Płukanie solą fizjologiczną do pobierania próbek mikrośrodowiska immunologicznego nosa u psów

Badamy odpowiedzi immunologiczne związane z radioterapią i psami z guzami nosa. Próbujemy zrozumieć, w jaki sposób możemy poprawić wyniki leczenia radioterapią u pacjentów z rakiem poprzez modulację układu odpornościowego. Zmiany w mikrośrodowisku immunologicznym mogą być ważne w badaniu efektów leczenia. Dlatego pożądana jest seryjna analiza komórek mikrośrodowiska. Jednak pobieranie próbek tkanek jamy nosowej przy wielokrotnych biopsjach może być trudne ze względu na złożoną anatomię i skłonność błony śluzowej do krwawień.

Technika płukania nosa solą fizjologiczną umożliwia seryjne pobieranie próbek mikrośrodowiska immunologicznego jamy nosowej przy minimalnym rozerwaniu tkanek. Komórki i białka zebrane techniką płukania nosa mogą być analizowane za pomocą różnych testów w celu zbadania stanu mikrośrodowiska immunologicznego nosa w czasie.

Dzień przed zabiegiem należy napełnić 520 mililitrowe strzykawki sterylną solą fizjologiczną. Szczelnie zakręć strzykawki i umieść je w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby ogrzały się przez noc. Następnie umieść znieczulonego psa na zewnątrz leżącego na stole zabiegowym. Dostosuj głowę psa tak, aby była pochylona w dół, naturalnie i wygodnie od krawędzi stołu, aby ułatwić optymalne pobieranie próbki z płukania nosa. Napompuj mankiet rurki dotchawiczej, aby zapewnić szczelne uszczelnienie dróg oddechowych. W przypadku płukania nosa wytnij u podstawy osiem francuskich sterylnych czerwonych gumowych cewników, aby ściśle przylegały do jednej z ampułkolitrowych strzykawek o pojemności 20 mililitrów zawierających ciepłą sól fizjologiczną. Za pomocą markera permanentnego zaznacz koniec podstawy cewnika, aby wskazać punkt początkowy przy wejściu do nozdrza. Upewnij się, że z góry określona długość rozciąga się donosowo z końcówką umieszczoną w żądanym miejscu. Następnie odetnij końcówkę cewnika, aby dopasować ją do określonej długości cewnika donosowego, upewniając się, że wyląduje on w odpowiednim miejscu w jamie nosowej. Aby wykonać zabieg płukania nosa, wyznacz jedną osobę do wprowadzenia cewnika do jamy nosowej i podania go, a drugą osobę do pobrania próbki w miarę jej opuszczania nosa. Ustaw jedną osobę przed i pod głową psa, w rękawiczkach. Delikatnie wprowadź czerwony gumowy cewnik do przyśrodkowej części jamy nosowej, aż znak na cewniku zrówna się z wejściem do nozdrza. W tym samym czasie druga osoba trzyma 50-mililitrową stożkową rurkę poniżej nozdrza z założonym cewnikiem. Jedną ręką delikatnie zatkaj przeciwległe nozdrze. Rozpocznij wlewanie soli fizjologicznej do jamy nosowej powolnym, stałym ciśnieniem lub naparem pulsacyjnym, utrzymując głowę psa pod kątem skierowanym w dół. Zbierz płyn odpływowy do 50-mililitrowej stożkowej rurki umieszczonej poniżej nozdrza. Po zabiegu pozwól psu dojść do siebie po znieczuleniu, trzymając go na zewnątrz w pozycji leżącej z głową skierowaną w dół. Teraz zapisz całkowitą objętość zebranego płynu z płukania nosa w stosunku do całkowitej ilości podanej soli fizjologicznej. Aby przetworzyć próbkę, delikatnie zwiruj lub pipetuj próbki płukania nosa w stożkowych rurkach, aby rozbić grudki gruzu i komórek. Przepuść zebrane próbki przez filtr komórkowy o średnicy 70 mikrometrów, aby usunąć duże zanieczyszczenia ze śluzu. Odwirować przefiltrowane próbki o stężeniu 300 G przez pięć do 10 minut, aby utworzyć osad komórkowy. Za pomocą pipety ostrożnie odessać supernatant z próbek wirówki. Umieścić supernatant w czystej probówce w celu dalszej analizy białka. Na koniec ponownie zawiesić granulki komórek w PBS lub preferowanym roztworze do testów komórkowych będących przedmiotem zainteresowania.