Name: Trójwymiarowe obrazowanie tkanek aorty w miażdżycy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Poznaj zaawansowane techniki obrazowania 3D tkanek aorty w miażdżycy u myszy. Metoda ta umożliwia wizualizację zmian strukturalnych i interakcji nerwowo-naczyniowych w chorobach sercowo-naczyniowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez Niemiecką Fundację Badawczą (DFG) SFB1123/Z1, Niemieckie Centrum Badań Sercowo-Naczyniowych (DZHK) DZHK 81X2600282 oraz grant Fundacji Corona (S199/10087/2022) dla SKM; oraz ERA-CVD (PLAQUEFIGHT) 01KL1808 oraz grant rządowy dla AJRH w Easemedcontrol R&D GmbH and Co. KG.

Optimized Tissue-Clearing Protocols for 3D Imaging of the Murine Aorta 

<ol><li>Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+landscape+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The changing landscape of atherosclerosis.</a> Nature. 592 (7855), 524-533 (2021).</li>
<li>Mohanta, S., Yin, C., Weber, C., Hu, D., Habenicht, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aorta+atherosclerosis+lesion+analysis+in+hyperlipidemic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Aorta atherosclerosis lesion analysis in hyperlipidemic mice.</a> Bio Protoc. 6 (11), e1833(2016).</li>
<li>Yin, C., Mohanta, S. K., Srikakulapu, P., Weber, C., Habenicht, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artery+tertiary+lymphoid+organs%3A+Powerhouses+of+atherosclerosis+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Artery tertiary lymphoid organs: Powerhouses of atherosclerosis immunity.</a> Front Immunol. 7, 387(2016).</li>
<li>Mohanta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artery+tertiary+lymphoid+organs+contribute+to+innate+and+adaptive+immune+responses+in+advanced+mouse+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Artery tertiary lymphoid organs contribute to innate and adaptive immune responses in advanced mouse atherosclerosis.</a> Circ Res. 114 (11), 1772-1787 (2014).</li>
<li>Carmeliet, P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+mechanisms+of+nerve+and+blood+vessel+wiring%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Common mechanisms of nerve and blood vessel wiring.</a> Nature. 436 (7048), 193-200 (2005).</li>
<li>Mohanta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroimmune+cardiovascular+interfaces+control+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuroimmune cardiovascular interfaces control atherosclerosis.</a> Nature. 605 (7908), 152-159 (2022).</li>
<li>Mohanta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+brain+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular brain circuits.</a> Circ Res. 132 (11), 1546-1565 (2023).</li>
<li>Hu, D., Yin, C., Luo, S., Habenicht, A. J. R., Mohanta, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+contribute+to+atherosclerosis+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells contribute to atherosclerosis immunity.</a> Front Immunol. 10, 1101(2019).</li>
<li>Newland, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type-2+innate+lymphoid+cells+control+the+development+of+atherosclerosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Type-2 innate lymphoid cells control the development of atherosclerosis in mice.</a> Nat Commun. 8, 15781(2017).</li>
<li>Grabner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphotoxin+beta+receptor+signaling+promotes+tertiary+lymphoid+organogenesis+in+the+aorta+adventitia+of+aged+Apoe-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Lymphotoxin beta receptor signaling promotes tertiary lymphoid organogenesis in the aorta adventitia of aged Apoe-/- mice.</a> J Exp Med. 206 (1), 233-248 (2009).</li>
<li>Mai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+cellular+mapping+in+mouse+using+standard+igg+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Whole-body cellular mapping in mouse using standard igg antibodies.</a> Nat Biotechnol. 42 (4), 617-627 (2024).</li>
<li>Molbay, M., Kolabas, Z. I., Todorov, M. I., Ohn, T. L., Erturk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guidebook+for+disco+tissue+clearing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Syst+Biol%22%5BJournal%5D)">A guidebook for disco tissue clearing.</a> Mol Syst Biol. 17 (3), e9807(2021).</li>
<li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+imaging+with+single-cell+resolution+by+tissue+decolorization%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Whole-body imaging with single-cell resolution by tissue decolorization.</a> Cell. 159 (4), 911-924 (2014).</li>
<li>Tian, T., Yang, Z., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+technique%3A+Recent+progress+and+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing technique: Recent progress and biomedical applications.</a> J Anat. 238 (2), 489-507 (2021).</li>
<li>Adolfs, Y., Raj, D. D. A., Brignani, S., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+tissue+clearing+and+3d+analysis+of+dopamine+neurons+in+the+developing+mouse+midbrain%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for tissue clearing and 3d analysis of dopamine neurons in the developing mouse midbrain.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100669(2021).</li>
<li>Power, R. M., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+light-sheet+fluorescence+microscopy+for+multiscale+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A guide to light-sheet fluorescence microscopy for multiscale imaging.</a> Nat Methods. 14 (4), 360-373 (2017).</li>
<li>Sun, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+approaches+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing approaches in atherosclerosis.</a> Methods Mol Biol. 2419, 747-763 (2022).</li>
<li>Chistiakov, D. A., Ashwell, K. W., Orekhov, A. N., Bobryshev, Y. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+the+arterial+wall+and+its+modification+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Auton+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Innervation of the arterial wall and its modification in atherosclerosis.</a> Auton Neurosci. 193, 7-11 (2015).</li>
<li>Cao, Y., Wang, H., Wang, Q., Han, X., Zeng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+volume+fluorescence-imaging+of+vascular+plasticity+in+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Metab%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional volume fluorescence-imaging of vascular plasticity in adipose tissues.</a> Mol Metab. 14, 71-81 (2018).</li>
<li>Kirst, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+fine-scale+organization+and+plasticity+of+the+brain+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mapping the fine-scale organization and plasticity of the brain vasculature.</a> Cell. 180 (4), 780-795.e25 (2020).</li>
<li>Todorov, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+learning+analysis+of+whole+mouse+brain+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Machine learning analysis of whole mouse brain vasculature.</a> Nat Methods. 17 (4), 442-449 (2020).</li>
<li>Bhatia, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+proteomics+in+three-dimensional+intact+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Spatial proteomics in three-dimensional intact specimens.</a> Cell. 185 (26), 5040-5058.e19 (2022).</li>
<li>Mai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scalable+tissue+labeling+and+clearing+of+intact+human+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Scalable tissue labeling and clearing of intact human organs.</a> Nat Protoc. 17 (10), 2188-2215 (2022).</li>
</ol>

SKM, CJY i AJRH są współzałożycielami Easemedcontrol R &D GmbH and Co. KG.

Miażdżyca może być postrzegana jako przezścienna choroba zapalna tętnic obejmująca wszystkie trzy warstwy ściany tętnicy. Ponadto tętnice otoczone są okołonaczyniową tkanką tłuszczową i tkanką neuronalną. Podczas progresji miażdżycy każda z tych tkanek ulega znacznym zmianom komórkowym i strukturalnym, co wymaga metod uzyskania subkomórkowego dostępu optycznego do nienaruszonych tkanek otaczających zdrowe i chore tętnice. Metody te zostały przedstawione w celu lepszego zrozumienia interakcji komórka-komórka i komórka-tkanka oraz pogłębienia wiedzy na temat patogenezy chorób sercowo-naczyniowych. Oczyszczanie tkanek i późniejsze obrazowanie mikroskopowe 3D pozwala na obrazowanie wielkoskalowych, dotychczas niedostępnych nienaruszonych przedziałów tkankowych, odsłaniając szczegółowe rekonstrukcje tętnic. W tym miejscu przedstawiamy protokoły dla technik oczyszczania tkanek TDE i iDISCO, podkreślając ich skuteczność i prostotę w osiąganiu niemal całkowitej przezroczystości tkanek, wydajnym obrazowaniu za pomocą mikroskopii konfokalnej/wielofotonowej lub mikroskopii arkuszowej, a jednocześnie zachowaniu integralności strukturalnej.
Oczyszczanie TDE wykorzystuje rozpuszczalny w wodzie odczynnik w celu uzyskania przezroczystości tkanek poprzez regulację RI, skutecznie zachowując w ten sposób sygnały fluorescencyjne w tkance. Stanowi skuteczną metodę oczyszczania tkanek dla naczyń krwionośnych o mniejszych rozmiarach, czyli objętości tkanki o wielkości od mikrometra do milimetra bez kurczenia się tkanek. Wymaga jednak dłuższego czasu przetwarzania w przypadku większych tkanek, to znaczy objętości tkanek o rozmiarach od milimetra do centymetra. Co ważne, procedura może być dostosowana do potrzeb użytkownika poprzez dostosowanie stężenia odczynników oraz czasu inkubacji. Z drugiej strony, iDISCO wykorzystuje szereg rozpuszczalników organicznych do usuwania lipidów i wody, co prowadzi do lepszej przezroczystości tkanek w przypadku większych tkanek, całych narządów lub całych tkanek myszy lub większych tkanek ludzkich. Oferuje unikalne zalety krótkiego czasu przetwarzania i przydatności do dużych objętości tkanek. Prowadzi to jednak do kurczenia się oczyszczonych próbek, wygaszania sygnałów fluorescencyjnych i usuwania lipidów, co jest głównym ograniczeniem dla bogatych w lipidy tkanek miażdżycowych. Ponadto mikroskopia arkuszowa światła, w przeciwieństwie do mikroskopii konfokalnej lub wielofotonowej, nie może wizualizować szczegółów subkomórkowych na poziomie mikrometru i wizualizować projekcji neuronalnych o małej średnicy, takich jak pojedyncze aksony i ich połączenia z innymi komórkami naczyniowymi.
Unerwienie naczyń odgrywa istotną rolę w rozwoju miażdżycy 6,7,18. Badanie rozmieszczenia nerwów obwodowych wzdłuż drzewa tętniczego i ich zmian pomoże zrozumieć postęp choroby. Ze względu na wydajną zdolność przetwarzania, iDISCO jest powszechnie stosowany do obrazowania całej sieci naczyniowej w modelach miażdżycy u szczurów i myszy 12,19,20,21, zapewniając trójwymiarowe obrazy o wysokiej rozdzielczości. Z drugiej strony TDE nadaje się do badań wymagających zachowania znaczników fluorescencyjnych, takich jak obserwacja określonych markerów neuronalnych, co pozwala dokładnie ujawnić delikatną strukturę i zmiany w unerwieniu naczyńkrwionośnych 6. Oba protokoły oczyszczania tkanek są wymagane, ponieważ usuwanie TDE nie obejmuje kurczenia się i może obrazować lipidy, podczas gdy iDISCO prowadzi do kurczenia się tkanek z powodu odwodnienia i delipidacji. Co więcej, zmodyfikowany protokół iDISCO może być stosowany do oczyszczania tkanek ludzkich komórek sercowo-naczyniowych22,23. Obie techniki oczyszczania oferują uzupełniające się korzyści w badaniu przebudowy tętnic w miażdżycy. Dzięki połączeniu mocnych stron obu metod można uzyskać bardziej kompleksowe i dogłębne zrozumienie patologicznych mechanizmów miażdżycy.

Techniki histologiczne dostarczają podstawowego zrozumienia próbek biologicznych poprzez cięcie tkanek/organów. Jednak nakreślenie złożonych anatomicznych interakcji komórka/komórka i tkanka/tkanka w trzech direzydencjach (3D) było - do niedawna - trudne do osiągnięcia. Ta niezaspokojona potrzeba była szczególnie widoczna w kontekście układu sercowo-naczyniowego w stanach zdrowych i chorych. Obrazowanie nienaruszonych tkanek było w przeszłości wyzwaniem ze względu na absorpcję i rozpraszanie światła, co sprawiało, że były one z natury nieprzezroczyste. Oczyszczanie tkanek sprawia, że nienaruszona próbka biologiczna jest przezroczysta, minimalizując te ograniczenia. Najnowsze osiągnięcia w technikach oczyszczania tkanek umożliwiają obrazowanie 3D w wysokiej rozdzielczości niewyciętych przezroczystych tkanek w celu uzyskania znacznego wglądu w mikroarchitekturę komórkową i strukturalną całych narządów z rozdzielczością mikrometrów, umożliwiając w ten sposób zdefiniowanie anatomicznych sieci łączności.
Miażdżyca obejmuje trzy warstwy ściany tętnicy, w tym wewnętrzną warstwę wewnętrzną, środkową warstwę medialną i zewnętrzną warstwę tkanki łącznej, która jest określana jako adventitia. Blaszki miażdżycowe w wewnętrznej warstwie tętnic są od dziesięcioleci konwencjonalnym celem badań1,2. Jednak warstwa przydanki zawiera naczynia krwionośne, naczynia limfatyczne i włókna nerwowe obwodowego układu nerwowego. Ponadto przydanka jest połączona z okołonaczyniową tkanką tłuszczową i składnikami tkanki neuronalnej, w tym nerwami obwodowymi i zwojami okołonaczyniowymi3,4. Wiadomo, że nerwy obwodowe wykorzystują przydankę jako kanały do dotarcia do odległych tkanek docelowych, a nawet komórek5. Nasze ostatnie badania posunęły naprzód postęp w zrozumieniu wielowarstwowych interakcji głównych układów biologicznych, w tym układu odpornościowego, układu nerwowego i układu sercowo-naczyniowego. Nazwaliśmy te interakcje interfejsami neuroimmunologiczno-sercowo-naczyniowymi6,7. Podczas miażdżycy elementy ściany tętnicy ulegają solidnej restrukturyzacji i przebudowie. Na przykład, w sąsiedztwie progresji blaszki miażdżycowej w błonie wewnętrznej, tworzą się agregaty komórek odpornościowych, a neogeneza aksonów neuronalnych zachodzi w mysiej przydance aortalnej6,8,9. W miarę postępu miażdżycy agregaty komórek odpornościowych przekształcają się w dobrze zbudowane trzeciorzędowe narządy limfatyczne tętnic (ATLO) z wyraźnymi obszarami komórek T, B i komórek plazmatycznych10. Jednak nakreślenie tych zmian w 3D, obrazowanie w wysokiej rozdzielczości nienaruszonej tkanki było wyzwaniem ze względu na niewystarczającą przepuszczalność błony i nieodłączne rozpraszanie światła11. Metody oczyszczania tkanek przezwyciężyły główne ograniczenia konwencjonalnych metod histologicznych11,12,13,14,15 ze zwiększoną penetracją przeciwciał, aby dotrzeć głęboko do nienaruszonych tkanek lub narządów poprzez równomierne dostosowanie indeksu refrakcji (RI), co prowadzi do obrazów o rozdzielczości mikrometrowej i większej głębokości obrazowania w woksele. RI próbek można dopasować do glicerolu (RI 1,46) lub olejku immersyjnego (RI 1,52), co znacznie zmniejsza rozpraszanie światła i aberracje sferyczne, umożliwiając wysoką rozdzielczość. Ostatnie postępy w technikach oczyszczania tkanek całego narządu lub całego ciała, takie jak 2,2-tiodieetanol (TDE) na bazie wody i obrazowanie 3D narządów oczyszczonych rozpuszczalnikiem (iDISCO) z wykorzystaniem immunoznakowania, wraz z technikami obrazowania wolumetrycznego (w tym obrazowaniem konfokalnym, wielofotonowym i mikroskopią świetlną) umożliwiły rekonstrukcję mikroanatomii architektury naczyń krwionośnych poprzez skonstruowanie ich łączności atlas11,16. Wizualizacja tych komórkowych i strukturalnych połączeń w 3D może dostarczyć nowych informacji, które pozwolą odpowiedzieć na dotychczas nierozwiązane pytania biologiczne.

<table><tbody><tr><td>2,2'-tiodieetanol (TDE)</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>166782</td><td>Odczynnik czyszczący</td></tr><tr><td>Amira</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>oprogramowanie do wizualizacji 3D; Oprogramowanie do przetwarzania obrazu służące do ręcznej segmentacji i śledzenia w obrazach 3D</td></tr><tr><td>Alkohol benzylowy</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>W213713</td><td>Odczynnik czyszczący</td></tr><tr><td>Benzoesan benzylu</td><td>Sigma</td><td>B6630</td><td>Odczynnik czyszczący</td></tr><tr><td>CD16/32</td><td>eBioscience</td><td>14-0161-82</td><td>Roztwór blokujący</td></tr><tr><td>Konfokalny laserowy mikroskop skaningowy&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS-SP8 3X</td><td>Urządzenie do obrazowania do wielowymiarowego obrazowania w wysokiej rozdzielczości nienaruszonych tkanek biologicznych lub skrawków o wysokiej swoistości w rozdzielczości subkomórkowej.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td>Marker jąder</td></tr><tr><td>Dichlorometan (DCM)</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>270997</td><td>Odczynnik czyszczący</td></tr> Wosk <tr><td>do misek czarnych&nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>S17432</td><td>Rozwarstwienie i stabilizacja aorty&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikroskop stereoskopowy</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>Stemi 2000</td><td>Sekcja narządów myszy</td></tr><tr><td>Etanol&nbsp;</td><td>Ucieczka Sigma</td><td>E7023</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>8040.1</td><td>Bufor perfuzyjny&nbsp;</td></tr><tr><td>Fidżi&nbsp;</td><td>(ImageJ, NIH)</td><td></td><td>Oprogramowanie do przetwarzania obrazów 2D i 3D</td></tr><tr><td>Kozioł anty-chomik IgG, Cy3</td><td>Dianova&nbsp;</td><td>127-165-099</td><td>Przeciwciało drugorzędowe</td></tr><tr><td>Kozioł anty-królicze IgG, Alexa Fluor 680</td><td>Thermo Fisher Scientific / Invitrogen</td><td>A-21109</td><td>Przeciwciało drugorzędowe&nbsp;</td></tr><tr><td>Koza anty-Rat IgG, Cy5</td><td>Dianova</td><td>712-175-150</td><td>Przeciwciało drugorzędowe</td></tr><tr><td>Chomik Anty-CD3e&nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>145-2C11&nbsp;</td><td>Marker komórek Pan-T</td></tr><tr><td>Huygens Professional</td><td>Scientific Volume Imaging, Holandia</td><td>Wersja 19.10</td><td>Oprogramowanie do przywracania obrazów; Oprogramowanie do przetwarzania obrazów wykorzystywane głównie do dekonwolucji obrazów 2D i 3D</td></tr><tr><td>Stacja robocza do przetwarzania obrazu</td><td>MIFCOM&nbsp;</td>Stacja robocza do przetwarzania obrazu <td>MIFCOM X5</td><td>wyposażona we wszystkie programy do przetwarzania obrazu, w tym pakiet aplikacji Leica X, Fiji i Imaris do przetwarzania końcowego obrazów uzyskanych za pomocą mikroskopów konfokalnych, wielofotonowych i arkuszy świetlnych</td></tr><tr><td>Imaris</td><td>Bitplane</td><td>w wersji 8.4</td><td>Oprogramowanie do analizy obrazu; Oprogramowanie do przetwarzania obrazów wykorzystywane do automatycznej segmentacji obrazów 3D</td></tr><tr><td>Inkubator i rotator&nbsp;</td><td>Marshall Naukowy&nbsp;</td><td>Innova 4230</td><td>Urządzenie do inkubacji i rotacji podczas oczyszczania tkanki &nbsp;</td></tr><tr><td>iSpacer</td><td>Sunjin Lab</td><td>IS4020</td><td>Studzienka prostokątna wraz z uchwytem na próbkę</td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Livisto</td><td></td><td>Anesthetic</td></tr><tr><td>Leica Application Suite X (LAS-X)&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>Wersja 3.5</td><td>Oprogramowanie do przetwarzania obrazów uzyskanych za pomocą mikroskopu Leica</td></tr><tr><td>Mikroskop świetlny</td><td>Leica Microsystems</td><td>DM LB</td><td>Urządzenie do obrazowania z jasnym polem</td></tr><tr><td>Arkusz świetlny&nbsp; mikroskop</td><td>LaVision BioTech</td><td>Ultramikroskop II</td><td>Technika obrazowania do szybkiego obrazowania w wysokiej rozdzielczości dużych próbek biologicznych lub całej myszy przy słabym naświetleniu poprzez szybkie pozyskiwanie obrazów cienkich przekrojów optycznych.</td></tr><tr><td>Mikroskopia wielofotonowa</td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS-SP5II MP&nbsp;</td><td>Metoda obrazowania do wielowymiarowego obrazowania w wysokiej rozdzielczości nienaruszonych i żywotnych tkanek biologicznych na poziomie subkomórkowym i molekularnym przez dłuższy czas, głęboko w próbce i przy minimalnej inwazji.</td></tr><tr><td>Normalna surowica kozia&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G9023</td><td>Roztwór blokujący</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P-6148&nbsp;</td><td>Mocowanie&nbsp;</td></tr><tr><td>Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P4417-100TAB&nbsp;</td><td>Bufor do mycia</td></tr><tr><td>Żelatyna ze skóry świń</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>G1890</td><td>Bufor inkubacyjny</td></tr><tr><td>Quadrol</td><td>Sigma</td><td>122262</td><td>CUBIC odczynnik czyszczący</td></tr><tr><td>Królik Anti-NF200</td><td>Sigma</td><td>N4142</td><td>Marker panneuronalny</td></tr><tr><td>Szczur Anty-B220&nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>RA3-6B2</td><td>Marker komórek Pan-B</td></tr><tr><td>Sacharoza</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>90M003524V&nbsp;</td><td>Odwodnienie&nbsp;</td></tr><tr><td>Sytox</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11380</td><td>Marker jąder</td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>401757</td><td>Odczynnik czyszczący&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Roth&nbsp;</td><td>3051.1</td><td>Penetracja</td></tr><tr><td>Mocznik</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>U5128</td><td>CUBIC odczynnik czyszczący</td></tr><tr><td>Ksylen&nbsp;</td><td>Fisher Chemical&nbsp;</td><td>x/0250/17&nbsp;</td><td>Znieczulenie&nbsp;</td></tr></tbody></table>

trójwymiarowe obrazowanie tkanek aorty w miażdżycy

Three-Dimensional Imaging of Aortic Tissues in Atherosclerosis

Ostatnie badania poszerzyły zrozumienie miażdżycy jako przezściennej przewlekłej choroby zapalnej obejmującej wszystkie trzy warstwy ściany tętnicy, w tym blaszkę wewnętrzną, środek i przydankę, która tworzy zewnętrzną powłokę tkankową tętnic. Nasze ostatnie badania sugerują, że przydanka jest wykorzystywana przez obwodowy układ nerwowy jako kanał docierający do wszystkich komórek tkankowych. Odkryliśmy również, że obwodowy układ nerwowy, czyli czuciowy i współczulny układ nerwowy, przechodzi poważne procesy przebudowy obejmujące neogenezę sieci aksonów sąsiadujących z blaszkami miażdżycowymi. W tym kontekście zrozumienie struktury sieci neuronowej i jej interakcji z komponentami naczyniowymi chorych tętnic daje duże nadzieje na lepsze zrozumienie patogenezy chorób sercowo-naczyniowych. Aby osiągnąć te cele, potrzebne są metody wizualizacji subkomórkowej architektury nienaruszonych zdrowych i chorych tętnic wraz z otaczającymi je przedziałami okołonaczyniowymi. Oczyszczanie tkanek umożliwia nienaruszone obrazowanie tkanek głębokich większych przedziałów tkankowych, które są niedostępne w inny sposób. Umożliwia obrazowanie wolumetryczne nienaruszonych tętnic dzięki integracji narzędzi do znakowania, oczyszczania, zaawansowanego obrazowania mikroskopowego i przetwarzania obrazu. W tym miejscu opisujemy dwa odrębne, ale uzupełniające się podejścia do pasywnego oczyszczania tkanek, to znaczy usuwanie 2, 2-tiodieetanolu (TDE) na bazie wody i trójwymiarowe obrazowanie narządu oczyszczonego rozpuszczalnikowo (iDISCO) za pomocą znakowania immunologicznego w celu zobrazowania izolowanych segmentów aorty lub całej aorty in-situ u całej myszy.

Aby zademonstrować mikroanatomię nienaruszonej aorty zdrowej i chorej oraz ujawnić fizyczne połączenia między układem odpornościowym, układem nerwowym i układem sercowo-naczyniowym w mysich modelach miażdżycy, zastosowaliśmy dwa komplementarne podejścia do utrudniania tkanek (clearing): utrudnianie TDE wyizolowanej aorty oraz utrudnianie iDISCO całej myszy (Rysunek 1). Po immunobarwieniu całego preparatu (whole-mount), aortę en face utrudniono za pomocą serii roztworów roboczych TDE. Wskaźnik załamania światła (RI) dopasowano do wartości 1,4-1,5, w zależności od stężenia TDE w ostatnim kroku, aby uzyskać optymalną przejrzystość tkanki aorty bez zmiany jej objętości (Rysunek 1A). W przeciwieństwie do utrudniania TDE, protokół utrudniania iDISCO obejmuje etapy odbarwiania i permeabilizacji przed immunobarwieniem całego preparatu, a następnie delipidację i odwodnienie przy użyciu różnych rozpuszczalników chemicznych oraz dopasowanie RI do wartości 1,56 (Rysunek 1B). Utrudnianie iDISCO umożliwia wizualizację tkanek o dużym rozmiarze, a nawet całego ciała myszy, ze względu na kurczenie się tkanki.
Konfokalne i wielofotonowe obrazowanie 3D całego preparatu aorty en face po utrwaleniu metodą TDE umożliwia wizualizację struktur, w tym blaszek miażdżycowych w intima, komórkowości błony zewnętrznej oraz projekcji neuronalnych błony zewnętrznej, wśród innych struktur, podczas gdy obrazowanie arkuszem światła (light-sheet) myszy utrwalonej metodą iDISCO pozwala na wizualizację i rekonstrukcję drzewa tętniczego wraz z okołynacznową tkanką tłuszczową, węzłami chłonnymi nerek i powiązanymi komponentami nerwowymi, w tym nerwami i zwojami (Ryc. 1C). Na przykład konfokalne obrazowanie aorty miażdżycowej utrwalonej metodą TDE wykazało obecność wielu limfocytów T barwionych na CD3e w blaszce oraz rozległą neogenezę włókien nerwowych o różnych średnicach barwionych na NF200 w ATLO, natomiast wielofotonowe obrazowanie całego preparatu chorej aorty brzusznej z wiekowych myszy Apoe-/- utrwalonej metodą TDE wykazało terytorialność kiełkowania aksonów wykazujących ekspresję NF200 w obszarach ATLO wolnych od limfocytów T (B220 negatywnych) (Ryc. 2A). Z kolei obrazowanie arkuszem światła całego brzucha myszy utrwalonej metodą iDISCO pozwoliło zwizualizować relację przestrzenną między aortą a sąsiednimi zwojami współczulnymi. Segmentacja obrazu 3D i śledzenie poszczególnych aksonów od zwojów do powierzchni aorty ujawniło silną przebudowę neuronalną, w tym nowo powstałe aksony barwione na NF200 w błonie zewnętrznej aorty w sąsiedztwie blaszki miażdżycowej (Ryc. 2B).
<img alt="Schemat metod klarowania aorty, etapy TDE i iDISCO, obrazowanie 3D, barwienie przeciwciałami." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67400/67400fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Schemat badawczy. (A) Klarowanie aorty en faced metodą TDE opartą na roztworach wodnych. (B) Klarowanie całego organizmu myszy metodą iDISCO opartą na rozpuszczalnikach. (C). Obrazowanie wolumetryczne 3D oraz przetwarzanie obrazów optycznie sklarowanych próbek izolowanej aorty lub całych myszy. Rycina została zmodyfikowana za zgodą Sun i wsp.17. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67400/67400fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Przezroczystość TDE i iDISCO w roztworach wodnych; mikroskopia konfokalna i wielofotonowa ujawniająca włókna nerwowe." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67400/67400fig02v2.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Przykład obrazów 3D tkanek utrwalonych metodami TDE i iDISCO. (A) Obrazowanie 3D aorty poddanej utrwalaniu TDE en face. Panel górny: obrazy konfokalne wykazały limfocyty T CD3e+ (czerwony, strzałka) w blaszce nowotworowej intimy oraz aksony nerwowe NF200+ (zielony) w błonie zewnętrznej aorty miażdżycowej (ATLO); Panel dolny: obrazy wielofotonowe wykazały aksony nerwowe NF200+ (zielony, groty strzałek), limfocyty B B220+ (czerwony, pusty trójkąt) oraz generację drugiej harmonicznej pochodną kolagenu (SHG, biały) w ATLO 78-tygodniowych samców myszy Apoe-/-. Sytox (niebieski) i DAPI (niebieski) wybarwiły jądra komórkowe. (B) Zrekonstruowane i segmentowane obrazy 3D całego brzucha myszy utrwalonego metodą iDISCO. Rekonstrukcja 3D za pomocą arkusza światła, segmentacja i śledzenie nerwów oraz aksonów NF200+ (strzałki, zielony) i ich relacja przestrzenna z zwojami współczulnymi (groty strzałek) nienaruszonej aorty brzusznej. Pusty trójkąt wskazuje nowo powstały akson sąsiadujący z blaszkami miażdżycowymi. Autofluorescencja (auto) została wykorzystana do obrazowania aorty i tkanki łącznej, w tym blaszki (cyjan) i węzła chłonnego nerkowego (RLN, niebieski). CG, zwoje trzewne, SycG, zwoje łańcucha współczulnego. Rycina została zmodyfikowana za zgodą Mohanta et al.6 oraz Sun et al.17. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67400/67400fig02largev2.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Tutaj prezentujemy zoptymalizowane protokoły oczyszczania tkanek do obrazowania mysiej aorty w trzech wymiarach (3D). Opisujemy najnowocześniejsze procedury barwienia immunologicznego, oczyszczania optycznego i obrazowania z zamiarem określenia anatomicznej bliskości obwodowego układu nerwowego z blaszkami miażdżycowymi i przydanką w miażdżycy.

Trójwymiarowe obrazowanie tkanek aorty w miażdżycy

Recent research has advanced the understanding of atherosclerosis as a transmural chronic inflammatory disease involving all three layers of the arterial ...

Nasze badania koncentrują się na zrozumieniu roli układu nerwowego w progresji miażdżycy. W szczególności w przypadku każdej interakcji z grzbietem staramy się odpowiedzieć na pytanie, w jaki sposób nerw zmienia się podczas miażdżycy i jak jego interakcja wpływa na postęp choroby. Obecnie wykorzystuje się kilka najnowocześniejszych technologii do postępów w badaniach nad miażdżycą w celu lepszego zrozumienia mechanizmów choroby.Obejmują one oczyszczanie tkanek i obrazowanie 3D, zaawansowane techniki mikroskopowe, sztuczną inteligencję, sekwencjonowanie pojedynczych komórek i uczenie maszynowe. Podczas progresji miażdżycy elementy ściany tętnicy ulegają solidnej restrukturyzacji. Określenie zmian w obrazowaniu 3D i wysokiej rozdzielczości nienaruszonych tkanek to kluczowe wyzwania eksperymentalne.Opisane tutaj narzędzia do obrazowania pomogą naukowcom i kardiologom lepiej zrozumieć chorobę i ostatecznie pomogą w leczeniu pacjentów. Opisany tutaj protokół ma kilka zalet w porównaniu z tradycyjnymi technikami, takimi jak głębokie obrazowanie tkanek nienaruszonych, a także wizualizacja ich struktury, które są niedostępne w inny sposób. Protokoły te pomogą lepiej zrozumieć interakcję komórka-komórka i komórka-tkanka, aby lepiej zrozumieć postęp choroby.Wizualizacja zmian komórkowych i strukturalnych w 3D w nienaruszonej tkance może dostarczyć nowych informacji, które pozwolą lepiej zrozumieć pytania biologiczne bez odpowiedzi w badaniach sercowo-naczyniowych. Na początek umieść znieczuloną mysz na piankowej płytce pokrytej papierowymi ręcznikami chirurgicznymi. Zamocuj ręce i nogi myszy w pozycji leżącej na plecach za pomocą taśm samoprzylepnych.Zdezynfekuj klatkę piersiową 75% etanolem. Pobrać krew z lewej komory za pomocą jednorazowej strzykawki o pojemności jednego mililitra. Następnie wykonaj nacięcie w linii środkowej na klatce piersiowej i małe nacięcie w prawym przedsionku.Perfuzjuj lewą komorę myszy za pomocą 10 mililitrów pięciomilimolowego EDTA w PBS przez pięć minut, aż krew zostanie wypłukana, a następnie 20 mililitrów PBS przez 5 do 10 minut. Na koniec perfuzjuj 10 mililitrami 4% paraformaldehydu przez 20 minut. Pod mikroskopem stereoskopowym usunąć narządy wewnętrzne, w tym narządy żołądkowo-jelitowe i rozrodcze.Pozostaw nienaruszone serce, aortę i nerki. Następnie ostrożnie usuń grasicę i otaczającą ją tkankę tłuszczową. Odsłoń całą aortę od aorty wstępującej do rozwidlenia biodrowego.Zbierz całą aortę i umieść ją na szalce Petriego wypełnionej PBS. Podziel aortę na różne segmenty i podziel ją wzdłużnie, aby uzyskać dwa 2, 2'tiodieetanol lub TDE. Przypnij aortę czołową do płaskiej czarnej płytki woskowej w kształcie litery Y i przymocuj ją przez noc w 4% paraformaldehydzie w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Następnego dnia odepnij aortę i przenieś ją do PBS na pięciominutowe mycie. Następnie przenieś aortę do roztworu blokującego na dwie godziny w celu zablokowania i przepuszczalności. Następnie inkubuj aortę z pierwszorzędowymi przeciwciałami w roztworze blokującym przez 24 godziny.Przemyj aortę w PBS przez pięć minut, powtarzając pięć razy przed inkubacją z przeciwciałami drugorzędowymi w 10% normalnej surowicy osła i DAPI do barwienia jądrowego przez noc, przenieś wybarwioną aortę do roztworu TDE o rosnącym stężeniu. Następnie dobrze przyklej dwustronną, lepką prostokątną przekładkę obrazową do czystego szkiełka i przenieś oczyszczoną aortę, upewniając się, że przydanka aorty czołowej jest skierowana w stronę szkiełka nakrywkowego. Zamontuj aortę za pomocą kropli 60% roztworu TDE i ostrożnie przymocuj szkiełko nakrywkowe do studni, unikając pęcherzyków powietrza.Włącz odwrócony konfokalny laserowy mikroskop skaningowy wyposażony w obiektyw z 20-krotnym zanurzeniem w olejku. Dostosuj hybrydowe detektory diodowe w oparciu o barwniki barwiące. Dostosuj ustawienia wyświetlania i wybierz format XY 1024x1024 pikseli do obrazowania.Upuść olejek immersyjny na szkiełko nakrywkowe i przesuń obiektyw 63x grubo w kierunku próbki, aż dotknie olejku immersyjnego i szkiełka nakrywkowego. Następnie zidentyfikuj obszar zainteresowania i uzyskaj stosy Z od strony przydanki aorty czołowej w krokach co dwa do czterech mikrometrów na głębokość do 60 mikrometrów w celu obrazowania trójwymiarowego. Nazwij plik ze szczegółami próbki i szczegółów skanowania, a następnie zapisz dane.Za pomocą pionowego mikroskopu wielofotonowego wyposażonego w obiektyw z powiększeniem 20x, uzyskaj stosy Z od strony abluminalnej w krokach co 10 do 15 mikrometrów i głębokości do 700 mikrometrów. Po znieczuleniu i perfuzji myszy za pomocą PBS i paraformaldehydu, należy wypreparować część ciała powyżej poziomu przepony. Przymocuj dolną część ciała za pomocą 4% paraformaldehydu przez jeden do dwóch dni w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Następnie dokładnie umyj próbkę w PBS przez 10 minut, powtarzając trzy razy. Próbkę inkubować w 20% roztworze sześciennym przez 48 godzin. Po przemyciu PBS należy inkubować próbkę w roztworze PGST przez noc w celu przepuszczalności i zablokowania.Następnego dnia inkubować próbkę z pierwszorzędowymi przeciwciałami w roztworze PGST w temperaturze czterech stopni Celsjusza, delikatnie wstrząsając przez 10 do 12 dni. Po umyciu próbki w PGST dodaj przeciwciała drugorzędowe w DAPI w PGST w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez siedem dni. Dokładnie myć próbkę w PGST przez jedną godzinę, powtarzając pięć razy.Przenieść wybarwioną próbkę do serii roztworów roboczych tetrahydrofuranu o zwiększonym stężeniu w celu odwodnienia, inkubując 12 godzin na każde stężenie. Po odwodnieniu umieścić próbkę w bezwzględnym roztworze dichlorometanu na trzy godziny w celu usunięcia lipidów. Następnie inkubuj próbkę w roztworze benzoesanu benzoesanu benzylu o współczynniku załamania światła pasującym do alkoholu benzylowego przez trzy do sześciu godzin.Aby rozpocząć, załaduj obrazy aorty myszy i dolnych części ciała z kafelkami Z do stacji roboczej przetwarzania obrazów. Aby oznaczyć kolorami głębię objętości komórki lub struktury, użyj oprogramowania do przywracania obrazu, aby zdekonwoluować obraz raw. W oprogramowaniu Fiji wygeneruj projekcję maksymalnej intensywności zdekonwoluowanych danych za pomocą czasowego kodowania kolorami.Załaduj do oprogramowania serię obrazów TIFF z kafelkami Z. Korzystając z wtyczki do łączenia Fidżi, zszyj obrazy i zapisz je w formacie TIFF. Następnie załaduj zszyte obrazy do trójwymiarowego oprogramowania do wizualizacji w celu segmentacji obrazu.Ręcznie prześledź struktury neuronalne na osi X-Y-Z wzdłuż całej ścieżki między aortą a zwojami. Załaduj wstępnie przetworzone obrazy do oprogramowania do analizy obrazu. Użyj autofluorescencji do segmentacji aorty i tkanek łącznych.Zastosuj oddzielne pseudokolory, aby uwidocznić wyraźną ścianę aorty i płytkę nazębną. Na koniec użyj funkcji adaptacyjnego wyrównywania histogramu z ograniczonym kontrastem, aby zwiększyć lokalny kontrast na tle przetwarzanych obrazów. Usunięta aorta miażdżycowa TDE ujawniła limfocyty T barwione CD3e w blaszkach miażdżycowych, rozległą neogenezę włókien nerwowych barwionych NF200 w tętniczych trzeciorzędowych narządach limfatycznych.Obrazowanie wielofotonowe chorej aorty brzusznej u myszy z nokautem APOE wykazało kiełkowanie aksonów z ekspresją NF200 w regionach pozbawionych komórek B B220 dodatnich w tętnicach trzeciorzędowych narządów limfatycznych. Obrazowanie odwłoka myszy oczyszczonego przez iDISCO uwidoczniło przestrzenny związek między aortą a zwojami współczulnymi z nowo utworzonymi aksonami wybarwionymi NF200 na przydankach przylegających do blaszki miażdżycowej.

three-dimensional-imaging-of-aortic-tissues-in-atherosclerosis

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Szczegółowo opisujemy nowy cewnik do fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF), służący do dwuwymiarowego wewnątrznaczyniowego obrazowania molekularnego biologii blaszki miażdżycowej in vivo. Cewnik NIRF umożliwia wizualizację kluczowych procesów biologicznych, takich jak zapalenie, poprzez wykrywanie obecności aktywowalnych i celowanych fluorochromów NIR wykazujących powinowactwo do blaszki miażdżycowej. Cewnik spełnia wymogi inżynieryjne i energetyczne stosowane w klinice i jest...

In vivo wewnątrznaczyniowe obrazowanie molekularne blaszek zapalnych z wykorzystaniem fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF) – multimodalne podejście do obrazowania miażdżycy

Analiza ex vivo zmian w tętnicach z modeli zwierzęcych chorób sercowo-naczyniowych klasycznie opiera się na technikach histologicznych i immunohistochemicznych. Zapewniają one 2-wymiarowe pomiary w 3-wymiarowych zmianach. W artykule opisano generowanie zmian tętniczych do analizy ilościowej w 3 wymiarach z wykorzystaniem optycznej tomografii projekcyjnej.

Generowanie i 3-wymiarowa ocena ilościowa zmian w tętnicach u myszy za pomocą optycznej tomografii projekcyjnej

Opisujemy procedury ilościowego określania i charakteryzowania zmian miażdżycowych w modelach mysich, wykorzystując precyzyjne przekroje zatoki aortalnej aorty i aorty wstępującej w połączeniu z analizą histochemiczną i immunohistochemiczną.

Analiza ilościowa i charakterystyka zmian miażdżycowych w mysiej zatoce aortalnej

Tutaj prezentujemy protokół korzystania z trójwymiarowych drukowanych modeli do planowania przedoperacyjnego i śródoperacyjnej reorganizacji skomplikowanych lokalizacji naczyniowych podczas obsługi wrodzonej anomalii aorty.

Trójwymiarowy wydruk złożonej anomalii aorty

Obrazowanie ultradźwiękowe stało się powszechną metodą określania wymiarów światła tętniaków aorty piersiowej i brzusznej u myszy. Protokół ten opisuje procedurę uzyskiwania wiarygodnych i powtarzalnych dwuwymiarowych obrazów ultrasonograficznych aorty wstępującej i brzusznej u myszy.

Obrazowanie ultrasonograficzne aorty piersiowej i brzusznej u myszy w celu określenia wymiarów tętniaka

Istnieje potrzeba określenia, które zmiany miażdżycowe będą postępować w unaczynieniu wieńcowym, aby kierować interwencją przed wystąpieniem zawału mięśnia sercowego. W tym artykule przedstawiono biomechaniczne modelowanie tętnic za pomocą optycznej tomografii koherentnej przy użyciu technik interakcji płyn-struktura w komercyjnym solverze elementów skończonych, aby pomóc przewidzieć tę progresję.

Optyczna tomografia koherentna Biomechaniczna analiza interakcji płyn-struktura progresji miażdżycy tętnic wieńcowych

Obrazowanie angiografii dynamicznej tomografii komputerowej (CTA) dostarcza dodatkowej wartości diagnostycznej w charakterystyce przecieków wewnątrzspadowych aorty. Protokół ten opisuje podejście jakościowe i ilościowe wykorzystujące analizę krzywej tłumienia w czasie w celu scharakteryzowania przecieków. Przedstawiono technikę integracji dynamicznego obrazowania CTA z fluoroskopią z wykorzystaniem fuzji obrazów 2D-3D w celu lepszego prowadzenia obrazu podczas leczenia.

Dynamiczna angiografia tomografii komputerowej z rozdzielczością czasową do charakterystyki przecieków wewnątrzaortalnych i wskazówek dotyczących leczenia za pomocą obrazowania fuzyjnego 2D-3D

Dokładna echokardiografia wewnątrzsercowa (ICE) wykazuje znaczną dokładność w szacowaniu struktury lewego przedsionka, co jest perspektywiczną i obiecującą metodą szacowania struktury serca. W tym miejscu proponujemy protokół trójwymiarowego modelowania lewego przedsionka i żył płucnych z ICE i szybką przebudową cewnika do mapowania anatomicznego (FAM).

Trójwymiarowe modelowanie lewego przedsionka i żył płucnych z precyzyjnym podejściem do echokardiografii wewnątrzsercowej

Ten protokół przedstawia kompleksowy potok do analizy próbek pobranych z ludzkich serc, które obejmują mikroskopijne i makroskopowe skale.

Rurociąg do wieloskalowych trójwymiarowych badań anatomicznych ludzkiego serca

Opisujemy platformę opartą na chipie do trójwymiarowej hodowli komórek w mikrobioreaktorach. Jeden chip może pomieścić do 10 Mio. komórek, które mogą być hodowane w precyzyjnie określonych warunkach pod kątem przepływu cieczy, ciśnienia tlenu itp. w sterylnym, zamkniętym obiegu.

Trójwymiarowa hodowla komórek na chipie w przepływowych mikrobioreaktorach

Poznaj zaawansowane techniki obrazowania 3D tkanek aorty w miażdżycy u myszy. Metoda ta umożliwia wizualizację zmian strukturalnych i interakcji nerwowo-naczyniowych w chorobach sercowo-naczyniowych.

Trójwymiarowe obrazowanie tkanek aorty w miażdżycy

Przeglądaj więcej filmów