td><td>Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd</td><td>356234, BD, Matrigel</td><td>ponownie zawieszone komórki</td></tr><tr><td>Probówka wirówkowa (15 ml)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>430790, Corning</td><td>Wirówka komórek</td></tr><tr><td>Igła do pomiaru stawu łokciowego (12 gauge/ 55 mm)</td><td>RWD Life Science Co., Ltd.</td><td>C21014-12</td><td>Element urządzenia do perfuzji żołądka</td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Haishi Hainuo Group Co., Ltd.</td><td>LC45</td><td>Filtr wywarowy</td></tr><tr><td>Żeń-szeń</td><td>Szanghaj Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>20220704-2</td><td>Leki gotowe do wywaru&nbsp;</td></tr><tr><td>Hedyotis diffusa</td><td>Shanghai Yanghetang Tradycyjna Medycyna Chińska Tablet Co., Ltd.</td><td>2023071107</td><td>Leki gotowe do wywaru&nbsp;</td></tr><tr><td>izofluran</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>VETEASY</td><td>Myszy anestezjologiczne</td></tr><tr><td>Strzykawka mikroobjętościowa</td><td>Szanghaj przemysł i handel gołębiami Co., Ltd</td><td>0-50 &mu; L</td><td>Wstrzyknij precyzyjne komórki do kości piszczelowej</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanami</td><td>Beyotime Biotechnology</td><td>ST447</td><td>umyj ludzkie komórki kostniakomięsaka</td></tr><tr><td></td><td>Gumki Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd.</td><td>XPJ</td><td>Gaza mocująca na miarce</td></tr><tr><td>Strzykawka (1 ml)</td> <td>Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd.</td><td>SBM0040</td><td>Składnik urządzenia do perfuzji żołądka</td></tr><tr><td>Trypsyna (0,25%)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>25200056, Gibco</td><td>trypsyna leczenie komórek</td></tr></tbody></table>

strategia zgłębnika dla formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej u myszy modelowych kostniakomięsaka

Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice

Formuła wywaru jest najczęściej używaną formą dawkowania w tradycyjnej medycynie chińskiej i stosowaną w praktyce klinicznej od tysięcy lat przez podawanie przezustne, które charakteryzuje się szybkim efektem, łatwym wchłanianiem i zindywidualizowanym leczeniem opartym na specyficznych zespołach pacjentów. Jakość formuły wywaru jest bezpośrednio odpowiedzialna za skuteczność kliniczną tradycyjnej medycyny chińskiej; Dlatego proces standaryzacji formuły wywaru jest ważny, aby uniknąć różnic w jakości wywaru spowodowanych czynnikami subiektywnymi. Tymczasem, ze względu na ograniczenia związane z przeprowadzaniem eksperymentów klinicznych, małe zwierzęta będące nosicielami chorób ludzkich, takie jak myszy, są często wykorzystywane w badaniach medycznych w celu zbadania skuteczności terapeutycznej i kompleksowych mechanizmów różnych interwencji, w tym formuły wywaru dla tradycyjnej medycyny chińskiej. W związku z tym, jako ważna metoda podawania przezustnego, wykwalifikowana technika zgłębnika jest szczególnie ważna, aby uniknąć potencjalnego uszkodzenia przełyku i rozlania leku, co zapewni równą ilość leku podawaną każdemu zwierzęciu modelowemu, prowadząc do dokładnych wyników eksperymentalnych. Ponadto ustandaryzowana metoda przygotowania formuły wywaru i umiejętna strategia gajnikowania są niezbędne do ochrony dobrostanu zwierząt i zminimalizowania liczby wykorzystywanych zwierząt. Tutaj przedstawiliśmy szczegółowy proces standaryzacji formuły wywaru i techniki zgłębnika na przykładzie wywaru Yiqi Jiedu w mysim modelu kostniakomięsaka. Skuteczność oceniano na podstawie objętości guza. Protokół ten zmaksymalizuje ochronę zwierząt i poprawi wiarygodność danych badawczych, zapewniając w ten sposób skuteczne strategie dla przyszłych badań nad skutecznością terapeutyczną i mechanizmami molekularnymi formuły wywaru dla tradycyjnej medycyny chińskiej in vivo.

Hamujący wpływ wywaru Yiqi Jiedu na wzrost osteosarcoma in vivo określono w mysim modelu ksenoprzeszczepu osteosarcoma wewnątrzpiszczelowego, przygotowanym poprzez wstrzyknięcie komórek osteosarcoma 143B do kości piszczelowej myszy atypowych. Wywar Yiqi Jiedu podawano myszom w grupie Yiqi Jiedu poprzez zgłębnik przez 28 dni, zaczynając od drugiego dnia po wstrzyknięciu komórek 143B. Myszy w grupie kontrolnej otrzymywały sól fizjologiczną. Wszystkie myszy uśpiono po 28 dniach. Wyniki wykazały, że objętość guza w grupie otrzymującej wywar Yiqi Jiedu była znacznie mniejsza w porównaniu z grupą kontrolną (Rycina 5).
<img alt="Składniki i sprzęt do przygotowania naparu ziołowego; próbki ziół, zlewka, gumki recepturki, ręczniki papierowe." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Materiały eksploatacyjne do odwaru. Lek przygotowany do odwaru składa się z (A) żeń-szenia, (B) Hedyotis diffusa, (C) ziół z gatunku Scutellaria barbata, (D) miarki graduowanej, (E) gumek recepturek, (F) gazy, (G) mocowania trzech warstw gazy na wylocie miarki za pomocą gumek recepturek. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Eksperyment z naparem ziołowym z użyciem czajników, proces filtracji i pobieranie próbek do probówek." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Przygotowanie formuły odwaru dla tradycyjnej medycyny chińskiej. (A) Namaczanie przez 30 min leków gotowych do przygotowania odwaru, z wyjątkiem żeńszenia. (B) Oddzielne namaczanie żeńszenia przez 30 min. (C) Oddzielne gotowanie żeńszenia. (D) Filtrowanie formuły odwaru tradycyjnej medycyny chińskiej. (E) Przechowywanie skoncentrowanej formuły odwaru tradycyjnej medycyny chińskiej. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig02large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Porównanie pomiarów strzykawki; 60 mm vs 55 mm, analiza sprzętu medycznego pod kątem precyzyjnego dawkowania." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Materiały eksploatacyjne do zgłębnika. Standardowa strzykawka 1 mL z oryginalną igłą (panel lewy) oraz strzykawka 1 mL, w której oryginalna igła została zastąpiona zakrzywioną igłą do perfuzji żołądkowej nr 12/55 mm w celu przygotowania urządzenia do gavage'u (panel prawy). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Procedura obchodzenia się z myszami laboratoryjnymi i podawania iniekcji, badacz w rękawiczkach, badanie fizjologiczne." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Procedura podawania substancji drogą zgłębną (gavage) u myszy. (A) Mysz na powierzchni klatki. (B) Chwycenie ogona myszy jedną ręką. (C-D) Unieruchomienie myszy jedną ręką. (E) Wprowadzanie igły przez pysk myszy. (F) Zakończenie podawania drogą zgłębną. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Analiza objętości guza; próbki guza, wykres objętości, tabela masy; wyniki badania eksperymentalnego." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 5"> 
Rycina 5: Działanie hamujące odwaru w mysim modelu osteosarkoma. (A) Próbki osteosarkoma pobierane z grupy kontrolnej oraz grupy interwencyjnej otrzymującej odwar Yiqi Jiedu. Słupki błędów oznaczają odchylenie standardowe (n=7) (B) Nieparzysty test t dla objętości guza pomiędzy grupą kontrolną (Ctrl) a grupą interwencyjną otrzymującą odwar Yiqi Jiedu. Interwencja odwarem Yiqi Jiedu przez 28 dni znacząco hamuje objętość guza (p&lt;0,05). Słupki błędów oznaczają odchylenie standardowe (n=7). (C>) Masa ciała myszy w grupie podawanej odwar Yiqi Jiedu doustnie oraz w grupie kontrolnej w trakcie całego okresu eksperymentalnego. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig05large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Protokół przedstawia szczegółowy proces standaryzacji formuły wywaru i techniki zgłębnika, na przykładzie wywaru z Yiqi Jiedu w mysim modelu kostniakomięsaka. Opisano w nim ochronę zwierząt i poprawiono wiarygodność danych badawczych, dostarczając skutecznych strategii badania skuteczności terapeutycznej i mechanizmów molekularnych formuł wywarowych in vivo.

Strategia zgłębnika dla formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej u myszy modelowych kostniakomięsaka

Decoction formula is the most commonly used dosage form in traditional Chinese medicine and applied in clinical practice for thousands of years by ...

Badanie to zapewnia szczegółowy i ustandaryzowany protokół dotyczący wywaru, przygotowania i stopniowej operacji, która stanowi odniesienie dla igły yin. Nasze badania zapewniają, że każde zwierzę jest dawkowane jednakowo, aby uzyskać dokładne wyniki. Nasze badanie ma na celu maksymalizację ochrony zwierząt i poprawę wiarygodności wyników badań nad preparatami wywarów.Na początek namocz 52,5 grama Hedyotis diffusa i 31,5 grama ziela czaszki z zadziorami w wodzie przez 30 minut. Podgrzej zioła do wrzenia na silnym ogniu, a następnie podgrzewaj przez 15 do 25 minut na łagodnym ogniu. Następnie za pomocą gumek przymocuj trzy warstwy gazy do ust miarki.Przefiltruj wywar przez gazę. Wlej przefiltrowany wywar do pojemnika. Podobnie przygotuj drugi wywar, gotując zioła i pijąc wodę tylko tyle, aby zanurzyć zioła.Po ugotowaniu wlej drugi wywar do tego samego pojemnika co pierwszy. Teraz namocz 42 gramy żeń-szenia w wodzie pitnej około trzech centymetrów nad powierzchnią zioła. Namoczony żeń-szeń gotujemy na silnym ogniu przez 60 minut.Następnie wlej ten pierwszy wywar do pojemnika z innymi wywarami. Zrób drugi wywar z żeń-szenia w wodzie pitnej tylko na tyle, aby zanurzyć zioło. Podgrzej ten wywar na łagodnym ogniu przez 40 minut i przefiltruj go do pojemnika na wywar.Przefiltrowany wywar zagotuj na mocnym ogniu w garnku. Następnie zmniejsz płomień do łagodnego ognia. Gotuj wywar, aż do uzyskania pożądanego stężenia.Odpipetować 21 mililitrów skoncentrowanego wywaru do probówek zgodnie z wymaganą dawką przez jeden tydzień. Podwielokrotności należy przechowywać w lodówce w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza. Umieść mysz na powierzchni klatki dla myszy.Chwyć jego ogon kciukiem i palcem wskazującym lewej ręki. Następnie przytrzymaj szyję myszy kciukiem, palcem wskazującym i środkowym prawej ręki. Przytrzymaj mysz, aby wyrównać głowę, szyję i ciało w linii prostej.Włóż załadowaną igłębkę do ust myszy od rogu i dociśnij język do górnej szczęki. Utrzymuj ciało myszy w tej samej linii i delikatnie popchnij igłębkę w kierunku żołądka wzdłuż przełyku. Wstrzyknij formułę wywaru do żołądka.Następnie wyjmij igłę i uwolnij mysz z powrotem do klatki. Podanie wywaru leczniczego zmniejszyło objętość guza kostniakomięsaka u myszy.

gavage-strategy-for-decoction-formula-traditional-chinese-medicine

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Celem tego artykułu jest dostarczenie szczegółowego opisu protokołu testu przerzutów do płuc (PuMA). Model ten pozwala naukowcom badać wzrost komórek kostniakomięsaka z przerzutami (OS) w tkance płucnej za pomocą szerokokątnego mikroskopu fluorescencyjnego lub konfokalnego skaningowego mikroskopu laserowego.

Praktyczne rozważania w badaniu przerzutowej kolonizacji płuc w kostniakomięsaku przy użyciu testu przerzutów do płuc

Bezpośrednie wstrzykiwanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych pochodzenia rakowego (EV) prowadzi do przeprogramowania szpiku kostnego, co wspomaga postęp nowotworu; jednak nie jest jasne, które komórki pośredniczą w tym efekcie. W tym miejscu opisujemy krok po kroku protokół badania interakcji nowotworowo-mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) za pośrednictwem EV in vivo, ujawniając kluczową rolę MSC edukowanych przez EV w przerzutach.

Przedkliniczny mysi model kostniakomięsaka w celu zdefiniowania komunikacji za pośrednictwem pęcherzyków zewnątrzkomórkowych między guzem a mezenchymalnymi komórkami macierzystymi

Tutaj prezentujemy protokół generowania indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC) z fibroblastów pochodzących od pacjentów z zespołem Li-Fraumeni (LFS), różnicowania iPSC poprzez mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) do osteoblastów oraz modelowania nowotworzenia in vivo przy użyciu osteoblastów pochodzących od pacjentów z LFS.

Modelowanie kostniakomięsaka za pomocą zespołu Li-Fraumeni Indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste pochodzące od pacjenta

Model kostnoszkieletowego mięsaka (BEM) dla kostniakomięsaka (OS) jest dobrze znany i pokazany tutaj. Może być używany jako odpowiednie rusztowanie do naśladowania wzrostu guza pierwotnego in vitro i stanowi idealny model do badania histologicznej i cytogennej heterogeniczności OS.

Trójwymiarowy model macierzy zewnątrzkomórkowej kości dla kostniakomięsaka

Tutaj opisana jest syngeniczna implantacja ortotopowa, po której następuje procedura amputacji kostniakomięsaka ze spontanicznymi przerzutami do płuc, która może być wykorzystana do badań przedklinicznych biologii przerzutów i rozwoju nowych terapii.

Syngeneiczny ortotopowy kostniakomięsak Sprague Dawley Rat Model z amputacją w celu kontrolowania częstości przerzutów

Obecny protokół opisuje wstrzykiwanie komórek do kostniakomięsaka kości piszczelowej w celu wygenerowania modeli myszy z ortotopowym kostniakomięsakiem i przerzutami do płuc.

Wstrzyknięcie komórek kostniakomięsaka piszczelowego w celu wygenerowania ortotopowego kostniakomięsaka i mysich modeli przerzutów do płuc

Ten protokół przedstawia ekonomiczną i efektywną metodę ilościowej oceny mikroarchitektury kości w mysim modelu osteoporozy poprzez połączenie barwienia Hematoxylin-Eosin (HE) i technik mikrotomografii komputerowej (Micro-CT).

Ocena mikroarchitektury kości beleczkowej w mysim modelu osteoporozy

Ten protokół dostarcza mysi model wrzodziejącego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego wywołanego przez azmetan w połączeniu z siarczanem dekstranu sodu. Model został wykorzystany do oceny skuteczności związków tradycyjnej medycyny chińskiej w profilaktyce i leczeniu raka jelita grubego.

Opracowanie modelu raka jelita grubego u myszy i ocena efektu terapeutycznego medycyny chińskiej

Obecny protokół opisuje metodę tworzenia mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta (PDX) przy użyciu ludzkiej tkanki kostniakomięsaka.

Opracowanie mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka

Osteoporoza pomenopauzalna stała się globalnym problemem zdrowia publicznego. Celem tego badania jest zbadanie efektów terapeutycznych i powiązanych mechanizmów tradycyjnej medycyny chińskiej tabletek Xiaoyao na ten stan.

Badania nad przeciwzapalnym działaniem tabletek Xiaoyao w leczeniu osteoporozy pomenopauzalnej u myszy

Poznaj standaryzowaną metodę przygotowania wywaru Yiqi Jiedu i technikę zgłębnika u myszy z kostniakomięsakiem. Protokół zapewnia równomierne dawkowanie i ochronę zwierząt, poprawiając niezawodność badań nad skutecznością terapeutyczną formuł tradycyjnej medycyny chińskiej.

Strategia zgłębnika dla formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej u myszy modelowych kostniakomięsaka

Przeglądaj więcej filmów