Szczurzy model zapalenia torebki po proktokolektomii i zespoleniu jelita krętego z odbytem przy użyciu siarczanu dekstranu sodu
31 maja 2024
Ten protokół opisuje metodę tworzenia szczurzego modelu zapalenia torebki. Model worka jelita krętego powstał poprzez wykonanie operacji zespolenia jelita krętego z odbytem (IPAA) z wykorzystaniem technik mikrochirurgicznych. Po operacji szczur był leczony 4% siarczanem dekstranu sodu (DSS) przez 4 dni.
Ze względu na wyzwania związane z prowadzeniem badań klinicznych nad zapaleniem jelita, modele zwierzęce mogą służyć jako cenne narzędzia do badania leków na zapalenie jelita i mechanizmów. Protokół ten opisuje metodę ustalania szczurzego modelu zapalenia woreczka. Ten eksperymentalny model zwierzęcy zapalenia woreczka stanowi podstawę do badania patogenezy i leczenia tego schorzenia.
Dzięki wcześniejszemu doświadczeniu w karmieniu myszy i przebudowie chirurgii IPAA, możliwe jest skrócenie krzywej uczenia się do około 10 przedmiotów. Kluczowym krokiem w tym procesie jest budowa i zespolenie worka G. Postępowanie pooperacyjne również odgrywa kluczową rolę w udanym modelowaniu.
Pomyślne opracowanie modelu zapalenia woreczka u szczura stanowi solidną podstawę do dalszych badań nad lekami i mechanizmami. Nasz zespół zawsze będzie zaangażowany w badanie patogenezy zapalenia torebki i mechanizmu działania leków. Na początek ułóż szczura na grzbiecie w pozycji grzbietowej na anatomicznej ławce.
Przykryj pole operacyjne sterylną gazą nasączoną bakteriostatycznym roztworem soli fizjologicznej. Po wykonaniu sześciocentymetrowego nacięcia w linii środkowej odsłoń powierzchnię otrzewnej za pomocą retraktora. Następnie odetnij końcowe jelito czcze.
Umieść kikut sequel w odległości od jednego do dwóch centymetrów od zastawki krętniczo-kątniczej, a następnie odetnij go. Odizoluj dopływ krwi do końcowego jelita czczego i zwiąż go za pomocą 8-0 nić do szwów. Teraz rozpocznij resekcję prawej półokrężnicy, ostrożnie wiążąc prawą półokrężnicę i środkową żyłę kolki.
Następnie oddziel tętnicę krezkową dolną i odizoluj tętnicę odbytnicy dolną. Przystąp do izolacji odbytnicy, aż osiągniesz dwa centymetry od krawędzi odbytu. Następnie przeciąć dystalną część odbytnicy pod kątem około 45 stopni, aby zapobiec pooperacyjnemu zwężeniu.
Następnie złóż końcowe jelito kręte w kształt litery J, aby utworzyć woreczek na jelito kręte. Za pomocą ściegu blokującego wykonaj zespolenie tylnej ściany i wzmocnij przednią ścianę zmodyfikowanym ściegiem stożkowym. Upewnij się, że w krezce nie ma skrętu.
W odstępach czasu zszyj przednie ściany boczne otworu worka i boczną ścianę kikuta odbytnicy, używając 8-0 nić do szycia dla trakcji. Następnie nałóż pełnowarstwowy ciągły szew blokujący zarówno na przednią, jak i tylną ścianę. Sekwencyjnie zamknij powięź mięśni brzucha i skórę za pomocą szwów 4-0.
Aby leczyć model zapalenia jelita krętego szczura za pomocą DSS, rozpuść cztery gramy DSS w 100 mililitrach czystej wody, świeżo przygotowywanej codziennie. Podawaj czystą wodę grupie IPAA i 4% DSS grupie zapalenia woreczka od 31 dnia po operacji do 35 dnia. Początkowo zarówno grupa IPAA, jak i Jelito Kręte miały równą masę ciała i były ogólnie w dobrej kondycji.
W 35. dniu po operacji masa ciała w grupie z zapaleniem jelita krętego była znacznie niższa niż w grupie IPAA.
Przegląd
Niniejszy protokół opisuje tworzenie szczurzego modelu pouchitis, który jest kluczowy dla badania patogenezy i leczenia tego schorzenia. Model ten powstaje poprzez zabieg zespolenia jelita krętego z odbytnicą (IPAA), a następnie podanie dekstranu siarczanu sodu (DSS).
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Biologia
- Modele zwierzęce
Wstęp
- Pouchitis jest schorzeniem trudnym do badania w ramach badań klinicznych.
- Modele zwierzęce dostarczają cennych informacji na temat mechanizmów powstawania pouchitis.
- Model szczurzy umożliwia efektywne badanie metod leczenia pouchitis.
- Poprzednie doświadczenie w przeprowadzaniu operacji IPAA pomaga w ustanowieniu modelu.
Cel badania
- Stworzenie wiarygodnego modelu szczurzego do badań nad zapaleniem zbiornika (pouchitis).
- Zrozumienie patogenezy zapalenia zbiornika.
- Ocena potencjalnych metod leczenia tego schorzenia.
Zastosowane metody
- Utworzenie modelu szczura poprzez operację IPAA.
- Opieka pooperacyjna w celu zapewnienia sukcesu modelu.
- Leczenie 4% siarczanem dekstranu sodu (DSS) przez 4 dni.
- Zastosowanie technik mikrochirurgicznych dla zapewnienia precyzji.
Główne wyniki
- Skuteczne opracowanie modelu zapalenia zbiornika (pouchitis) u szczura.
- Wykazanie wykonalności modelu przy skróconym czasie nauki techniki.
- Wnioski dotyczące patogenezy i leczenia zapalenia zbiornika.
- Potencjał do dalszych badań z wykorzystaniem tego modelu.
Wnioski
- Model szczurzy jest cennym narzędziem w badaniach nad zapaleniem zbiornika (pouchitis).
- Operacja IPAA oraz traktowanie DSS są skutecznymi metodami modelowania.
- Niniejsze badanie stanowi podstawę dla przyszłych studiów nad zapaleniem zbiornika.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Opracowanie powtarzalnego szczurzego modelu pouchitis po proktokolektomii i zespoleniu końcowej pętli jelita krętego z odbytnicą (IPAA) pozwala na wypełnienie krytycznej luki w badaniach przedklinicznych nad powikłaniami nieswoistych zapaleń jelit. Model ten umożliwia analizę mechanistyczną i walidację celów terapeutycznych w systemie istotnym chorobowo, w którym badania kliniczne są ograniczone. Jego solidna konstrukcja zapewnia ciągłość translacyjną – od wczesnych etapów odkrywania leków po ocenę przedkliniczną – wspierając decyzje dotyczące portfela nowych środków przeciwzapalnych.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Umożliwia badanie patogenezy zapalenia torby oraz mechanizmów immunologicznych w kontrolowanym kontekście in vivo.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów terapeutycznych poprzez odtworzenie ludzkich odpowiedzi zapalnych występujących po operacji.
- Zwiększa pewność predykcyjną przy wyborze kandydatów poprzez zapewnienie powtarzalnego modelu choroby.
Przesiewanie i opracowanie testu
- Zapewnia zwalidowany system zwierzęcy do ilościowej oceny skuteczności leków oraz odpowiedzi biomarkerów.
- Standaryzuje punkty końcowe, takie jak utrata masy ciała, spożycie pokarmu i histopatologia, w celu zapewnienia porównywalności między badaniami.
- Umożliwia powtarzalne przesiewanie związków przeciwzapalnych w klinicznie istotnych warunkach.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Jest zgodny z patologią istotną dla choroby, co wspiera odkrywanie i walidację biomarkerów translacyjnych.
- Łączy wczesne odkrycia mechanistyczne z przedklinicznym dowodem koncepcji w zakresie interwencji w zapaleniu worka (pouchitis).
- Zmniejsza ryzyko translacyjne poprzez modelowanie pooperacyjnych powikłań zapalnych obserwowanych u pacjentów z wrzodziejącym zapaleniem jelita grubego (UC).
Integracja potoku i przepływu pracy
Ten model zapalenia workowatego u szczurów wpisuje się w kontinuum od etapu odkrywania do badań przedklinicznych, umożliwiając testowanie hipotez, identyfikację związków wiodących oraz walidację translacyjną terapeutyków przeciwzapalnych skierowanych przeciwko powikłaniom po kolektomii.
- Biologia odkrywcza: Wspiera badania mechanistyczne nad szlakami immunologicznymi i zapalnymi zaangażowanymi w zapalenie zbiornika.
- Przesiewanie: Dostarcza ilościowych, powtarzalnych wyników do profilowania skuteczności i bezpieczeństwa związków.
- Analityka: Zapewnia ustandaryzowane odczyty, w tym masę ciała, wskaźniki spożycia oraz patologię tkanek, umożliwiając rzetelną analizę statystyczną.
- Badania translacyjne: Ułatwia dopasowanie wyników przedklinicznych do klinicznej patologii zapalenia zbiornika oraz profili biomarkerów.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Tworzy platformę wielokrotnego użytku do iteracyjnej oceny leków i biomarkerów w ramach programów odkrywczych.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i redukuje niejednoznaczność mechanistyczną w procesie odkrywania leków na zapalenie kosmki (pouchitis).
- Wartość operacyjna: Poprawia standaryzację, odtwarzalność i skalowalność preklinicznych modeli chorób zapalnych.
- Wartość strategiczna: Dostarcza informacji dla decyzji go/no-go i optymalizuje alokację zasobów poprzez ograniczanie ryzyka w przypadku kandydatów we wczesnej fazie badań.
- Wpływ na portfolio: Umożliwia priorytetyzację skorygowaną o ryzyko oraz rozwój zasobów przeciwzapalnych celujących w powikłania pozabiegowe.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymaga doświadczenia w technikach mikrochirurgicznych oraz w pooperacyjnej opiece nad zwierzętami.
- Wymaga dostępu do specjalistycznego instrumentarium do operacji IPAA oraz podawania DSS.
- Niezbędna jest standaryzacja punktów końcowych i protokołów analitycznych pomiędzy zespołami.
- Możliżna jest konieczność adaptacji metody dla różnych szczepów gryzoni lub czynników indukujących zapalenie torbieli.
- Ograniczenia modelu obejmują złożoność chirurgiczną oraz konieczność rygorystycznego monitorowania pooperacyjnego.
