Name: Opracowanie mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-22T14:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 35 s
Description: Poznaj metodę tworzenia modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka w myszach z immunodeficjencją. Ten model umożliwia badanie biologii nowotworu, oporności na leki i przerzutów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca jest wspierana przez granty od (1) National Nature Science Foundation (81973877 i 82174408); (2) Projekt budowy Centrum Badawczego o Najwyższym Priorytecie w Szanghaju (2022ZZ01009); (3) Krajowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin (2020YFE0201600); (4) Szanghajskie Centrum Innowacji Współpracy w Transformacji Przemysłowej Przygotowania TCM w Szpitalu oraz (5) Projekty badawcze w ramach budżetu Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju (2021LK047).

Wszystkie badania z udziałem tkanek ludzkich zostały zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję Oceny Etyki Szpitala Longhua, powiązanego z Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (Shanghai, China) (2013LC52), a pisemna świadoma zgoda została uzyskana od pacjentów zgodnie z Deklaracją Helsińską. Liczba IACUC dla tego badania na zwierzętach wynosi PZSHUTCM221017013. Czterotygodniowe samce myszy CAnN.Cg-Foxn1nu / Crl zostały zaopatrzone w podwójny lew Napromieniowana dieta dla gryzoni GB 14924.3 i sterylną wodę i zostały umieszczone w klatce dla myszy IVC z pięcioma myszami na klatkę, w warunkach SPF z 12-godzinnym cyklem światła / ciemności. Tabela materiałów zawiera szczegółowe informacje o wszystkich materiałach, odczynnikach i instrumentach użytych w tym protokole.
1. Przygotowanie tkanki ludzkiego kostniakomięsaka
UWAGA: W tym badaniu, tkanka ludzkiego kostniakomięsaka została wycięta12 z uszkodzenia kości udowej 15-letniego pacjenta z kostniakomięsakiem przed chemioterapią.
<ol>
	<li>Świeżo wyciętą tkankę kostniakomięsaka należy natychmiast przechowywać w roztworze chroniącym tkanki, aby zmaksymalizować zachowanie aktywacji komórek kostniakomięsaka po spłukaniu sterylną solą fizjologiczną. 
	UWAGA: Świeżo wycięte tkanki kostniakomięsaka należy jak najszybciej przeszczepić myszom. Można je przechowywać w roztworze ochronnym tkanek maksymalnie przez 24 godziny przed przeszczepem. Tkanki kostniakomięsaka używane do modelowania muszą pochodzić od pacjentów, którzy nie otrzymali chemioterapii. Aktywność komórek nowotworowych od pacjentów, którzy otrzymali chemioterapię, będzie słaba, co doprowadzi do niepowodzenia ustalenia modelu i utraty wysokiej wierności.</li>
	<li>Świeżo wycięte tkanki kostniakomięsaka przechowywane w roztworze ochronnym tkanek należy jak najszybciej przenieść do laboratorium.</li>
	<li>Przygotowanie eksperymentalnych instrumentów i materiałów do opracowania modelu PDX: skalpele (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A); pęseta okulistyczna (<silna klasa="xfig">Rysunek 1B,C); nożyczki okulistyczne (<silna klasa="xfig">Rysunek 1D); igła do szycia (<silna klasa="xfig">Rysunek 1E); linia szwu (<silna klasa="xfig">Rysunek 1F); prosty uchwyt na igłę (<silna klasa="xfig">Rysunek 1G); długopis do znakowania (<silna klasa="xfig">Rysunek 1H). 
	UWAGA: Upewnij się, że wszystkie narzędzia chirurgiczne są sterylizowane w autoklawie przed użyciem.</li>
	<li>Dwukrotnie spłukać tkanki kostniakomięsaka wstępnie schłodzoną sterylną solą fizjologiczną w sterylnym kapturze.</li>
	<li>Usuń obszary tkanki kostniakomięsaka z krwawieniem i martwicą.</li>
	<li>Oczyszczoną tkankę kostniakomięsaka pokroić skalpelem na 3 mm3 kawałki w naczyniu hodowlanym zawierającym wstępnie schłodzoną sterylną sól fizjologiczną i przechowywać na lodzie.</li>
</ol>
2. Tworzenie modeli PDX poprzez przeszczep tkanki kostniakomięsaka w okolicy boku myszy
<ol>
	<li>Przedoperacyjną analgezję meloksykamu (5 mg/kg mc./24 h) należy podać myszom we wstrzyknięciu podskórnym i umieścić nagie myszy na sterylnych obłożach chirurgicznych. Zapewnij wsparcie termiczne przez cały czas trwania zabiegu.</li>
	<li>Wywołaj znieczulenie u myszy, wystawiając je na działanie 3% izofluranu i 97% tlenu. Po całkowitym znieczuleniu myszy przenieś je do stożka nosowego i utrzymuj znieczulenie 1,5% izofluranu i 98,5% tlenu.</li>
	<li>Ściśnij palce u stóp, aby upewnić się, że myszy są całkowicie znieczulone, i poczekaj dłużej, jeśli nadal występują skurcze lub reakcje konwulsyjne. 
	UWAGA: Wszystkie zabiegi muszą być wykonywane przy użyciu sterylnego sprzętu w sterylnym kapturze. Unikaj suchości myszy podczas znieczulenia, nakładając maść okulistyczną na ich oczy.</li>
	<li>Zabezpiecz mysz w bocznej pozycji odleżynowej (<silna klasa="xfig">Rysunek 2A). Zdezynfekuj jedną stronę okolicy boku myszy w celu przeszczepu tkanki kostniakomięsaka 3 razy za pomocą naprzemiennych rund jodu powidonu i wacików dezynfekujących o stężeniu 70% etanolu. 
	UWAGA: Dezynfekcja chirurgiczna jest wykonywana w okrągły wzór, zaczynając od środka i spiralnie kierując się na zewnątrz.</li>
	<li>Zaznacz miejsce nacięcia chirurgicznego na skórze markerem.</li>
	<li>Wykonaj 5 mm nacięcie od skóry do tkanek podskórnych za pomocą skalpela (<silna klasa="xfig">Ryc. 2B).</li>
	<li>Podnieś górną stronę skóry brzegu nacięcia za pomocą pęsety okulistycznej za pomocą lewej ręki i wykonaj wycięcie w górę pod skórą właściwą myszy za pomocą prostego uchwytu na igłę, używając prawej ręki (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2C).</li>
	<li>Przytrzymaj górną stronę skóry nacięcia pęsetą okulistyczną lewą ręką i umieść tkankę kostniakomięsaka pod skórą około 5 mm powyżej brzegu nacięcia za pomocą pęsety okulistycznej, używając prawej ręki, aby przeszczepić tkankę kostniakomięsaka (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2C). 
	UWAGA: Upewnij się, że tkanka kostniakomięsaka jest przeszczepiona tuż pod skórą właściwą. rozwarstwienie wykonuje się za pomocą prostych i kleszczy preparacyjnych, takich jak prosty uchwyt na igły, aby uniknąć penetracji klatki piersiowej myszy podczas znajdowania warstwy skóry właściwej myszy.</li>
	<li>Zszyj nacięcie za pomocą wchłanialnego szwu z 2-3 szwami dla nacięcia 5 mm (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2D).</li>
	<li>Umieść myszy z powrotem w czystych klatkach i monitoruj je, aż całkowicie wyzdrowieją ze znieczulenia. 
	UWAGA: PDX ustalony przez przeszczepienie tkanki ludzkiego kostniakomięsaka jest oznaczony jako pasaż 0 (P0), PDX ustalony przez przeszczepienie tkanki PDX w P0 jest oznaczony jako pasaż 1 (P1), a następnie P2 i P3.</li>
</ol>
3. Zbiór tkanek nowotworowych PDX
<ol>
	<li>Mierz objętość guza raz w tygodniu. Gdy rozmiar guza osiągnie 1500 mm3, należy poddać myszy eutanazji metodą zwichnięcia szyjki macicy po inhalacji CO2 . Humanitarne punkty końcowe obejmują owrzodzenie guza lub problemy z ruchomością kończyn przednich. 
	UWAGA: Zmierz długą średnicę (a) i krótką średnicę (b) guza za pomocą suwmiarki. Oblicz objętość guza (V) za pomocą wzoru: V = 1/2 × a × b2.</li>
	<li>Ustaw mysz bokiem, aby odsłonić guz i zdezynfekuj skórę w miejscu guza wacikiem nasączonym alkoholem.</li>
	<li>Użyj nożyczek okulistycznych, aby oddzielić cały guz. Zważ masę guza za pomocą wagi elektronicznej.</li>
</ol>
4. Badanie patologiczne pierwotnych tkanek klinicznych i tkanek guza PDX
<ol>
	<li>Umieść tkanki nowotworowe 13 w probówce o pojemności 50 ml zawierającej 30 ml 10% neutralnego buforowanego roztworu formaliny przez 24 godziny. Dokładnie spłucz tkanki nowotworowe płynącą wodą, aby usunąć utrwalacz.</li>
	<li>Odwodnić i zanurzyć tkanki nowotworowe w parafinie14.</li>
	<li>Pokrój tkanki guza i przeprowadź rutynowe badanie histologiczne15.</li>
</ol>

Protocol for Osteosarcoma PDX Mouse Models: Studying Growth and Drug Resistance

<ol><li>Saraf, A. J., Fenger, J. M., Roberts, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+accelerating+progress+makes+for+a+hopeful+future%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: accelerating progress makes for a hopeful future.</a> Front Oncol. 8, 4(2018).</li>
<li>Ligon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathways+of+immune+exclusion+in+metastatic+osteosarcoma+are+associated+with+inferior+patient+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Pathways of immune exclusion in metastatic osteosarcoma are associated with inferior patient outcomes.</a> J Immunother Cancer. 9 (5), e001772(2021).</li>
<li>Miwa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+and+emerging+targets+in+immunotherapy+for+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Current and emerging targets in immunotherapy for osteosarcoma.</a> J Oncol. 2019, 7035045(2019).</li>
<li>Eaton, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Blood+Cancer%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma.</a> Pediatr Blood Cancer. 68 (2), e28352(2021).</li>
<li>Ritter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma.</a> Ann Oncol. 21, 320-325 (2010).</li>
<li>Lowery, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad+spectrum+activity+of+the+checkpoint+kinase+1+inhibitor+prexasertib+as+a+single+agent+or+chemo+potentiator+across+a+range+of+preclinical+pediatric+tumor+models%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Broad spectrum activity of the checkpoint kinase 1 inhibitor prexasertib as a single agent or chemo potentiator across a range of preclinical pediatric tumor models.</a> Clin Cancer Res. 25 (7), 2278-2289 (2019).</li>
<li>Hingorani, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trastuzumab+deruxtecan%2C+antibody-drug+conjugate+targeting+Her2%2C+is+effective+in+pediatric+malignancies%3A+a+report+by+the+pediatric+preclinical+testing+consortium%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Trastuzumab deruxtecan, antibody-drug conjugate targeting Her2, is effective in pediatric malignancies: a report by the pediatric preclinical testing consortium.</a> Mol Cancer Ther. 21 (8), 1318-1325 (2022).</li>
<li>Brennecke, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR4+antibody+treatment+suppresses+metastatic+spread+to+the+lung+of+intratibial+human+osteosarcoma+xenografts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">CXCR4 antibody treatment suppresses metastatic spread to the lung of intratibial human osteosarcoma xenografts in mice.</a> Clin Exp Metastasis. 31 (3), 339-349 (2014).</li>
<li>Pan, B., Wei, X., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models+in+hepatopancreatobiliary+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models in hepatopancreatobiliary cancer.</a> Cancer Cell Int. 22 (1), 41(2022).</li>
<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumor+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumor xenografts as models for oncology drug development.</a> Nat Rev Clin Oncol. 9 (6), 338-350 (2012).</li>
<li>Yoshida, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+patient-derived+tumor+xenograft+models+and+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Applications of patient-derived tumor xenograft models and tumor organoids.</a> J Hematol Oncol. 13 (1), 4(2020).</li>
<li>Stitzlein, R. N., Wojcik, J., Sebro, R. A., Balamuth, N. J., Weber, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Team+approach%3A+Osteosarcoma+of+the+distal+part+of+the+femur+in+adolescents%5BTitle%5D)+AND+%22JBJS+Rev%22%5BJournal%5D)">Team approach: Osteosarcoma of the distal part of the femur in adolescents.</a> JBJS Rev. 5 (12), 5(2017).</li>
<li>Kai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formalin+fixation+on+Her-2+and+PD-l1+expression+in+gastric+cancer%3A+A+pilot+analysis+using+the+same+surgical+specimens+with+different+fixation+times%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Clin+Cases%22%5BJournal%5D)">Formalin fixation on Her-2 and PD-l1 expression in gastric cancer: A pilot analysis using the same surgical specimens with different fixation times.</a> World J Clin Cases. 7 (4), 419-430 (2019).</li>
<li>Yang, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+protocol+to+prepare+paraffin-embedded+whole+tick+histology+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Ticks+Tick+Borne+Dis%22%5BJournal%5D)">A practical protocol to prepare paraffin-embedded whole tick histology sections.</a> Ticks Tick Borne Dis. 14 (4), 102162(2023).</li>
<li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response%2Fendoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Rep%22%5BJournal%5D)">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Mol Med Rep. 18 (1), 945-957 (2018).</li>
<li>de Alava, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ewing+sarcoma%2C+an+update+on+molecular+pathology+with+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Pathol+Clin%22%5BJournal%5D)">Ewing sarcoma, an update on molecular pathology with therapeutic implications.</a> Surg Pathol Clin. 10 (3), 575-585 (2017).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models%3A+An+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models: An emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discov. 4 (9), 998-1013 (2014).</li>
<li>Eoh, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+clinical+features+and+outcomes+in+epithelial+ovarian+cancer+according+to+tumorigenicity+in+patient-derived+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">Comparison of clinical features and outcomes in epithelial ovarian cancer according to tumorigenicity in patient-derived xenograft models.</a> Cancer Res Treat. 50 (3), 956-963 (2018).</li>
<li>Stewart, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+utility+of+patient-derived+xenografts+to+determine+biomarkers+of+prognosis+and+map+resistance+pathways+in+EGFR-mutant+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinical utility of patient-derived xenografts to determine biomarkers of prognosis and map resistance pathways in EGFR-mutant lung adenocarcinoma.</a> J Clin Oncol. 33 (22), 2472-2480 (2015).</li>
<li>Kresse, S. H., Meza-Zepeda, L. A., Machado, I., Llombart-Bosch, A., Myklebost, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+xenograft+models+of+human+sarcoma+show+nonrandom+loss+of+aberrations%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Preclinical xenograft models of human sarcoma show nonrandom loss of aberrations.</a> Cancer. 118 (2), 558-570 (2012).</li>
<li>Dobrolecki, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models+in+basic+and+translational+breast+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft (PDX) models in basic and translational breast cancer research.</a> Cancer Metastasis Rev. 35 (4), 547-573 (2016).</li>
<li>Abdolahi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models%2C+applications+and+challenges+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research.</a> J Transl Med. 20 (1), 206(2022).</li>
<li>Deng, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+whole-genome+sequencing+identifies+recurrent+genomic+alterations+in+commonly+used+breast+cancer+cell+lines+and+patient-derived+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Deep whole-genome sequencing identifies recurrent genomic alterations in commonly used breast cancer cell lines and patient-derived xenograft models.</a> Breast Cancer Res. 24 (1), 63(2022).</li>
<li>Chen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+characterization+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Generation and characterization of patient-derived xenografts from patients with osteosarcoma.</a> Tissue Cell. 79, 101911(2022).</li>
<li>Fortuna-Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+association+between+successful+engraftment+of+osteosarcoma+patient-derived+xenografts+and+clinicopathological+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Histol+Histopathol%22%5BJournal%5D)">An association between successful engraftment of osteosarcoma patient-derived xenografts and clinicopathological findings.</a> Histol Histopathol. 35 (11), 1295-1307 (2020).</li>
<li>Beck, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+and+murine+models+of+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Canine and murine models of osteosarcoma.</a> Vet Pathol. 59 (3), 399-414 (2022).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.

Modele PDX mogą symulować charakterystykę nowotworów u ludzi i zachowywać większe podobieństwo do guza pierwotnego, w tym zmiany genetyczne i genomowe, histologię, heterogeniczność i profil ekspresji genów 16,17,18,19. W związku z tym zachowują fenotypy molekularne i genotypy pacjentów z rakiem, zapewniając innowacyjne podejścia do badania biologii i oceny potencjalnych terapii. Podejścia te obejmują przedkliniczne badania przesiewowe nowych leków przeciwnowotworowych o bardzo podobnych odpowiedziach do rzeczywistych odpowiedzi klinicznych, wykrywanie biomarkerów oporności na leki, badania przesiewowe leków wrażliwych w spersonalizowanym doborze schematu leczenia klinicznego oraz przewidywanie wyników pacjentów20. Co więcej, proces tworzenia modeli PDX jest stosunkowo prosty i nie wymaga specjalnego sprzętu.
W tym badaniu udało się ustalić mysi model PDX przy użyciu tkanek ludzkiego kostniakomięsaka. Ujawniono kilka kluczowych aspektów pomyślnego ustanowienia modelu PDX z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka. Po pierwsze, możliwość przeszczepu tkanek ludzkiego kostniakomięsaka u myszy jest wykonalna, co umożliwia badanie biologii ludzkiego kostniakomięsaka w układzie mysim. Wysokie tempo powstawania guza można przypisać zastosowaniu myszy z niedoborem odporności pozbawionych funkcjonalnego układu odpornościowego, co pozwala przeszczepionym komórkom kostniakomięsaka na proliferację bez odrzucenia. Co więcej, badanie to wykazało, że model PDX zachował histologię oryginalnych tkanek ludzkiego kostniakomięsaka. Morfologia guza i cechy histopatologiczne były podobne między pierwotnym guzem pacjenta a guzami PDX. Wskazuje to, że model PDX dokładnie podsumowuje kostniakomięsaka, co czyni go cennym narzędziem do badania progresji kostniakomięsaka, przerzutów i odpowiedzi na leczenie.
Jednak podczas modelowania PDX należy zwrócić uwagę na kilka kluczowych punktów. Po pierwsze, tkanki ludzkiego kostniakomięsaka używane do przeszczepu muszą być świeżo wycięte i powinny być przechowywane w roztworze ochronnym tkanek tak szybko, jak to możliwe. Zaleca się zakończenie przeszczepu w ciągu 12 godzin po resekcji, chociaż aktywność komórek nowotworowych w tkankach ludzkiego kostniakomięsaka przechowywanych w roztworze ochronnym tkanek może być utrzymana maksymalnie przez 24 godziny16. Po drugie, lepiej jest używać tkanek nowotworowych od pacjentów, którzy nie otrzymali chemioterapii, aby maksymalnie zachować fenotypy molekularne i genotypy pacjentów, chociaż tkanki ludzkiego kostniakomięsaka od pacjentów, którzy otrzymali chemioterapię raz lub dwa razy, można z powodzeniem przeszczepić myszom z niedoborem odporności. Co więcej, aktywność komórek nowotworowych będzie słaba, jeśli pacjent otrzyma wiele chemioterapii, co prowadzi do niepowodzenia modelowania przeszczepu; Jednak tkanki kostniakomięsaka od pacjentów z nawrotem mogą mieć wyższy wskaźnik pomyślnego tworzenia guza po przeszczepieniu myszom z niedoborem odporności niż tkanki kostniakomięsaka od pacjentów zdiagnozowanych początkowo. Po trzecie, przeszczepienie tkanek kostniakomięsaka tuż pod skórą właściwą skóry poprawi tempo tworzenia się guza u myszy z niedoborem odporności21.
Ważne jest, aby zdać sobie sprawę z ograniczeń tego badania. Po pierwsze, cykl tworzenia modelu PDX jest długi i trwa 4-12 tygodni od przeszczepu do powstania guza22. Po drugie, informacje związane z inicjacją i etiologią guza mogą być nieobecne, ponieważ w pełni rozwinięte tkanki kostniakomięsaka z komórek rakowych są przeszczepiane, a rzadkie subklony lub zmiany genomowe mogą zostać utracone podczas procesu przeszczepu. Sekwencjonowanie całego genomu guzów PDX i porównanie z próbkami pobranymi od pacjentów byłoby cenne dla oceny wierności genetycznej modelu23. Po trzecie, mysie komórki gospodarza mogą infiltrować nowotwory, potencjalnie wpływając na aktywność komórek nowotworowych9. Po czwarte, model PDX ma wskaźnik awaryjności na poziomie około 50%24,25. Wreszcie, w niektórych przypadkach, przerzuty raka nie mogą być badane ze względu na brak przerzutów komórek nowotworowych po przeszczepieniu myszom z niedoborem odporności26.
Podsumowując, badanie to potwierdza pomyślne ustanowienie mysiego modelu PDX przy użyciu tkanek ludzkiego kostniakomięsaka. Model ten wiernie odwzorowuje cechy histopatologiczne pierwotnego guza, stanowiąc cenne narzędzie do badania biologii kostniakomięsaka i testowania potencjalnych metod leczenia. Dalsze badania z wykorzystaniem tego modelu PDX poszerzą naszą wiedzę na temat kostniakomięsaka i zaowocują opracowaniem skuteczniejszych strategii dla tych pacjentów.

Kostniakomięsak jest pierwotnym nowotworem złośliwym kości wywodzącym się z komórek płata międzykostnego i występuje najczęściej zarówno u młodzieży, jak i u dzieci. Często występuje w nasadach trzonu długiego i charakteryzuje się wysoką złośliwością, wczesnymi przerzutami i złym rokowaniem1,2. Przerzuty do płuc są główną przyczyną zgonów pacjentów z kostniakomięsakiem. 5-letni wskaźnik przeżycia pacjentów z kostniakomięsakiem bez przerzutów wynosi 65%-70%3. Jednak w ciągu ostatnich 40 lat 5-letni wskaźnik przeżycia (tylko 20%) pacjentów z kostniakomięsakiem z przerzutami nie uległ znacznej poprawie, a 25% pacjentów z kostniakomięsakiem ma przerzuty w momencie diagnozy4. Obecnie leki pierwszego rzutu stosowane w leczeniu kostniakomięsaka osiągnęły konsensus, ale nadal istnieją znaczące różnice w schemacie chemioterapii i czasie leczenia5. Ważne jest przeprowadzenie eksperymentów przedklinicznych w oparciu o odpowiednie modele zwierzęce w celu uzyskania bardziej skutecznych schematów chemioterapii.
Obecnie, modele powszechnie używane w eksperymentach przedklinicznych kostniakomięsaka obejmują hodowle komórkowe in vitro oparte na liniach komórkowych i ksenoprzeszczepy in vivo pochodzące od komórek (CDX), a także ksenoprzeszczepy pochodzące od pacjentów (PDX)6,7.
Linie komórkowe są wygodne do hodowli i wykorzystania w badaniach in vitro, lub do przeszczepu myszom z niedoborem odporności w celu stworzenia modeli CDX8. Jednak linie komórkowe hodowane in vitro mogą nie odzwierciedlać dokładnie niejednorodności nowotworów złośliwych i indywidualnych cech pacjentów ze względu na potencjalne mutacje, które występują w celu przystosowania się do środowiska hodowli in vitro podczas powtarzających się pasaży. Dodatkowo brakuje im mikrośrodowiska i układu odpornościowego niezbędnych do wzrostu i rozwoju guza in vivo. Chociaż modele CDX oferują pewne zalety w porównaniu z hodowlą komórkową in vitro, nadal mogą nie odzwierciedlać w pełni indywidualnych cech pacjentów z kostniakomięsakiem, chociaż tkanki nowotworowe uzyskane z modeli CDX mają ograniczoną heterogeniczność wewnątrznowotworową i reprezentację układu odpornościowego w porównaniu z liniami komórkowymi hodowanymi in vitro9. Dlatego kluczowe znaczenie ma stworzenie modelu przedklinicznego o wysokiej wierności.
modele PDX obejmują natychmiastowe przeszczepienie świeżo wyciętych ludzkich tkanek nowotworowych myszom z niedoborem odporności. Metoda ta pozwala na wierne zachowanie genetycznych, epigenetycznych i heterogenicznych cech nowotworów złośliwych człowieka u każdego pacjenta, nawet po kolejnych pasażach u myszy. Co więcej, modele PDX są znane z dokładnego przewidywania późniejszych wyników klinicznych10, co czyni je cennymi narzędziami do tworzenia zindywidualizowanych terapii i rozwoju badań nad medycyną precyzyjną11.
Ta praca opisuje procedurę tworzenia modelu PDX u myszy z niedoborem odporności poprzez przeszczepienie ludzkiej tkanki kostniakomięsaka. Takie modele służą jako platformy do prowadzenia eksperymentów przedklinicznych dotyczących kostniakomięsaka.

<table><tbody><tr><td>10% neutralny roztwór formaliny</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1101-500ml</td><td>Napraw tkanki</td></tr><tr><td>Autoklaw</td><td>Japonia Hiryama Company</td><td>HVE-50</td><td>Narzędzia chirurgiczne do sterylizacji</td></tr><tr><td>CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl</td><td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td><td>/</td><td>Suwmiarka dla zwierząt</td></tr><tr><td></td><td>Yantai Green Forest Tools Co., Ltd.</td><td>034180A</td><td>Zmierz objętość guza</td></tr><tr><td>Naczynie (60 mm)</td> <td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>430166, Corning</td><td>Umieszczenie próbki podczas przeszczepu</td></tr><tr><td>Waciki dezynfekujące</td><td>Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd.</td><td>20230627</td><td>Dezynfekcja skóry myszy</td></tr><tr><td>Jednorazowe sterylne rękawiczki</td><td>Guilin Hengbao Health Protection Co., Ltd.</td><td>YT21131</td><td>Sterylna operacja</td></tr><tr><td>Podwójny lew Napromieniowana dieta dla gryzoni</td><td>Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd.</td><td>GB 14924.3</td><td>Pasza dla zwierząt</td></tr><tr><td>Waga elektroniczna</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>1-2000</td><td>Zważ masę guza</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd</td><td>E4009-25G</td><td>Hematoksylina eozyna barwienie</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd</td><td>H3136-25G</td><td>Hematoksylina eozyna barwnik</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td></td><td>Znieczulenie myszy VETEASY&nbsp;</td></tr><tr><td>Klatka na myszy IVC</td><td>Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd.</td><td>HH-MMB-2</td><td>Długopis z barierą dla zwierząt</td></tr><tr><td></td><td>Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd.</td><td>YYST5</td><td>Zaznacz nacięcie chirurgiczne</td></tr><tr><td>Mikroskop optyczny Olympus</td><td>Japońska firma Olympus</td><td>BH20</td><td>Skanuj plastry tkanek Maść</td></tr><tr><td>okulistyczna</td><td>Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd</td><td>SOICOEYEGRL</td><td>Unikaj suchych oczu myszy podczas znieczulenia</td></tr><tr><td>Nożyczki okulistyczne</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>Y00030 JZ</td><td>Wytnij skórę</td></tr><tr><td>Pęseta okulistyczna</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>BS-ZER-S-100 Biosharp</td><td>Przytrzymaj tkanki kostniakomięsaka podczas przeszczepu</td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Jiangsu Shitai Sprzęt eksperymentalny Co., Ltd.</td><td>80200-0015</td><td>Zakopana kostniakomięsak</td></tr><tr><td>maszyna do krojenia parafiny</td><td>Lyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd.</td><td>RM2235</td><td>Sekcja tkankowa kostniakomięsaka</td></tr><tr><td>sól fizjologiczna</td><td>Guangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd.</td><td>605-004057</td><td>Płukanie i tymczasowe przechowywanie skalpeli tkankowych kostniakomięsaka</td></tr><tr><td>Fabryka</td><td>narzędzi chirurgicznych Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd.</td><td>J11010-10# JZ</td><td>Oddzielenie tkanki kostniakomięsaka i wykonanie nacięć chirurgicznych</td></tr><tr><td>Sterylny kaptur</td><td>Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.</td><td>ECO0.9</td><td>Stół operacyjny</td></tr><tr><td>sterylne obłożenia chirurgiczne</td><td>Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd.</td><td>20160090</td><td>Zapewnij sterylny obszar chirurgiczny</td></tr><tr><td>Prosty uchwyt igły</td><td>Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd</td><td>J31050 JZ</td><td>Zszyj ranę</td></tr><tr><td>Linia do szycia</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd</td><td>F3124</td><td>Zszyj ranę</td></tr><tr><td>Igła do szycia</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd</td><td>F3124</td><td>Zszyj ranę</td></tr><tr><td>Roztwór ochronny tkanek</td><td>Nanjing Shenghang Biotechnology Co., LTD</td><td>BC-CFM-03</td><td>Utrzymuj aktywność komórek tkankowych</td></tr><tr><td>Rurka (50 ml)</td><td>Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.</td><td>BLD-BL2002500</td><td>Zainstaluj roztwór do utrwalania formaliny</td></tr></tbody></table>

opracowanie mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka

Establishment of Patient-Derived Xenograft Mouse Model with Human Osteosarcoma Tissues

Kostniakomięsak jest najczęstszym pierwotnym złośliwym nowotworem kości u dzieci i młodzieży. Pomimo opracowania nowych planów leczenia w ostatnich latach, rokowanie dla pacjentów z kostniakomięsakiem nie uległo znacznej poprawie. Dlatego tak ważne jest stworzenie solidnego modelu przedklinicznego o wysokiej wierności. Model ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta (PDX) wiernie zachowuje genetyczne, epigenetyczne i heterogeniczne cechy nowotworów złośliwych u każdego pacjenta. W związku z tym modele PDX są uważane za autentyczne modele in vivo do badania różnych nowotworów w badaniach transformacji. W artykule przedstawiono kompleksowy protokół tworzenia i utrzymywania mysiego modelu PDX, który dokładnie odzwierciedla cechy morfologiczne ludzkiego kostniakomięsaka. Polega to na natychmiastowym przeszczepieniu świeżo wyciętej tkanki ludzkiego kostniakomięsaka myszom z obniżoną odpornością, a następnie kolejnym pasażowaniu. Opisany model służy jako platforma do badania wzrostu, oporności na leki, nawrotu i przerzutów kostniakomięsaka. Dodatkowo pomaga w badaniach przesiewowych docelowych terapii i ustalaniu spersonalizowanych schematów leczenia.

Niniejszy protokół opisuje szczegółową procedurę tworzenia modelu mysiego PDX, zachowującego cechy morfologiczne ludzkiego osteosarcoma po bezpośrednim przeszczepieniu świeżo wyresekowanej tkanki ludzkiego osteosarcoma oraz kolejnych pasażach u myszy. W ramach opracowanej metody pomyślnie stworzono model mysi PDX z wykorzystaniem tkanki ludzkiego osteosarcoma.
Rysunek 3A przedstawia reprezentatywną mysz PDX w generacji P0, dwa miesiące po transplantacji tkanki kostniaka udowego od 15-letniego pacjenta. Rysunek 3B przedstawia reprezentatywną mysz PDX w generacji P1, miesiąc po transplantacji tkanki PDX z generacji P0. Rysunek 3C przedstawia reprezentatywną mysz PDX w generacji P2, miesiąc po transplantacji tkanki PDX z generacji P1. Rysunek 3D przedstawia reprezentatywną mysz PDX w generacji P3, miesiąc po transplantacji tkanki PDX z generacji P2.
Myszy uśpiono metodą zwichnięcia kręgów szyjnych po inhalacji CO2 w momencie, gdy rozmiar guza osiągnął 1 500 mm3, w celu pobrania tkanek guza PDX. Tkanki guzów od pacjentów klinicznych oraz z myszy zostały następnie zatopione w parafinie i poddane barwieniu H&amp;E. Reprezentatywny obraz barwienia H&amp;E tkanki guza pacjenta klinicznego przedstawiono na Rysunku 4A. Reprezentatywne obrazy barwienia H&amp;E tkanek guzów mysich PDX w generacjach P0, P1 i P2 przedstawiono na Rysunku 4B,C,D. Cechy osteosarkomy, charakteryzujące się małymi komórkami z okrągłymi, hiperchromatycznymi jądrami w macierzystych tkankach guzów pacjentów klinicznych, zostały zachowane w ustanowionych modelach PDX w generacjach P0, P1 i P2.
<img alt="Zestaw instrumentów chirurgicznych, oznakowane narzędzia, przygotowanie do demonstracji sekcji lub szycia." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66491/66491fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Instrumenty chirurgiczne. (A) Skalpel. (B,C) Pęsety okulistyczne. (D) Nożyczki okulistyczne. (E) Igła chirurgiczna. (F) Nić chirurgiczna. (G) Prosty igłotrzymacz. (H) Marker. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66491/66491fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat znakowania anatomicznego myszy i etapów procedury chirurgicznej w badaniach eksperymentalnych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66491/66491fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Utworzenie modelu PDX. (A) Miejsce transplantacji tkanki kostniakomięsaka w okolicy boku myszy zostaje zaznaczone markerem. (B) Wykonano nacięcie skóry o długości 5 mm aż do tkanki podskórnej. (C) Rozdzielenie tępe i transplantacja tkanki kostniakomięsaka. (D) Zaszyte nacięcie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66491/66491fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Progresja guza w modelu mysim; schematy eksperymentalne A-D przedstawiają etapy wzrostu i efekty leczenia." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66491/66491fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Wzrost PDX pierwotnie przeszczepionego z tkanką osteosarcoma kości udowej od 15-letniego pacjenta. (A) PDX ustanowiony poprzez przeszczepienie ludzkiej tkanki osteosarcoma (P0). (B) PDX ustanowiony poprzez przeszczepienie tkanki PDX z etapu P0 (P1). (C) PDX ustanowiony poprzez przeszczepienie tkanki PDX z etapu P1 (P2). (D) PDX ustanowiony poprzez przeszczepienie tkanki PDX z etapu P2 (P3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66491/66491fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Analiza histopatologiczna; porównanie morfologii komórek; opisane obrazy mikroskopowe A-D, E-H." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66491/66491fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Barwienie hematoksyliną i eozyną (H&amp;E) przekrojów tkankowych z pierwotnych tkanek klinicznych oraz tkanek PDX. Barwienie H&amp;E wykazało cechy histologiczne (A) osteosarcoma kości udowej u 15-letniego pacjenta, (B) PDX w generacji P0, (C) PDX w generacji P1, (D) PDX w generacji P2. Paski skali: (A-D) 100 µm; (E-H) 20 µm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66491/66491fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Obecny protokół opisuje metodę tworzenia mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta (PDX) przy użyciu ludzkiej tkanki kostniakomięsaka.

Opracowanie mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka

Osteosarcoma is the most common primary malignant bone tumor in children and adolescents. Despite the development of new treatment plans in recent years, ...

Badanie to skrupulatnie zastępuje boczną progresję wzrostu tkanki kostniakomięsaka u myszy z niedoborem odporności, zapewniając platformę do badania wzrostu, nawrotu oporności na leki i przerzutów kostniakomięsaka. Realizujemy kroki proceduralne związane z ustanowieniem modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta przy użyciu ludzkiej tkanki kostniakomięsaka, doradzając w ten sposób w badaniach przedklinicznych nad kostniakomięsakiem. Ta techniczna dokładność naśladuje ludzkiego raka i imituje podobieństwo do guza pierwotnego, ułatwiając eksplorację biologii kostniakomięsaka i skuteczność leczenia.Na początek weź świeżo wycięte tkanki kostniakomięsaka przechowywane w roztworze ochronnym dla tkanek. Dwukrotnie spłukać tkanki kostniakomięsaka wstępnie schłodzoną sterylną solą fizjologiczną w sterylnym kapturze. Następnie usuń obszary tkanki kostniakomięsaka z krwawieniem i martwicą.Za pomocą skalpela przeciąć oczyszczoną tkankę kostniakomięsaka w naczyniu do hodowli tkanek zawierającym wstępnie schłodzoną sterylną sól fizjologiczną. Trzymaj chusteczkę na lodzie. Teraz umieść nagie myszy na sterylnych serwetach chirurgicznych.Ściśnij palce u nóg myszy, aby upewnić się, że są całkowicie znieczulone. Następnie zabezpiecz mysz w bocznej pozycji odleżynowej. Markerem zaznacz miejsce nacięcia chirurgicznego na skórze.Za pomocą skalpela wykonaj pięciomilimetrowe nacięcie od skóry do tkanek podskórnych. Teraz trzymaj pęsetę okulistyczną w lewej ręce i unieś górny margines nacięcia. Jednocześnie prawą ręką użyj prostego uchwytu na igłę, aby wykonać rozwarstwienie w górę pod skórą właściwą myszy.Za pomocą pęsety okulistycznej przytrzymaj górną stronę skóry nacięcia. Następnie przeszczep tkankę kostniakomięsaka pod skórę pięć milimetrów powyżej brzegu nacięcia. Zszyj nacięcie za pomocą linii chirurgicznych z dwoma lub trzema szwami, aby uzyskać pięciomilimetrowe nacięcie.Przeszczepienie tkanki kostniakomięsaka kości udowej od 15-letniego pacjenta do myszy P0, P1, P2 i P3 zaowocowało pomyślnym stworzeniem ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta.

establishment-patient-derived-xenograft-mouse-model-with-human

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

W tym filmie komórki czerniaka pochodzenia ludzkiego są wszczepiane podskórnie w obszar boczny myszy z obniżoną odpornością. Model PDX umożliwia przedkliniczne badanie komórek czerniaka, które lepiej oddaje niejednorodność guza i agresywność czerniaka obserwowane w warunkach in vivo.

Modelowanie ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjenta: technika generowania mysich modeli czerniaka

Rak prostaty jest drugą najczęstszą przyczyną zgonów związanych z rakiem w Stanach Zjednoczonych. Ortotopowy model raka stanowi użyteczne podejście do zrozumienia biologii raka prostaty i oceny skuteczności schematów terapeutycznych. Protokół ten opisuje szczegółowe kroki niezbędne do ustalenia ortotopowego modelu myszy raka prostaty.

Przedkliniczny ortotopowy mysi model ludzkiego raka prostaty

Bezpośrednie wstrzykiwanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych pochodzenia rakowego (EV) prowadzi do przeprogramowania szpiku kostnego, co wspomaga postęp nowotworu; jednak nie jest jasne, które komórki pośredniczą w tym efekcie. W tym miejscu opisujemy krok po kroku protokół badania interakcji nowotworowo-mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) za pośrednictwem EV in vivo, ujawniając kluczową rolę MSC edukowanych przez EV w przerzutach.

Przedkliniczny mysi model kostniakomięsaka w celu zdefiniowania komunikacji za pośrednictwem pęcherzyków zewnątrzkomórkowych między guzem a mezenchymalnymi komórkami macierzystymi

Opisujemy szczegółowy protokół izolacji komórek inicjujących nowotwór z ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z ludzkim mięsakiem poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją, przy użyciu ludzkiego antygenu leukocytów-1 (HLA-1) jako markera ujemnego, oraz dla dalszej walidacji i charakterystyki tych komórek inicjujących HLA-1-ujemny nowotwór.

Izolacja i charakterystyka komórek inicjujących nowotwór z ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z mięsakiem

Tutaj prezentujemy protokół generowania indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC) z fibroblastów pochodzących od pacjentów z zespołem Li-Fraumeni (LFS), różnicowania iPSC poprzez mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) do osteoblastów oraz modelowania nowotworzenia in vivo przy użyciu osteoblastów pochodzących od pacjentów z LFS.

Modelowanie kostniakomięsaka za pomocą zespołu Li-Fraumeni Indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste pochodzące od pacjenta

Obecny protokół opisuje metody tworzenia modeli ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjenta (PDX) i pierwotnych linii komórek rakowych z próbek chirurgicznego raka żołądka. Metody te stanowią użyteczne narzędzie do opracowywania leków i badań w zakresie biologii nowotworów.

Opracowanie modeli ksenoprzeszczepów i pierwszorzędowych linii komórkowych pochodzących od pacjentów z rakiem żołądka

Ortotopowe modele myszy z przerzutowym czerniakiem błony naczyniowej oka ludzkiej wątroby zostały stworzone przy użyciu technik chirurgicznej implantacji ortotopowej z technikami wstrzykiwania kawałków guza pochodzących od pacjenta i igieł z hodowanymi ludzkimi liniami komórkowymi czerniaka błony naczyniowej gałki ocznej.

Generowanie ortotopowej platformy ksenoprzeszczepu ludzkiego czerniaka błony naczyniowej gałki ocznej wątroby u myszy z niedoborem odporności

Modele przerzutów do kości nie rozwijają przerzutów równomiernie ani ze 100% częstością. Bezpośrednie wstrzyknięcie do komórek nowotworowych kości może spowodować embolizację płuc. Przedstawiamy naszą technikę modelowania pierwotnych guzów kości i przerzutów do kości z wykorzystaniem implantacji przeszczepu guza litego do kości, prowadzącej do powtarzalnego wszczepienia i wzrostu.

Modelowanie pierwotnych guzów kości i przerzutów do kości z implantacją przeszczepu guza litego do kości

Modele PDX z przerzutami do ośrodkowego układu nerwowego reprezentują fenotypowe i molekularne cechy ludzkich przerzutów, co czyni je doskonałymi modelami do badań przedklinicznych. Poniżej opisano, jak ustalić modele PDX i drogi inokulacji, które najlepiej wykorzystać w badaniach przedklinicznych.

Opracowanie i wykorzystanie modeli ksenoprzeszczepów do ośrodkowego układu nerwowego pochodzących od pacjentów

Obecny protokół opisuje wstrzykiwanie komórek do kostniakomięsaka kości piszczelowej w celu wygenerowania modeli myszy z ortotopowym kostniakomięsakiem i przerzutami do płuc.

Wstrzyknięcie komórek kostniakomięsaka piszczelowego w celu wygenerowania ortotopowego kostniakomięsaka i mysich modeli przerzutów do płuc

Poznaj metodę tworzenia modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka w myszach z immunodeficjencją. Ten model umożliwia badanie biologii nowotworu, oporności na leki i przerzutów.

Opracowanie mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka

Przeglądaj więcej filmów