Name: Techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego Xenopus (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: Poznaj techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego Xenopus, w tym serca, wątroby i nerek. Standaryzowane metody ułatwiają badania w biologii rozwoju i współpracę między laboratoriami.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez R24OD031956 grantowe NIH. Dziękujemy Samancie Jalbert, Jill Ralston i Corze Anderson za ich pomoc i wsparcie, a także naszej redaktorce i anonimowym recenzentom za ich pomocne opinie

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z zasadami i przepisami Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) (IS 00001365_3). Reprezentatywne wyniki przedstawiono zarówno dla perfuzyjnego, jak i nieperfundowanego dojrzałego samca albinosa Xenopus laevis.
1. Przygotowanie eksperymentalne 
UWAGA: Jeśli protokół perfuzji8 jest przestrzegany przed próbkowaniem, przejdź do kroku 2.2.
<ol>
	<li>Upewnij się, że instytucja badawcza zatwierdziła technikę eutanazji opisaną w niniejszym protokole.</li>
	<li>Przygotować roztwór 5 g/l MS-222 (metanosulfonian trikainy) i 5 g/l wodorowęglanu sodu (patrz tabela materiałów). Objętość musi być większa niż objętość wymagana do pokrycia zwierząt poddawanych całkowitej eutanazji. Sprawdź pH, aby upewnić się, że wynosi ≥7.</li>
	<li>Przeprowadzić pierwotną eutanazję, umieszczając Xenopus w roztworze do eutanazji; zwierzę pozostanie zanurzone w wodzie przez łącznie 1 godzinę.</li>
	<li>Ustaw stację preparacyjną tak, aby natychmiast po pobraniu próbki wszystkie tkanki mogły zostać przepłukane w schłodzonym PBS lub 0,7x PBS9 (w zależności od potrzeb eksperymentalnych), sprawdzone i przycięte pod lampą o powiększeniu 5x (lub większym). Stacja ta musi również umożliwiać użytkownikowi wymianę wszystkich kleszczy i nożyczek lub wycieranie ich do czysta między użyciami.</li>
	<li>Gdy żaba znajduje się w roztworze przez 1 godzinę, pierwotna eutanazja została zakończona. Usuń żabę i sprawdź utratę reakcji na ból, wykonując uszczypnięcie stopy.</li>
	<li>Zapisz odpowiednie szczegóły dotyczące zwierzęcia, takie jak gatunek, szczep, płeć, wiek i stan zdrowia, a także to, czy doszło do perfuzji. Zważ Xenopus i wykonaj wszelkie dodatkowe pomiary, takie jak długość pyska.</li>
	<li>Połóż żabę na grzbiecie i przypnij kończyny bliżej ciała (<silna klasa="xfig">Rysunek 1).</li>
	<li>Za pomocą nożyczek preparacyjnych przeciąć skórę, w górę linii środkowej, a następnie bocznie, tworząc dwie klapy.</li>
	<li>Odnosząc się do Rysunek 2, zidentyfikuj linea alba i użyj kleszczy, aby ją chwycić i odciągnąć od jamy celomicznej. Ostrożnie przetnij mięśnie za pomocą nożyczek. Wykonaj dwie klapy ze ściany wnęki. Wytnij lub przypnij wszystkie klapy, aby nie przeszkadzały.</li>
	<li>Zidentyfikuj serce, które nadal będzie bić. Użyj nożyczek preparacyjnych, aby zmniejszyć kości krucze (<silna klasa="xfig">Rysunek 2), aby uzyskać lepszy dostęp do serca. 
	UWAGA: Jeśli serce przestało bić przed pobraniem próbki, należy zauważyć, że świeżość próbki została naruszona.</li>
</ol>
2. Pobieranie próbek
UWAGA: Jeśli zwierzę zostało poddane perfuzji, przejdź do kroku 2.2.
<ol>
	<li>Zidentyfikuj cienkie osierdzie i napnij je kleszczami do tkanek (<silna klasa="xfig">Ryc. 3).</li>
	<li>Za pomocą końcówki nożyczek do irydektomii delikatnie przebij osierdzie, uważając, aby nie przeciąć leżących pod spodem tkanek. Obierz osierdzie z dala od 3 komór serca.</li>
	<li>Użyj kleszczy, aby chwycić komorę za wierzchołek, określ, gdzie przyczepia się do małżowin usznych i pnia tętniczego (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 4) i przetnij ją poniżej tych przyczepów (<silna klasa = "xfig">Rysunek 5). W razie potrzeby przyciąć komorę tak, aby nie były widoczne żadne tkanki z małżowin usznych lub pnia tętniczego, a jasna tkanka zastawki będzie nadal widoczna wewnątrz komory. 
	UWAGA: U zwierząt bez perfuzji usunięcie komory może kwalifikować się jako wtórna eutanazja.</li>
	<li>Widoczne będą 3 płaty wątroby (<silna klasa="xfig">Rysunek 6 i <silna klasa="xfig">Rysunek 7). Chwyć wargę lewego płata (po prawej stronie widza) i delikatnie unieś ją tak, aby widoczne były przewody wątrobowe i torbielowate (Ryc. 8). Próbkuj dolną 1/3 płata poniżej tych nasadek (<silna klasa="xfig">Rysunek 9).</li>
	<li>Aby uzyskać lepszy dostęp do tkanek samicy żaby, pomocne jest usunięcie jajnika. Zidentyfikuj jajnik, który jest otoczony warstwą trzewnej otrzewnej zwaną nabłonkiem zarodkowym. Delikatnie przesuń płatki, aż znajdą się na odpowiednich bokach, aby obszar przyczepu był widoczny (<silna klasa="xfig">Rysunek 10). Te przyczepy są bezpośrednio brzuszne do sparowanej nerki.</li>
	<li>Za pomocą nożyczek usuń jajniki jak najbliżej nerek, nie uszkadzając ich (<silna klasa="xfig">Ryc. 11).</li>
	<li>Sprawdź płat przyśrodkowy (zwany również płatem przednim) wątroby i zwróć uwagę, jak łączy się on z żołądkiem i dwunastnicą przez krezkę i przewód wątrobowo-trzustkowy (zwany również wspólnym przewodem żółciowym) (<silna klasa = "xfig">Rysunek 6, <silna klasa = "xfig" >Rysunek 7 i <silna klasa = "xfig" > Rysunek 8). </li>
	<li>Przeciąć krezkę, więzadło wątrobowo-nerkowe za pomocą nożyczek do irydektomii, a także przewód wątrobowo-trzustkowy, w którym styka się z dwunastnicą. Odciąć połączenie trzustki i przewodu wątrobowo-trzustkowego z płatem przyśrodkowym wątroby, tak aby nie była przyczepiona ciemna tkanka wątroby (<silna klasa = "xfig">Ryc. 12).</li>
	<li>Chwyć żołądek kleszczami zębatymi, a górny koniec trzustki kleszczami tkankowymi. Pod 5-krotnym powiększeniem delikatnie oderwij trzustkę od żołądka (<silna klasa="xfig">Ryc. 13). 
	UWAGA: Jeśli nie odejdzie czysto, pozostała tkanka trzustki będzie widoczna i można ją usunąć we fragmentach. Alternatywnie trzustkę można metodycznie odłączyć za pomocą nożyczek do irydektomii i kleszczy tkankowych.</li>
	<li>Odnosząc się do Rysunek 14A, zidentyfikuj pęcherz moczowy i usuń go, przecinając jak najbliżej kloaki. Wyrzuć tę tkankę.</li>
	<li>Odnosząc się do Rysunek 14B, zidentyfikuj jelito grube i napnij je, aby przeciąć jelito grube jak najbliżej kloaki. Usuń i wyrzuć cały przewód pokarmowy, odcinając otrzewną w miejscu, w którym przyczepia się do śledziony. Grube ciała będą teraz w pełni dostępne.</li>
	<li>Rozsuń grube ciała tak, aby znalazły się po swoich stronach. Widoczny będzie obszar nad nerkami, w którym ciało tłuszczowe łączy się z otrzewną. Chwyć podstawę lewego ciała tłuszczowego (po prawej stronie widza) i użyj nożyczek, aby odciąć je od otrzewnej, pozostawiając niewielki margines, aby nerka nie została uszkodzona (<silna klasa = "xfig">Ryc. 15).</li>
	<li>Usuń i wyrzuć pozostałą tkankę tłuszczową. Sparowane nerki będą teraz w pełni widoczne.</li>
	<li>U samic żab lub samców z wyraźnymi szczątkowymi jajowodami, chwyć jajowód i odciągnij go od nerki i kloaki (<silna klasa="xfig">Ryc. 16). Przetnij jajowód w miejscu, w którym styka się z kloaką i kontynuuj odciąganie go od nerki, przecinając wszelkie wyraźne przyczepy otrzewnej, gdy staną się widoczne. Wyrzuć tę tkankę.</li>
	<li>Powtórz ten proces z pozostałym jajowodem.</li>
	<li>Nerki są nadal pokryte przezroczystą otrzewnową (zaotrzewnową)10. Użyj kleszczy, aby chwycić nerki i odciąć otrzewną na ich dolnym końcu.</li>
	<li>Wyjdź nerki z jamy celomicznej, używając nożyczek, aby przeciąć otrzewną jak najbliżej nerek, nie uszkadzając ich (<silna klasa="xfig">Ryc. 17).</li>
	<li>Pod 5-krotnym powiększeniem odetnij nadmiar otrzewnej i wszelkie inne pozostałe tkanki (ciała tłuszczowe, śledziona). Jeśli żaba jest samicą, upewnij się, że pozostała tkanka jajnika została usunięta (<silna klasa = "xfig">Ryc. 18). Jeśli żaba jest samcem, ostrożnie usuń jądro i sprawdź, czy nie ma szczątkowego jajowodu, który może nie być widoczny bez powiększenia (<silna klasa = "xfig">Ryc. 19).</li>
	<li>Usuń szpilki ze zwierzęcia, odwróć je na jego brzuch i ponownie przypnij kończyny zwierzęcia.</li>
	<li>Wybierz jedną z kończyn tylnych, z których chcesz pobrać próbkę, i przypnij stopę tej kończyny.</li>
	<li>Usuń płat skóry w kształcie migdała znad mięśnia brzuchatego łydki/kości piszczelowej (<silna klasa="xfig">Ryc. 20).</li>
</ol>

Standardized Dissection and Sampling Protocol for Adult Xenopus Organs

<ol><li>Porro, L. B., Richards, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+dissection+of+the+model+organism+Xenopus+laevis+using+contrast-enhanced+computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Digital dissection of the model organism Xenopus laevis using contrast-enhanced computed tomography.</a> J Anat. 231 (2), 169-191 (2017).</li>
<li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (23), 91-106 (2003).</li>
<li>Kittel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--Part+2.+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 413-431 (2004).</li>
<li>Morawietz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice+-+Part+3+-+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice - Part 3 - A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 433-449 (2004).</li>
<li>Patmann, M. D., Shewade, L. H., Schneider, K. A., Buchholz, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+tadpole+tissue+harvest%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Xenopus tadpole tissue harvest.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2017 (11), 097675(2017).</li>
<li>Lőw, P., Molnár, K., Kriska, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+a+Frog+%28Rana+sp.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Atlas+of+Animal+Anatomy+and+Histology%22%5BJournal%5D)">Dissection of a Frog (Rana sp.).</a> Atlas of Animal Anatomy and Histology. , 213-263 (2016).</li>
<li>O'Rourke, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibians+used+in+research+and+teaching%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Amphibians used in research and teaching.</a> ILAR J. 48 (3), 183-187 (2007).</li>
<li>Jonas-Closs, R. A., Peshkin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+rapid+blood+perfusion+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Effective rapid blood perfusion in Xenopus.</a> JoVE. (issue), e65287(2023).</li>
<li>Balls, M., Worley, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibian+cells+in+vitro.+II.+Effects+of+variations+in+medium+osmolarity+on+a+permanent+cells+line+isolated+from+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Amphibian cells in vitro. II. Effects of variations in medium osmolarity on a permanent cells line isolated from Xenopus.</a> Exp Cell Res. 76 (2), 333-336 (1973).</li>
<li>Holz, P. H., Raidal, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+renal+anatomy+of+exotic+species%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+North+Am+Exot+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Comparative renal anatomy of exotic species.</a> Vet North Am Exot Anim Pract. 9 (1), 1-11 (2006).</li>
<li>Trott, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+Mycobacterium+ulcerans-like+infection+in+a+colony+of+African+tropical+clawed+frogs+%28Xenopus+tropicalis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Characterization of a Mycobacterium ulcerans-like infection in a colony of African tropical clawed frogs (Xenopus tropicalis).</a> Comp Med. 54 (3), 309-317 (2004).</li>
<li>Fremont-Rahl, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+liflandii+outbreak+in+a+research+colony+of+Xenopus+%28Silurana%29+tropicalis+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium liflandii outbreak in a research colony of Xenopus (Silurana) tropicalis frogs.</a> Vet Pathol. 48 (4), 856-867 (2011).</li>
<li>Green, S. L., Parker, J., Davis, C., Bouley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+hyperstimulation+syndrome+in+gonadotropin-treated+laboratory+South+African+clawed+frogs+%28Xenopus+laevis%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Ovarian hyperstimulation syndrome in gonadotropin-treated laboratory South African clawed frogs (Xenopus laevis).</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (3), 64-67 (2007).</li>
<li>Vitt, L. J., Caldwell, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+amphibians+and+reptiles.+Herpetol%5BTitle%5D)+AND+%22Herpetol%22%5BJournal%5D)">Anatomy of amphibians and reptiles. Herpetol.</a> Herpetol. , 35-81 (2009).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów.

Ponieważ protokół ten ma na celu maksymalizację świeżości, niektóre próbki mogą zawierać niepożądane tkanki. Na przykład przewód wątrobowo-trzustkowy i niektóre krezki są pobierane za pomocą trzustki, a niektóre tkanki otrzewnej, nadnercza i moczowody zawsze będą pobierane za pomocą sparowanych nerek. Jeśli świeżość nie jest problemem, można uzyskać bardziej precyzyjne pobieranie próbek przy użyciu zmodyfikowanych technik.
Wygląd i lokalizacja narządów są porównywalne między płciami i gatunkami Xenopus. Jednak kolor tkanek różni się znacznie w zależności od tego, czy zwierzęta zostały poddane perfuzji, czy nie. Z tego powodu dołączane są obrazy zarówno zwierząt perfuzowanych, jak i nieperfuzyjnych.
Ograniczeniem tego protokołu jest to, że szybkość i odtwarzalność są ważniejsze niż pobieranie próbek, które najlepiej reprezentują całość pożądanej tkanki. Na przykład wycinek lewego płata wątroby, z którego pobrano próbki, nie może odpowiednio reprezentować wszystkich trzech płatów tkanki wątrobowej. Jeśli występują błędy w pobieraniu próbek, na możliwości rozwiązywania problemów ma wpływ możliwość wystąpienia różnic między różnymi sekcjami tkanki. Na przykład nie wiadomo, czy prawy płat wątroby, prawy tłuszcz lub inna część skóry byłyby funkcjonalną alternatywą dla pożądanych tkanek. W takich przypadkach należy zachować ostrożność, w oparciu o potrzeby badania, przed zastąpieniem odcinków tkanki.
Innym ograniczeniem tego protokołu jest to, że jeśli zwierzęta, od których pobiera się próbki, mają drastyczne wady anatomiczne lub klinicznie istotne problemy zdrowotne, narządy w jamie celomicznej mogą nie wyglądać tak, jak opisano tutaj. Ziarniniaki znaleziono w tkankach żab zakażonych Mycobacterium spp.11,12, a wcześniejsze przypadki zespołu hiperstymulacji jajników wydają się prowadzić do nieprawidłowej prezentacji narządów13.
Chociaż metoda ta została opracowana dla laboratoryjnych Xenopusa, istnieją znaczące podobieństwa w wyglądzie tych narządów u wielu i kończynowych niebędących beznogimi14. Część tego protokołu dotycząca pobierania próbek może być łatwo zmodyfikowana dla innych modeli, takich jak aksolotle lub zielony anol.

Chociaż dostępna jest "cyfrowa sekcja" dorosłego Xenopusa<sup class="xref">1, powtarzalne pobieranie próbek narządów i tkanek dorosłego Xenopus pozostaje wyzwaniem bez szczegółowej instrukcji dostępnej dla innych dorosłych modeli (np. myszy2,3,4). Ten artykuł ma na celu dostarczenie jasnych wskazówek dotyczących dokładnego i powtarzalnego pobierania próbek narządów od dorosłych Xenopus, podobnych do tego, co jest obecnie dostępne dla ich larw5. Nacisk położono na łatwość ukończenia, aby zachować maksymalną świeżość i uczynić protokół dostępnym dla wszystkich użytkowników.
Chociaż istnieje dokładny przewodnik po sekcjach dla Rana sp.6, a także liczne przewodniki po sekcjach dla innych anuranów7, obecnie nie jest dostępny żaden przewodnik po sekcji i próbkowaniu Xenopus. Dla tych, którzy nie są zaznajomieni z praktykami pobierania próbek lub anatomią, niewielkie różnice między Xenopus a innymi anuranami sprawiają, że zasoby te nie są optymalne do powtarzalnego pobierania próbek tkanek.
Wiele cennych tkanek nie jest uwzględnionych i nawet jest odrzucanych w niniejszym przewodniku; ma to na celu zapewnienie świeżości tkanek. Sześć próbek jest na tyle ograniczonych, że tkanki te można pobrać w czasie krótszym niż godzina po rozpoczęciu bicia serca, niezależnie od doświadczenia i poziomu umiejętności użytkownika. Bardziej zaawansowane i szczegółowe przewodniki dotyczące pobierania wielu innych tkanek są w trakcie opracowywania jako osobne dokumenty towarzyszące.
Dla mniej doświadczonych użytkowników, zawsze zaleca się, aby ten protokół został najpierw wypróbowany na zwierzętach poddanych eutanazji z powodów innych niż eksperymenty, zanim pobierze się próbki od zwierząt, które są trudne do zastąpienia (np. transgenicznych, zwierząt w zaawansowanym wieku, itp.). Idealnie byłoby, gdyby wszystkie zwierzęta, od których pobrano próbki, były zdrowe, a jeśli są samicami, nie miały owulacji w ciągu ostatnich dwóch tygodni.

<table><tbody><tr><td>5x Szkło powiększające ze światłem LED i podstawką</td><td></td><td>amazon.com B08QJ6J8P1</td><td>światło nie może wytwarzać ciepła</td></tr><tr><td>Jednorazowe pipety transferowe</td><td>VWR</td><td>414004-036</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze preparacyjne drobno zakończone</td><td>Fisher Scinetific</td><td>08-875</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki preparacyjne ostre pionowe, proste 6,5"</td> <td>VWR</td><td>76457-374</td><td></td></tr><tr><td>Taca preparcyjna</td><td>Arkusze styropianu</td> <td>Fisher Scinetific</td><td>14-370-284</td> są akceptowalną alternatywą</tr><tr><td>Pojemnik do eutanazji</td><td>US Plastic&nbsp;</td><td>Pozycja&nbsp; 2860</td><td>alternatywnych nieprzezroczystych pojemników dopuszczalne</td></tr><tr><td>pokrywy pojemnika do eutanazji</td><td>US Plastic&nbsp;</td><td>Pozycja&nbsp; 3047</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki do irydektomii 6 "</td><td>vwr</td><td>470018-938</td><td>Nożyczki do tęczówki są akceptowalną alternatywą</td></tr><tr><td>MS-222: Syncaina (dawniej trykaina)</td><td>Pentair AES</td><td>TRS1</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1x</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu, proszek, USP</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-606-333</td><td></td></tr><tr><td>Kleszczyki do próbek, ząbkowane</td><td>VWR</td><td>82027-442</td><td></td></tr><tr><td>Kołki teowe do preparowania</td><td>Fisher Scinetific</td><td>S99385</td><td></td></tr></tbody></table>

techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego xenopus

Techniques for Rapidly Sampling Six Crucial Organs in Adult Xenopus

Xenopus od ponad stu lat jest potężnym organizmem modelowym do zrozumienia rozwoju i chorób kręgowców. Podczas gdy techniki analizy eksperymentalnej i sekcji zarodka zostały dobrze udokumentowane, opisy dorosłych struktur i narządów Xenopus, wraz z technikami pracy z dorosłymi, nie zostały zaktualizowane w celu uwzględnienia wymagań takich nowoczesnych podejść, jak proteomika ilościowa i transkryptomika pojedynczych komórek. Perspektywa skoncentrowana na typie komórki i genach wymaga kontrastujących obserwacji w stadiach embrionalnych z tymi w tkankach dorosłych. Narządy larwy przechodzą znaczące zmiany w ich ogólnej strukturze, morfologii i lokalizacji anatomicznej na całej długości przejścia od larwy do dorosłego osobnika, w szczególności podczas masywnej przebudowy metamorfozy. Ustanowienie solidnych standardów identyfikacji i sekcji narządów ma kluczowe znaczenie dla zapewnienia spójności zbiorów danych pochodzących z badań przeprowadzonych w różnych laboratoriach. Niniejszy protokół identyfikuje sześć narządów u dorosłego Xenopusa, demonstrując metody preparowania i pobierania próbek z komory serca, wątroby, ciała tłuszczowego, trzustki, sparowanej nerki i skóry dorosłego Xenopusa. W zależności od metod konserwacji, wypreparowane narządy mogą być wykorzystane do proteomiki ilościowej, transkryptomiki pojedynczej komórki/jąder, hybrydyzacji in situ, immunohistochemii, histologii itp. Protokół ten ma na celu standaryzację pobierania próbek tkanek i ułatwienie badań wielolaboratoryjnych układów narządów dorosłych.

Wykorzystując Rysunek 1 do Rysunku 20 i postępując zgodnie ze wszystkimi krokami niniejszego protokołu, komora serca, lewy płat wątroby, trzustka, lewe ciała tłuszczowe, sparowane nerki oraz płat skóry zostały precyzyjnie wycięte w ciągu godziny od eutanazji. W tym czasie próbki są płukane i przycinane tak, aby wyglądały jak pokazano na Rysunku 21.
<img alt="Schemat sekcji żaby, badanie anatomiczne z przypiętymi kończynami; linie pomiarowe na brzuchu do celów edukacyjnych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig1.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Przypięty Xenopus. Dorosła samica X. tropicalis przypięta za pomocą szpilek w każdej kończynie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig1large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Schemat sekcji żaby przedstawiający kości krucze i linię białą, do badań anatomicznych i celów edukacyjnych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig2.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: Ściana brzuszna. Brzuszna skóra samicy X. tropicalis została nacięta i rozchylona, odsłaniając linię białą oraz kości krucze. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Schemat sekcji osierdzia i serca szczura, przedstawiający cechy i struktury anatomiczne." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig3.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Serce otoczone osierdziem. Wierzchołek komory serca jest chwycony przez osierdzie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig3large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Schemat sekcji pokazujący pień tętniczy i komorę serca w badaniu anatomii płazów." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig4.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Komora serca i pień tętniczy. Komora serca przepłukanego osobnika X laevis podczas chwytania, ukazująca jej połączenie z pniem tętniczym. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig4large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat anatomii serca; przedstawia uszka, pień tętniczy, komorę; oznaczenia edukacyjne." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig5.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 5"> 
Rysunek 5: Schemat serca. Schemat istotnych struktur serca z linią przerywaną wskazującą miejsce pobrania próbki z komory. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig5large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Schemat anatomii wątroby z pęcherzykiem żółciowym, trzustką, przewodami i dwunastnicą, przedstawiający przepływ żółci." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig6.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 6"> 
Rysunek 6: Schemat hepatopankretyczny. Schemat trzech płatów wątroby, trzustki i narządów towarzyszących. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig6large.JPG" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>

<img alt="Schemat narządów wewnętrznych przedstawiający wątróbę, trzustkę, śledzionę, pęcherzyk żółciowy i przewody do celów edukacji anatomicznej." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig7.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 7"> 
Rysunek 7: Narządy hepatopankreatyczne. Przeperfundowany, albinotyczny samiec X. laevis z opisanymi trzema płatami wątroby, trzustką i powiązanymi narządami. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig7large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Schemat anatomiczny sekcji żaby przedstawiający płaty wątroby, pęcherzyk żółciowy, trzustkę i jelita." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig8.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 8"> 
Rysunek 8: Przewody pęcherzykowe i wątrobowe. Lewy płat wątroby jest odchylony, aby ukazać przewody pęcherzykowe i wątrobowe u perfundowanej X. laevis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig8large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Sekcja żaby ukazująca organy wewnętrzne, edukacyjny eksperyment biologiczny, pomoc w badaniu anatomicznym." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig9.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 9"> 
Rycina 9: Pobieranie próbek wątroby. Lewy płat wątroby nieperfundowanego X. tropicalis zostaje odcięty poniżej przyczepów przewodów wątrobowych. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig9large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat sekcji żaby z zaznaczonymi ciałami tłuszczowymi, śledzioną, nabłonkiem rozrodczym i jajnikami." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig10.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 10"> 
Rycina 10: Przyczepy jajnika. Po odsunięciu płatów jajnika na odpowiednie strony widoczna jest ciągłość nabłonka rozrodczego z ścianą otrzewnej (nad nerkami). Dwie białe przerywane linie wskazują miejsca, w których należy przeciąć te przyczepy. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig10large.JPG" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat sekcji anatomicznej żaby z opisanymi organami, w tym wątrobą, żołądkiem, jajnikami i jelitami." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig11.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 11"> 
Rysunek 11: Usuwanie jajnika. Jajnik nieprzepłukanego X. laevis jest odsuwany od sparowanych nerek. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig11large.JPG" target="_blank">Aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku, kliknij tutaj.</a>
<img alt="Schemat anatomiczny sekcji kota z opisaną wątrobą, trzustką, żołądkiem i dwunastnicą; materiał edukacyjny." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig12.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 12"> 
Rycina 12: Nacięcia krezki. Jama ciała nieperfundowanego X. laevis po pobraniu próbek z komory serca i lewego płata wątroby oraz po usunięciu jajnika. Biała przerywana linia wskazuje miejsce przecięcia więzadła i przewodu wątrobowo-trzustkowego, natomiast zielona przerywana linia wskazuje miejsce oddzielenia trzustki od przyśrodkowego płata wątroby. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig12large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Sekcja anatomiczna ukazująca narządy trzewne, elementy układu pokarmowego i tkanki łącznej." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig13.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 13"> 
Rycina 13: Pobieranie próbek trzustki. Trzustka nieprzepłukanej X. laevis jest oddzielana od żołądka. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig13large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Porównanie sekcji pęcherza moczowego i jelita grubego na schemacie anatomicznym świni." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig14.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 14"> 
Rysunek 14: Usunięcie organów. (A) pęcherz moczowy nieprzepłukanego *X. laevis* jest oddzielone od kloaki linią przerywaną wskazującą miejsce cięcia. (B) Jelito grube niepoddanego perfuzji X. laevis, jest odciągana od kloaki, a przerywana linia wskazuje miejsce, w którym należy ją odciąć. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig14large.JPG" target="_blank">Prosimy o kliknięcie tutaj w celu wyświetlenia powiększonej wersji tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat sekcji: opisane wewnętrzne organy płaza, w tym jądra i nerki do celów edukacyjnych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig15.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 15"> 
Rycina 15: Pobieranie próbek ciała tłuszczowego. Ciała tłuszczowe, przytwierdzone do otrzewnej w górnej części sparowanych nerek, są wyciągane z jamy coelomicznej; przerywana linia wskazuje miejsce ich odcięcia. Należy zauważyć, że obok tego przyczepu u tego samca X. tropicalis znajduje się jedno jądro oraz para wyraźnych, szczątkowych jajowodów. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig15large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat anatomiczny sekcji gady; pokazuje prawy przewód jajowodowy, przezroczystą otrzewną, sparowane nerki." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig16.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 16"> 
Rysunek 16: Usunięcie jajowodu. Jajowód perfundowanego X. laevis jest odciągnięty od sparowanej nerki, co czyni widoczną przezroczystą otrzewną. Linia przerywana wskazuje miejsce nacięcia otrzewnej. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig16large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Schemat sekcji ukazujący anatomię płuc, sparowanych nerek, otrzewnej i splotu kulszowego." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig17.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 17"> 
Rycina 17: Pobieranie próbek nerek. Sparowane nerki nieprzepłukanej X. laevis są wyjmowane z jamy ciała. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig17large.JPG" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Porównanie tkanek; analiza infekcji pasożytniczej; obraz preparatu biologicznego; wynik badania naukowego." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig18.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rysunek 18"> 
Rysunek 18: Przycinanie nerek. (A) Widok brzuszny nieprzepłukanych parzystych nerek samicy X. laevis’ z przyłączonymi narządami otrzewnymi. (B) Ta sama nerka po usunięciu powiązanych narządów, z pozostałymi fragmentami tkanki otrzewnej. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig18large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Układ do sekcji, oznaczone jądro i sparowane nerki w szalce Petriego, badanie identyfikacji organów." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig19.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 19"> 
Rycina 19: Usunięcie jądra. Sparowane nerki nieperfundowanego X. tropicalis po usunięciu jednego jądra. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig19large.JPG" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Porównanie anatomii nogi żaby; przedissekowane kończyny ukazujące strukturę mięśniową; badanie biologiczne." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig20.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 20"> 
Rycina 20: Pobieranie próbek skóry. (A) Prawa noga X. tropicalis z linią przerywaną wskazującą obszar skóry do pobrania. (B) Prawa noga X. tropicalis z usuniętą próbką skóry nad kością piszczelowo-strzałkową. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig20large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Porównanie organów samca albino X. laevis, perfundowanych i nieperfundowanych, w szalkach Petriego; badanie biologiczne." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig21.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Rycina 21"> 
Rycina 21: Reprezentatywne wyniki pobierania organów. Próbki komory serca, wątroby, trzustki, ciała tłuszczowego, parzystej nerki oraz skóry pobrane z perfundowanego i nieperfundowanego osobnika albino X. laevis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig21large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Ten artykuł przedstawia przewodnik do pobierania próbek z sześciu ważnych i różnorodnych narządów u dorosłego Xenopus, do których można szybko i łatwo dotrzeć: komora serca, płat wątroby, trzustka, ciała tłuszczowe, sparowane nerki i skóra.

Techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego Xenopus

Xenopus has been a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease for over a hundred years. While experimental analysis and ...

Przed tą pracą opracowałem protokół szybkiej perfuzji. Protokół ten powinien być stosowany przed pobraniem próbek do badań, takich jak proteomika i immunochemia, w których obecność nadmiernej ilości krwi w tkankach jest niepożądana. Chociaż dostępnych jest wiele schematów i innych pomocy, obecnie nie ma kompleksowych przewodników, jak szybko i niezawodnie wypreparować tkanki dorosłego Xenopus.Mamy nadzieję, że ustandaryzowane techniki pobierania próbek pozwolą laboratoriom na łatwe udostępnianie tkanek. Jest to szczególnie korzystne w sytuacjach, gdy import i eksport zwierząt nie jest możliwy ze względu na obawy dotyczące bezpieczeństwa biologicznego lub ograniczenia w transporcie. Na początek weź żabę, która była zanurzona w roztworze do eutanazji na godzinę i uszczypnij jej stopę, aby sprawdzić, czy nie ma reakcji bólowej.Zważ Xenopus i wykonaj dodatkowe pomiary, takie jak długość od pyska do otworu wentylacyjnego. Połóż żabę na grzbiecie i zabezpiecz jej kończyny blisko ciała. Za pomocą nożyczek preparacyjnych wykonaj nacięcie przez skórę wzdłuż linii środkowej, a następnie rozciągnij je na boki, aby utworzyć dwa płaty skóry.Następnie zlokalizuj linea alba i chwyć ją kleszczami. Delikatnie wyciągnij go z jamy celomicznej i za pomocą nożyczek przetnij leżącą pod spodem muskulaturę. Utwórz dwie klapy ze ściany gniazda.Zidentyfikuj wciąż bijące serce i użyj nożyczek preparacyjnych, aby przyciąć kości cricoid, aby uzyskać lepszy dostęp. Teraz użyj kleszczyków tkankowych, aby zidentyfikować cienkie osierdzie i rozciągnąć je. Za pomocą końcówki nożyczek do irydektomii ostrożnie przebij osierdzie.Następnie usuń osierdzie z dala od trzech komór serca. W tym protokole pokazano pobieranie próbek z komory serca, lewego płata wątroby, trzustki, ciała tłuszczowego, sparowanych nerek. Aby pobrać próbkę komory serca, chwyć ją na wierzchołku kleszczami, zlokalizuj jej połączenie z wyroczniami i pniem tętniczym i odetnij ją poniżej tych punktów.Następnie obserwuj trzy płaty wątroby. Delikatnie unieś lewy płat, aby odsłonić przewody wątrobowe i torbielowate, a następnie pobierz próbkę jednej trzeciej tego płata poniżej przewodów. Jeśli żaba jest samicą, zlokalizuj jajnik pokryty nabłonkiem zarodkowym.Delikatnie zmień położenie płatków w każdą stronę, aby odsłonić obszar przyczepu. Użyj nożyczek, aby wyciąć jajniki jak najbliżej nerek, nie uszkadzając ich. Następnie zbadaj płat przyśrodkowy wątroby i jego połączenia z żołądkiem i dwunastnicą przez krezkę i przewód wątrobowo-trzustkowy.Za pomocą nożyczek do irydektomii przeciąć więzadło wątrobowo-oddechowe krezki i przewód wątrobowo-trzustkowy w pobliżu dwunastnicy. Odłącz trzustkę i przewód od płata przyśrodkowego wątroby, nie pozostawiając przyczepionej ciemnej tkanki wątroby. Następnie przytrzymaj żołądek za pomocą kleszczy zębatych.Następnie użyj kleszczyków tkankowych, aby przytrzymać górny koniec trzustki. W 5-krotnym powiększeniu ostrożnie oddziel trzustkę od żołądka. Teraz zlokalizuj i wytnij pęcherz moczowy, przecinając jak najbliżej kloaki, a następnie wyrzuć tkankę.Następnie zidentyfikuj jelito grube i rozciągnij je, przecinając je w pobliżu kloaki. Następnie oddziel ciała tłuszczowe z każdej strony. Chwyć podstawę lewego ciała tłuszczowego i odetnij go od otrzewnej.W przypadku samic żab lub samców z widocznymi szczątkowymi jajowodami, należy przytrzymać jajowód i oddzielić go od nerki i kloaki. Przeciąć połączenie kloaki i kontynuować odłączanie go od nerki, usuwając wszelkie wyraźne przyczepy otrzewnej. Teraz użyj kleszczy, aby przytrzymać nerki i przeciąć otrzewną na ich dolnym końcu.Podnieś nerki z jamy celomicznej. Za pomocą nożyczek odłącz otrzewną jak najbliżej nerek, nie powodując szkody. W 5-krotnym powiększeniu usuń nadmiar otrzewnej i resztki tkanek, takich jak jądra, ciała tłuszczowe lub śledziona.Po uwolnieniu zwierzęcia połóż je na brzuchu i zabezpiecz jego kończyny. Wybierz jedną tylną kończynę do pobrania próbki i zabezpiecz jej stopę. Wytnij płat skóry w kształcie migdała znad obszaru mięśnia brzuchatego łydki lub kości piszczelowo-strzałkowej.Następnie wypłucz wszystkie próbki i PBS, sprawdź, czy nie ma nadmiaru tkanek i przytnij przed użyciem, jeśli to konieczne. Komora serca, lewy płat wątroby, trzustka, lewe ciała tłuszczowe, sparowane nerki i płat skóry zostały czysto wycięte w ciągu godziny od eutanazji.

techniques-for-rapidly-sampling-six-crucial-organs-in-adult-xenopus

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten film demonstruje procedury używane do hodowli pierwotnych kultur embrionalnych komórek nerwowych i mięśniowych Xenopus oraz przydatność tego preparatu do jednoczesnego wykonywania nagrań pre- i post-synaptycznych klamerów.

Jednoczesny pre- i postsynaptyczny zapis elektrofizjologiczny z kokultur nerwowo-mięśniowych Xenopus

Tutaj prezentujemy protokół do wykorzystania map losu i znaczników linii do celowania w zastrzyki do poszczególnych blastomerów, które dają początek nerkom zarodków Xenopus laevis.

Technika celowania w mikrowstrzyknięcie do rozwijającej się nerki Xenopus

Ten protokół demonstruje metodę opartą na fluorescencji do wizualizacji układu naczyniowego i ilościowego określenia jego złożoności u Xenopus tropicalis. Naczynia krwionośne można obrazować kilka minut po wstrzyknięciu barwnika fluorescencyjnego do bijącego serca zarodka po manipulacjach genetycznych i/lub farmakologicznych w celu zbadania rozwoju układu sercowo-naczyniowego in vivo.

Wizualizacja i analiza ilościowa angiogenezy embrionalnej u Xenopus tropicalis

Opisujemy kroki, które umożliwiają szybkie pobieranie próbek in situ małej części pojedynczej komórki z dużą precyzją i minimalną inwazją, przy użyciu mikropróbkowania opartego na kapilarach, aby ułatwić chemiczną charakterystykę migawki aktywności metabolicznej w żywych zarodkach przy użyciu specjalnie zbudowanej platformy do elektroforezy kapilarnej i spektrometrii mas z pojedynczą komórką.

Elektroforeza kapilarna z mikrosondą Spektrometria mas do metabolomiki pojedynczych komórek w żywych zarodkach żab (Xenopus laevis)

Prezentowany tutaj jest skuteczny protokół szybkiej perfuzji krwi do przygotowania próbek tkanek od afrykańskich żab szponiastych do badań transkryptomicznych i proteomicznych.

Skuteczna szybka perfuzja krwi w Xenopus

To jest pierwsza część kompleksowego protokołu próbkowania Xenopus. Pobrane tkanki to komora serca, pień tętniczy, lewy płat wątroby, pęcherzyk żółciowy, płuco, trzustka, śledziona, krtań, przełyk, żołądek, jelita, jądra, ciała tłuszczowe, jajowód, sparowane nerki, splot kulszowy, skóra, grasica i całe oko.

Skuteczne techniki kompleksowego pobierania próbek dostępnych tkanek u dorosłych Xenopus

Wizualizacja transportu RNA in vivo jest realizowana poprzez mikroiniekcję fluorescencyjnie znakowanych transkryptów RNA do oocytów Xenopus, a następnie za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Wizualizacja lokalizacji RNA w oocytach Xenopus

Niniejszy protokół opisuje procedurę identyfikacji i wycinania narządów z dorosłego danio pręgowanego.

Disekcja organów dorosłej rybki zebrafish

Oceniono sygnały [Ca2+]i wywołane bodźcem w pojedynczych ludzkich plemnikach. Ruchome komórki obciążono fluorescencyjnym barwnikiem wrażliwym na Ca2+ (metodą estru AM) i unieruchomiono w komorze przepływowej. Obrazowanie komórek przeprowadzono za pomocą fluorescencyjnej mikroskopii poklatkowej, a stymulację wykonano poprzez medium perfuzyjne. Odpowiedzi pojedynczych komórek (lub obszarów) przeanalizowano offline przy użyciu programu Excel.

Techniki obrazowania sygnalizacji Ca2+ w ludzkich plemnikach

Prąd jonowy kanałów BK rejestruje się przy użyciu technik patch clamp. Kanały BK są eksprymowane w oocytach Xenopus poprzez wstrzykiwanie mRNA. Roztwór wewnątrzkomórkowy podczas pomiarów patch clamp jest kontrolowany przez system perfuzyjny.

Techniki patch clamp i perfuzji do badania kanałów jonowych ekspresowanych w oocytach Xenopus

Poznaj techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego Xenopus, w tym serca, wątroby i nerek. Standaryzowane metody ułatwiają badania w biologii rozwoju i współpracę między laboratoriami.

Techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego Xenopus

Przeglądaj więcej filmów