Name: Monitorowanie stężenia glukozy we krwi u potomstwa myszy po docytoplazmatycznym wstrzyknięciu plemnika (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: Poznaj metodę ICSI-ET u myszy do badania zmian metabolizmu glukozy związanych z wiekiem. Protokół umożliwia ocenę długoterminowych skutków zdrowotnych potomstwa po zapłodnieniu pozaustrojowym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Plan Głównego Projektu Specjalnego Funduszu Rozwoju dla Narodowej Strefy Demonstracji Innowacji Shanghai Zhangjiang (ZJ2022-ZD-006), Projekt Finansowania Ukierunkowanego Komisji Nauki i Technologii Miasta Szanghaju (22DX1900400), Program Młodzieżowy Miejskiej Komisji Zdrowia w Szanghaju (20204Y0276). Chińska Narodowa Fundacja Nauk Przyrodniczych (32070849).

ICSI-ET Mouse Model to Study Long-Term Impacts on Glucose Metabolism

<ol><li>Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+after+intracytoplasmic+injection+of+single+spermatozoon+into+an+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte.</a> Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).</li>
<li>Flurkey, K. M., Currer, J., Harrison, D. E. Vol. III Mouse models in aging research. Ch. 20. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFlurkey%2C+KM+%22The+mouse+in+biomedical+research+%28second+edition%29%22">The mouse in biomedical research (second edition)</a>. Fox, J. G., et al. , Academic Press. Burlington. 637-672 (2007).</li>
<li>Chen, M., Heilbronn, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+health+outcomes+of+human+offspring+conceived+by+assisted+reproductive+technologies+%28art%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Orig+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">The health outcomes of human offspring conceived by assisted reproductive technologies (art).</a> J Dev Orig Health Dis. 8 (4), 388-402 (2017).</li>
<li>Heber, M. F., Ptak, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+assisted+reproduction+technologies+on+metabolic+health+and+diseasedagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">The effects of assisted reproduction technologies on metabolic health and diseasedagger.</a> Biol Reprod. 104 (4), 734-744 (2021).</li>
<li>Ma, R. C. W., Ng, N. Y. H., Cheung, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproduction+technology+and+long-term+cardiometabolic+health+in+the+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Assisted reproduction technology and long-term cardiometabolic health in the offspring.</a> PLoS Med. 18 (9), e1003724(2021).</li>
<li>De Waal, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cumulative+effect+of+assisted+reproduction+procedures+on+placental+development+and+epigenetic+perturbations+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">The cumulative effect of assisted reproduction procedures on placental development and epigenetic perturbations in a mouse model.</a> Hum Mol Genet. 24 (24), 6975-6985 (2015).</li>
<li>Carlin, J., George, R., Reyes, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+donor+supplementation+blocks+the+adverse+effects+of+maternal+high+fat+diet+on+offspring+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Methyl donor supplementation blocks the adverse effects of maternal high fat diet on offspring physiology.</a> PLoS One. 8 (5), e63549(2013).</li>
<li>Hiraoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo-icsi+for+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Piezo-icsi for human oocytes.</a> J Vis Exp. (170), e60224(2021).</li>
<li>Sullivan-Pyke, C. S., Senapati, S., Mainigi, M. A., Barnhart, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fertilization+and+adverse+obstetric+and+perinatal+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">In vitro fertilization and adverse obstetric and perinatal outcomes.</a> Semin Perinatol. 41 (6), 345-353 (2017).</li>
<li>Luke, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+birth+defects+with+conception+by+art%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">The risk of birth defects with conception by art.</a> Hum Reprod. 36 (1), 116-129 (2021).</li>
<li>Norrman, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease%2C+obesity%2C+and+type+2+diabetes+in+children+born+after+assisted+reproductive+technology%3A+A+population-based+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease, obesity, and type 2 diabetes in children born after assisted reproductive technology: A population-based cohort study.</a> PLoS Med. 18 (9), e1003723(2021).</li>
<li>Goldsmith, S., Mcintyre, S., Badawi, N., Hansen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+palsy+after+assisted+reproductive+technology%3A+A+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cerebral palsy after assisted reproductive technology: A cohort study.</a> Dev Med Child Neurol. 60 (1), 73-80 (2018).</li>
<li>Hansen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intellectual+disability+in+children+conceived+using+assisted+reproductive+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Intellectual disability in children conceived using assisted reproductive technology.</a> Pediatrics. 142 (6), e20181269(2018).</li>
<li>Chang, R. C., Wang, H., Bedi, Y., Golding, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconception+paternal+alcohol+exposure+exerts+sex-specific+effects+on+offspring+growth+and+long-term+metabolic+programming%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics+Chromatin%22%5BJournal%5D)">Preconception paternal alcohol exposure exerts sex-specific effects on offspring growth and long-term metabolic programming.</a> Epigenetics Chromatin. 12 (1), 9(2019).</li>
<li>Grasemann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parental+diabetes%3A+The+akita+mouse+as+a+model+of+the+effects+of+maternal+and+paternal+hyperglycemia+in+wildtype+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Parental diabetes: The akita mouse as a model of the effects of maternal and paternal hyperglycemia in wildtype offspring.</a> PLoS One. 7 (11), e50210(2012).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

W badaniu tym zintegrowano techniki docytoplazmatycznego wstrzykiwania plemnika u myszy (ICSI) i transferu zarodków (ET), aby kompleksowo podsumować technologię wspomaganego rozrodu u ludzi (ART) i zbadać wpływ ICSI w połączeniu z ET na rozwój potomstwa. Zastosowanie techniki ICSI z normalnymi plemnikami myszy dało wysokie zapłodnienie (86,76%) i odsetek 2-komórek (88,48%). Po ET wskaźnik urodzeń potomstwa myszy wynosił około 42,50%, co wskazuje na solidność platformy technicznej. Najbardziej godnym uwagi odkryciem tego badania były związane z wiekiem wahania poziomu metabolizmu glukozy u potomstwa ICSI, które można przypisać zastosowaniu techniki ICSI6.
Zaobserwowane wahania poziomu metabolizmu glukozy stanowią niezwykłe odkrycie w tym badaniu. Odkrycie to sugeruje potencjalne długoterminowe implikacje techniki ICSI dla zdrowia potomstwa, w szczególności w odniesieniu do metabolizmu glukozy7. Aby wyjaśnić przyczyny tego zjawiska, przeprowadziliśmy kompleksowe badanie kluczowych etapów technicznych wchodzących w skład procedury ICSI. Stwierdziliśmy, że kontrolowanie temperatury mikroiniekcji (19 °C), czasu trwania cięcia ultradźwiękowego (w ciągu 5 s) i objętości płynu transferowego (<0,5 cm) było ważne dla utrzymania podwyższonej żywotności zarodków i wskaźników implantacji. Kontrolowanie efektu syfonowania pipety transferowej okazało się kluczowym krokiem w precyzyjnym transferze zarodków. Podczas przygotowywania pipety transferowej zapewnienie jednorodności średnicy rurki ma kluczowe znaczenie dla złagodzenia efektu syfonowania i lepszej kontroli ruchu cieczy w probówce. Środek ten ma zasadnicze znaczenie dla zwiększenia wskaźnika powodzenia i dokładności transferu zarodków. Co więcej, unikanie długotrwałych hodowli in vitro i przeludnienia podczas transferu zarodków również przyczyniło się do poprawy kompetencji rozwojowych. Stosując zoptymalizowane protokoły, osiągnęliśmy wskaźnik zapłodnienia na poziomie 86,76% i wskaźnik urodzeń na poziomie 42,50% po ET, co sugeruje, że sama procedura ICSI nie miała z natury negatywnego wpływu na żywotność. W związku z tym wahania metabolizmu glukozy były bardziej prawdopodobne związane z subtelnymi zmianami wewnątrzkomórkowymi wywołanymi przez proces ART niż z jawnym uszkodzeniem zarodka.
Podczas gdy ART jest powszechnie uważany za bezpieczny, coraz więcej dowodów wskazuje, że nawet pozornie normalne potomstwo ART może wykazywać różne zagrożenia dla zdrowia w późniejszym życiu ze względu na nienaturalne cechy rozrodcze i krytyczne okresy interwencji podczas rozwoju gamet i zarodka 5,8,9,10,11,12,13 . Nasze odkrycia dostarczają nowych informacji na temat potencjalnych skutków metabolicznych ART i podkreślają potrzebę dalszych badań nad długoterminowym wpływem ART na zdrowie potomstwa14.
Należy przyznać, że w tym badaniu wykorzystano model mysi; W związku z tym wyniki mogą nie być bezpośrednio przenoszone na ludzi. Niemniej jednak, biorąc pod uwagę istotne podobieństwa biologiczne między myszami a ludźmi, odkrycia te zachowują znaczne znaczenie referencyjne15. Ponadto ważne jest, aby przyznać, że pacjenci poddawani ICSI w praktyce klinicznej często mają nieprawidłowości w plemnikach. I odwrotnie, w badaniu tym wykorzystano normalne myszy do procedur ICSI, w związku z czym brakowało danych na temat potomstwa ICSI od myszy z nieprawidłowościami nasienia. Można jednak przypuszczać, że nieprawidłowości w działaniu nasienia będą miały głębszy wpływ na długoterminowe skutki techniki ICSI. W związku z tym wyniki tego badania zachowują godną uwagi wartość referencyjną.
Kolejnym ograniczeniem naszego badania jest rozbieżność metodologiczna między naszym modelem mysim a ludzkimi praktykami klinicznymi w zakresie unieruchamiania plemników. W klinicznym zastosowaniu ICSI powszechną praktyką jest unieruchamianie ludzkich plemników poprzez fizyczne uszkodzenie ogona za pomocą mikropipety. Jednak w naszych eksperymentach na modelu mysim zastosowaliśmy ultradźwiękowe obcinanie ogona w celu przygotowania plemników, metodę rutynowo stosowaną w manipulacji embrionalnym myszy. Zdajemy sobie sprawę, że takie podejście może nieumyślnie wprowadzić zmienność i potencjalne odchylenie w modelu, zwłaszcza biorąc pod uwagę możliwe uszkodzenie integralności i funkcji plemników, jakie mogą spowodować ultradźwięki. Ta różnica metodologiczna może ograniczać bezpośrednią przekładalność naszych ustaleń. W naszych przyszłych pracach planujemy zbadać zastosowanie mikropipet do zakłócania ogonów nasienia myszy. Dostosowanie to ma na celu zminimalizowanie wszelkich niezamierzonych skutków dla plemników i lepsze odtworzenie warunków i wyników obserwowanych w procedurach ICSI u ludzi. Zobowiązujemy się do ciągłego doskonalenia naszych praktyk badawczych, aby zwiększyć znaczenie kliniczne naszych wyników.
Opierając się na wyżej wymienionej platformie technologicznej, w przyszłych badaniach będziemy dalej badać wpływ techniki ICSI na inne aspekty zdrowia potomstwa, takie jak zdrowie układu sercowo-naczyniowego i układu odpornościowego. Co więcej, długoterminowe badania kontrolne są również niezbędne, aby kompleksowo zrozumieć długoterminowe skutki ICSI.

Problemy z płodnością stały się głównym przedmiotem zainteresowania medycznego i socjologicznego, szczególnie w nowoczesnym społeczeństwie, gdzie spadające wskaźniki dzietności oraz rosnące nasilenie niepłodności i nasilenie urosły do rangi uwydatnienia. Technologia wspomaganego rozrodu (ART) zapewnia szeroki wachlarz możliwości radzenia sobie z tymi wyzwaniami, przy czym docytoplazmatyczne wstrzyknięcie plemnika (ICSI) jest powszechnie stosowane jako interwencja terapeutyczna.
Od 1992 roku, kiedy to w Palermo odnotowano pierwszą udaną ciążę uzyskaną dzięki docytoplazmatycznemu wstrzyknięciu plemnika (ICSI), ICSI stało się kluczową techniką w Technikach Wspomaganego Rozrodu (ART)1. Biorąc jednak pod uwagę, że ICSI jest stosowany w warunkach klinicznych dopiero od 30 lat, co jest stosunkowo krótkim okresem w porównaniu z długością życia człowieka, długoterminowe skutki ICSI, zwłaszcza na rozwój potomstwa, nie zostały dokładnie zbadane i wyjaśnione. Obecnie myszy charakteryzujące się jednolitym tłem genetycznym i krótszą długością życia stały się szeroko stosowanym modelem alternatywnym w badaniach medycznych. Co więcej, model mysi może podsumować całą długość życia człowieka w skompresowanych ramach czasowych, gdzie jeden rok u myszy odpowiada w przybliżeniu 40 latom u ludzi2.
W ciągu ostatniej dekady, kilka badań na małą skalę wykazało, że osoby poczęte za pomocą ICSI mogą być narażone na zwiększone ryzyko rozwoju zespołów metabolicznych, takich jak nieprawidłowy poziom cukru we krwi, w późniejszym życiu3,4. Chociaż dowody nie są ostateczne, odkrycie to wzbudziło jednak poważne obawy w społeczności naukowej dotyczące długoterminowych skutków zdrowotnych ICSI. Sytuacja ta podkreśla pilną potrzebę bardziej rygorystycznych ocen ART i jej długoterminowych konsekwencji zdrowotnych. Szczególnie w świetle ograniczeń i względów etycznych związanych z badaniami na ludziach, opracowanie modeli zwierzęcych, które mogą precyzyjnie odtworzyć rozwój ludzkiego potomstwa po ICSI, staje się coraz bardziej istotne. W tym kontekście, mysi model ICSI-ET (Intracytoplasmic Sperm Injection-Embryo Transfer), ze względu na swoją zdolność do naśladowania ludzkiego ICSI i ułatwiania długoterminowego monitorowania wyników zdrowotnych potomstwa, stał się skutecznym narzędziem do oceny potencjalnych zagrożeń dla zdrowia związanych z technologią ICSI dla potomstwa5.
To badanie ma na celu zbadanie wpływu technologii ICSI-ET na dominujący fenotyp metaboliczny, a mianowicie zdrowie metaboliczne glukozy u potomstwa, poprzez zastosowanie losowego monitorowania poziomu glukozy, badania poziomu glukozy na czczo i testów tolerancji glukozy w celu oceny stanu metabolicznego glukozy u myszy. Wyrywkowe monitorowanie stężenia glukozy we krwi służy do uchwycenia naturalnych wahań metabolizmu glukozy podczas normalnych czynności fizjologicznych, podczas gdy testy stężenia glukozy we krwi na czczo i tolerancji glukozy są stosowane do oceny potencjalnych stanów przedcukrzycowych.

<table><tbody><tr><td>1,25% avertin (2,2,2-tribromoetanol)</td><td>Nanjing Aibei</td><td>M2960</td><td>do znieczulenia</td></tr><tr><td>Bakteriologiczne szalki Petriego 35 x 10 mm ze szczelną pokrywą, krystaliczny polistyren pierwotny, sterylne</td><td>BD</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Bakteriologiczne szalki Petriego 50 x 9 mm ze szczelną pokrywą, krystaliczny polistyren pierwotny, sterylny</td><td>BD</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>Szafa bezpieczeństwa biologicznego</td><td>ESCO</td><td>class <img alt="Równanie 1" src="/files/ftp_upload/66212/66212eq01.jpg" style="margin: auto; "> BSC</td><td>Operacje aseptyczne, wytwarzanie szalek hodowlanych, porcjowanie odczynników itp.</td></tr><tr><td>Inkubator CO2</td><td>Thermo</td><td>8000DH</td><td>Hodowla zarodków</td></tr><tr><td>Mikroskop preparacyjny</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Zastosowanie w transferze zarodków myszy</td></tr><tr><td>Fluorinert Fc-770</td><td>SIGMA</td><td>F3556</td><td>Fluorinert FC-770 to stabilna termicznie, w pełni fluorowana ciecz o wysokiej wytrzymałości dielektrycznej i rezystywności, stosowana jako</td></tr><tr><td>płyn operacyjny ręczny glukometr</td><td>Roche</td><td>AccuChek performa</td><td>Blood Pomiar stężenia glukozy</td></tr><tr><td>HTF</td><td>Merck</td><td>MR-070-D</td><td>Płyn z ludzkich jajowodów EmbryoMax (HTF) (1x), płyn przeznaczony do stosowania z zapłodnieniem in vitro u myszy jest dostępny w formacie 50 ml i został zoptymalizowany i zatwierdzony do hodowli zarodków.</td></tr><tr><td>Mikroiniektor hydrauliczny</td><td>Eppendorf</td><td>CellTram 4r Oil, 5196000030</td><td>Do wstrzykiwań nasienia</td></tr><tr><td>Mikroskop odwrócony</td><td>Nikon</td><td>TI2-U</td><td>Mikromanipulacja obserwacyjna</td></tr><tr><td>gospodarz KSOM</td><td>Merck</td><td>MR-020P-D</td><td>(1x), Proszek, bez czerwieni fenolowej, 5 x 10 ml</td></tr><tr><td>M2</td><td>Merck</td><td>MR-015-D</td><td>EmbryoMax M2 Medium (1x), Płyn, z mikromanipulatorem Phenol Red</td></tr><tr><td></td><td>NARISHIGE</td><td>NTX-N4</td><td>Mikromanipulacyjny olej mineralny do ramienia</td></tr><tr><td> </td>Olej mineralny <td>SIGMA</td><td>M8410</td><td>nadaje się do stosowania jako warstwa wierzchnia do kontroli parowania i zanieczyszczenia krzyżowego w różnych zastosowaniach biologii molekularnej.</td></tr><tr><td>Obcinak do igieł</td><td>Nanjing Aibei</td><td>Sutter MF-800</td><td>Służy do wytwarzania igieł do mikromanipulacji</td></tr><tr><td>Ściągacz igieł</td><td>Nanjing Aibei</td><td>Sutter model p-100</td><td>Służy do wykonywania igieł do mikromanipulacji</td></tr><tr><td>Piezo Drill Trip Mouce ICSI</td><td>Eppendorf</td><td>5195000.087</td><td>Zastosowanie igły iniekcyjnej ICSI.</td></tr><tr><td>Mikromanipulator piezoelektryczny (łamacz membrany)</td><td>Eppendorf</td><td>Eppendorf PiezoXpert</td><td>Wykorzystanie mikroimpulsów do przerwania osłonki przejrzystej i oolemmy oocytu</td></tr><tr><td>Mikroiniektor pneumatyczny</td><td>Eppendorf</td><td>CellTram 4r Air, 5196000013</td><td>Do utrwalenia oocytu</td></tr><tr><td>Gotowa do użycia ludzka gonadotropina kosmówkowa (Hcg)</td><td>Nanjing Aibei</td><td>M2520</td><td>Odczynnik do sterylizacji, wstrzyknięcie dootrzewnowe. 50 j.m./ml</td></tr><tr><td>Gotowa do użycia gonadotropina surowicy ciężarnej klaczy (PMSG)</td><td>Nanjing Aibei</td><td>M2620</td><td>Odczynnik do sterylizacji, wstrzyknięcie dootrzewnowe. 50 IU/ml</td></tr><tr><td>Mikroskop stereoskopowy</td><td>Olympus</td><td>SZX7</td><td>Pobieranie oocytów i obserwacja rozwoju zarodka</td></tr></tbody></table>

monitorowanie stężenia glukozy we krwi u potomstwa myszy po docytoplazmatycznym wstrzyknięciu plemnika

Monitoring Blood Glucose in Mouse Offspring After Intracytoplasmic Sperm Injection

Długość życia człowieka jest znacznie długa, podczas gdy modele mysie mogą symulować całe życie człowieka w stosunkowo krótkim okresie, przy czym jeden rok życia myszy odpowiada mniej więcej 40 ludzkim latom. Docytoplazmatyczne wstrzyknięcie plemnika (ICSI) jest powszechnie stosowaną techniką wspomaganego rozrodu w praktyce klinicznej. Jednak biorąc pod uwagę jej stosunkowo niedawne pojawienie się około 30 lat temu, długoterminowy wpływ tej techniki na rozwój człowieka pozostaje niejasny. W tym badaniu ustaliliśmy metodę ICSI połączoną z transferem zarodków (ET) przy użyciu modelu mysiego. Wyniki wykazały, że normalne plemniki myszy, po przejściu hodowli in vitro, a następnie ICSI, wykazywały wskaźnik zapłodnienia 89,57% i wskaźnik dwukomórkowy 87,38%. Po ET wskaźnik urodzeń potomstwa wynosił około 42,50%. Ponadto wraz z wiekiem myszy obserwowano wahania poziomu metabolizmu glukozy, co może być związane z zastosowaniem techniki ICSI. Odkrycia te oznaczają, że mysia technika ICSI-ET stanowi cenną platformę do oceny wpływu nieprawidłowości plemników na rozwój zarodka i ich długoterminowego wpływu na zdrowie potomstwa, w szczególności w odniesieniu do metabolizmu glukozy. Badanie to dostarcza ważnych informacji dla dalszych badań nad potencjalnym wpływem techniki ICSI na rozwój człowieka, podkreślając konieczność dogłębnego zbadania długoterminowych implikacji tej technologii.

W naszym laboratorium osiągnęliśmy wskaźnik zapłodnienia na poziomie 89,57% oraz wskaźnik rozwoju do stadium 2 komórek na poziomie 87,38%, stosując metodę ICSI z wykorzystaniem plemników z ogona najądrza u myszy. Wskaźnik urodzeń potomstwa po transferze embrionów (ET) wynosi około 42,50%. Co istotne, wszystkie wskaźniki zapłodnienia, wskaźniki rozwoju do stadium 2 komórek oraz wskaźniki urodzeń potomstwa są porównywalne z poziomami osiąganymi w ludzkiej medycynie wspomaganej prokreacji (ART), co umożliwia kompleksową symulację różnych etapów technik ludzkiej ART na modelu mysim. Dalsze szczegóły przedstawiono w Tabeli 1 i Tabeli 2. Podczas procesu wzrostu i rozwoju nie odnotowano istotnych wahań poziomu glukozy we krwi na czczo między myszami urodzonymi naturalnie a myszami uzyskanymi metodą ICSI (Rysunek 2). Jednakże samce myszy ICSI wykazywały stale wysokie poziomy glukozy we krwi na czczo przez cały okres trwania eksperymentu (Rysunek 3), co wskazuje na zaburzenie homeostazy glikemii na czczo. Co ciekawe, u samic myszy ICSI nie zaobserwowano zmian w porównaniu z grupą kontrolną. W teście tolerancji glukozy (GTT) poziom glukozy we krwi wykazał istotną różnicę między samcami myszy ICSI a grupą kontrolną (Rysunek 4), natomiast u samic nie stwierdzono takiej różnicy. Wyniki te sugerują, że potomstwo uzyskane za pomocą technologii ICSI może cierpieć na cukrzycę, a wynik ten jest powiązany z płcią. Chociaż samice myszy nie wykazały fenotypu cukrzycowego, fenotyp nadwagi był spójny zarówno u samców, jak i samic myszy ICSI (Rysunek 5).
Stosując opisany tutaj protokół wstrzykiwania plemników do cytoplazmy (ICSI), osiągnęliśmy wysoki poziom zapłodnienia i rozwoju embrionów u myszy. W reprezentatywnym eksperymencie 89,57% oocytów zostało zapłodnionych po zabiegu ICSI, co potwierdzono poprzez obecność dwóch jąder komórkowych. W 24 h po ICSI 87,38% zygot rozwinęło się do stadium embrionu dwukomórkowego. Po transferze embrionów do samic biorców wskaźnik urodzeń żywych młodych wyniósł 42,50% (wyniki pozytywne). Wykorzystując zoptymalizowany protokół wstrzykiwania plemników do cytoplazmy (ICSI) opisany w niniejszej pracy, efektywnie uzyskaliśmy potomstwo z mysich oocytów i plemników. Co istotne, dokładna charakterystyka zwierząt uzyskanych drogą ICSI wykazała zaburzenia metaboliczne przy braku wyraźnych wad rozwojowych.
W porównaniu z kontrolnymi myszami z naturalnego rozrodu, samce, ale nie samice myszy ICSI, wykazywały zaburzenia homeostazy glukozy, co objawiało się podwyższonym poziomem glukozy we krwi na czczo (Rysunek 3) oraz zmniejszoną tolerancją glukozy w testach tolerancji glukozy przeprowadzonych poprzez podanie domięśniowe (Rysunek 4). Zmiany te mogą wynikać z niedoborów reprogramowania podczas zapłodnienia za pomocą metody ICSI lub subtelnych anomalii genetycznych/epigenetycznych powstałych w wyniku manipulacji plemnikami.
Dodatkowo, zarówno samce, jak i samice myszy poddanych ICSI wykazały zwiększoną masę ciała w porównaniu z grupami kontrolnymi (Rysunek 5), co sugeruje skłonność do otyłości. Chociaż technika ICSI u myszy wiarygodnie modeluje wyniki ICSI u ludzi, zaobserwowane fenotypy metaboliczne podkreślają potrzebę ostrożnej interpretacji wyników uzyskanych z modeli zwierzęcych ICSI. Kompleksowa ocena wzrostu, stanu zdrowia i zachowania jest niezbędna, aby określić przydatność myszy ICSI do dalszych zastosowań.
Wzięte razem, dane te ilustrują użyteczność protokołu ICSI u myszy w celu efektywnego pozyskiwania potomstwa do badań, jednocześnie podkreślając znaczenie dokładnej oceny wyników fenotypowych u zwierząt pochodzących z ICSI. Obserwowane w tym przykładzie specyficzne dla płci nieprawidłowości metaboliczne podkreślają potrzebę ostrożnej interpretacji wyników uzyskanych z modeli mysich ICSI.
<img alt="Koncepcja równowagi statycznej, schemat równowagi sił, ΣFx=0, edukacyjna ilustracja z zakresu fizyki." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Schemat przygotowania naczynia do wstrzyknięcia plemnika do cytoplazmy wewnątrzkomórkowej u myszy. Pokrywkę naczynia do hodowli komórek podzielono na połowę górną i dolną. Połowa górna zawierała krople 10% roztworu poliwinylopirolidonu do umieszczenia plemników. Połowa dolna zawierała krople medium M2 do przeprowadzenia procedury ICSI. Wszystkie krople zostały przykryte olejem mineralnym, aby zapobiec odparowaniu. Taki układ naczynia umożliwił sekwencyjny transfer plemników i oocytów między kroplami PVP a M2 w celu przeprowadzenia procesu ICSI. Rozdzielone obszary zapobiegały mieszaniu się mediów podczas procedury. Skróty: ICSI = wstrzyknięcie plemnika do cytoplazmy wewnątrzkomórkowej; PVP = poliwinylopirolidon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig01large.jpg" target="_blank">Aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku, kliknij tutaj.</a>
<img alt="Wykres poziomów glukozy we krwi u myszy samców i samic; porównanie NM vs. ICSI, analiza statystyczna." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Cotygodniowe losowe poziomy glukozy we krwi u myszy kontrolnych z naturalnego rozrodu (n = 5) oraz myszy ICSI (n = 5) podczas rozwoju postnatalnego. Poziomy glukozy we krwi mierzono co tydzień po całonocnym poście z żyły ogonowej myszy kontrolnych i ICSI za pomocą glukometru. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM. Istotność statystyczną oceniono za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji (two-way ANOVA), ns, P &gt; 0.05. Skróty: SEM = standardowy błąd średniej; ICSI = wstrzyknięcie plemnika do cytoplazmy; ns = nieistotne; NM = kopulacja naturalna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wykres poziomu glukozy w krwi na czczo dla NM vs ICSI u samców i samic myszy w ciągu 16 tygodni, analiza statystyczna." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Tygodniowe poziomy glukozy w krwi na czczo u myszy kontrolnych z naturalnego rozrodu (n = 7 dla samców, n = 7 dla samic) oraz myszy poddanych procedurze ICSI (n = 7 dla samców, n = 7 dla samic) podczas rozwoju postnatalnego. Po całonocnym poście co tydzień mierzono poziom glukozy w krwi pobranej z żyły ogonowej myszy kontrolnych i myszy poddanych ICSI przy użyciu glukometru. Zaobserwowano, że samce poddane ICSI, ale nie samice, wykazywały znacznie podwyższone poziomy glukozy w krwi na czczo w porównaniu do dopasowanych pod względem płci kontroli, zaczynając od 8. tygodnia życia. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM. Istotność statystyczną oceniono za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji ANOVA, ns, P &gt; 0,05, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001). Skróty: SEM = błąd standardowy średniej; ICSI = wstrzyknięcie plemnika do cytoplazmy; ns = brak istotności; NM = naturalne zapłodnienie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Poziomy glukozy we krwi, samce vs. samice, wykres; leczenie NM vs. ICSI w czasie (15-120 min)." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Dożylny test tolerancji glukozy u myszy samców z grupy kontrolnej z naturalnego rozrodu (n = 5) oraz myszy samców poddanych procedurze ICSI (n = 5) w wieku 16 tygodni.Po nocnym poście myszy otrzymały dożylny zastrzyk z glukozą (2 g/kg masy ciała). Poziomy glukozy we krwi mierzono następnie w 0, 30, 60 i 120 min po wstrzyknięciu. Samce poddane procedurze ICSI wykazały istotnie wyższe poziomy glukozy we krwi w 30, 60 i 120 min podczas IPGTT w porównaniu z grupą kontrolną z naturalnego rozrodu. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM. Analizy przeprowadzono za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji (two-way ANOVA). ns, P &gt; 0.05. *P &lt; 0.05. Skróty: IPGTT = dożylny test tolerancji glukozy; SEM = standardowy błąd średniej; ICSI = wstrzyknięcie plemnika do cytoplazmy komórki jajowej; ns = nieistotne; NM = naturalny rozród. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="wykres przyrostu masy ciała samców i samic w ciągu tygodni; porównanie metody NM i ICSI." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 5"> 
Rysunek 5: Monitorowanie masy ciała myszy z grupy kontrolnej rozmaniajanej naturalnie (n = 5 samców, n = 5 samic) oraz myszy poddanych procedurze ICSI (n = 5 samców, n = 5 samic) od 4. do 20. tygodnia życia. Pomiary tygodniowe wykazały, że zarówno samce, jak i samice myszy poddanych procedurze ICSI wykazywały znacząco zwiększoną masę ciała w porównaniu z odpowiadającymi im pod względem płci grupami kontrolnymi, poczynając od 8. tygodnia życia. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM. Analizy przeprowadzono przy użyciu dwuczynnikowej analizy wariancji (two-way ANOVA). ***P &lt; 0.001. ****P &lt; 0.0001. Skróty: SEM = standardowy błąd średniej; ICSI = wewnątrzcytoplazmatyczne wstrzykiwanie plemników; ns = nieistotne statystycznie; NM = kopulacja naturalna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig05large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<table border="1" fo:font-size="8px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody >
		<tr >
			<td style="min-width: 60px;"></td>
			<td style="min-width: 60px;">Oocyty</td>
			<td style="min-width: 60px;">Zygoty</td>
			<td style="min-width: 60px;">Wskaźnik zapłodnienia (%)</td>
			<td style="min-width: 60px;">Stadium 2-komórkowe</td>
			<td style="min-width: 60px;">Wskaźnik stadium 2-komórkowego (%)</td>
			<td style="min-width: 60px;">Stadium 4-8 komórkowe</td>
			<td style="min-width: 60px;">Wskaźnik stadium 4-8 komórkowego (%)</td>
			<td style="min-width: 60px;">Morula</td>
			<td style="min-width: 60px;">Wskaźnik morula</td>
			<td style="min-width: 60px;">Blastocysty</td>
			<td style="min-width: 60px;">Wskaźnik blastocyst</td>
		</tr >
		<tr >
			<td style="min-width: 60px;">Plemniki z ogona naskórka ICSI1</td>
			<td style="min-width: 60px;">90</td>
			<td style="min-width: 60px;">84</td>
			<td style="min-width: 60px;">93.33</td>
			<td style="min-width: 60px;">76</td>
			<td style="min-width: 60px;">90.48</td>
			<td style="min-width: 60px;">72</td>
			<td style="min-width: 60px;">85.71</td>
			<td style="min-width: 60px;">69</td>
			<td style="min-width: 60px;">82.14</td>
			<td style="min-width: 60px;">64</td>
			<td style="min-width: 60px;">76.19</td>
		</tr >
		<tr >
			<td style="min-width: 60px;">Plemniki z ogona naskórka ICSI2</td>
			<td style="min-width: 60px;">80</td>
			<td style="min-width: 60px;">72</td>
			<td style="min-width: 60px;">90</td>
			<td style="min-width: 60px;">62</td>
			<td style="min-width: 60px;">86.11</td>
			<td style="min-width: 60px;">59</td>
			<td style="min-width: 60px;">81.94</td>
			<td style="min-width: 60px;">53</td>
			<td style="min-width: 60px;">73.61</td>
			<td style="min-width: 60px;">46</td>
			<td style="min-width: 60px;">63.89</td>
		</tr >
		<tr >
			<td style="min-width: 60px;">Plemniki z ogona naskórka ICSI3</td>
			<td style="min-width: 60px;">60</td>
			<td style="min-width: 60px;">50</td>
			<td style="min-width: 60px;">83.33</td>
			<td style="min-width: 60px;">42</td>
			<td style="min-width: 60px;">84</td>
			<td style="min-width: 60px;">37</td>
			<td style="min-width: 60px;">74</td>
			<td style="min-width: 60px;">32</td>
			<td style="min-width: 60px;">64</td>
			<td style="min-width: 60px;">28</td>
			<td style="min-width: 60px;">56</td>
		</tr >
		<tr >
			<td style="min-width: 60px;">Suma</td>
			<td style="min-width: 60px;">230</td>
			<td style="min-width: 60px;">206</td>
			<td style="min-width: 60px;">89.57</td>
			<td style="min-width: 60px;">180</td>
			<td style="min-width: 60px;">87.38</td>
			<td style="min-width: 60px;">168</td>
			<td style="min-width: 60px;">81.55</td>
			<td style="min-width: 60px;">154</td>
			<td style="min-width: 60px;">74.76</td>
			<td style="min-width: 60px;">138</td>
			<td style="min-width: 60px;">66.99</td>
		</tr >
	</tbody >
</table>
Tabela 1: Wyniki rozwojowe po ICSI u myszy.Skrót: ICSI = wstrzyknięcie plemnika do cytoplazmy komórki jajowej.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nie.</td>
			<td>Liczba transferowanych embrionów</td>
			<td>Liczba urodzeń (%)</td>
			<td>Samiec</td>
			<td>Kobieta</td>
			<td>Współczynnik urodzeń (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>6</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>6</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>5</td>
			<td>2</td>
			<td>0</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>8</td>
			<td>4</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>8</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6</td>
			<td>7</td>
			<td>5</td>
			<td>3</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suma</td>
			<td>40</td>
			<td>17</td>
			<td>10</td>
			<td>7</td>
			<td>42.5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 2: Wyniki narodzin po transplantacji macicznej embrionów mysich uzyskanych metodą ICSI.Skrót: ICSI = wstrzyknięcie plemnika do cytoplazmy komórki jajowej.

Tutaj prezentujemy protokół do ustanowienia mysiego modelu docytoplazmatycznego wstrzykiwania plemnika (ICSI) i transferu zarodków (ET), co pozwala nam obserwować związane z wiekiem zmiany w metabolizmie glukozy, które mogą być przypisane ICSI, dostarczając wglądu w jego potencjalny długoterminowy wpływ na rozwój człowieka.

Monitorowanie stężenia glukozy we krwi u potomstwa myszy po docytoplazmatycznym wstrzyknięciu plemnika

Human lifespan is considerably long, while mouse models can simulate the entire human lifespan in a relatively short period, with one year of mouse life ...

Sprawdzamy, czy techniki stosowane w ICSI mogą powodować zaburzenia metaboliczne u potomstwa. Jest to bardzo ważne, ponieważ zapewnia bezpieczeństwo i rozwój technologii wspomaganego rozrodu. Nasze badania stanowią solidną podstawę do przyszłych badań, umożliwiając naukowcom zbadanie, w jaki sposób plemniki wpływają na wzrost zarodka i zdrowie potomstwa w czasie.Nasz zespół skupi się na zdrowiu układu sercowo-naczyniowego i wynikach układu odpornościowego u potomstwa ICSI, dążąc do zapewnienia kompleksowego zrozumienia ich długoterminowego zdrowia. Na początek umieść eksperymentalną samicę myszy na platformie roboczej. dootrzewnowo podać dootrzewnowo 7,5 jednostki międzynarodowe gonadotropiny surowicy ciężarnej klaczy około godziny 20:00 pierwszego dnia.Po 48 godzinach wstrzyknąć dootrzewnowo 7,5 jednostki międzynarodowe ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej. Podziel pokrywkę naczynia do hodowli komórkowych na górną i dolną połowę. w górnej połowie umieść od czterech do sześciu kropelek po pięć mikrolitrów PVP każda do umieszczenia nasienia.Dodaj osiem do 10 kropelek po pięć mikrolitrów pożywki M2 każda w dolnej połowie do procedury ICSI. Przykryj kropelki pożywki PVP i M2 około trzema mililitrami oleju mineralnego. Po wyizolowaniu ogona najądrza od uśpionego samca myszy, delikatnie osusz go na wysterylizowanej gazie.Rozetnij najądrze ogona i delikatnie ściśnij za pomocą kleszczy, aby uwolnić plemniki. Zbierając je we wstępnie zrównoważonych rurkach z płynem z jajowodów ludzkich, wypłucz najądrze ogona w wstępnie podgrzanym płynie z jajowodów u człowieka. Umieść probówkę odkrytą w inkubatorze o temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla w celu uzyskania kapacytacji plemników.Czwartego dnia, po wstrzyknięciu ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej, umieść poddaną eutanazji samicę myszy pod mikroskopem preparacyjnym. Za pomocą igły o rozmiarze 25 rozerwij bańkę jajowodu, aby uwolnić liczne kompleksy wzgórko-oocyty. Po kapacytacji sonikować 100 mikrolitrów plemników przez pięć sekund, aby oddzielić głowy od ogonów, Napełnij igłę do mikromanipulacji płynem operacyjnym, upewniając się, że wypełniona porcja mierzy 0,5 centymetra wewnątrz igły.Zamontuj igłę na prawym ramieniu mikromanipulatora i zabezpiecz ją, dokręcając nasadkę mocującą. Następnie zainstaluj pipetę przytrzymującą do mikromanipulacji z płaską końcówką na lewym ramieniu mikromanipulatora. Umieścić igłę do wstrzykiwań i pipetę przytrzymującą w polu widzenia mikroskopu.Pod mikroskopem polaryzacyjnym określ położenie wrzeciona metafazy w oocycie, aby upewnić się, że aparat wrzeciona nie znajduje się po stronie iniekcji. Po zetknięciu się igły iniekcyjnej z osłonką przejrzystą, aktywuj impulsy piezoelektryczne o intensywności pięciu i częstotliwości jeden, tworząc perforację w osłonce przejrzystej i umożliwiając przejście igły do wstrzykiwań. Używając impulsów piezoelektrycznych o intensywności pierwszej i częstotliwości pierwszej, utwórz mały por w błonie plazmatycznej, upewniając się, że główka plemnika jest wstrzykiwana do ooplazmy.Za pomocą atraumatycznych kleszczy ostrożnie wyegzewnętrzizuj jajniki, jajowody i macicę ze znieczulonej samicy myszy w pseudociąży. Wykonaj małe nacięcie pod kątem do góry za pomocą końcówki igły strzykawkowej na ścianie macicy poniżej połączenia macicy i jajowodów, omijając naczynia krwionośne. Delikatnie włóż jajowód na dwa do trzech milimetrów przez mały otwór.Stosując metodę ICSI, wskaźnik zapłodnienia osiągnął 89,57% u myszy, przy czym 87,38% zygot przeszło do stadium zarodka dwukomórkowego w ciągu 24 godzin po ICSI. Wskaźnik urodzeń żywych szczeniąt po transferze zarodków zaobserwowano na poziomie 42,5%Nie było znaczących wahań w losowych poziomach glukozy we krwi między myszami urodzonymi naturalnie a myszami ICSI. Jednak samce myszy ICSI konsekwentnie wykazywały podwyższony poziom glukozy we krwi na czczo, co sugeruje upośledzoną homeostazę glukozy.W testach tolerancji glukozy stwierdzono istotne różnice w poziomie glukozy we krwi między samcami myszy ICSI a myszami kontrolnymi, podczas gdy nie zaobserwowano różnicy u samic. W śledzeniu masy ciała zarówno samce, jak i samice myszy ICSI wykazywały fenotyp nadwagi w porównaniu z grupą kontrolną.

monitoring-blood-glucose-mouse-offspring-after-intracytoplasmic-sperm

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Ten film pokazuje wpływ ciągłego wlewu leku do mózgu myszy na poziom glukozy we krwi. Metabolizm glukozy ocenia się poprzez pobranie krwi z ogona myszy na czczo i pomiar poziomu glukozy przed i po doustnym podaniu glukozy. Tolerancję insuliny ocenia się poprzez wstrzyknięcie insuliny myszy, przy czym poziom glukozy jest rejestrowany w określonych odstępach czasu.

Ocena wpływu ciągłego wlewu leku do mózgu myszy na obwodowy poziom glukozy

Ten protokół bada rolę ligandu 5 (CCL5) chemokiny (motyw C-C) w podwzgórzu, dostarczając antagonistę, MetCCL5, do mózgu myszy za pomocą systemu infuzji mózgu za pomocą mikro-pompy osmotycznej. To przejściowe zahamowanie aktywności CCL5 przerwało sygnalizację insuliny w podwzgórzu, prowadząc do nietolerancji glukozy i obwodowej ogólnoustrojowej wrażliwości na insulinę.

Badanie sygnału insuliny podwzgórzowej do obwodowej nietolerancji glukozy za pomocą systemu ciągłego wlewu leków do mózgu myszy

W tym badaniu opisujemy system in-ovo jako obiecujące narzędzie do testowania związków insulinomimetycznych w żywym organizmie. Do głównych zalet należy zaliczyć odpowiednie przepustowości i akceptowalne koszty, które umożliwiają identyfikację fitozwiązków o właściwościach insulinomimetycznych.

Model in ovo do badania związków insulinomimetycznych

Tutaj opisujemy nową metodę wykrywania udanego ustanowienia wspólnego krążenia krwi dwóch parabiontów poprzez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej, która powoduje minimalne szkody i nie jest śmiertelna dla parabiontów.

Wykrywanie ustalenia wspólnego dopływu krwi u myszy parabiotycznych przez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej

To badanie opisuje bezpośredni pomiar produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników przy użyciu stabilnego izotopowego znacznika glukozy przez żyłę ogonową zarówno na czczo, jak i w stanie bogatym w glukozę w tandemie.

Ocena produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników

Zakażenie matki jest czynnikiem ryzyka zaburzeń neurorozwojowych. Mysie modele aktywacji immunologicznej matki (MIA) mogą wyjaśnić wpływ infekcji na rozwój i funkcjonowanie mózgu. W tym miejscu przedstawiono ogólne wytyczne i procedurę produkcji niezawodnie odpornego i podatnego potomstwa narażonego na MIA.

Generowanie powtarzalnego modelu aktywacji immunologicznej matki w połowie ciąży przy użyciu poli(I:C) w celu zbadania podatności i odporności u potomstwa

Ten artykuł opisuje szczegółowy protokół zwiększania stężenia glukozy w płynie mózgowo-rdzeniowym (CSF) myszy. Takie podejście może być przydatne do badania wpływu wysokiego poziomu glukozy w płynie mózgowo-rdzeniowym na neurodegenerację, funkcje poznawcze i obwodowy metabolizm glukozy u myszy.

Implantacja minipompy osmotycznej w celu zwiększenia stężenia glukozy w płynie mózgowo-rdzeniowym myszy

Tutaj wprowadzamy metodę wykonywania okrągłych wstrzyknięć spermatyd (ROSI) u myszy, technikę o obiecujących zastosowaniach klinicznych i użyteczność do badania mechanizmów leżących u podstaw rozwoju embrionalnego.

Wstrzyknięcie okrągłego plemnika myszy

Ten protokół opisuje metodę zmniejszania spożycia kwasu foliowego lub choliny u samic myszy przed ciążą w celu zbadania wpływu diety matki na wyniki zdrowotne potomstwa.

Modyfikowanie poziomów kwasu foliowego lub choliny w diecie matki w celu zbadania wpływu niedoborów na wyniki zdrowotne potomstwa

Artykuł zawiera kompleksowy protokół do wygenerowania modelu mysiego aktywacji immunologicznej matki (MIA) w celu zbadania wpływu wczesnego zapalenia w czasie ciąży na neurorozwój, w tym kluczowe wskaźniki, aby zapewnić niezawodność i powtarzalność.

Generowanie wczesno-ciążowego modelu aktywacji odporności matczynej u myszy w celu oceny prenatalnego stanu zapalnego na neurorozwój

Poznaj metodę ICSI-ET u myszy do badania zmian metabolizmu glukozy związanych z wiekiem. Protokół umożliwia ocenę długoterminowych skutków zdrowotnych potomstwa po zapłodnieniu pozaustrojowym.

Monitorowanie stężenia glukozy we krwi u potomstwa myszy po docytoplazmatycznym wstrzyknięciu plemnika

Przeglądaj więcej filmów