7 lutego 2025
Ten artykuł przedstawia protokół realizacji wysoce translacyjnej i niezależnie sprawdzonej koncepcji mysiej jednostki uderzenia (mSU) u myszy o dużym skoku. Zapewnia również ustandaryzowany protokół wykonywania ogniskowej eksperymentalnej skali udaru u myszy, która ocenia deficyty ogniskowe udaru wykryte nawet długotrwale.
Model udaru myszy z okluzją wewnątrznaczyniową dobrze tłumaczy obecne zabiegi trombektomii i reperfuzji, jednak nie przekłada skutecznych procedur klinicznych oddziałów udarowych. W tym filmie demonstrujemy naszą sprawdzoną koncepcję translacyjnej jednostki udaru myszy i standaryzowaną skalę oceny neurologicznej. Pierwsza metoda naszego protokołu odnosi się do jednostki uderzenia myszy.
Codziennie oceniaj stan kliniczny zwierzęcia i obliczaj jego wynik certyfikacji ryzyka, sumując punkty, jak pokazano tutaj. Dostosuj częstotliwość i intensywność wspomagania do RSS i fazy po udarze zwierzęcia. Aby uzyskać aktywne wsparcie żywieniowe, chwyć i przytrzymaj mysz delikatnie, ale mocno za sierść na szyi.
Ustabilizuj policzek środkowym palcem i przesuń środkowy palec w kierunku nosa myszy przy policzku i utrzymaj pozycję. Umieścić końcówkę strzykawki między zębami w kierunku wewnętrznej strony policzka. Za każdym razem podawaj około 40 lub 50 mikrolitrów pokarmu w żelu.
Delikatnie umieść mysz w klatce i powtórz karmienie po jednej do dwóch minut. Następnie demonstrowany jest główny składnik Eksperymentalnej Skali Udaru Mózgu. Zacznij od pierwszego testu na niedowład kończyn przednich.
Delikatnie podnieś mysz z podstawy ogona i zbadaj przednie kończyny. Zero punktów za symetryczne wyprostowanie do przodu i ruchomość kończyn przednich. Punktacja jedna za łagodne zgięcie i zmniejszoną ruchomość kończyny przeciwstawnej.
Drugi punkt za łagodne zgięcie kończyny przeciwległej. Zdobądź trzy punkty za przyleganie kończyny przeciwstawnej do tułowia i cztery punkty za kończynę plegiczną bez ruchu kończyny lub ciała. Teraz oceń niedowład kończyn tylnych.
Kontynuuj trzymanie myszy za podstawę ogona, jak w teście. Zbadaj tylne kończyny, uzyskaj zero punktów za symetryczne wyprostowanie i ruch tylnych kończyn. Punktacja jedna dotyczy asymetrii kończyn tylnych ze znacznie zmniejszonym ruchem i asymetrycznym położeniem przeciwległej kończyny tylnej.
Kontynuuj trzymanie myszy za podstawę ogona, aby ocenić symetrię tułowia. Zero punktów za normalne symetryczne zgięcie tułowia w obie strony i brak trwałego zgięcia tułowia powyżej 30 stopni do osi pionowej. Punktacja jedna za zaznaczone zgięcie tułowia powyżej 30 stopni do osi pionowej z przewagą przeciwstawną.
Teraz przetestuj zachowanie podczas krążenia. Delikatnie połóż mysz na płaskiej powierzchni i pozwól jej swobodnie poruszać się przez co najmniej minutę. Obserwuj jego wzorzec ruchu.
Zero punktów, gdy mysz porusza się szybko i liniowo. Zdobądź jeden za tendencję do skręcania w bok, ale nie w ciasnych kręgach. Zdobądź dwa punkty za zamknięte niestałe okręgi po jednej stronie.
Zdobądź trzy punkty za ciągłe zamykanie kręgów w jedną stronę i cztery punkty za obracanie się, kołysanie lub brak ruchu. Teraz przetestuj symetrię ciała. Kontynuuj od testu czwartego i pozwól myszy swobodnie poruszać się po płaskiej powierzchni.
Obserwuj jego oś od nosa do ogona. Zero punktów za normalną postawę, podniesiony tułów z ławki i prosty ogon. Zdobądź jeden za lekką asymetrię, gdy ciało zgina się lekko w jedną stronę, a ogon jest dystalnie zgięty.
Zdobądź dwa punkty za umiarkowaną asymetrię, gdy ciało pochyla się lub zgina w stronę przeciwną, a ogon jest wygięty proksymalnie. Zdobądź trzy punkty za wyraźną asymetrię, gdy ciało jest zgięte, jedna strona leży na ławce, a ogon jest wyraźnie wygięty. I zdobądź cztery punkty za ekstremalną asymetrię, gdy ciało jest zgięte, a jedna strona stale leży na ławce.
Teraz do testu szóstego, kontynuuj od testu piątego i obserwuj jego chód. Sprawdź, czy nie ma deficytów motorycznych chodu. Zdobądź zero punktów za normalny chód, gdy kończyny są elastyczne, symetryczne i szybkie.
Zdobądź jeden za sztywny, nieelastyczny i wolniejszy chód bez utykania. Zdobądź dwa punkty za wyraźne utykanie z asymetrycznymi ruchami. Zdobądź trzy punkty za drżenie, dryfowanie lub upadek po delikatnym pchnięciu.
Zdobądź cztery punkty za brak spontanicznego spaceru. Teraz przetestuj pod kątem obowiązkowego krążenia. Chwyć mysz za podstawę ogona i unieś ją lekko z powierzchni, aby chodziła na przednich kończynach.
Obserwuj jego ruch. Punktacja zero dla normalnego ruchu liniowego. Zdobądź jeden punkt za tendencję do skręcania na bok.
Zdobądź dwa, gdy mysz zatoczy krąg w jedną stronę w pełnych zamkniętych okręgach. Zdobądź trzy, gdy się obraca, a jego ruch jest powolny. I zdobądź cztery, gdy mysz nie się do przodu, a przednia część tułowia leży na ławce.
Tutaj opisujemy, jak wykonać test postawy. Umieść mysz na dłoni, jak pokazano na filmie, i delikatnie kołysz nią do tyłu i do przodu. Zwróć uwagę, że mysz utrzymuje swoją pionową pozycję i balansuje z siłami bocznymi, jej korpus nie styka się z dłonią ani palcami.
Nagrania z różnymi wynikami tego testu nie są pomocne, ponieważ jego punktacja w dużej mierze opiera się na wykrywaniu szybkich i subtelnych ruchów myszy, które są wyczuwalne przez rękę, a wskazówki wizualne nie są wystarczające do oceny. Dla Twojej wygody każdą partyturę opisujemy w formie tekstu. Teraz oceń ułożenie kończyn przednich.
Trzymaj mysz z tyłu lub od podstawy ogona i skieruj ją w stronę belki jako celu, do którego należy dotrzeć. Obserwuj, aby uzyskać symetryczny zasięg. Następnie, gdy chwyci belkę, delikatnie ją odciągnij i obserwuj, czy kończyny przednie są symetrycznie zwolnione.
Zero punktów za symetryczny zasięg i uwolnienie. Oceń jeden za dowolną asymetrię. Teraz przetestuj deficyt sensomotoryczny kończyn przednich.
Trzymaj mysz za grzbiet, jak pokazano, i stymuluj kolejno przednie łapy cienką końcówką. Zero punktów za normalne szybkie ruchy chwytania. Punktacja jest przyznawana za brak lub wyraźnie opóźnione chwytanie przedniej łapy przeciwległej.
Następnie przetestuj jego chodzenie po belce. Umieść mysz na belce tak, aby jej oś nos-ogon była równoległa do niej i pozwól jej balansować lub chodzić po belce. Obserwuj równowagę, niedowład kończyn i upadki.
Zawsze trzymaj rękę poniżej zwierzęcia na wypadek, gdyby spadło. Wynik zero punktów, gdy mysz balansuje stabilną postawą i idzie w kierunku jednej strony belki. Zdobądź jeden, gdy chwyci się boku belki i nie będzie po niej chodził.
Należy pamiętać, że może potrzebować trochę czasu, aby nadal balansować na belce. Zdobądź dwa, gdy jedna kończyna spadnie z belki. Zdobądź trzy punkty, gdy dwie kończyny spadną z belki.
Zdobądź cztery, gdy mysz próbuje utrzymać równowagę na belce, ale spada po 40 sekundach. Należy pamiętać, że w tym teście mysz powinna być obserwowana przez maksymalnie 60 sekund. Zdobądź pięć punktów, gdy nastąpi upadek, który nastąpi między 20 a 40 sekundą.
I zdobądź sześć, gdy nie próbuje utrzymać równowagi ani zawiesić się na belce. Oceń odczucie wąsów. Umieść mysz na otwartym blacie i skutecznie stymuluj jej wąsy cienkim wacikiem z długą końcówką.
Jadąc ze ślepego kąta, obserwuj jego reakcję na skręt. Wynik zero dla normalnego szybkiego obracania się po obustronnej stymulacji. Zdobądź jeden punkt za wolniejszą odpowiedź przeciwstawną.
Drugi punkt oznacza brak odpowiedzi przeciwstawnej. Trzeci punkt oznacza brak odpowiedzi przeciwtrądzikowej i wolniejszą odpowiedź ipsilesionalną. I zdobądź cztery punkty za obustronną odpowiedź na nieobecny.
Test zdolności do wspinania się. Umieść mysz na środku pokrytej gumą powierzchni pod kątem 45 stopni i obserwuj jej reakcję, gdy próbuje się wspinać. Zdobądź zero, gdy mysz szybko wdrapie się na szczyt powierzchni.
Zdobądź jeden, gdy wspina się z wysiłkiem i występuje osłabienie kończyn. Zdobądź dwa, gdy trzyma się nachylenia i nie ślizga się ani nie wznosi. Zdobądź trzy, gdy zsunie się ze zbocza pomimo wysiłku, aby zapobiec upadkowi.
I zdobądź cztery, gdy ślizgnie się bez wysiłku, aby zapobiec upadkowi. Protokół jednostki udaru myszy w sposób powtarzalny wspierał przeżycie myszy po nitkowatej niedrożności tętnicy środkowej mózgu, utrzymując wskaźnik przeżycia na poziomie 80%Ogniskowy ESS przoduje w wykrywaniu deficytów neurologicznych, rejestrowaniu powrotu do zdrowia i utrzymywaniu czułości przez okres do sześciu miesięcy po udarze. Jako uzupełnienie ogniskowego ESS można użyć testu szczebla drabinkowego do wykrywania i ilościowego określania osłabienia zarówno kończyn przednich, jak i tylnych przez okres do sześciu miesięcy.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Ten artykuł przedstawia protokół implementacji koncepcji jednostki udaru mózgu u myszy (mSU) w przypadku dużego udaru u myszy, obok zstandardyzowanego protokołu oceny skupionych eksperymentalnych skal udaru. Badanie opisuje metody oceny skupionych deficytów po udarze u myszy, nawet na dłuższą metę.
Standardized neurological scoring and risk stratification in mouse stroke models address a critical gap in translational fidelity for preclinical cerebrovascular research. The mouse Stroke Unit (mSU) protocol, combined with validated focal Experimental Stroke Scale (fESS) and quantitative motor function tests, enhances predictive confidence and supports robust target validation for stroke therapeutics. This integrated framework enables more reliable go/no-go decisions and portfolio triage in early discovery and preclinical pipelines.
The mSU protocol and standardized scoring integrate into the discovery-to-preclinical continuum, bridging early target validation, lead identification, and translational research in stroke.