Name: Modelowanie pokrwaconego wodogłowia przedwczesnego u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:35:00.000+00:00
Duration: 4 min 12 s
Description: Poznaj modelowanie pokrwaconego wodogłowia przedwczesnego u szczurów poprzez połączenie chorioamnionitis in utero i krwotoku śródkomorowego. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów uszkodzeń mózgu i poszukiwanie nowych terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy są wdzięczni za finansowanie zapewnione przez National Institutes of Health (R01HL139492), Congressionally Directed Medical Research Program (W81XWH1810166, W81XWH1810167, W81XWH2210461 i W81XWH2210462), Stowarzyszenie Wodogłowia oraz Rudi Schulte Research Institute.

Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (ACUC) na Uniwersytecie Johnsa Hopkinsa zatwierdził wszystkie opisane tu procedury eksperymentalne. Protokół ten wykorzystuje ciężarne matki szczurze Sprague-Dawley oraz młode obu płci.
1. Wywołanie chorioamnionitisu w E18
UWAGA: Część dotycząca obelgi in utero w tym protokole została wcześniej szczegółowo opublikowana, jest podsumowana powyżej i jest przedmiotem osobnego protokołu JOVE oraz wideo 19,37,38,39,40,41,42,43,44,46. Krótko mówiąc, ciężarne samice szczurów Sprague-Dawley przechodzą laparotomię brzucha w dniu embrionalnym 18 (E18), aby wywołać chorioamnionitis, obejmującą TSHI oraz intraamniotyczne LPS.
<ol>
	<li>Znieczulenie<ol>
		<li>Indukować znieczulenie w ciężarnej tamie szczurów E18 z 2-4% izofluranem.</li>
		<li>Wyjmij ciężarną kocurę z komory indukcyjnej i połóż szczura w pozycji leżącej na zawieszonym chirurgicznym kocu z cyrkulacją wody ustawionym na 37 °C.</li>
		<li>Stosuj maść okulistyczną, aby zapobiec wysuszaniu rogówki. Delikatnie ściśnij łapę, aby potwierdzić brak odruchu szczypania palców. Monitoruj głębokość znieczulenia co 15-20 minut i zwiększ izofluran w przypadku pozytywnej reakcji na uszczypnięcie palca.</li>
		<li>Podaj buprenorfinę o przedłużonym uwalnianiu (0,1 mg/kg SC) na karku.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie chirurgiczne i peeling<ol>
		<li>Stosując standardową technikę sterylną, ogol brzuch.</li>
		<li>Szoruj brzuch 3 razy naprzemiennie betadyną i 70% etanolem.</li>
		<li>Okryj zwierzę sterylnymi zasłonami chirurgicznymi.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Laparotomia brzucha<ol>
		<li>Wykonaj skalpelem nacięcie o średnicy środkowej linii 3 cm na przygotowanej skórze brzucha.</li>
		<li>Użyj kleszczy i nożyczek chirurgicznych, aby podtrzymać warstwę powięzi brzusznej i wykonać nacięcie w linii naczyniowej warstwy mięśniowej, aby dostać się do jamy otrzewnej.</li>
		<li>Zewnętrznie wyodrębnić macicę.</li>
		<li>Odizoluj i zaciskaj tętnice macicy klipsami na tętniaka przez 60 minut. Utrzymuj temperaturę i utrzymuj zawartość wewnątrzbrzuszną wilgotną sterylną solą fizjologiczną.</li>
		<li>Wyjmij klipsy i wstrzyknij 100 μL LPS (4 μg/woreczek roztworu LPS) do każdego worka owodniowego każdego płodu. Nie niepokoić płodu ani łożyska.</li>
		<li>Płukaj rogi macicy i hojnie wyprowadzaj 3x sterylną solą fizjologiczną.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zamknięcie laparotomii<ol>
		<li>Zmień rogi macicy w jamie otrzewnej.</li>
		<li>Zbliż krawędzie warstwy mięśniowo-powięziowej i zamknij za pomocą szwu 3-0.</li>
		<li>Przybliż warstwę skóry i zamknij skórę za pomocą szwu 3-0.</li>
		<li>Użyj igły 26 G, aby podskórnie wstrzyknąć 0,125% bupivakainy wokół krawędzi rany.</li>
		<li>W przypadku fikcyjnych kontroli wykonuj laparotomię przez ten sam czas, aby kontrolować przez cały czas trwania znieczulenia. Nie zaciskaj tętnic ani nie podawaj żadnych zastrzyków dookoowodniowych. Po zakończeniu zabiegu należy zamknąć laparotomię w dwóch warstwach (powięzi mięśni brzucha i skóra) za pomocą szwów 3-0. We wszystkich przypadkach młode rodzą się w terminie (E21/22) i są opiekowane przez matkę.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Przygotowanie lizowanych czerwonych krwinek na P1
<ol>
	<li>Pobieranie krwi<ol>
		<li>Weź jednego samca i jedną samicę szczura Sprague-Dawley w dniu 1 poporodowym (P1) z miotu, który doświadczył zapalenia chorioamnionitisu w E18. Szybko odetnij głowę każdemu szczenięciu-dawcy specjalnymi nożyczkami chirurgicznymi. UWAGA: Do pobierania krwi używamy jednego samca i jednej samicy, aby wyeliminować potencjalne uprzedzenia płciowe poprzez reprezentację każdego z grup dawców. Dodatkowo używamy pary dopasowanej płci, aby zapewnić odpowiednią objętość i wydajność zlyzowanych czerwonych krwinek do wstrzyknięcia ich rodzeństwa. Zazwyczaj każdy dawca młody dostarcza wystarczającą liczbę zlizowanych czerwonych krwinek do wykonania zastrzyku ICV u maksymalnie 4-5 miotów.</li>
		<li>Natychmiast pobieraj krew do rurki mikrowirówki o pojemności 2 mL zawierającej 0,2 mL bezpłodnej soli fizjologicznej, uważając, aby po dekapitacji pobierać tylko swobodnie płynącą krew i nie skrobywać ani nie wyciskać, aby wytworzyć więcej krwi, ponieważ prowadzi to do przedwczesnej hemolizy. Dobrze wiruj. UWAGA: Dokładna ilość krwi zależy od konkretnego zwierzęcia dawcy i wagi, ale powinna być maksymalna przy zachowaniu powyższych środków ostrożności.</li>
		<li>Siekaj/mielę skrzepy krwi małymi nożyczkami chirurgicznymi.</li>
		<li>Wirówka zawiesiny krwi w stężeniu 500 × g przez 10 minut w temperaturze 4 °C, usuwa supernatant i ponownie zawiesza pellet w 0,2 mL bezpłodnej soli fizjologicznej. Dobrze wiruj.</li>
		<li>Siekaj/mielę resztki krwi po wirze małymi nożyczkami chirurgicznymi.</li>
		<li>Powtórz kroki 2.1.4-2.1.5 jeszcze dwa razy, łącznie 3 razy, czyszcząc nożyczki chirurgiczne sprayem 70% etanolu pomiędzy kolejnymi cyklami lizy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Liza czerwonych krwinek<ol>
		<li>Po końcowej centrifugacji dodaj 0,25 mL bezpłodnej soli fizjologicznej do granulatu; Wiruj dobrze.</li>
		<li>Umieść zawiesinę na suchym lodzie na 5 minut.</li>
		<li>Wyjmij zawiesinę z suchego lodu, umieść ją w inkubatorze ustawionym na 37,5 °C na 5 minut aż do całkowitego rozmrozenia i dobrze przeżyj wiry.</li>
		<li>Powtarzaj cykle zamrażania i rozmrażania przez łącznie 3 razy (trzy zamrożenia i trzy rozmrażania).</li>
		<li>Po zakończeniu ostatniej roztopi, wykonaj wir i szybki obrót. Krwinki są już zlizowane i gotowe do użycia. UWAGA: Mieszanka powinna mieć nieprzezroczysty kolor przypominający sok pomidorowy i łatwo ją wciągać do strzykawek.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Intraceventrikularne iniekcje lizowanych czerwonych krwinek na P1
<ol>
	<li>Znieczulenie z użyciem hipotermii<ol>
		<li>Umieść małą platformę na mokrym lodzie, aby ostygła.</li>
		<li>Nałóż suchą chusteczkę laboratoryjną, aby chronić skórę szczeniaka. UWAGA: Ta płaska, zimna powierzchnia służy do znieczulenia i wstrzyknięć młodym.</li>
		<li>Przenieś szczeniaka (w wieku P1) z maty grzewczej na przecieranie na zimnej platformie, aby wywołać znieczulenie przez hipotermię.</li>
		<li>Potwierdź głębokość znieczulenia, ściskając łapę i potwierdzając brak odruchu szczypania palców.</li>
		<li>Ustaw zewnętrzną lampę chirurgiczną na najjaśniejsze ustawienia.</li>
		<li>Asystent używa palca wskazującego i środkowego, by delikatnie utrzymać linię środkową głowy zwierzęcia, transilumiej czaszkę, aby zobaczyć boczne komory przez czaszkę. Identyfikacja bregmy polega na wizualizacji zatoki strzałkowej górnej (linii środkowej) przez skórę oraz dotyku szwu koronnego za pomocą cienkich kleszczy jako punktów orientacyjnych przecinających się.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zastrzyk ICV<ol>
		<li>Przetrzyj głowę znieczulonego szczeniaka wacikiem nasączonym 70% etanolem.</li>
		<li>Zidentyfikuj i oznacz miejsce wstrzyknięcia jako 1 mm boczne od szwu strzałkowego, w połowie drogi między lambda a bregma.</li>
		<li>Po wizualizacji użyj strzykawki insulinowej o pojemności 0,3 mL, długości 8 mm, 31 G, z ultracienką igłą przezskórną, aby wstrzyknąć 20 μL lizowanych czerwonych krwinek do prawej bocznej komory. Wkładaj igłę prosto w dół, używając techniki odręcznej, na głębokość około połowy długości igły i powoli wstrzykuj oraz wyjmuj igłę (proces wstrzykiwania i usuwania trwa około 10-15 sekund).</li>
		<li>Pozostaw igłę na miejscu przez kilka sekund po wstrzyknięciu, aby zapobiec wypłynięciu wstrzykniętych lizowanych krwinek.</li>
		<li>Powtórz to z lewą komorą boczną i wstrzykni 20 μL lizowanych czerwonych krwinek.</li>
		<li>Połóż szczeniaka na podgrzewaczu ustawionym na 37,5 °C, aby mógł dojść do siebie po znieczuleniu.</li>
		<li>Zapisz płeć szczeniaka i nadaj unikalny identyfikator zwierzęcia.</li>
		<li>Do klatki domowej należy oddać szczeniaka dopiero po pełnym wyzdrowieniu na podkładce grzewczej i odzyskaniu przytomności, aby zwierzę mogło bezpiecznie utrzymać leżącą część mostka.</li>
		<li>Codziennie monitoruj wszystkie szczenięta szczurów pod kątem zdrowia i dobrostanu.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Potwierdzenie pomyślnego obustronnego krwotoku dokomórowego na P2
<ol>
	<li>USG głowy<ol>
		<li>Aby przygotować się do USG głowy, wyjmij szczenięta P2 z ich domowej klatki.</li>
		<li>Nałóż żel ultrasonograficzny na sondę i umieść sondę nad czaszką.</li>
		<li>Przy bardzo lekkim nacisku przesuwaj sondę, aby zobaczyć komory. Potwierdzenie obustronnej hiperechogeniczności komór bocznych reprezentujących IVH.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Potwierdzenie udanego posthemorrhagicznego wodogłowia
<ol>
	<li>Pomiar odległości wewnątrzusznej (IAD), zastępczy obwód głowy, w celu potwierdzenia makrocefalii<ol>
		<li>Aby przygotować się do pomiaru, zdobądź małą miarkę odpowiednią do pomiaru obwodu głowy, najlepiej z wyraźnie widocznymi oznaczeniami milimetrów.</li>
		<li>Niech maskowany obserwator wyprowadzi szczeniaka z jego klatki.</li>
		<li>Delikatnie trzymając szczeniaka, zmierz odległość od ucha do ucha (odległość wewnątrzsłuchowa, IAD) i zapisuj wartość w milimetrach.</li>
		<li>Powtarzaj IAD codziennie od P1 do P15 i rysuj wartości na wykresie. Śledzić seryjnie IAD i ponownie mierzyć w P21 przy przenoszeniu młodych do nowych klatek fizycznie oddzielonych od matki (co jest standardowym czasem odstawiania szczeniąt). Powtarzaj IAD co 5 dni, zaczynając od P25 do P60.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pomiar ciśnienia otwierającego w celu potwierdzenia podwyższonego ciśnienia wewnątrzczaszkowego<ol>
		<li>Niech zamaskowany obserwator wyprowadzi szczeniaka z jego klatki.</li>
		<li>Znieczulony podawaj 75-100 mg/kg dootrzewnowej (IP) ketaminy oraz 5-10 mg/kg IP ksylazyny w przygotowaniu do eutanazji.</li>
		<li>Sprawdź głębokość znieczulenia, ściskając łapę i potwierdzając brak uszczypnięcia/odruchu pedałowego.</li>
		<li>Włóż małą igłę (31 G) połączoną z manometrem do przestrzeni rdzenia mózgowo-rdzeniowego połączenia szyjnego.</li>
		<li>Zapisz ciśnienie początkowe na manometrze.</li>
		<li>Wyjmij igłę i odetnij szczura ostrymi nożyczkami, a następnie przystąpi do zbierania tkanek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rezonans magnetyczny (MRI) ex vivo do oceny brzuchomegi<ol>
		<li>Znieczulać 75-100 mg/kg dootrzewnowej (IP) ketaminą oraz 5-10 mg/kg IP Xylazyny w przygotowaniu do eutanazji.</li>
		<li>Sprawdź głębokość znieczulenia, ściskając łapę i potwierdzając brak uszczypnięcia/odruchu pedałowego.</li>
		<li>Przeprowadź szczury solą fizjologiczną z buforem fosforanowym (PBS), a następnie 4% paraformaldehydu (PFA), aż zostaną dobrze utrwalone.</li>
		<li>Usuń mózg i drop-fix mózgu w 4% PFA</li>
		<li>Osadz mózg w 2% agarozy w stożkowej probówce o pojemności 50 mL. Niech stoi w temperaturze pokojowej.</li>
		<li>Przenieś mózg do MRI na rezonans ex vivo .</li>
		<li>Wykonaj 11,7T MRI w następującym stylu: T2 Turbo RARE; TE/TR = 30,0/3000 ms; średnio = 2; Odstęp echa = 10 000 ms; Współczynnik RARE = 8; liczba przekrojów = 30; grubość plastra = 1 mm; rozmiar obrazu = 128 x 128; FOV = 28 mm x 28 mm; rozdzielczość przekroju = 0,219 x 0,219 mm2; FA = 90,0°. UWAGA: Chociaż obrazowanie MRI dostarcza dowodów na pomyślne modelowanie PHHP, nie jest wymagane skanowanie wszystkich mózgów w danej kohorcie, aby potwierdzić PHHP. Pomiar IAM i ICP wystarcza do weryfikacji, jak opisano powyżej. Ostatecznie zdolność badacza do wykonania rezonansu in vivo lub ex vivo będzie zależała od różnych czynników, takich jak dostęp do sondaru MRI, środki finansowe oraz umiejętności techniczne. Ten krok jest szczególnie przydatny do walidacji przy nowo wdrażaniu modelu PHHP. Ważne jest, aby zauważyć, że w przypadku braku udokumentowanych oznak zwiększonego ciśnienia wewnątrzczaszkowego, takich jak podwyższone ciśnienie otwierające, pojedyncze wyniki wentrikulomegalii na obrazowaniu MRI nie oznaczają wodogłowia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Autorzy nie mają żadnych konfliktów interesów do ujawnienia.

Protokół ten indukcji PHHP pozwala na rygorystyczne, mierzalne i klinicznie przetłumaczalne pomiary wyników struktury i funkcji mózgu, w połączeniu z fenotypowymi cechami wodogłowia, w tym przewlekłym podwyższeniem ICP, brzusznej omaki i makrocefalii, od urodzenia do dorosłości4. Badania biochemiczne, histologiczne i funkcjonalne mogą być wykorzystywane do oceny stanu splotu naczyniówki, epipensmy i układu glymfatycznego, a także istoty szarej i białej19. Dodatkowo model te...

Pokrwawiąca wododowodza przedwczesnego porodu (PHHP) pozostaje poważnym problemem zdrowia publicznego. Charakteryzowany objawowym nagromadzeniem płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF) współdziałającym z podwyższonym ciśnieniem wewnątrzczaszkowym (ICP) wtórnym do krwotoku wewnątrzkomorowego (IVH), PHHP jest ciężkim przejawem encefalopatii wcześniacego i istotnym czynnikiem przyczyniającym się do globalnego obciążenia przedwcześniakiem i nabytym wodogłowiem 1,2. Na całym świecie około 400 000 niemowląt rocznie rodzi się z lub przejmuje dożywotnie obciążenie wodogłowia3, a wiele z nich umiera z powodu braku leczenia3. PHHP jest powszechne w krajach rozwiniętych u bardzo wcześniaków (<32 tygodnia ciąży) z ciężkim IVH i często dotyka najciężej chore niemowlęta, które już cierpią na inne zagrażające życiu choroby współistniejące 4,5.
Jedynym dostępnym leczeniem wodogłowia jest operacja6. Zabiegi chirurgiczne zapewniają lepszą długość życia, gdy niemowlęta mają więcej niż 6 miesięcy w momencie pierwszej trwałej interwencji, czy to przy zastosowaniu zastawki wentrikuloperitonealnej (VP) w celu odchylenia płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF), endoskopowej trzeciej komorowej (ETV), czy ETV z krzepnięciem splotu włosówkowego (ETV-CPC)7. Najczęstszą opcją, zastawki VP, często zawodzą w ciągu roku i predysponują dzieci do powikłań przez całe życie, powtarzających się operacji i hospitalizacji, co wiąże się z ogromnymi kosztami dla dziecka, rodziny i społeczeństwa. 8 W szczególności lęk związany z potencjalnym uszkodzeniem zastawki w dowolnym momencie jest obciążeniem dla rodzin9. Opieka nad dziećmi z objawowym wodogłowiem, w tym częste operacje, jest główną przyczyną wydatków na opiekę zdrowotną dla dzieci 10,11,12,13,14. Roczny szacunkowy koszt wydatków związanych z zaponowaniem u dzieci wynosił 2 miliardy dolarów w 2003roku. Podczas gdy dzieci z zastawkami stanowią tylko 0,6% hospitalizacji, generują 3,1% opłat szpitalnych dla dzieci w wysokości15. Dlatego odkrycie bezpiecznych, niechirurgicznych terapii leczenia PHHP jest kluczowe.
U niemowląt PHHP rozwija się po IVH w trakcie klinicznego trwania od kilku tygodni do miesięcy po początkowym wykryciu krwawienia mózgowego. Badanie przeprowadzone przez Hydrocephalus Clinical Research Network (HCRN) potwierdziło, że zastawki VP pozostają najlepszą opcją chirurgiczną dla noworodków z PHHP16. Nawet dla dzieci z PHHP w krajach o wysokich dochodach, gdzie dostęp do wykwalifikowanej pediatrycznej opieki neurochirurgicznej mają dostęp do pełnych kwalifikacji – >50% zaponów u niemowląt z PHHP wymaga rewizji chirurgicznej w ciągu pierwszych 2 lat8. Pomimo wyraźnej potrzeby identyfikacji bezpieczniejszych i skuteczniejszych terapii PHHP, badania napotykają przeszkody. Postęp jest częściowo utrudniony przez to, że literatura przedkliniczna dotycząca PHHP często nie rozróżnia odpowiednio wentrikulomegalii spowodowanej wodogłowiem ex vacuo17,18 od objawowego wodogłowia z makrocefalią19,20. Rzeczywiście, modele rozwojowe wodogłowia powinny obejmować postępującą makrocefalię i/lub pomiary podwyższonego ICP1.
Połączenie wiedzy klinicznej i przedklinicznej poprawiło projektowanie badań i przyczyniło się do dalszej wiedzy oPHHP 2. Badania przeprowadzone w różnych ośrodkach na całym świecie wykazały, że IVH najczęściej występuje u bardzo przedwczesnych noworodków wtórnych do zapalenia chorioamnionitis, 21,22,23,24,25,26,27,28. Oprócz infekcji łożyska i stanu zapalnego, sepsa noworodkowa jest kolejnym ważnym czynnikiem ryzyka i może odgrywać kluczową rolę w przebiegu od IVH, przez brzuchomomegalię, do objawowego PHHP, aż po późniejszą interwencjęchirurgiczną 29. Dane przedkliniczne i kliniczne potwierdzają, że zapalenie przenoszone przez krew może powodować wodogłowie20, a stany ogólnoustrojowe zwiększają wydzielanie płynu mózgowo-płynowego przez splot naczyniówki30. Ponadto dorośli z krwotokom podpajęczynówkowym i IVH, którzy również cierpią na sepsę, znacznie częściej wymagają zastawki31. Nowsza literatura potwierdziła, że stan zapalny zmniejsza napęd ruchliwych rzęsek w rzęskach pierścioniowych (CSF 19,20,32) oraz reabsorpcję płynu mózgowo-płynowego przez układ glymfatyczny 33,34,35,36. Ogólnie rzecz biorąc, stany zapalne układowe są kluczowym czynnikiem patofizjologicznym i klinicznym w PHHP1.
Biorąc pod uwagę te wyniki, stworzyliśmy odpowiedni do wieku przedkliniczny model PHHP. Model ten łączy IVH w okresie bezpośrednim i wczesnym poporodowym z chorioamnionitis, główną przyczyną przedwczesnych porodów19. To eksperymentalne podejście rozpoczyna się już w łonie matki, od niewydolności łożyska, zapalenia łożyska oraz zapalenia śródowodniowego, które definiują chorioamnionitis, 7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18, 19,20,21,22, 
 23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38 ,39,40,41,42, 
 43,44,45. Konkretnie przedstawiamy zespół odpowiedzi zapalnej płodu, neutrofilię łożyska oraz prozapalne mikrośrodowisko OUN w okresie przedwczesnym poprzez laparotomię brzuszną u ciężarnych szczurzych koń w dniu embrionalnym 18 (E18)37,38,39,40,41,42,43,444,45. Uszkodzenie wewnątrzmaciczne jest wywołane przez tymczasowe obustronne zwężenie tętnicy macicy, prowadzące do przejściowej ogólnoustrojowej niedokrwienia niedokrwienia (TSHI), po którym następuje intraamniotyczne wstrzyknięcie lipopolisacharydu (LPS)37,38,39,40,41,41,42,43,44,45. Następnie, aby zaburzyć dynamikę płynu mózgowo-mogłego i pobudzić rozwój wodogłowia u żywych młodych, IVH jest indukowane w pierwszym dniu poporodowym. Osiąga się to poprzez obustronne wstrzyknięcie do intrace-naczynia i komory (ICV) lizowanych czerwonych krwinek (RBC) u miotu (RBC) do komór bocznych 19,37,44. Młode są następnie badane w miarę rozwoju wodogłowia i przez cały okres życia.

<table><tbody><tr><td>70% etanol i bezalkohol;</td><td>Pharmco&nbsp;</td><td>111000200</td><td>Rozcieńczony do 70%&nbsp;</td></tr><tr><td>Peeling chirurgiczny z Betadyną</td><td>Kardynał Zdrowia</td><td>NDC-67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Tępe kleszcze</td><td>Roboz</td><td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>Bravmini Plus Bezprzewodowy Akumulator Akumulatorowy &nbsp;</td><td>Wahl&nbsp;</td><td>41590-0438</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgiczne ostrza ze stali węglowej&nbsp;</td><td>Bard-Parker</td><td>371151-11</td><td></td></tr><tr><td>wirówka &nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>Bawełniana gąbka gazowa</td><td>Fisherbrand</td><td>22-362-178</td><td>Mały, 6-calowy sterylny</td></tr><tr><td>Aplikatory z bawełnianymi końcówkami</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-114</td><td>30 G 1</td></tr><tr><td>Smar do oczu</td><td>Odśwież Lacri Lubri</td><td>75929</td><td></td></tr><tr><td>Podkład grzewczy w dalekiej podczerwieni</td><td>Kent Scientific</td><td>RT-0501&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator -&nbsp; Genie Temp-Shaker 100&nbsp;</td><td>Przemysł naukowy</td><td>SI-G100</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki insulinowe</td><td>BD</td><td>328438</td><td>0,3 cm³ 3 mm 31 G, ultrafine&nbsp;</td></tr><tr><td>Izofluran</td><td>Covettrus&nbsp;</td><td>11695067772&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Zastrzyk chlorowodorku ketaminy</td><td>Dechra&nbsp;</td><td>17033-101-10</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Nauka Kimtech</td><td>BXTNI141300</td><td></td></tr><tr><td>LPS 011B4</td><td>Sigma</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Rurki mikrowirówkowe</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3453</td><td>2,0 mL</td></tr><tr><td>Igła</td><td>BD</td><td>305122</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Igła</td><td>BD</td><td>305128</td><td>25 G 5/8</td></tr><tr><td>Uchwyty na igły</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>INS14109</td><td>12,5 CM STR</td></tr><tr><td>Ręczniki OR</td><td>Kardynał Zdrowia</td><td>287000-008</td><td></td></tr><tr><td>Papierowa taśma miarkowa</td><td>Kardynał Zdrowia</td><td>SKU &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór soli fizjologicznej, 0,9%</td><td>Sigma</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Roboz</td><td>RS-6808</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite</td><td>Kent Scientific</td><td>SS6823B&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Podpaski do przygotowania sterylnego alkoholu</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td>Sterylność</td></tr><tr><td>Rękawice chirurgiczne</td><td>Biogel</td><td>40870</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne</td><td>EST</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>T/Pompa (Pompa Terapii Cieplnej)</td><td>Stryker Medical &nbsp;</td><td>TP700</td><td></td></tr><tr><td>Klipsy na naczynia</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>INS14120</td><td>Ciśnienie 30 g</td></tr><tr><td>Zastrzyk ksylazyny&nbsp;</td><td>Vet One&nbsp;</td><td>NDC 13985-704-10</td><td></td></tr></tbody></table>

modelowanie pokrwaconego wodogłowia przedwczesnego u szczurów

Modeling Posthemorrhagic Hydrocephalus of Prematurity in Rats

Pokrwacony wodogłowie przedwczesnego (PHHP) jest poważnym następstwem ciężkiego krwotoku wewnątrzkomorowego (IVH) u bardzo wcześniaków poniżej 32 tygodnia wieku ciążowego (GA). PHHP definiuje się poprzez nagromadzenie płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF) związane z klinicznymi objawami podwyższonego ciśnienia śródczaszkowego (ICP). Niemowlęta z PHHP cierpią na dożywotnią zależność od zaczewów, z połową wymagającą powtarzalnych operacji w pierwszym roku życia, a wielu z nich wielokrotnych operacji w trakcie życia. Prenatalne chorioamnionitis predysponuje wcześniaki do ciężkiej fazy IVH oraz konieczności chirurgicznego leczenia trendów PHHP z sepsą noworodkową. Te cechy kliniczne sugerują, że stany ogólnoustrojowe są integralnym elementem patofizjologii PHHP. 
Tutaj definiujemy model zwierzęcy, który oddaje wszystkie kliniczne aspekty i kluczowe cechy PHHP u szczurów. Celem tego protokołu jest pokazanie, jak zapalenie chorioamnionitisu in unierodnego zapalenia krwi i dożylności poporodowej, z użyciem lizowanych czerwonych krwinek, można łączyć w celu uzyskania PHHP. To przedkliniczne podejście prowadzi do postępującej makrocefalii i kopulastych czaszek, podwyższonego ciśnienia wewnątrzczaszkowego oraz wentrikulomegalii, które można wykryć za pomocą rezonansu magnetycznego (MRI) lub mikroskopii. Oprócz długotrwałych zakłóceń w dynamice płynu mózgowo-rdzeniowego, szczury mają także opóźnienie poznawcze i niepełnosprawność funkcjonalną aż do dorosłości. W związku z tym ta platforma przedkliniczna umożliwia unikalne i niezrównane badania translacyjne PHHP, które mogą obejmować pomiary molekularne, komórkowe, biochemiczne, histologiczne, obrazowe oraz funkcjonalne. Może być również wykorzystywany do rygorystycznej analizy splotu naczyniówki, ruchomych rzęsek przytomnych oraz układu glimfatycznego równolegle. Na koniec, może być także nieocenionym narzędziem przedklinicznym do badania nowych strategii interwencji chirurgicznych oraz niechirurgicznych podejść terapeutycznych w leczeniu wodogłowia.

Według tego modelu wodogłowie rozwija się w dniach i tygodniach po wstrzyknięciu zlikwidowanych czerwonych krwinek. Przedstawienie typowego eksperymentalnego projektu i postępu wodogłowia przedstawiono na Rysunku 1. Oceniliśmy 5-6 zwierząt pozorowanych oraz 6-8 zwierząt z PHHP w każdej grupie. Jako młodociane szczury z PHHP wykazywały makrocefalię (Rysunek 2), podwyższone ciśnienie wewnątrzczaszkowe (Rysunek 3) oraz brzuchomomegalię...

Pokrwawiąca wodogłowie przedwczesnego (PHHP) można modelować u noworodków szczurów poprzez połączenie zapalenia chorioamnionitisu i krwotoku wewnątrzkomorowego. Połączenie tych wydarzeń prenatalnych i poporodowych wiernie oddaje kliniczne cechy PHHP, w tym makrocefalię, brzuszną omegę oraz podwyższone ciśnienie wewnątrzczaszkowe, przez całe życie.

Modelowanie pokrwaconego wodogłowia przedwczesnego u szczurów

Posthemorrhagic hydrocephalus of prematurity (PHHP) is a serious sequela of severe intraventricular hemorrhage (IVH) in very preterm infants less than 32 ...

Nasze laboratorium dąży do scharakteryzowania komórkowych i molekularnych mechanizmów patofizjologicznych różnych urazów mózgu okołoporodowego, ze szczególnym zainteresowaniem w postatorrahicznym wodogłowiu przedwczesnym, czyli PHHP. Naszym celem jest odkrywanie nowych, przekładalnych terapii dla tych trudnych chorób. Ten protokół pomaga nam lepiej zrozumieć uszkodzenia rozwijającego się mózgu po krwotoku dookołokomorowym i wodogłowiu.Dzięki temu modelu odkrywamy potencjalne strategie odwrócenia tych uszkodzeń mózgu oraz opracowywania nowych, mniej inwazyjnych metod leczenia. Protokół ten powtarza kluczowe cechy kliniczne PHHP u szczurów, łącząc w łonie macicy chorioamnionitis, a IVH poporodową z użyciem lizowanych czerwonych krwinek. Protokół ten pozwala szczurom z utrzymującą się makrocefalią, brzuszną omegalią, zwiększonym ciśnieniem wewnątrzczaszkowym oraz funkcyjną niepełnosprawnością aż do dorosłości, ułatwiając badania translacyjne PHHP z pełnym spektrum miar wyników.Na początek pobierz krew od samca i samicy szczura Sprague-Dawley w pierwszym dniu poporodowym z miotu, który doświadczył zapalenia chorioamnionitisu łona macicy w dniu embrionalnym 18. Dobrze przemieszaj rurkę, aby wymieszać zawartość. Używając małych chirurgicznych nożyczek, siekaj i mielę skrzepy krwi w tubce.Wiruj zawiesinę krwi w stężeniu 500g przez 10 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Usuń supernatant. Ponownie zawiesić pellet w 0,2 mililitra sterylnej soli fizjologicznej i dobrze zawiesić wiry, aby zapewnić prawidłowe wymieszanie.Posiekaj i siekaj resztki skrzepów krwi w zawiesie po wirze małymi nożyczkami chirurgicznymi. Po końcowym wirowaniu dodaj 0,25 mililitra soli fizjologicznej do pelletu i przeszukaj studnię w rurce, aby wymieszać zawartość. Połóż zawieszenie na suchym lodzie na pięć minut.Następnie przenieś zawieszenie do inkubatora ustawionego na 37,5 stopnia Celsjusza na pięć minut, aż zostanie całkowicie rozmrozzone, a następnie zacznij wirować zawieszenie długo po rozmrożeniu. Powtórz cykle zamrażania i rozmrażania łącznie trzy razy. Po ostatecznym rozmrożeniu przewij rurkę i wykonaj szybkie obrótnie w wirówce.Umieść małą platformę na mokrym lodzie i połóż suchą chusteczkę laboratoryjną, aby chronić skórę szczeniaka podczas zabiegu. Po znieczuleniu szczeniaka hipotermią, ustaw zewnętrzną lampę chirurgiczną ustawioną na najjaśniejsze ustawienia. Transilluminuj czaszkę, aby zobaczyć boczne komory przez czaszkę.Użyj strzykawki insulinowej o średnicy 0,3 mililitra, długości 8 milimetrów, 31-gauge z ultracienką igłą przezskórną, aby wstrzyknąć 20 mikrolitrów lizowanych czerwonych krwinek do prawej bocznej komory. Szczury z postemoragicznym wcześniakiem, czyli PHHP, wykazywały powiększone, kopulaste czaszki i makrocefalię, co potwierdza miara zastępczego zwiększonego obwodu głowy obserwowanego jako młodociane. Szczury z PHHP miały zwiększoną odległość wewnątrzsłuchową i zwiększone ciśnienie wewnątrzczaszkowe w 21. dniu poporodowym w porównaniu do kontroli pozorowanej.Brzuszna omegalia i zwiększona objętość komory u szczurów z PHHP były widoczne dzięki rezonansu magnetycznemu, co potwierdziło porównanie z pozorowanymi kontrolami.

modeling-posthemorrhagic-hydrocephalus-of-prematurity-in-rats

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Postnatalny model niedotlenienia i niedokrwienia mózgu u szczura jest uznanym modelem ludzkiej noworodkowej encefalopatii niedotlenieniowo-niedokrwiennej (HIE). W niniejszym artykule opisujemy model HIE u postnatalnych szczurząt.

Model niedotlenienia i niedokrwienia mózgu w perinatalnym niedokrwieniu

Opracowaliśmy mysie modele leukomalacji okołokomorowej (PVL), która jest dominującym uszkodzeniem mózgu u wcześniaków, charakteryzującym się zmianami w istocie białej wokół komór. Głównymi przyczynami PVL są niedotlenienie i niedokrwienie, z towarzyszącą lub bez towarzyszącej infekcji systemowej. Jednostronne podwiązanie tętnicy szyjnej oraz ekspozycja na hipoksję, z wstrzyknięciem lipopolisacharydu lub bez, wywołują zmiany przypominające PVL u myszy w 6. dniu po urodzeniu (P6).

Modele mysie leukomalacji okołodomowej

Aneuryzmalny krwotok podpajęczynówkowy (SAH) to krwawienie do przestrzeni podpajęczynówkowej następujące po pęknięciu tętniaka. Choć zapadalność i śmiertelność z powodu tego zdarzenia spadły dzięki lepszym metodom leczenia, ryzyko wystąpienia skurczu naczyń po krwotoku podpajęczynówkowym pozostaje na tym samym poziomie, co kilka lat temu. Znaczenie opracowania kompleksowego i powtarzalnego modelu zwierzęcego w celu zidentyfikowania zdarzeń inicjujących mózgowy skurcz naczyń było przedmiotem...

Model szczura o niskiej śmiertelności do oceny opóźnionego naczyniowego skurczu mózgu po eksperymentalnym krwotoku podpółczepkowym

Ten film przedstawia metodę generowania szczurzego modelu krwotoku dokomorowego u noworodków. W tej procedurze znieczulonemu szczeniakowi szczura wstrzykuje się hemoglobinę do bocznej komory mózgu. Hemoglobina powoduje stres oksydacyjny i uwalnia hem, symulując krwotok dokomorowy. Wynikające z tego uszkodzenie tkanek mózgowych, napędzane przez reaktywne formy tlenu i cytokiny zapalne, prowadzi do powiększenia komór, co jest częstą konsekwencją krwotoku dokomorowego.

Modelowanie krwotoku śródkomorowego noworodka poprzez dokomorowe wstrzyknięcie hemoglobiny

Źródło: Jantzie, L. L., et. al. Modelowanie encefalopatii wcześniaków za pomocą niedotlenienia prenatalnego z lipopolisacharydem owodniowym u szczurów. J. Vis. Exp. (2015)Ten film demonstruje protokół wywoływania stanów niedotlenieniowo-niedokrwiennych i zapalnych u płodów szczurów poprzez ograniczanie przepływu krwi w macicy i wstrzykiwanie LPS, modelowanie zapalenia nerwów i zaburzonego rozwoju mózgu istotne dla badań nad przedwczesnym porodem.

Wywoływanie stanów niedotlenieniowo-niedokrwiennych i zapalnych w celu modelowania encefalopatii u szczurów w okresie prenatalnym

Encefalopatia wcześniaków obejmuje nieprawidłowości ośrodkowego układu nerwowego związane z uszkodzeniem spowodowanym przedwczesnym porodem. W niniejszym raporcie opisano klinicznie istotny szczurzy model przejściowego ogólnoustrojowego niedotlenienia i niedokrwienia w macicy oraz podawania lipopolisacharydów owodniowych (LPS), który naśladuje zapalenie błon płodowych i związanego z tym wpływu bodźców zakaźnych i niedostatecznej perfuzji łożyska na rozwój OUN.

Modelowanie encefalopatii wcześniaków za pomocą prenatalnej hipoksji-niedokrwienia lipopolisacharydem wewnątrzowodniowym u szczurów

Łagodna hipoperfuzja wewnątrzmaciczna została wywołana przez zwężenie tętnicy z metalowymi mikrocewkami owiniętymi wokół macicy i tętnic jajnikowych u szczurów w 17 dniu embrionalnym. Procedura ta spowodowała hipoperfuzję prenatalną i wewnątrzmaciczne ograniczenie wzrostu.

Szczurzy model łagodnej hipoperfuzji wewnątrzmacicznej ze zwężeniem mikrocewki

Monitorowanie ciśnienia śródczaszkowego w modelach gryzoni nieurazowego krwotoku śródkomorowego nie jest powszechne w obecnej literaturze. W niniejszym artykule demonstrujemy technikę pomiaru ciśnienia śródczaszkowego, średniego ciśnienia tętniczego i ciśnienia perfuzji mózgowej podczas krwotoku śródkomorowego w modelu zwierzęcym szczura.

Monitorowanie ciśnienia śródczaszkowego w nieurazowym modelu gryzoni z krwotokiem dokomorowym

Prezentujemy model krwotoku wewnątrzkomorowego u noworodków na szczurzych szczeniętach, który naśladuje patologię obserwowaną u ludzi.

Wstrząs krwotoczny zabija co roku 1,9 miliona ludzi na całym świecie. Małe zwierzęta są często wykorzystywane jako modele wstrząsu krwotocznego, ale wiążą się z problemami standaryzacji, odtwarzalności i znaczenia klinicznego, co ogranicza ich znaczenie. W artykule opisano opracowanie nowego, klinicznie istotnego modelu wstrząsu krwotocznego u szczurów.

Opracowanie klinicznie istotnego modelu wstrząsu krwotocznego u szczurów

Poznaj modelowanie pokrwaconego wodogłowia przedwczesnego u szczurów poprzez połączenie chorioamnionitis in utero i krwotoku śródkomorowego. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów uszkodzeń mózgu i poszukiwanie nowych terapii.

Modelowanie pokrwaconego wodogłowia przedwczesnego u szczurów

Przeglądaj więcej filmów