Name: Protokół jednostki udaru myszy ze standaryzowaną punktacją neurologiczną do translacyjnych badań udarów myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T12:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 45 s
Description: Poznaj protokół jednostki udaru myszy ze standaryzowaną punktacją neurologiczną do translacyjnych badań udarów. Ta metoda umożliwia ocenę deficytów neurologicznych u myszy po udarze nawet długoterminowo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować Nikolaosowi Plakopitisowi i Ioannisowi Tatsidisowi za cenne wsparcie chirurgiczne podczas części badania.

<ol><li>Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Stroke.</a> Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).</li>
<li>Lourbopoulos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+block+in+stroke%3A+A+constructive+and+%26%2334%3Bout-of-the-box%26%2334%3B+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Translational block in stroke: A constructive and &#34;out-of-the-box&#34; reappraisal.</a> Front Neurosci. 15, 652403(2021).</li>
<li>Cai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Panoptic+imaging+of+transparent+mice+reveals+whole-body+neuronal+projections+and+skull-meninges+connections%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Panoptic imaging of transparent mice reveals whole-body neuronal projections and skull-meninges connections.</a> Nat Neurosci. 22 (2), 317-327 (2019).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurol Res. 19 (6), 641-648 (1997).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Powers, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+early+management+of+patients+with+acute+ischemic+stroke%3A+2019+update+to+the+2018+guidelines+for+the+early+management+of+acute+ischemic+stroke%3A+A+guideline+for+healthcare+professionals+from+the+american+heart+association%2Famerican+stroke+association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: 2019 update to the 2018 guidelines for the early management of acute ischemic stroke: A guideline for healthcare professionals from the american heart association/american stroke association.</a> Stroke. 50 (12), e344-e418 (2019).</li>
<li>Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessments+in+the+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Transl+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Functional assessments in the rodent stroke model.</a> Exp Transl Stroke Med. 2 (1), 13(2010).</li>
<li>Ruan, J., Yao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+tests+in+rodent+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Hemorrhages%22%5BJournal%5D)">Behavioral tests in rodent models of stroke.</a> Brain Hemorrhages. 1 (4), 171-184 (2020).</li>
<li>Bederson, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+middle+cerebral+artery+occlusion%3A+Evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Rat middle cerebral artery occlusion: Evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).</li>
<li>Bieber, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+and+reliability+of+neurological+scores+in+mice+exposed+to+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Validity and reliability of neurological scores in mice exposed to middle cerebral artery occlusion.</a> Stroke. 50 (10), 2875-2882 (2019).</li>
<li>Lourbopoulos, A., Karacostas, D., Artemis, N., Milonas, I., Grigoriadis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+a+new+modified+intraluminal+suture+for+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats+of+various+weight%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of a new modified intraluminal suture for temporary middle cerebral artery occlusion in rats of various weight.</a> J Neurosci Methods. 173 (2), 225-234 (2008).</li>
<li>Lourbopoulos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inadequate+food+and+water+intake+determine+mortality+following+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 37 (6), 2084-2097 (2017).</li>
<li>De Simoni, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotection+by+complement+%28c1%29+inhibitor+in+mouse+transient+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuroprotection by complement (c1) inhibitor in mouse transient brain ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 23 (2), 232-239 (2003).</li>
<li>Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice%3A+Permanent+coagulation+of+the+distal+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice: Permanent coagulation of the distal middle cerebral artery.</a> J Vis Exp. (89), e51729(2014).</li>
<li>Dzirkale, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+behavioural+alterations+in+mice+following+transient+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Long-term behavioural alterations in mice following transient cerebral ischemia.</a> Behav Brain Res. 452, 114589(2023).</li>
<li>Kolabas, Z. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+molecular+profiles+of+skull+bone+marrow+in+health+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders.</a> Cell. 186 (17), 3706-3725.e29 (2023).</li>
<li>Kestner, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+dynamics+at+the+neurovascular+unit+during+early+regeneration+after+cerebral+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene expression dynamics at the neurovascular unit during early regeneration after cerebral ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Front Neurosci. 14, 280(2020).</li>
<li>Pinto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+the+transient+intraluminal+stroke+preclinical+model+to+clinical+practice%3A+From+improved+surgical+procedures+to+a+workflow+of+functional+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Bridging the transient intraluminal stroke preclinical model to clinical practice: From improved surgical procedures to a workflow of functional tests.</a> Front Neurol. 13, 846735(2022).</li>
<li>Damigos, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+learning+based+analysis+of+stroke+lesions+on+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Machine learning based analysis of stroke lesions on mouse tissue sections.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 42 (8), 1463-1477 (2022).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li>
<li>Bowman, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acyl+coa+synthetase+5+%28acsl5%29+ablation+in+mice+increases+energy+expenditure+and+insulin+sensitivity+and+delays+fat+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Metab%22%5BJournal%5D)">Acyl coa synthetase 5 (acsl5) ablation in mice increases energy expenditure and insulin sensitivity and delays fat absorption.</a> Mol Metab. 5 (3), 210-220 (2016).</li>
<li>John, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Housing-temperature+reveals+energy+intake+counter-balances+energy+expenditure+in+normal-weight%2C+but+not+diet-induced+obese%2C+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Housing-temperature reveals energy intake counter-balances energy expenditure in normal-weight, but not diet-induced obese, male mice.</a> Commun Biol. 5 (1), 946(2022).</li>
<li>Tashiro, M., Hosokawa, Y., Amao, H., Tohei, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Duration+of+thermal+support+for+preventing+hypothermia+induced+by+anesthesia+with+medetomidine-midazolam-butorphanol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Duration of thermal support for preventing hypothermia induced by anesthesia with medetomidine-midazolam-butorphanol in mice.</a> J Vet Med Sci. 82 (12), 1757-1762 (2020).</li>
<li>Taylor, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+two+devices+used+to+maintain+normothermia+in+rats+and+mice+during+general+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Study of two devices used to maintain normothermia in rats and mice during general anesthesia.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (5), 37-41 (2007).</li>
<li>Bendele, A. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBendele%2C+AM+%22Urinary+system%22">Urinary system</a>. Jones, T. C., Hard, G. C., Mohr, U. , Springer Berlin Heidelberg. Berlin, Heidelberg. 456-462 (1998).</li>
<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cns+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Cns plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).</li>
<li>Mathis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deeplabcut%3A+Markerless+pose+estimation+of+user-defined+body+parts+with+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deeplabcut: Markerless pose estimation of user-defined body parts with deep learning.</a> Nat Neurosci. 21 (9), 1281-1289 (2018).</li>
<li>Fonarow, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+national+institutes+of+health+stroke+scale+to+30-day+mortality+in+medicare+beneficiaries+with+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Relationship of national institutes of health stroke scale to 30-day mortality in medicare beneficiaries with acute ischemic stroke.</a> J Am Heart Assoc. 1 (1), 42-50 (2012).</li>
<li>Allen reference atlas - adult mouse brain coronal. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Available+from+atlas.Brain-map.Org%22">Available from atlas.Brain-map.Org</a>. , Allen Institute for Brain Science. (2011).</li>
<li>Groger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Release+of+bradykinin+and+expression+of+kinin+b2+receptors+in+the+brain%3A+Role+for+cell+death+and+brain+edema+formation+after+focal+cerebral+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Release of bradykinin and expression of kinin b2 receptors in the brain: Role for cell death and brain edema formation after focal cerebral ischemia in mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 25 (8), 978-989 (2005).</li>
<li>Kolbinger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behind+the+wall-compartment-specific+neovascularisation+during+post-stroke+recovery+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Behind the wall-compartment-specific neovascularisation during post-stroke recovery in mice.</a> Cells. 11 (10), (2022).</li>
<li>Merino-Serrais, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microanatomical+study+of+pyramidal+neurons+in+the+contralesional+somatosensory+cortex+after+experimental+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Microanatomical study of pyramidal neurons in the contralesional somatosensory cortex after experimental ischemic stroke.</a> Cereb Cortex. 33 (4), 1074-1089 (2023).</li>
<li>Metz, G. A., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ladder+rung+walking+task%3A+A+scoring+system+and+its+practical+application%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The ladder rung walking task: A scoring system and its practical application.</a> J Vis Exp. (28), (2009).</li>
<li>Metz, G. A., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+and+subcortical+lesions+impair+skilled+walking+in+the+ladder+rung+walking+test%3A+A+new+task+to+evaluate+fore-+and+hindlimb+stepping%2C+placing%2C+and+co-ordination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: A new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination.</a> J Neurosci Methods. 115 (2), 169-179 (2002).</li>
</ol>

Brak informacji do raportowania.

Niniejszy protokół jest kompleksowym przewodnikiem po protokole wsparcia mSU, zaprojektowanym w celu zmniejszenia sztucznej śmiertelności między 3 a 10 dniami u myszy poddanych dużym udarom terytorialnym przez model fMCAo13. Ponadto niniejszy protokół zawiera ustandaryzowany przewodnik wideo dla ogniskowego składnika skali ESS (fESS) w celu zmniejszenia rozszerzonej subiektywności i stronniczości neurologicznej punktacji ogniskowej u myszy po udarze. Równolegle wprowadzamy test drabinkowo-szpiedlo...

Duży udar niedokrwienny mózgu jest jedną z głównych przyczyn zachorowalności i niepełnosprawności na całym świecie1. Mimo to badania nad udarem u myszy napotykają na blokadę translacyjną w prawie wszystkich dotychczasowych testowanych terapiach przedklinicznych2. Wielorakie przyczyny tego problemu i wysiłki zmierzające do jego przezwyciężenia zostały szczegółowo omówione w poprzedniej publikacji2. Wyzwania te wynikają z ograniczonej integracji postępów klinicznych z odpowiednimi modelami zwierzęcymi2 oraz słabości behawioralnych i neurologicznych systemów punktacji w dokładnym i czułym wykrywaniu deficytów po udarze2.
Ostatnie odkrycia3 potwierdzają, że model włókienniczy niedrożności tętnicy środkowej (fMCAo) u myszy ma znaczące zalety translacyjne nad innymi modelami z otwartym uszkodzeniem czaszki i urazem2,4. Co więcej, jest to jedyny, który modeluje reperfuzję i trombektomię mechaniczną w klinicznych warunkach udaru5,6,7. Jednak model boryka się z wysoką śmiertelnością podostrą w okresie od 3 do 7 dni po udarze, co uniemożliwia długoterminowe badania dużych udarów i do niedawna było uważane za nieodłączny i nieprzezwyciężalny artefakt modelu. Ponadto wykrycie deficytów neurologicznych po udarze mózgu jest stosunkowo trudne i stronnicze u myszy ze względu na ich mały rozmiar, szczególnie wśród osób niebędących klinicystami lub niedoświadczonych badaczy8,9. Aby temu zaradzić, różne grupy opracowały różne skale do wykrywania deficytów. Do najczęściej używanych i znanych skal należą: 3-punktowa skala Bedersona (BS)10, 5-punktowa zmodyfikowana skala Bedersona (mBS)11, 5-punktowa skala Longa (LS) (która jest podobna do mBS)6, zmodyfikowana Neurologiczna Skala Udaru Mózgu (mNSS)12,13, 18-punktowa skala Garcii (GS)9 i bardziej szczegółowa DeSimoni14 lub inaczej znany jako "Neuroscore" (NS)9,15 scale. Niestety, niektóre z tych skal są albo zbyt prymitywne i ograniczają się tylko do kilku dni ostrej fazy po udarze (BS, mBS i LS)8,9 lub ich interpretacja jest zatarta przez ogólne deficyty (NS).
Na tym tle, wcześniej opracowaliśmy i zweryfikowaliśmy protokół obsługi mysich jednostek uderzeń (mSU), wraz z eksperymentalną skalą uderzeń (ESS) dla myszy13. Uzasadnieniem dla mSU było dostosowanie wiedzy z rutynowych badań klinicznych (tj. ludzkich oddziałów udarowych) do przedklinicznych badań nad udarem, podczas gdy ESS krytycznie skonsolidował wcześniej istniejące, ale "niewrażliwe" lub nadmiarowe skale udaru w praktyczną, wyrafinowaną, czułą i efektywną czasowo skalę. mSU polega na częstym i dostosowanym monitorowaniu podstawowych parametrów klinicznych myszy z dostosowanym zastosowaniem wsparcia dla zwierząt w celu zwiększenia przeżywalności13.
Rzeczywiście, dane z naszego laboratorium i innych potwierdzają wartość obu metod. mSU tłumaczy kliniczne podstawowe środki wspomagające i rozwija się7 z ludzi na myszy, znacznie zmniejsza śmiertelność fMCAo u myszy z 60-70% do 10-15%13, umożliwiając w ten sposób badania większych udarów i od tego czasu może być skutecznie stosowany w niezależnych laboratoriach16,17,18,19. Ponadto ESS potrafi rozróżniać ogniskowe (komponent ogniskowy ESS, fESS) i ogólne (składowe ogólne ESS, gESS) deficyty i objawy po udarze, modeluje ludzką ocenę kliniczną (rozróżnienie między ogniskowymi i ogólnymi oznakami i objawami u ludzi), jest liniowo powiązany z wielkością zmiany po udarze i jest długoterminowo wrażliwy na deficyty13,20. Mimo to, pomimo udowodnionej wartości i skuteczności zarówno mSU, jak i ESS, brak jasnych, zwizualizowanych, ustandaryzowanych instrukcji nawet dla niedoświadczonych badaczy pozostawia kilka otwartych pytań dotyczących zastosowania mSU i znaczny subiektywizm w ocenie deficytów ogniskowych w fESS.
W związku z tym, nasz obecny artykuł ma na celu dostarczenie przejrzystych instrukcji dla protokołów mSU i fESS. Jesteśmy przekonani, że pomoże to badaczom zajmującym się udarem mózgu w zwiększeniu efektywności translacyjnej ich badań nad udarem, znacznym zmniejszeniu strat zwierząt w ciągu pierwszych 3-10 dni po udarze, zmniejszeniu kosztów eksperymentów i ostatecznie powtarzalnej ocenie deficytów neurologicznych przez wiele miesięcy po udarze13. Dodatkowo, dodatkowa kombinacja testu drabinkowego i testu cylindrycznego może łatwo określić ilościowo ogniskowy niedowład kończyn (kończyny przednie i tylne) spowodowany fMCAo.
Aby pokazać skuteczność mSU i fESS, dostarczamy średnio- (14-dniowe) i długoterminowe (6-miesięczne) dane na myszach po fMCAo. Dwunastotygodniowe samce myszy C57Bl/6J (n = 31) wykorzystano i trzymano w kontrolowanej temperaturze (22 ± 2 °C), z 12-godzinnym okresem cyklu światło-ciemność i dostępem do granulowanego pokarmu i wody ad libitum. Myszy podzielono na dwie kohorty obserwowane odpowiednio przez 14 dni (n = 10, kohorta 1) i 6 miesięcy (n = 15, kohorta 2). Myszy te poddano 60-minutowemu niedokrwieniu mózgu przy użyciu dobrze opisanego modelu fMCAo13,20,21 w znieczuleniu izofluranowym. Zwierzęta operowane pozorami (n=6, operowane jako dwie powyższe kohorty, ale nie wywołano niedokrwienia) obserwowane przez 6 miesięcy służyły jako kontrole. Buprenorfina była stosowana jako przed- i 3-dniowy pooperacyjny środek przeciwbólowy. Testy szczebla drabiny i cylindra przeprowadzono również dla kohorty 6-miesięcznej w ramach oceny neurologicznej.
Wszystkie zwierzęta były codziennie sprawdzane pod kątem humanitarnych punktów końcowych w ciągu pierwszych 14 dni po udaniu, zdefiniowanych jako: 1) ciężka hipotermia (<33 °C) i/lub unieruchomienie (np. wynik 4 w teście 6 fESS lub test "spontanicznej aktywności" gESS), który nie uległ poprawie po leczeniu "mysim Stroke Unit" (tj. pasywnym ogrzewaniu i aktywnym karmieniu, patrz 1.4, 1.6, 1.8) w ciągu jednej godziny, 2) objawy bólu lub zachowania lękowego (np. wynik >2 w teście "lęk/zachowanie automatyczne" gESS), nawet po analgezji pooperacyjnej zgodnie z protokołem.
W tym protokole, wsparcie myszy po udarze w postaci mSU rozpoczyna się natychmiast po powrocie myszy do zdrowia po operacji fMCAo. Składa się ona z 3 faz: fazy A (0-48 godzin po reperfuzji), fazy B (>48 godzin i do "końca potrzebnego aktywnego wsparcia", zwykle w 10-14 dniu, w zależności od fazy B u danego zwierzęcia) i fazy C (od 14 dnia). Obejmuje pięć istotnych interwencji (wizyty/ocena stratyfikacji ryzyka, karmienie, płyny, temperatura i miejscowa dezynfekcja; patrz 1.1 do 1.8 poniżej) dostosowanych do każdego zwierzęcia, zgodnie z każdą fazą (A, B lub C) i jego dziennym rzeczywistym stanem klinicznym ocenianym za pomocą oceny stratyfikacji ryzyka (RSS), patrz rysunek uzupełniający 1 i tabela 1 z trzema typowymi przykładami. Wymagane materiały i narzędzia do mSU są pokazane w Rysunek 1a i opisane w Tabeli materiałów. Udostępniamy również szablon do monitorowania zwierząt podczas mSU (patrz Plik Uzupełniający 1).

<table><tbody><tr><td>Tools do mSU</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% roztworu dekstrozy&nbsp;</td><td>VIOSER S.A</td><td>na (nie dotyczy)</td><td>Dowolny genericon</td></tr><tr><td>Bezdotykowy termometr cyfrowy</td><td>AVRON</td><td>YTC20095</td><td>Dowolny genericon</td></tr><tr><td>Cyfrowa waga</td><td>KERN & Sohn Gmbh</td><td>FCB6K1</td><td>Dowolny genericon</td></tr><tr><td>Granulki spożywcze</td><td>Mucedola srl</td><td>na</td><td>Dowolny rodzaj, użyj normalnego pokarmu z twojego zakładu dla zwierząt</td></tr><tr><td>Płyta grzewcza</td><td>Photax</td><td>na</td><td>Podgrzewacz do naczyń Photax 2</td></tr><tr><td>Płynny środek antyseptyczny</td><td>Sch&uuml; lke & Mayr GmbH</td><td>na</td><td>Octenisept&reg;</td></tr><tr><td>Normalny blender</td><td></td> spożywczy <td>na</td><td>Do rozdrabniania granulek. Dowolny genericon</td></tr><tr><td>sól fizjologiczna</td><td>DEMO S.A.</td><td>na</td><td>Chlorek sodu do wstrzykiwań 0,9%</td></tr><tr><td>Pinsetter i patyczki kosmetyczne</td><td></td><td>na</td><td>Dowolny genericon</td></tr><tr><td>Cukier</td><td></td><td>na</td><td>Dowolna genericon</td></tr><tr><td>Strzykawki (1 ml) z igłą</td><td></td><td></td> o rozmiarze 27 na <td>Dowolny rodzaj. Do podawania pokarmu (bez igły) i do podawania płynów podskórnych (za pomocą igły)</td></tr><tr><td>Narzędzia do ESS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>45&deg; powierzchnia kątowa&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Wykonany z pleksiglasu lub innego materiału, z powierzchnią gumową, do testów wspinaczkowych</td></tr><tr><td>wacik bawełniany&nbsp;</td><td>Dowolny genericon</td><td>na</td><td>komercyjny patyczek kosmetyczny do uszu, spraw, aby jego bawełniana końcówka była długa i cienka</td></tr><tr><td>krawędź z zaostrzoną krawędzią drewniany patyczek</td><td>Dowolny genericon</td><td>na</td><td>np. wykałaczki</td></tr><tr><td>Długa belka&nbsp;</td><td>Wymiary</td><td></td><td>: 1 x 1 x1 cm, około 100 cm długości, drewniany. Umieść między dwiema krawędziami stołu do testu chodzenia po belce</td></tr><tr><td>Grube rękawice&nbsp;</td><td>Dowolny rodzaj</td><td></td><td>zapobiegający urazom zwierząt podczas upadku z belki</td></tr></tbody></table>

protokół jednostki udaru myszy ze standaryzowaną punktacją neurologiczną do translacyjnych badań udarów myszy

The Mouse Stroke Unit Protocol with Standardized Neurological Scoring for Translational Mouse Stroke Studies

Model filamentowy niedrożności tętnicy środkowej (fMCAo) jest prawdopodobnie najbardziej translacyjnym modelem udaru myszy, pozwalającym na kontrolowane niedokrwienie z wewnątrznaczyniową reperfuzją/rekanalizacją. Brakuje mu jednak zgodności z obecnymi postępami klinicznymi w leczeniu udarów mózgu (np. Oddziały Udarowe), zwykle wykorzystuje subiektywną lub niejasną ocenę neurologiczną w laboratoriach i wykazuje wysoką śmiertelność w fazie ostrej. W tym miejscu rozwiązujemy te ograniczenia za pomocą sprawdzonych protokołów wideo. Przedstawiamy protokół mysiej jednostki udarowej (mSU) z filmami instruktażowymi i algorytmem decyzyjnym (Risk Stratification Score), wypełniając lukę między modelowaniem klinicznym a modelowaniem udaru u myszy. Aby zwiększyć dokładność i czułość oceny neurologicznej udaru mózgu, po raz pierwszy prezentujemy ustandaryzowany format wideo ogniskowej eksperymentalnej skali udaru mózgu (fESS) i udowadniamy jej wartość do 6 miesięcy po udarze. Dodatkowo przedstawiono protokoły testu drabinkowego na myszach, a także znanego testu cylindrycznego, służące do bezstronnej, ilościowej oceny funkcji motorycznych kończyn. Wyniki wskazują na skuteczność translacyjną mSU. Focal ESS (fESS) wyróżnia się na tle innych znanych skal w wykrywaniu ogniskowych deficytów udarowych, rejestrowaniu rekonwalescencji i utrzymywaniu czułości przez okres do 6 miesięcy po udarze. Testy szczebla drabinkowego i cylindra obiektywnie określają ilościowo i monitorują deficyty motoryczne kończyn przednich i tylnych w perspektywie długoterminowej. Podsumowując, integracja testów mSU, fESS i testów funkcji motorycznych zapewnia solidne ramy dla klinicznie istotnych badań udaru mózgu. Nasze protokoły poprawiają wartość translacyjną w badaniach nad udarami u myszy.

Procedura mSU, opisana powyżej, rozpoczyna się po operacji fMCAo. Nasze reprezentatywne wyniki w dwóch niezależnych kohortach myszy z udarem fMCAo oraz grupą sham (Rycina 4a) potwierdzają wcześniej udowodnioną wartość mSU, szczególnie w krytycznym okresie między 3. a 10. dniem13. W naszych kohortach śmiertelność wystąpiła u 3/15 zwierząt z Kohorty 1 (udar, 6-miesięczna obserwacja), 2/10 z Kohorty 2 (udar, 14-dniowa obserwacja) oraz 0/6 zwierząt z grupy sham (<strong c...

Ten artykuł przedstawia protokół realizacji wysoce translacyjnej i niezależnie sprawdzonej koncepcji mysiej jednostki uderzenia (mSU) u myszy o dużym skoku. Zapewnia również ustandaryzowany protokół wykonywania ogniskowej eksperymentalnej skali udaru u myszy, która ocenia deficyty ogniskowe udaru wykryte nawet długotrwale.

Protokół jednostki udaru myszy ze standaryzowaną punktacją neurologiczną do translacyjnych badań udarów myszy

The filament model of middle artery occlusion (fMCAo) is perhaps the most translational mouse stroke model, allowing for controlled ischemia with ...

Model udaru myszy z okluzją wewnątrznaczyniową dobrze tłumaczy obecne zabiegi trombektomii i reperfuzji, jednak nie przekłada skutecznych procedur klinicznych oddziałów udarowych. W tym filmie demonstrujemy naszą sprawdzoną koncepcję translacyjnej jednostki udaru myszy i standaryzowaną skalę oceny neurologicznej. Pierwsza metoda naszego protokołu odnosi się do jednostki uderzenia myszy.Codziennie oceniaj stan kliniczny zwierzęcia i obliczaj jego wynik certyfikacji ryzyka, sumując punkty, jak pokazano tutaj. Dostosuj częstotliwość i intensywność wspomagania do RSS i fazy po udarze zwierzęcia. Aby uzyskać aktywne wsparcie żywieniowe, chwyć i przytrzymaj mysz delikatnie, ale mocno za sierść na szyi.Ustabilizuj policzek środkowym palcem i przesuń środkowy palec w kierunku nosa myszy przy policzku i utrzymaj pozycję. Umieścić końcówkę strzykawki między zębami w kierunku wewnętrznej strony policzka. Za każdym razem podawaj około 40 lub 50 mikrolitrów pokarmu w żelu.Delikatnie umieść mysz w klatce i powtórz karmienie po jednej do dwóch minut. Następnie demonstrowany jest główny składnik Eksperymentalnej Skali Udaru Mózgu. Zacznij od pierwszego testu na niedowład kończyn przednich.Delikatnie podnieś mysz z podstawy ogona i zbadaj przednie kończyny. Zero punktów za symetryczne wyprostowanie do przodu i ruchomość kończyn przednich. Punktacja jedna za łagodne zgięcie i zmniejszoną ruchomość kończyny przeciwstawnej.Drugi punkt za łagodne zgięcie kończyny przeciwległej. Zdobądź trzy punkty za przyleganie kończyny przeciwstawnej do tułowia i cztery punkty za kończynę plegiczną bez ruchu kończyny lub ciała. Teraz oceń niedowład kończyn tylnych.Kontynuuj trzymanie myszy za podstawę ogona, jak w teście. Zbadaj tylne kończyny, uzyskaj zero punktów za symetryczne wyprostowanie i ruch tylnych kończyn. Punktacja jedna dotyczy asymetrii kończyn tylnych ze znacznie zmniejszonym ruchem i asymetrycznym położeniem przeciwległej kończyny tylnej.Kontynuuj trzymanie myszy za podstawę ogona, aby ocenić symetrię tułowia. Zero punktów za normalne symetryczne zgięcie tułowia w obie strony i brak trwałego zgięcia tułowia powyżej 30 stopni do osi pionowej. Punktacja jedna za zaznaczone zgięcie tułowia powyżej 30 stopni do osi pionowej z przewagą przeciwstawną.Teraz przetestuj zachowanie podczas krążenia. Delikatnie połóż mysz na płaskiej powierzchni i pozwól jej swobodnie poruszać się przez co najmniej minutę. Obserwuj jego wzorzec ruchu.Zero punktów, gdy mysz porusza się szybko i liniowo. Zdobądź jeden za tendencję do skręcania w bok, ale nie w ciasnych kręgach. Zdobądź dwa punkty za zamknięte niestałe okręgi po jednej stronie.Zdobądź trzy punkty za ciągłe zamykanie kręgów w jedną stronę i cztery punkty za obracanie się, kołysanie lub brak ruchu. Teraz przetestuj symetrię ciała. Kontynuuj od testu czwartego i pozwól myszy swobodnie poruszać się po płaskiej powierzchni.Obserwuj jego oś od nosa do ogona. Zero punktów za normalną postawę, podniesiony tułów z ławki i prosty ogon. Zdobądź jeden za lekką asymetrię, gdy ciało zgina się lekko w jedną stronę, a ogon jest dystalnie zgięty.Zdobądź dwa punkty za umiarkowaną asymetrię, gdy ciało pochyla się lub zgina w stronę przeciwną, a ogon jest wygięty proksymalnie. Zdobądź trzy punkty za wyraźną asymetrię, gdy ciało jest zgięte, jedna strona leży na ławce, a ogon jest wyraźnie wygięty. I zdobądź cztery punkty za ekstremalną asymetrię, gdy ciało jest zgięte, a jedna strona stale leży na ławce.Teraz do testu szóstego, kontynuuj od testu piątego i obserwuj jego chód. Sprawdź, czy nie ma deficytów motorycznych chodu. Zdobądź zero punktów za normalny chód, gdy kończyny są elastyczne, symetryczne i szybkie.Zdobądź jeden za sztywny, nieelastyczny i wolniejszy chód bez utykania. Zdobądź dwa punkty za wyraźne utykanie z asymetrycznymi ruchami. Zdobądź trzy punkty za drżenie, dryfowanie lub upadek po delikatnym pchnięciu.Zdobądź cztery punkty za brak spontanicznego spaceru. Teraz przetestuj pod kątem obowiązkowego krążenia. Chwyć mysz za podstawę ogona i unieś ją lekko z powierzchni, aby chodziła na przednich kończynach.Obserwuj jego ruch. Punktacja zero dla normalnego ruchu liniowego. Zdobądź jeden punkt za tendencję do skręcania na bok.Zdobądź dwa, gdy mysz zatoczy krąg w jedną stronę w pełnych zamkniętych okręgach. Zdobądź trzy, gdy się obraca, a jego ruch jest powolny. I zdobądź cztery, gdy mysz nie się do przodu, a przednia część tułowia leży na ławce.Tutaj opisujemy, jak wykonać test postawy. Umieść mysz na dłoni, jak pokazano na filmie, i delikatnie kołysz nią do tyłu i do przodu. Zwróć uwagę, że mysz utrzymuje swoją pionową pozycję i balansuje z siłami bocznymi, jej korpus nie styka się z dłonią ani palcami.Nagrania z różnymi wynikami tego testu nie są pomocne, ponieważ jego punktacja w dużej mierze opiera się na wykrywaniu szybkich i subtelnych ruchów myszy, które są wyczuwalne przez rękę, a wskazówki wizualne nie są wystarczające do oceny. Dla Twojej wygody każdą partyturę opisujemy w formie tekstu. Teraz oceń ułożenie kończyn przednich.Trzymaj mysz z tyłu lub od podstawy ogona i skieruj ją w stronę belki jako celu, do którego należy dotrzeć. Obserwuj, aby uzyskać symetryczny zasięg. Następnie, gdy chwyci belkę, delikatnie ją odciągnij i obserwuj, czy kończyny przednie są symetrycznie zwolnione.Zero punktów za symetryczny zasięg i uwolnienie. Oceń jeden za dowolną asymetrię. Teraz przetestuj deficyt sensomotoryczny kończyn przednich.Trzymaj mysz za grzbiet, jak pokazano, i stymuluj kolejno przednie łapy cienką końcówką. Zero punktów za normalne szybkie ruchy chwytania. Punktacja jest przyznawana za brak lub wyraźnie opóźnione chwytanie przedniej łapy przeciwległej.Następnie przetestuj jego chodzenie po belce. Umieść mysz na belce tak, aby jej oś nos-ogon była równoległa do niej i pozwól jej balansować lub chodzić po belce. Obserwuj równowagę, niedowład kończyn i upadki.Zawsze trzymaj rękę poniżej zwierzęcia na wypadek, gdyby spadło. Wynik zero punktów, gdy mysz balansuje stabilną postawą i idzie w kierunku jednej strony belki. Zdobądź jeden, gdy chwyci się boku belki i nie będzie po niej chodził.Należy pamiętać, że może potrzebować trochę czasu, aby nadal balansować na belce. Zdobądź dwa, gdy jedna kończyna spadnie z belki. Zdobądź trzy punkty, gdy dwie kończyny spadną z belki.Zdobądź cztery, gdy mysz próbuje utrzymać równowagę na belce, ale spada po 40 sekundach. Należy pamiętać, że w tym teście mysz powinna być obserwowana przez maksymalnie 60 sekund. Zdobądź pięć punktów, gdy nastąpi upadek, który nastąpi między 20 a 40 sekundą.I zdobądź sześć, gdy nie próbuje utrzymać równowagi ani zawiesić się na belce. Oceń odczucie wąsów. Umieść mysz na otwartym blacie i skutecznie stymuluj jej wąsy cienkim wacikiem z długą końcówką.Jadąc ze ślepego kąta, obserwuj jego reakcję na skręt. Wynik zero dla normalnego szybkiego obracania się po obustronnej stymulacji. Zdobądź jeden punkt za wolniejszą odpowiedź przeciwstawną.Drugi punkt oznacza brak odpowiedzi przeciwstawnej. Trzeci punkt oznacza brak odpowiedzi przeciwtrądzikowej i wolniejszą odpowiedź ipsilesionalną. I zdobądź cztery punkty za obustronną odpowiedź na nieobecny.Test zdolności do wspinania się. Umieść mysz na środku pokrytej gumą powierzchni pod kątem 45 stopni i obserwuj jej reakcję, gdy próbuje się wspinać. Zdobądź zero, gdy mysz szybko wdrapie się na szczyt powierzchni.Zdobądź jeden, gdy wspina się z wysiłkiem i występuje osłabienie kończyn. Zdobądź dwa, gdy trzyma się nachylenia i nie ślizga się ani nie wznosi. Zdobądź trzy, gdy zsunie się ze zbocza pomimo wysiłku, aby zapobiec upadkowi.I zdobądź cztery, gdy ślizgnie się bez wysiłku, aby zapobiec upadkowi. Protokół jednostki udaru myszy w sposób powtarzalny wspierał przeżycie myszy po nitkowatej niedrożności tętnicy środkowej mózgu, utrzymując wskaźnik przeżycia na poziomie 80%Ogniskowy ESS przoduje w wykrywaniu deficytów neurologicznych, rejestrowaniu powrotu do zdrowia i utrzymywaniu czułości przez okres do sześciu miesięcy po udarze. Jako uzupełnienie ogniskowego ESS można użyć testu szczebla drabinkowego do wykrywania i ilościowego określania osłabienia zarówno kończyn przednich, jak i tylnych przez okres do sześciu miesięcy.

the-mouse-stroke-unit-protocol-with-standardized-neurological-scoring

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Włóknista okluzja tętnicy środkowej mózgu jest powszechnie stosowanym modelem badania udaru niedokrwiennego u myszy.

Modelowanie udaru u myszy – zator tętnicy środkowej mózgu z wykorzystaniem modelu filamentowego

Różne mysie modele zamknięcia tętnicy środkowej mózgu (MCAO) są szeroko stosowane w eksperymentalnych badaniach mózgu. W tym miejscu demonstrujemy model przezczaszkowego stałego dystalnego MCAO, który powoduje konsekwentny zawał kory mózgowej o wielkości odpowiadającej uszkodzeniom spowodowanym przez większość udarów niedokrwiennych u ludzi.

Modelowanie udaru u myszy: trwała koagulacja dalszej tętnicy środkowej mózgu

Ten protokół wideo opisuje czułą, niezawodną i szybką metodę oceny deficytów nerwowo-mięśniowych w transgenicznym mysim modelu stwardnienia zanikowego bocznego.

Szybki fenotypowy system punktacji neurologicznej do oceny postępu choroby w mysim modelu SOD1-G93A ALS

Tutaj prezentujemy metodologię wytwarzania ogniskowego udaru w mysiej istocie białej poprzez miejscowe wstrzyknięcie nieodwracalnego inhibitora śródbłonkowej syntazy tlenku azotu (eNOS) (L-Nio). Przedstawiono dwie odmiany stereotaktyczne, wsteczne śledzenie neuronów oraz znakowanie i rozwarstwianie świeżych tkanek, które rozszerzają potencjalne zastosowania tej techniki.

Wszechstronny mysi model podkorowego udaru istoty białej do badania zwyrodnienia aksonów i neurobiologii istoty białej

Aby zrozumieć patofizjologię udaru, ważne jest korzystanie z wiarygodnych modeli. W artykule opisano jeden z najczęściej stosowanych modeli udaru u myszy, określany jako model niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAo) (określany również jako model włókna śródświetlnego lub szewu) z reperfuzją.

Podejście chirurgiczne do niedrożności tętnicy środkowej mózgu i udaru wywołanego reperfuzją u myszy

Tutaj opisany jest model udaru fotozakrzepowego, w którym udar jest wytwarzany przez nienaruszoną czaszkę poprzez wywołanie trwałej okluzji mikronaczyniowej za pomocą oświetlenia laserowego po podaniu barwnika światłoczułego.

Modelowanie udaru u myszy: ogniskowe zmiany korowe spowodowane fotozakrzepicą

Różne modele niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAo) są używane w eksperymentalnych badaniach nad udarem. W tym miejscu opisano eksperymentalny model udaru przejściowego MCAo przez tętnicę szyjną zewnętrzną (ECA), który ma na celu naśladowanie udaru u człowieka, w którym skrzeplina naczyniowo-mózgowa jest usuwana w wyniku spontanicznej lizy skrzepu lub terapii.

Modelowanie udaru u myszy: przejściowe zamknięcie tętnicy środkowej mózgu przez tętnicę szyjną zewnętrzną

Ten protokół demonstruje unikalny model udaru myszy ze średniej wielkości zawałem i doskonałym wskaźnikiem przeżycia. Model ten pozwala przedklinicznym badaczom zajmującym się udarem mózgu wydłużyć czas trwania niedokrwienia, wykorzystać starzejące się myszy i ocenić długoterminowe wyniki funkcjonalne.

Zmodyfikowany przezczaszkowy model niedrożności tętnicy środkowej mózgu do badania wyników udaru u starszych myszy

Stosując całkowicie optyczne podejście, udar niedokrwienny jest indukowany, jednocześnie rejestrując aktywność neuronów Ca2+ za pomocą fluorescencyjnego biosensora w wyłaniającym się rdzeniu udaru czujnej, zachowującej się myszy.

Jednoczesna fotozakrzemia i fotometria włókien w celu wywołania i monitorowania udaru niedokrwiennego u zachowujących się myszy

Obrazowanie rezonansem magnetycznym (MRI) stało się coraz popularniejszym narzędziem do badania fenotypu myszy z modyfikacjami genetycznymi. Niniejszy artykuł przedstawia metody niezbędne do przeprowadzenia wysokoprzepustowego fenotypowania myszy z modyfikacjami genetycznymi przy użyciu MRI dla wielu osobników jednocześnie.<br...

Neuroanatomiczny obrazowanie magnetycznemu rezonansem dla wielu myszy

Poznaj protokół jednostki udaru myszy ze standaryzowaną punktacją neurologiczną do translacyjnych badań udarów. Ta metoda umożliwia ocenę deficytów neurologicznych u myszy po udarze nawet długoterminowo.

Protokół jednostki udaru myszy ze standaryzowaną punktacją neurologiczną do translacyjnych badań udarów myszy

Przeglądaj więcej filmów