Ukosowanie na mokro igieł do mikroiniekcji z wykorzystaniem stałego ciśnienia powietrza w celu uzyskania informacji zwrotnej o otwarciu igły

Zakład przekształcania owadów. Jesteśmy placówką świadczącą usługi uniwersyteckie, która pomaga klientom w wytwarzaniu owadów modyfikowanych genetycznie. Badania obejmują zarówno neurobiologię, w której prowadzą badania nad węchem komarów, jak i badania nad zdrowiem publicznym, w których tworzą szczepionki na malarię, a także ekspresję nowych białek w czarnej muszce żołnierskiej.

Tradycyjnie, igły były otwierane poprzez pociągnięcie igieł, a następnie otarcie ich o coś, aby otworzyć tę igłę, co może spowodować powstanie igieł, które są albo idealne do mikroiniekcji, albo bezużyteczne. I tak ta metoda pozwala nam otworzyć igłę w zwięzły sposób, w którym za każdym razem otrzymujemy ostre igły. Protokół ten daje informację zwrotną na temat rozmiaru otworu igły.

Gdy igła jest otwarta, można zmniejszyć ciśnienie dostarczane do końcówki igły, a im wyższe ciśnienie, przy którym pęcherzyki powietrza przestają płynąć, tym mniejszy rozmiar otworu tej igły. Przygotuj zespół szlifierski zgodnie z wytycznymi producenta, który obejmuje ustawienie płyty ściernej i zamocowanie pierścienia ustalającego wyposażonego w magnesy. Następnie nałóż 10 kropli oleju z postumentów na optycznie płaską powierzchnię postumentów.

Umieść zespół szlifierski na cokole i rozpocznij operację szlifowania. Aktywuj źródło światła, aby oświetlić obszar roboczy, upewniając się, że światło znajduje się za ściętą krawędzią, świecąc pod kątem 45 stopni do płyty ściernej i igły. Obróć głowicę mikroskopu na miejscu przy 90-krotnym powiększeniu.

Na chwilę zatrzymaj obracanie się płyty ściernej, aby ustawić ostrość mikroskopu na powierzchni płytki. Dodaj 1% środka zwilżającego do, aż będzie całkowicie mokry. Następnie dodaj 1% środka zwilżającego na powierzchnię płyty ściernej, upewniając się, że pokrywa powierzchnię bez przeciekania na pierścień ustalający.

Umieść wstępnie zwilżony na powierzchni płyty ściernej podczas jej obracania się, upewniając się, że znajduje się po lewej stronie płyty, patrząc w dół od góry i rozciąga się od godziny 11 do godziny 6 z płytką jako tarczą zegara. Upewnij się, że nie porusza się po czarnej części pierścienia ustalającego. Aby rozpocząć ukosowanie igły krzemianowej bora po przygotowaniu zespołu szlifierskiego, włóż igłę do uchwytu igły i dokręć pierścień ustalający, aby zamocować igłę na miejscu.

Otwórz regulator i zwiększ ciśnienie do 24 funtów na cal kwadratowy. Obróć pokrętło regulacji kursu na tyle, aby podnieść uchwyt igły, aż igła zostanie podniesiona wyżej niż powierzchnia obracającej się płyty ściernej. Obróć cały manipulator tak, aby igła wskoczyła na miejsce nad obracającą się płytą.

Umieścić igłę na płytce w taki sposób, aby obrót płytki odsunął ją od końcówki igły. Obserwując z boku, użyj pokrętła regulacji zgrubnej, aby opuścić igłę w kierunku powierzchni płyty ściernej i zatrzymaj się, gdy igła prawie dotyka powierzchni cieczy. Wyregulować położenie igły tak, aby znajdowała się w środku pola widzenia.

Po znalezieniu się w środku powoli zwiększaj powiększenie, dokonując niewielkich korekt, aby końcówka igły znajdowała się w centrum view. Przy maksymalnym powiększeniu zatrzymaj płytę szlifierską i ustaw ostrość mikroskopu na powierzchni płyty ściernej. Gdy ostrość na powierzchni jest już ustawiona, natychmiast uruchom ponownie obrót płyty.

Za pomocą pokrętła regulacji kursu manipulatora opuść igłę w kierunku płyty ściernej. W polu view obserwuj igłę i cień igły. Gdy oba elementy są bliskie styku, przełącz się na pokrętło precyzyjnej regulacji.

Kontynuuj opuszczanie igły, aż dotknie swojego cienia. W tym momencie odczytaj suwmiarkę i zanotuj odczyt. Odczyt ten wskazuje, że powierzchnia płyty ściernej znajduje się na poziomie lub poniżej tego pomiaru suwmiarki.

Pozwól, aby igła pozostała na tym wskazówku suwmiarki przez 5 do 10 sekund. Za pomocą pokrętła precyzyjnej regulacji manipulatora podnieś igłę, upewniając się, że pozostaje pod powierzchnią środka zwilżającego. Zatrzymaj na chwilę obrót płyty ściernej, aby obserwować, czy pęcherzyki powietrza wydostają się z końcówki igły.

Jeśli bąbelki nie są obecne, przesuń igłę z powrotem do poprzedniego odczytu kalibru, obniż ją nieznacznie, wykonaj nowy odczyt kalibru i powtórz kroki, jak pokazano wcześniej. Jeśli widoczne są pęcherzyki, uruchom ponownie płytę ścierną, aby sprawdzić, czy podczas obracania się płyty dochodzi do tworzenia się pęcherzyków. Po zaobserwowaniu pęcherzyków, gdy płyta ścierna się nie obraca, powoli zmniejszaj ciśnienie powietrza, obracając pokrętło regulacyjne regulatora.

Gdy pęcherzyki przestaną wypływać z końcówki igły, zwróć uwagę na ciśnienie, a następnie zwiększ ciśnienie powietrza, aż bąbelki zaczną ponownie wypływać z końcówki igły. Po zakończeniu ukosowania podnieś igłę nad płytę ścierną, upewniając się, że jest wystarczająco wysoko, aby w nic nie uderzyć, gdy cały manipulator jest obracany od płytki i mikroskopu. Gdy igła znajdzie się w pozycji, w której można ją bezpiecznie wyjąć, zmniejsz ciśnienie powietrza do zera.

Wyjąć igłę i umieścić ją w pojemniku do przechowywania igieł, takim jak szalka Petriego, aż zostanie zużyta.