Techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego Xenopus
16 lutego 2024
Ten artykuł przedstawia przewodnik do pobierania próbek z sześciu ważnych i różnorodnych narządów u dorosłego Xenopus, do których można szybko i łatwo dotrzeć: komora serca, płat wątroby, trzustka, ciała tłuszczowe, sparowane nerki i skóra.
Przed tą pracą opracowałem protokół szybkiej perfuzji. Protokół ten powinien być stosowany przed pobraniem próbek do badań, takich jak proteomika i immunochemia, w których obecność nadmiernej ilości krwi w tkankach jest niepożądana. Chociaż dostępnych jest wiele schematów i innych pomocy, obecnie nie ma kompleksowych przewodników, jak szybko i niezawodnie wypreparować tkanki dorosłego Xenopus.
Mamy nadzieję, że ustandaryzowane techniki pobierania próbek pozwolą laboratoriom na łatwe udostępnianie tkanek. Jest to szczególnie korzystne w sytuacjach, gdy import i eksport zwierząt nie jest możliwy ze względu na obawy dotyczące bezpieczeństwa biologicznego lub ograniczenia w transporcie. Na początek weź żabę, która była zanurzona w roztworze do eutanazji na godzinę i uszczypnij jej stopę, aby sprawdzić, czy nie ma reakcji bólowej.
Zważ Xenopus i wykonaj dodatkowe pomiary, takie jak długość od pyska do otworu wentylacyjnego. Połóż żabę na grzbiecie i zabezpiecz jej kończyny blisko ciała. Za pomocą nożyczek preparacyjnych wykonaj nacięcie przez skórę wzdłuż linii środkowej, a następnie rozciągnij je na boki, aby utworzyć dwa płaty skóry.
Następnie zlokalizuj linea alba i chwyć ją kleszczami. Delikatnie wyciągnij go z jamy celomicznej i za pomocą nożyczek przetnij leżącą pod spodem muskulaturę. Utwórz dwie klapy ze ściany gniazda.
Zidentyfikuj wciąż bijące serce i użyj nożyczek preparacyjnych, aby przyciąć kości cricoid, aby uzyskać lepszy dostęp. Teraz użyj kleszczyków tkankowych, aby zidentyfikować cienkie osierdzie i rozciągnąć je. Za pomocą końcówki nożyczek do irydektomii ostrożnie przebij osierdzie.
Następnie usuń osierdzie z dala od trzech komór serca. W tym protokole pokazano pobieranie próbek z komory serca, lewego płata wątroby, trzustki, ciała tłuszczowego, sparowanych nerek. Aby pobrać próbkę komory serca, chwyć ją na wierzchołku kleszczami, zlokalizuj jej połączenie z wyroczniami i pniem tętniczym i odetnij ją poniżej tych punktów.
Następnie obserwuj trzy płaty wątroby. Delikatnie unieś lewy płat, aby odsłonić przewody wątrobowe i torbielowate, a następnie pobierz próbkę jednej trzeciej tego płata poniżej przewodów. Jeśli żaba jest samicą, zlokalizuj jajnik pokryty nabłonkiem zarodkowym.
Delikatnie zmień położenie płatków w każdą stronę, aby odsłonić obszar przyczepu. Użyj nożyczek, aby wyciąć jajniki jak najbliżej nerek, nie uszkadzając ich. Następnie zbadaj płat przyśrodkowy wątroby i jego połączenia z żołądkiem i dwunastnicą przez krezkę i przewód wątrobowo-trzustkowy.
Za pomocą nożyczek do irydektomii przeciąć więzadło wątrobowo-oddechowe krezki i przewód wątrobowo-trzustkowy w pobliżu dwunastnicy. Odłącz trzustkę i przewód od płata przyśrodkowego wątroby, nie pozostawiając przyczepionej ciemnej tkanki wątroby. Następnie przytrzymaj żołądek za pomocą kleszczy zębatych.
Następnie użyj kleszczyków tkankowych, aby przytrzymać górny koniec trzustki. W 5-krotnym powiększeniu ostrożnie oddziel trzustkę od żołądka. Teraz zlokalizuj i wytnij pęcherz moczowy, przecinając jak najbliżej kloaki, a następnie wyrzuć tkankę.
Następnie zidentyfikuj jelito grube i rozciągnij je, przecinając je w pobliżu kloaki. Następnie oddziel ciała tłuszczowe z każdej strony. Chwyć podstawę lewego ciała tłuszczowego i odetnij go od otrzewnej.
W przypadku samic żab lub samców z widocznymi szczątkowymi jajowodami, należy przytrzymać jajowód i oddzielić go od nerki i kloaki. Przeciąć połączenie kloaki i kontynuować odłączanie go od nerki, usuwając wszelkie wyraźne przyczepy otrzewnej. Teraz użyj kleszczy, aby przytrzymać nerki i przeciąć otrzewną na ich dolnym końcu.
Podnieś nerki z jamy celomicznej. Za pomocą nożyczek odłącz otrzewną jak najbliżej nerek, nie powodując szkody. W 5-krotnym powiększeniu usuń nadmiar otrzewnej i resztki tkanek, takich jak jądra, ciała tłuszczowe lub śledziona.
Po uwolnieniu zwierzęcia połóż je na brzuchu i zabezpiecz jego kończyny. Wybierz jedną tylną kończynę do pobrania próbki i zabezpiecz jej stopę. Wytnij płat skóry w kształcie migdała znad obszaru mięśnia brzuchatego łydki lub kości piszczelowo-strzałkowej.
Następnie wypłucz wszystkie próbki i PBS, sprawdź, czy nie ma nadmiaru tkanek i przytnij przed użyciem, jeśli to konieczne. Komora serca, lewy płat wątroby, trzustka, lewe ciała tłuszczowe, sparowane nerki i płat skóry zostały czysto wycięte w ciągu godziny od eutanazji.
Przegląd
Ten artykuł dostarcza wszechstronnego przewodnika po szybkim i efektywnym pobieranie próbek sześciu różnych narządów u dorosłych żab Xenopus, w tym komory serca, płata wątroby, trzustki, ciał tłuszczowych, parzystych nerek i skóry. Opisane techniki mają na celu ułatwienie badań w różnych dziedzinach biologii poprzez umożliwienie standaryzowanego pobierania tkanek.
Kluczowe elementy badania
Obszar badań
- Techniki sekcji żab
- Pobieranie próbek narządów do proteomiki i immunochemii
- Standaryzacja w praktykach badań biologicznych
Tło
- Potrzeba szybkiego pobierania tkanek w badaniach
- Poprzedni brak wszechstronnych przewodników sekcji dla Xenopus
- Znaczenie minimalizowania zanieczyszczenia próbek krwią
Stosowane metody
- Standaryzowany protokół chirurgiczny do pobierania tkanek
- Dorasta Xenopus jako organizm modelowy
- Wykorzystanie narzędzi sekcyjnych i specyficznych technik anatomicznych
Główne wyniki
- Szczegółowa metodologia krok po kroku pobierania próbek narządów
- Skuteczna ekstrakcja narządów przy minimalnym uszkodzeniu
- Ułatwienie wymiany tkanek między laboratoriami badawczymi
Konkluzje
- To badanie dostarcza istotnych technik pobierania próbek narządów u dorosłych Xenopus.
- Metodologie te poprawią współpracę i jakość badań w naukach biologicznych.
Często zadawane pytania
Executive Industry Relevance
Standardized rapid organ sampling in adult Xenopus enables reproducible, high-quality tissue acquisition for quantitative proteomics and single-cell transcriptomics. This protocol addresses a critical gap in adult amphibian model workflows, supporting cross-lab data consistency and facilitating multi-site R&D collaboration. Reliable tissue preparation at this stage underpins predictive confidence in downstream molecular and translational studies.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables robust hypothesis testing by providing consistent adult organ samples for molecular analysis.
- Supports biological de-risking through standardized tissue acquisition across developmental stages.
- Facilitates functional target validation by ensuring sample comparability between labs.
Screening & Assay Development
- Prepares validated organ samples suitable for quantitative proteomics and single-cell transcriptomics workflows.
- Improves assay reproducibility by minimizing blood contamination and tissue variability.
- Enables scalable tissue collection for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns adult tissue sampling with disease-relevant model systems for translational biomarker studies.
- Ensures continuity from developmental to adult stages in preclinical validation pipelines.
- Reduces risk of confounding variables in cross-stage comparative analyses.
Pipeline & Workflow Integration
This protocol integrates into the discovery-to-preclinical continuum by providing standardized adult organ samples for molecular and cellular analyses.
- Discovery Biology: Supports hypothesis-driven studies by enabling precise organ isolation and downstream molecular interrogation.
- Screening: Delivers reproducible, blood-free tissues for assay development and compound evaluation.
- Analytics: Facilitates quantitative readouts and cross-condition comparisons through consistent sample preparation.
- Translational Research: Bridges developmental and adult model systems for biomarker and mechanistic studies.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable, standardized protocol for multi-lab and multi-study applications.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in molecular studies.
- Operational Value: Enhances reproducibility, standardization, and scalability of tissue sampling.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and capital efficiency by reducing sample variability.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of discovery and preclinical programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in amphibian anatomy and dissection techniques.
- Needs access to dissection tools, magnification, and sample preservation infrastructure.
- Demands cross-team standardization to ensure reproducibility across sites.
- May require adaptation for different amphibian species or developmental stages.
- Dependent on proper perfusion and euthanasia protocols to minimize blood contamination.
