Name: Opracowanie mysiego modelu suchego oka z niedoborem wody wodnistej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 21 s
Description: Poznaj metodę tworzenia mysiego modelu suchego oka z niedoborem wody wodnistej poprzez wycięcie gruczołów łzowych. Model ten umożliwia badanie zmian powierzchni oka i patofizjologii zespołu suchego oka.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

To badanie było częściowo wspierane przez Projekty Nauki i Technologii Prowincji Guizhou (QKHJC-ZK[2024]ZD043), Fundusz Naukowy Prowincji Fujian dla Wybitnych Młodych Uczonych (2023J06053 [do S.O]), Chińską Fundację Nauk Przyrodniczych (nr 82101084 [do S.O.] oraz Chińską Radę Stypendialną (CSC, 202306310049 [do Y.W.]).

Samice myszy C57BL/6 (C57) w wieku 7-8 tygodni, zostały użyte w tym badaniu. Wszystkie procedury były zgodne z wytycznymi ARVO dotyczącymi wykorzystywania zwierząt w badaniach okulistycznych i wzrokowych i zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Zwierząt Uniwersytetu Medycznego w Guizhou (zatwierdzenie nr 2305193). W badaniu w lampie szczelinowej nie zaobserwowano zmian na powierzchni oka.
1. Kroki przedoperacyjne
<ol>
	<li>Wysterylizuj narzędzia za pomocą szybkiego sterylizatora: uchwytów na igły, igły do szycia 5-0 z gwintem, okulistycznych nożyczek chirurgicznych i kleszczyków.</li>
	<li>Znieczulić mysz 1,25% Avertin we wstrzyknięciu dootrzewnowym w dawce 0,3 ml/100 g.</li>
	<li>Po zakończeniu znieczulenia umieść mysz w bocznej pozycji odleżynowej i usuń włosy z obszaru operacyjnego. Meloksykam w dawce 20 mg/kg mc. należy podawać dootrzewnowo 30 minut przed operacją, a kolejne dawki co 8 godzin po operacji.</li>
	<li>Zdezynfekuj pole operacyjne za pomocą trzech naprzemiennych aplikacji jodoforu i alkoholu.</li>
	<li>Opracowanie modelu suchego oka
	<ol>
		<li>Umieść mysz w bocznej pozycji odleżynowa. Odsłonięto obszar chirurgiczny pod mikroskopem operacyjnym.</li>
		<li>Potwierdź głębokość znieczulenia za pomocą uszczypnięcia palca u nogi przed wykonaniem nacięcia. Zacisnąć skórę po prawej stronie pyska myszy za pomocą kleszczyków zębatych i wykonać nacięcie w środku linii przecinającej zewnętrzną małżowinę uszną i linię żuchwy do wewnętrznego kącika oka. Odsłoń tkankę mięśniową; ostrożnie usuń ELG znajdujący się na mięśniu.</li>
		<li>Przedłuż nacięcie skóry do wewnętrznego kącika oka, tępo oddziel mięsień i zlokalizuj jasnoczerwony gruczoł pod mięśniem. Odklej i usuń ILG.</li>
		<li>Zszyj nacięcie za pomocą wstępnie wysterylizowanego nylonowego szwu 5-0 z dołączoną igłą za pomocą uchwytu na igłę, okulistycznych nożyczek chirurgicznych i kleszczy.</li>
		<li>Na koniec operacji nałóż maść z ofloksacyną, aby zapobiec infekcji.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Po usunięciu jednostronnych ELG i ILG umieść myszy w środowisku o rytmicznym cyklu 12:12 h światło-ciemność ze swobodnym dostępem do jedzenia i wody. Tworzy to jednostronny model suchego oka, podczas gdy oko przeciwległe z wewnętrznymi i zewnętrznymi gruczołami łzowymi służy jako normalna grupa kontrolna.</li>
</ol>
2. Pomiar produkcji łez
<ol>
	<li>Znieczulić mysz 1,25% Avertin dootrzewnowo w dawce 0,3 ml/100 g.</li>
	<li>Wykonaj pomiar wydzielania łez za pomocą dobrze zapakowanych i komercyjnie wysterylizowanych czerwonych nici fenolowych w znieczuleniu ogólnym.</li>
	<li>Delikatnie pociągnij w dół dolną powiekę, która ma być mierzona. Umieść górną część czerwonej nici fenolowej w wewnętrznej i zewnętrznej jednej trzeciej dolnej powieki, natychmiast uruchamiając timer.</li>
	<li>Wykonuj test na jednym oku na raz przez 15 sekund.</li>
	<li>Po upływie wyznaczonego czasu ostrożnie schuj dolną powiekę i ostrożnie usuń nitkę czerwieni fenolowej w dół.</li>
	<li>Użyj skali znajdującej się na zewnętrznej torbie czerwonej nici fenolowej, aby zmierzyć od góry nici do całej czerwonej części.</li>
	<li>Zastosuj elektroniczny stoper, aby dokładnie zarejestrować czas trwania testu.</li>
</ol>
3. Przygotowanie plastrów tkanek do zamrażania
<ol>
	<li>Wykonaj szybkie zwichnięcie szyjki macicy u myszy po uduszeniu CO2 .</li>
	<li>Użyj nożyczek i kleszczy, aby ostrożnie wydobyć gałki oczne.</li>
	<li>Osadź gałki oczne w związku o optymalnej temperaturze cięcia i użyj zamrożonego mikrotomu, aby uzyskać zamrożone plastry tkanki o grubości 5-7 μm28.</li>
	<li>Przechowywać wszystkie szkiełka w pudełku na próbki w temperaturze pokojowej przez około 30 minut. Następnie przenieś je do zamrażarki o bardzo niskiej temperaturze w temperaturze -80 °C.</li>
</ol>
4. Barwienie hematoksyliną i eozyną (H&E)
<ol>
	<li>Wyjmij zamrożone plastry chusteczek z zamrażarki o bardzo niskiej temperaturze, połóż je płasko w pudełku na chusteczki i wysusz w dygestorium.</li>
	<li>Umyj plastry 1x PBS, przykryj na 5 minut, a następnie wyjmij PBS. Przykryj próbkę 4% paraformaldehydem, upewniając się, że pokrywka jest zamknięta, aby zapobiec parowaniu. Po 15 minutach w temperaturze pokojowej płukać próbki przez 3 x 5 minut w 1x PBS.</li>
	<li>Umieść próbkę w stojaku i zanurz ją w 0,5% barwniku hematoksylinowym na 5 minut.</li>
	<li>Opłucz próbkę w wodzie z kranu przez 5 minut, aby zmyć nadmiar barwnika. Następnie zanurz go w 0,1% alkoholu kwasu solnego na 1-2 s, aby ułatwić różnicowanie.</li>
	<li>Umieść uchwyt próbki w wodzie z kranu na 15 minut, aby usunąć niespecyficzne zabarwienie.</li>
	<li>Spuść nadmiar wody i zanurz próbkę w 0,05% roztworze barwiącym eozynę na 3 minuty.</li>
	<li>Umyj próbkę w wodzie z kranu i zanurz ją kolejno w 75%, 80%, 95% i dwóch rundach 100% alkoholu na 2 minuty każda.</li>
	<li>Zanurz uchwyt próbki w dwóch rundach ksylenu na 2 minuty każdy.</li>
	<li>Umieść uchwyt w dygestoriach do wyschnięcia i zamontuj próbkę za pomocą medium montażowego, unikając uszkodzeń i pęcherzyków.</li>
	<li>Przechowuj wybarwione próbki w pudełku w temperaturze pokojowej i sfotografuj je za pomocą systemu biomikrograficznego.</li>
</ol>
5. Barwienie immunofluorescencyjne
<ol>
	<li>Wyjmij próbkę z zamrażarki, połóż ją płasko w pudełku i wysusz w kapturze.</li>
	<li>Umyj próbkę 1x PBS, przykryj na 5 minut i odessaj nadmiar płynu. Przykryj próbkę 4% paraformaldehydem, dodaj wodę do immunohistochemicznego mokrego pudełka i zamknij pokrywkę, aby zapobiec parowaniu. Pozostaw w temperaturze pokojowej na 15 minut; następnie przepłukać próbkę 3 x 5 min w 1x PBS. 
	UWAGA: Podczas tego procesu należy obchodzić się z próbką ostrożnie.</li>
	<li>Usuń nadmiar PBS z powierzchni próbki i delikatnie przetrzyj pozostałą ciecz wokół sekcji tkanki bibułą filtracyjną. Przykryj powierzchnię próbki roztworem do przepuszczalności komórek (0,2% Triton X-100) i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 20 minut, aby przepuszczalność błony.</li>
	<li>Usunąć roztwór przepuszczalny i przepłukać próbkę 3 x 5 minut 1x PBS.</li>
	<li>Wylej PBS z powierzchni próbki i delikatnie wytrzyj resztki płynu wokół sekcji tkanki bibułą filtracyjną. Przykryj próbkę wstępnie podgrzanym roztworem blokującym (2% BSA). Zamknij pokrywkę, aby zapobiec parowaniu i inkubować w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę.</li>
	<li>Podczas procesu blokowania należy wybrać odpowiednie przeciwciało zgodnie z potrzebami doświadczalnymi, przygotować przeciwciało pierwszorzędowe z rozcieńczalnikiem przeciwciał immunofluorescencyjnych (1% BSA) zgodnie z zalecanym stosunkiem i odwirować przygotowane przeciwciało pierwszorzędowe w wirówce o temperaturze 4 °C przy 2 000 × g, 10 min. 
	UWAGA: Wszystkie powyższe są eksploatowane na lodzie lub w niskich temperaturach. Zaleca się stosowanie około 120 μl przeciwciał pierwszorzędowych na próbkę.</li>
	<li>Wyrzuć lub odlej przeciwciało pierwszorzędowe. Przemyć próbkę 3 x 10 min 1x buforem PBS. Po wylaniu PBS przepłukać próbkę świeżym 1x PBS. Upewnij się, że PBS zakrywa szkiełko podczas pierwszego płukania.</li>
	<li>Podczas płukania przeciwciała pierwszorzędowego należy wybrać odpowiednie przeciwciało drugorzędowe na podstawie jego kategorii. Rozcieńczyć 1% rozcieńczalnikiem BSA w stosunku 1:300. Odwirowywać przygotowane przeciwciało w wirówce w temperaturze 4 °C, 2 000 × g przez 10 minut. Cały proces wykonaj na lodzie lub w niskiej temperaturze w ciemności.</li>
	<li>Przepłukać szkiełko PBS, delikatnie przetrzeć płyn wokół próbki bibułą filtracyjną, użyć pompy ssącej, aby wchłonąć pozostałą ciecz i szybko dodać przygotowane przeciwciało wtórne do próbki. Przykryj i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Upewnij się, że wszystkie procesy są przeprowadzane w ciemności.</li>
	<li>Wyrzuć przeciwciało wtórne, przepłucz 1x buforem PBS i umyj 3 x 10 min. Upewnij się, że PBS całkowicie zakrywa szkiełko. Z próbką należy obchodzić się delikatnie, aby uniknąć jej wypłukania.</li>
	<li>Wylej 1x PBS, zetrzyj nadmiar płynu bibułą filtracyjną, użyj pompy ssącej, aby usunąć pozostały płyn i zamontuj próbkę za pomocą podłoża montażowego zawierającego DAPI. Umieść pokrywę na płycie przesuwnej i przechowuj ją w zamrażarce o temperaturze 4°C, chroniąc przed światłem folią aluminiową. Uważaj, aby nie uszkodzić próbki i nie tworzyć pęcherzyków powietrza.</li>
	<li>Sfotografuj barwioną próbkę za pomocą laserowego mikroskopu konfokalnego lub pionowego mikroskopu fluorescencyjnego. Upewnij się, że obrazowanie zostało wykonane w ciągu tygodnia, aby zapobiec wygaszaniu fluorescencji.</li>
</ol>
6. Ekstrakcja mRNA rogówki
<ol>
	<li>Wykonaj szybkie zwichnięcie szyjki macicy u myszy po uduszeniu CO2 . Następnie użyj nożyczek i kleszczy, aby ostrożnie wydobyć gałki oczne, umyj je 3x w 1x PBS i umieść gałkę oczną na szalce Petriego zawierającej 1x PBS.</li>
	<li>Pod mikroskopem użyj nożyczek i kleszczyków, aby odciąć gałkę oczną od tylnego bieguna gałki ocznej, aby oddzielić soczewkę. Oczyść nadmiar twardówki i tęczówki, ale pozostaw białą twardówkę o średnicy 0,5 mm i całą rogówkę. Wyodrębnij mRNA z gałek ocznych myszy za pomocą zestawu do ekstrakcji RNA zgodnie z instrukcją.</li>
</ol>
7. PCR z odwrotną transkrypcją
<ol>
	<li>Przed wykonaniem odwrotnej transkrypcji należy określić stężenie RNA za pomocą spektrofotometru UV.</li>
	<li>Weź 1 mg RNA na podstawie zmierzonego stężenia RNA. Przeprowadź reakcję odwrotnej transkrypcji za pomocą zestawu do odwrotnej transkrypcji.</li>
	<li>Po dodaniu składników reakcyjnych dodaj mieszaninę do probówki wirówkowej o pojemności 200 μl, wymieszaj delikatnie wstrząsając, odwiruj z niską prędkością, aby uniknąć pęcherzyków powietrza, i natychmiast włóż ją do normalnego termocyklera w celu reakcji.</li>
	<li>Analizuj cDNA z procesu odwrotnej transkrypcji bezpośrednio za pomocą PCR w czasie rzeczywistym lub przechowuj je w zamrażarce o temperaturze -20 °C.</li>
</ol>
8. Ilościowe reakcje PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR)
<ol>
	<li>Skonfiguruj system reakcyjny o pojemności 10 μl zgodnie z instrukcjami dołączonymi do zestawu do PCR w czasie rzeczywistym29: 3,6 μl wody poddanej działaniu DEPC, starter sensujący 0,2 μM, starter antysensowny 0,2 μM, 1 μl cDNA, 5 μl mieszanki. Szczegółowe informacje na temat starterów znajdują się w Tabeli 1.</li>
	<li>W zależności od grupy eksperymentów, dodać układ reakcyjny do 96-dołkowej płytki lub ośmiopaskowej probówki przeznaczonej do qRT-PCR. Po skonfigurowaniu systemu qRT-PCR upewnij się, że mieszanina jest dobrze wymieszana i użyj wirówki stołowej do krótkiego wirowania, aby strząsnąć płyn ze ścianki probówki. Zawsze sprawdzaj probówkę pod kątem pęcherzyków powietrza przed qRT-PCR.</li>
	<li>Przeprowadzić reakcję w trzech egzemplarzach i obliczyć średnią Ct (próg cyklu).</li>
</ol>

<ol><li>Stapleton, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tfos+dews+ii+epidemiology+report%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Tfos dews ii epidemiology report.</a> Ocul Surf. 15 (3), 334-365 (2017).</li>
<li>Galor, A., Levitt, R. C., Felix, E. R., Martin, E. R., Sarantopoulos, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+ocular+pain%3A+An+important+yet+underevaluated+feature+of+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Neuropathic ocular pain: An important yet underevaluated feature of dry eye.</a> Eye (Lond). 29 (3), 301-312 (2015).</li>
<li>Craig, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tfos+dews+ii+definition+and+classification+report%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Tfos dews ii definition and classification report.</a> Ocul Surf. 15 (3), 276-283 (2017).</li>
<li>Hao, R., Ding, Y., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+corneal+epithelial+dendritic+cell+in+Sjogren%27s+syndrome+dry+eye+and+clinical+correlations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Alterations in corneal epithelial dendritic cell in Sjogren's syndrome dry eye and clinical correlations.</a> Sci Rep. 12 (1), 11167(2022).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+therapeutic+strategy+based+on+oxidant-antioxidant+balance+for+fuchs+endothelial+corneal+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Evolution of therapeutic strategy based on oxidant-antioxidant balance for fuchs endothelial corneal dystrophy.</a> Ocul Surf. 34, 247-261 (2024).</li>
<li>Sekhon, A. S., He, B., Iovieno, A., Yeung, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+corneal+endothelial+cell+loss+in+dry+eye+disease+and+other+inflammatory+ocular+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Immunol+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of corneal endothelial cell loss in dry eye disease and other inflammatory ocular disorders.</a> Ocul Immunol Inflamm. 31 (1), 21-31 (2023).</li>
<li>Zuo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Akr1c1+protects+corneal+epithelial+cells+against+oxidative+stress-mediated+ferroptosis+in+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Akr1c1 protects corneal epithelial cells against oxidative stress-mediated ferroptosis in dry eye.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 63 (10), 3(2022).</li>
<li>Akdemir, M. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+pseudoexfoliation+and+pseudoexfoliation+induced+dry+eye+on+central+corneal+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of pseudoexfoliation and pseudoexfoliation induced dry eye on central corneal thickness.</a> Curr Eye Res. 41 (3), 305-310 (2016).</li>
<li>Delcroix, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+epithelial+cells+shape+immune+responses+through+the+modulation+of+inflammasomes+and+lipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland epithelial cells shape immune responses through the modulation of inflammasomes and lipid metabolism.</a> Int J Mol Sci. 24 (5), 4309(2023).</li>
<li>Portal, C., Gouyer, V., Gottrand, F., Desseyn, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+mucins+in+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Ocular mucins in dry eye disease.</a> Exp Eye Res. 186, 107724(2019).</li>
<li>Doctor, M. B., Basu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+insufficiency+in+aqueous+deficiency+dry+eye+disease%3A+Recent+advances+in+pathogenesis%2C+diagnosis%2C+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland insufficiency in aqueous deficiency dry eye disease: Recent advances in pathogenesis, diagnosis, and treatment.</a> Semin Ophthalmol. 37 (7-8), 801-812 (2022).</li>
<li>Rocha, E. M., Alves, M., Rios, J. D., Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lacrimal+gland%3A+Changes+in+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">The aging lacrimal gland: Changes in structure and function.</a> Ocul Surf. 6 (4), 162-174 (2008).</li>
<li>He, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+microenvironment+changes+after+obstruction+of+lacrimal+gland+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland microenvironment changes after obstruction of lacrimal gland ducts.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 63 (3), 15(2022).</li>
<li>Zoukhri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+involved+in+injury+and+repair+of+the+murine+lacrimal+gland%3A+Role+of+programmed+cell+death+and+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Mechanisms involved in injury and repair of the murine lacrimal gland: Role of programmed cell death and mesenchymal stem cells.</a> Ocul Surf. 8 (2), 60-69 (2010).</li>
<li>Li, W., Hayashida, Y., Chen, Y. T., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche+regulation+of+corneal+epithelial+stem+cells+at+the+limbus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Niche regulation of corneal epithelial stem cells at the limbus.</a> Cell Res. 17 (1), 26-36 (2007).</li>
<li>Ou, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ectodysplasin+a+on+the+ocular+surface+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of ectodysplasin a on the ocular surface homeostasis.</a> Int J Mol Sci. 23 (24), 12(2022).</li>
<li>Rolando, M., Zierhut, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+surface+and+tear+film+and+their+dysfunction+in+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The ocular surface and tear film and their dysfunction in dry eye disease.</a> Surv Ophthalmol. 45 (Suppl 2), S203-S210 (2001).</li>
<li>Johnson, M. E., Murphy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+tear+film+and+ocular+surface+from+dry+eye+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in the tear film and ocular surface from dry eye syndrome.</a> Prog Retin Eye Res. 23 (4), 449-474 (2004).</li>
<li>Masoudi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+of+human+tear+film%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Biochemistry of human tear film: A review.</a> Exp Eye Res. 220, 109101(2022).</li>
<li>Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+regulation+of+lacrimal+gland+secretory+processes%3A+Relevance+in+dry+eye+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Neural regulation of lacrimal gland secretory processes: Relevance in dry eye diseases.</a> Prog Retin Eye Res. 28 (3), 155-177 (2009).</li>
<li>Garg, A., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+development%3A+From+signaling+interactions+to+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland development: From signaling interactions to regenerative medicine.</a> Dev Dyn. 246 (12), 970-980 (2017).</li>
<li>Shinomiya, K., Ueta, M., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+dry+eye+mouse+model+produced+by+exorbital+and+intraorbital+lacrimal+gland+excision%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A new dry eye mouse model produced by exorbital and intraorbital lacrimal gland excision.</a> Sci Rep. 8 (1), 1483(2018).</li>
<li>Viau, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+ocular+surface+and+lacrimal+gland+changes+in+a+new+scopolamine-induced+dry+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Time course of ocular surface and lacrimal gland changes in a new scopolamine-induced dry eye model.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 246 (6), 857-867 (2008).</li>
<li>Burgalassi, S., Panichi, L., Chetoni, P., Saettone, M. F., Boldrini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+simple+dry+eye+model+in+the+albino+rabbit+and+evaluation+of+some+tear+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a simple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tear substitutes.</a> Ophthalmic Res. 31 (3), 229-235 (1999).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+dry+eye+model+induced+by+topical+administration+of+benzalkonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">A mouse dry eye model induced by topical administration of benzalkonium chloride.</a> Mol Vis. 17, 257-264 (2011).</li>
<li>Honkanen, R. A., Huang, L., Rigas, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+aqueous-deficient+dry+eye+disease+induced+by+concanavalin+a+injection+into+the+lacrimal+glands%3A+Application+to+drug+efficacy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of aqueous-deficient dry eye disease induced by concanavalin a injection into the lacrimal glands: Application to drug efficacy studies.</a> J Vis Exp. (155), e59631(2020).</li>
<li>Barabino, S., Dana, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+dry+eye%3A+A+critical+assessment+of+opportunities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal models of dry eye: A critical assessment of opportunities and limitations.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (6), 1641-1646 (2004).</li>
<li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+su6668+pure+nanoparticle-based+eyedrops%3A+Toward+its+high+drug+accumulation+and+long-time+treatment+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">A su6668 pure nanoparticle-based eyedrops: Toward its high drug accumulation and long-time treatment for corneal neovascularization.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 14(2024).</li>
<li>Zhu, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synergistic+therapy+with+antioxidant+and+anti-vegf%3A+Toward+its+safe+and+effective+elimination+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">A synergistic therapy with antioxidant and anti-vegf: Toward its safe and effective elimination for corneal neovascularization.</a> Adv Healthc Mater. 13 (5), 10(2024).</li>
<li>Mao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+p38+mapk+signaling+pathway+ameliorates+tissue-engineered+corneal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Downregulation of p38 mapk signaling pathway ameliorates tissue-engineered corneal epithelium.</a> Tissue Eng Part A. 28 (23-24), 977-989 (2022).</li>
<li>Mcnamara, N. A., Gallup, M., Porco, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+pax6+as+a+biomarker+to+detect+early+loss+of+ocular+phenotype+in+human+patients+with+sjogren%27s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Establishing pax6 as a biomarker to detect early loss of ocular phenotype in human patients with sjogren's syndrome.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (11), 7079-7084 (2014).</li>
<li>Thacker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benzalkonium+chloride-induced+dry+eye+disease+animal+models%3A+Current+understanding+and+potential+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Benzalkonium chloride-induced dry eye disease animal models: Current understanding and potential for translational research.</a> Indian J Ophthalmol. 71 (4), 1256-1262 (2023).</li>
<li>Singh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+model+for+aqueous+deficient+dry+eye+secondary+to+periglandular+cicatrizing+conjunctivitis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Developing a model for aqueous deficient dry eye secondary to periglandular cicatrizing conjunctivitis.</a> Exp Eye Res. 244, 109949(2024).</li>
<li>Singh, S., Sharma, S., Basu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+models+of+dry+eye+disease%3A+Current+understanding+and+unmet+needs+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit models of dry eye disease: Current understanding and unmet needs for translational research.</a> Exp Eye Res. 206, 108538(2021).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Udało nam się ustalić mysi model zespołu suchego oka z niedoborem wody wodnistej, chirurgicznie wycinając zarówno ELG, jak i ILG, mając na celu zbadanie zmian na powierzchni oka w warunkach zespołu suchego oka z niedoborem wody wodnistej. Skrupulatnie udokumentowaliśmy zmiany morfologiczne i fizjologiczne zaobserwowane w tym mysim modelu suchego oka wynikające z podwójnego wycięcia ELG i ILG. Dwa tygodnie po modelowaniu obserwowaliśmy i pobraliśmy próbki ustalonego mysiego modelu suchego oka. 
<p class="jove_content"...

Suche oko stało się najczęstszą chorobą powierzchni oka na świecie, szacuje się, że cierpi na nią od 5% do 50% populacji1. Suchość i dyskomfort spowodowany suchym okiem, jeśli jest uporczywy, może prowadzić do zaburzeń widzenia i niestabilnego filmu łzowego, co z kolei prowadzi do uszkodzenia powierzchni oka2. Niektórzy pacjenci z zespołem suchego oka mogą nawet cierpieć na przewlekły ból2.
Zgodnie z konsensusem TFOS DEWS II 2017 Dry Eye, suche oko to złożony stan, który obejmuje wiele czynników i charakteryzuje się zaburzeniem naturalnej równowagi filmu łzowego. Stanowi temu towarzyszy szereg objawów ocznych, niestabilność filmu łzowego, zwiększona osmolarność łez, stan zapalny i uszkodzenie powierzchni oka oraz ból neuropatyczny, które są kluczowe dla zrozumienia postępu choroby3. W tej pętli sprzężenia zwrotnego suche oko może powodować uszkodzenie komórek nabłonka rogówki, zmniejszać grubość zrębu rogówki i gęstość komórek śródbłonka, wyzwalać aktywację i agregację komórek odpornościowych na powierzchni rogówki, zmniejszać wydzielanie mucyny przez komórki kubkowe i powodować dysfunkcję immunologiczną gruczołu łzowego, co jeszcze bardziej pogarsza stan4,5,6,7,8,9,10. Konsensus wyróżnia trzy podstawowe formy zespołu suchego oka: suche oko z niedoborem wody wodnistej, suche oko wyparne oraz kombinację obu, znaną jako mieszane suche oko3. Suche oko z niedoborem wody wodnistej jest związane ze zmianami strukturalnymi i funkcjonalnymi w gruczołach łzowych11. Zmiany te obejmują zanik zrazikowaty, niedrożność przewodów, która blokuje przepływ łez, naciek limfocytów wskazujący na odpowiedź immunologiczną oraz zmniejszenie wydzielania białek, które są niezbędne do utrzymania zdrowia i stabilności filmu łzowego12,13.
Gruczoł łzowy to rurkowaty gruczoł zewnątrzwydzielniczy, który jest odpowiedzialny za produkcję składników wodnych w filmie łzowym13,14, w tym woda, elektrolity i białka, oraz przyczynia się do utrzymania stabilności mikrośrodowiska powierzchni oka15,16. Zdrowie i przejrzystość widzenia oka zależą od obecności filmu łzowego, który tworzy krytyczną warstwę optyczną na powierzchni rogówki, zapewniając gładkie nawilżenie rogówki i spojówki17. Film łzowy wspomaga aktywność metaboliczną komórek powierzchni oka i działa jak środek czyszczący, skutecznie usuwając zanieczyszczenia i potencjalne substancje drażniące z powierzchni oka, utrzymując w ten sposób równowagę fizjologiczną i komfort oka18,19.
U gryzoni, takich jak szczury i myszy, gruczoły łzowe składają się z dwóch płatów: wewnętrznego i zewnętrznego płata oczodołu. Zewnętrzny płat oczodołu znajduje się poniżej ucha, a jego funkcjonalna część jest połączona z okiem przedłużonym przewodem. Przewód ten łączy się z płatem gruczołu łzowego na oczodole przed dotarciem do oka i bierze udział w produkcji łez20. Wewnętrzny płat oczodołu, znany również jako gruczoł łzowy wewnątrzoczodołowy, znajduje się pod spojówką opuszkową zewnętrznego kąta. ILG jest mniejszy niż ELG. Upośledzona funkcja gruczołów łzowych może prowadzić do niedoboru wodnistego suchego oka, który, jeśli nie jest leczony, może przekształcić się w owrzodzenia rogówki i utratę wzroku21.
Modele zwierzęce suchego oka z niedoborem wody wodnistej można podzielić na trzy metody interwencji: modele indukcji chirurgicznej, modele indukowane lekiem i modele transgeniczne. Model indukcji chirurgicznej polega na usunięciu ELG. Jednak ten model nie jest stabilny ze względu na obecność ILG22. Ogólnoustrojowe wstrzyknięcie blokera receptora cholinergicznego skopolaminy jest powszechne w modelu indukowanym lekiem23. Miejscowe stosowanie atropiny24 i chlorku benzalkoniowego25 mogą również zmniejszać wydzielanie mucyny i łez. Concanavalin-A może być wstrzykiwany miejscowo do gruczołów łzowych królika w celu wywołania immunologicznego zapalenia gruczołu łzowego, tworząc w ten sposób model suchego oka z niedoborem wody wodnistej26. Dodatkowo, zwierzęta transgeniczne, takie jak NOD, Aly/aly, NFS/sld, IQI/Jic, Id3 KO i inne szczepy myszy, mogą naśladować objawy i fenotypy pierwotnego zespołu Sjögrena27, aby odtworzyć suche oko z niedoborem wody wodnistej.
W tym badaniu, główny projekt eksperymentalny obejmował zabieg chirurgiczny mający na celu bezbolesne i precyzyjne usunięcie ELG i ILG myszy. Te gruczoły łzowe są niezbędne do utrzymania nawilżenia i nawilżenia oczu; Ich usunięcie powoduje znaczne zmniejszenie wydzielania łez, naśladując suche oko z niedoborem wody wodnistej u myszy. Podejście to pozwala na obserwację i analizę zachowania myszy, reakcji fizjologicznych i zmian w tkance oka w stanie suchego oka, zapewniając kluczową podstawę eksperymentalną do badań patologicznych i oceny opcji leczenia zespołu suchego oka.

<table><tbody><tr><td>Strzykawka 10 ml</td><td>Zhejiang KDL Medical Devices Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 Igła do szwów</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Absolutny etanol</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, osioł anty myszy IgG</td><td>Invitrogen</td><td>811493</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594, osioł anty królik IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A21207</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało anty-keratynowe 12 EPR17882</td><td>Abcam</td><td>ab185627</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało anty-PAX6</td><td>Abcam</td><td>ab5790</td><td></td></tr><tr><td>Autoklaw</td><td>Hirayama. Japonia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mysz C57BL/6</td><td>Shanghai Slack Laboratory Animal Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wirować w temperaturze pokojowej</td><td>Eppendorf. Niemcy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>Shanghai Bioengineering Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wagi elektroniczne</td><td>Shanghai Auhaus Biotech Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>System mikrografii kontrastowej z odwróconą fazą fluorescencji</td><td>TE-2000U, Nikon. Japonia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zamroź kasetę</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zamroź ostrze do krojenia</td><td>Xiamen Taijing Biotechnology Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H-1200 z podłożem montażowym DAPI</td><td>Xiamen Juin Biotechnology Co., Ltd. Chiny</td><td></td> medium <td>montażowe zawierające DAPI</td></tr><tr><td>H-5000 Tablet</td><td>Mountant Vector. USA</td><td></td><td>medium</td></tr><tr><td>montażowe HCl</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zestaw barwników Hematoksylina-eozyna</td><td>Auragene. USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jod</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało Ki-67</td><td>Abcam</td><td>ab16667</td><td></td></tr><tr><td>ciekły azot</td><td>Xiamen Yidong Gas Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopijny uchwyt igły</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopijne kleszcze zębate</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopijny kleszcze bezzębne</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Model 3050 mrożona krajalnica</td><td>Leica, Deerfield, IL. USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OCT</td><td>Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maść ofloksacynowa Okulistyczne</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>paski testowe fluoresceiny sodu</td><td>Tianjin Jingming New Technology Development Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proszek paraformaldehydu</td><td>Sigma. USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fenol czerwona bawełniana nić</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szybki sterylizator sterylizator</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rekombinowane ludzkie białko SPRR1b&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab167925</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka stołowa z chłodzeniem</td><td>Eppendorf. Niemcy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Uchwyty</td><td></td><td></td><td></td>do slajdów</tr><tr><td>Lampa szczelinowa</td><td>Topcon. Japonia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pudełko na próbki</td><td>Lambolide (Fuzhou) Biotechnology Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alkohol tert-amylowy</td><td>Szanghaj. Macklin Biochemical, Chiny</td><td>A800283</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Tribromoetanolu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma. USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zamrażarka ultraniskotemperaturowa</td><td>Thermo Fisher Scientific. USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pionowy mikrograf fluorescencyjny</td><td>Leica DM2500. USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pionowy normalny system biomikrograficzny</td><td>Eclipse 50i, Nikon. Japonia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop chirurgiczny Zeiss</td><td>VISU150, Carl ZEISS. Niemcy</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

opracowanie mysiego modelu suchego oka z niedoborem wody wodnistej

Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

Suche oko to powszechna dolegliwość dotykająca 5%-50% światowej populacji. Badania na modelach zwierzęcych odgrywają kluczową rolę w zrozumieniu mechanizmów leżących u jego podstaw. Dlatego opracowaliśmy mysi model zespołu suchego oka, chirurgicznie usuwając zarówno zewnątrzoczodołowe gruczoły łzowe (ELG), jak i wewnątrzoczodołowe gruczoły łzowe (ILG) w celu zbadania patologii powierzchni oka w kontekście suchego oka z niedoborem wodnistości. Dwa tygodnie po operacji myszy wykazywały poważne objawy suchego oka, w tym zmniejszone wydzielanie łez, nieregularności nabłonka rogówki, dodatnie barwienie sodu fluoresceiną i neowaskularyzację. Badanie histologiczne za pomocą barwienia hematoksyliną i eozyną wykazało naciek komórek zapalnych i dysplazję nabłonka rogówki. Barwienie immunofluorescencyjne i ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją wykazały zmniejszoną ekspresję prawidłowych biomarkerów nabłonka rogówki K12 i Pax6 oraz zwiększoną ekspresję Sprr1b w nabłonku rogówki. Te objawy oczne wskazywały na nieprawidłowe różnicowanie nabłonka rogówki. Co więcej, barwienie immunofluorescencyjne Ki67 ujawniło rosnącą proliferację komórek. Podsumowując, model wycinania ELG i ILG okazał się odpowiedni do badania zmian na powierzchni oka i wyjaśniania mechanizmów leżących u podstaw niedoboru wody wodnistej, takiego jak suche oko.

Aby zbadać skutki i mechanizmy leżące u podłoża zespołu suchego oka z niedoborem łez w obrębie powierzchni oka, stworzono mysi model zespołu suchego oka z niedoborem łez poprzez chirurgiczne usunięcie zarówno ELG, jak i ILG (Rycina 1A). Po 2-tygodniowym okresie od resekcji gruczołów łzowych, wydzielanie łez u myszy z zespołem suchego oka (po usunięciu gruczołów łzowych) uległo znacznemu zmniejszeniu w porównaniu z grupą kontrolną (Rycina 1B,C). ...

Tutaj prezentujemy metodę tworzenia mysiego modelu suchego oka z niedoborem wody wodnej poprzez wycięcie gruczołów łzowych zewnątrzoczodołowych i podoczodołowych oraz ocenę zmian na powierzchni oka w suchym oku z niedoborem wodnistości.

Opracowanie mysiego modelu suchego oka z niedoborem wody wodnistej

Dry eye disease is a prevalent condition affecting 5%-50% of the global population. Animal model investigations play a crucial role in understanding its ...

Naszym celem jest stworzenie wiarygodnego modelu zespołu suchego oka. Udało nam się odtworzyć stan patologiczny suchego oka z niedoborem wody wodnistej, usuwając ELG i ILG z oczu. Ze względu na głęboką lokalizację anatomiczną ILG, łączne wycięcie ELG i ILG jest trudniejsze i bardziej inwazyjne.Jest również w stanie powodować krwawienie podczas operacji, co stawia wysokie wymagania wobec naszej zdolności operacyjnej. Nasz model z powodzeniem wywołał znaczny niedobór cieczy wodnistej, suche oko przy minimalnym uszkodzeniu zwierzęcia i znacznym uproszczeniu zabiegu chirurgicznego. Skonstruowany model mysi jest bardzo podobny do ciężkiego zespołu suchego oka, takiego jak zespół Sjögrena i zespół Stevensa-Johnsona, co stanowi silne wsparcie dla powiązanych badań.Metoda ta pozwala uniknąć systematycznych efektów iniekcji, rozwiązuje problem słabej trwałości miejscowego efektu iniekcji, przezwycięża niedociągnięcia modelu suchego oka i upraszcza proces eksperymentalny, eliminując potrzebę stosowania dedykowanego środowiska dla zwierząt. Na początek umieść znieczuloną mysz w bocznej pozycji odleżynowej i naświetl obszar chirurgiczny pod mikroskopem operacyjnym. Za pomocą kleszczyków zębaty

establishment-of-a-mouse-model-of-aqueous-deficiency-dry-eye

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film demonstruje technikę wywoływania przewlekłej eksperymentalnej autoimmunologicznej choroby suchego oka u szczurów. Po wstrzyknięciu szczurowi emulsji antygenowo-adiuwantowej zawierającej autoantygeny i obce antygeny w określonych odstępach czasu, u uodpornionego szczura indukuje się przewlekłe zapalenie oka poprzez wstrzyknięcie tych samych antygenów do tkanek powierzchni oka.

Technika wywoływania przewlekłego eksperymentalnego autoimmunologicznego zespołu suchego oka u szczurów

Bez użycia znieczulenia wstrzyknąć podskórnie emulsję u podstawy ogonów szczura. Następnie, w dniu 14 w podobny sposób, wstrzyknij 200 mikrolitrów tego samego antygenu i niekompletnego adiuwantu Freunda. Tego samego dnia wstrzyknąć dootrzewnowo 300 nanogramów toksyny krztuścowej w 100 mikrolitrach PBS.

Ten film demonstruje metodę oceny gładkości rogówki i stabilności filmu łzowego w autoimmunologicznym modelu szczura. Podkreśla wpływ dysfunkcji gruczołów na stabilność filmu łzowego, co ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia choroby suchego oka.

Ocena gładkości rogówki i łez w autoimmunologicznym modelu szczurzym z suchym okiem

Ten raport opisuje metodę wywoływania przewlekłego eksperymentalnego autoimmunologicznego suchego oka u szczurów Lewisa poprzez immunizację emulsją ekstraktu z gruczołu łzowego szczura, albuminy jaja kurzego i kompletnego adiuwantu Freunda, a następnie wstrzyknięcie ekstraktu z gruczołu łzowego i albuminy jaja kurzego do otworu podspojówkowego i gruczołów łzowych sześć tygodni później.

Przewlekły autoimmunologiczny model szczura z suchym okiem ze wzrostem liczby efektorowych limfocytów T pamięci w tkance gałki ocznej

Ten artykuł opisuje rozwój metody wywoływania ostrej lub przewlekłej choroby suchego oka u królików poprzez wstrzykiwanie konkanawaliny A do wszystkich części układu gruczołu łzowego oczodołu. Ta metoda, lepsza od już opisanych, generuje powtarzalny, stabilny model suchego oka, odpowiedni do badania środków farmakologicznych.

Króliczy model zespołu suchego oka z niedoborem wody wywołanej wstrzyknięciem konkanawaliny A do gruczołów łzowych: zastosowanie do badań skuteczności leków

Przedstawiono nowatorskie podejście do wywoływania przewlekłej choroby suchego oka u królików poprzez chirurgiczne usunięcie wszystkich gruczołów łzowych oczodołu. Ta metoda, odmienna od wcześniej opisanych, daje stabilny, powtarzalny model suchego oka z niedoborem wody wodnistej, dobrze nadający się do badania fizjologii i patofizjologii łez oraz terapii okulistycznej.

Opracowanie modelu ciężkiego zespołu suchego oka za pomocą całkowitej dacryoadenektomii u królików

Tutaj tworzymy szczurzy model dysfunkcji gruczołów łzowych, aby zapewnić podstawę do badania suchego oka z niedoborem wody wodnistej.

Model suchego oka szczura z dysfunkcją gruczołów łzowych wywołaną przez skopolaminę

Rogówka jest wyjątkowa ze względu na brak tkanek naczyniowych. Niemniej jednak, silne czynniki angiogenne mogą indukować intensywny wzrost i przeżywalność naczyń krwionośnych w rogówce. W związku z tym rogówka może stanowić cenne narzędzie w badaniach nad angiogenezą. Niniejszy protokół demonstruje, jak wykonać model kieszonkowy w rogówce myszy oraz jak ocenić indukowaną przez czynniki angiogenne angiogenezę z wykorzystaniem tego modelu.

Myszowy model testu kieszonki rogówkowej do badań angiogenezy

Zdolność do modelowania infekcji dróg moczowych (ZUM) jest kluczowa, aby móc zrozumieć patogenezę bakterii i zapoczątkować rozwój nowych terapii. Celem tej pracy jest zademonstrowanie mysich modeli eksperymentalnego ZUM i ZUM związanego z cewnikiem, które podsumowują i przewidują wyniki obserwowane u ludzi.

Ustalenie i charakterystyka UTI i CAUTI w modelu mysim

Poznaj metodę tworzenia mysiego modelu suchego oka z niedoborem wody wodnistej poprzez wycięcie gruczołów łzowych. Model ten umożliwia badanie zmian powierzchni oka i patofizjologii zespołu suchego oka.

Opracowanie mysiego modelu suchego oka z niedoborem wody wodnistej

Przeglądaj więcej filmów