Name: Model murinowy immunomodulacji indukowanej przez skórę (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Poznaj metodę immunomodulacji indukowanej przez skórę w modelu mysim używanym w badaniach nad alergicznym kontaktowym zapaleniem skóry. Ta bezigłowa strategia pozwala generować komórki regulacyjne i modulować odpowiedzi immunologiczne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badanie to zostało wsparte grantami z Polskiego Komitetu Badań Naukowych Granty 3 PO5B 091 25, 2PO5A 204 29 oraz z Narodowego Centrum Nauki nr N401 3554 33 dla M.S. Wykresy zostały narysowane za pomocą oprogramowania GraphPad Prism 10.2.3, a rysunki 1-3 zostały stworzone w BioRender. Zemelka-Wiacek, M. (2025): (1) https://BioRender.com/3ux2px ; (2) https://BioRender.com/s0y8zs7 ; (3) https://BioRender.com/0qziglw. Autorzy dziękują Dorocie Woźniak za opiekę nad koloniami myszy.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Badania przeprowadzono na wielu różnych modelach zwierzęcych i z użyciem wielu szczepów myszy, takich jak BALB/c, C57BL/6, HLADR4-Tg, DBA 1, B10.PL i SJL, wykazują, że szczepienie EC przypisanym antygenem może być wszechstronnym i potencjalnie nieograniczonym sposobem tworzenia tolerancji i kontrolowania niepożądanych odpowiedzi immunologicznych. Obecny protokół przedstawia dwa modele transferu komórek: (1) "transfer adopcyjny IN", który jest przydatny do oceny immunomodulacji zarówno fazy aferentnej, jak i eferentnej CH...

Niniejszy artykuł przedstawia metodę inwestowania tolerancji (określanej w całym tekście jako "tłumienie") w myszim modelu nadwrażliwości kontaktowej (CHS) oraz odwrócenia tej tolerancji (określanej w całym tekście jako "kontrasupresja") poprzez nadoskórne (EC) zastosowanie antygenu samodzielnie lub w połączeniu z ligandami receptorów rozpoznawających patogeny (PRR), odpowiednio1. W opisanym protokole (a) haptenizowane immunoglobuliny myszy (TNP-Ig) są używane jako antygen do tłumienia nadwrażliwości kontaktowej lub (b) antygen z wzorcami molekularnymi powiązanymi z patogenami (PAMP), ligandy dla receptorów podobnych do Tollu (TLR) oraz receptorów białkowych podobnych do domeny oligomerizacji (NOD) (NLR) wiążących nukleotydy, aby odwrócić supresję indukowaną przez skórę 2,3,4. Wyniki wskazują, że immunomodulacja wywołana przez EC jest pośredniczona przez antygenowo-niespecyficzne komórki supresyjne T (T) oraz antygenowo-specyficzne komórki T-kontrasupresory (Tcs). Komórki te można badać w myszim modelu transferu komórek adopcyjnych, aby określić mechanizm testowanych reakcji. Obecny protokół opisuje dwa modele transferu komórek: "transfer adopcyjny do środka" oraz "transfer adopcyjny OUT". Transfer adopcyjny IN jest przydatny do testowania immunomodulacji w fazach aferentnych i eferentnych CHS. Z kolei "transfer adopcyjny OUT" odzwierciedla efekt immunomodulacji tylko w fazie eferentnej CHS.
Artykuł opisuje metodę supresji indukowanej przez skórę poprzez naepikutanne zastosowanie antygenu w mysiim modelu ludzkiego alergicznego zapalenia skóry kontaktowego (ACD) – nadwrażliwości kontaktowej (CHS) pośredniczonej przez limfocyty typu T typu 1 (Th1)5. Jednak podejście to zostało również przetestowane pod kątem skuteczności w regulacji (tłumieniu, tolerancji) eksperymentalnych modeli cyklotoksycznych limfocytów typu 1 (Tc1) leczonych przez T (Tc1), chorób autoimmunologicznych, takich jak zapalenie stawów wywołanych kolagenem (CIA)8,9, eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i mózgu (EAE)10,11 oraz wrzodziejącego zapalenia jelitagrubego 12. Ponadto protokół opisuje metodę kontrasupresji indukowanej przez skórę (odwróconą supresję) poprzez zastosowanie antygenu EC wraz z ligandami PRR w modelu mysim CHS 13,14,15,16. Przedstawione wyniki wskazują, że supresję antygenów niespecyficznych wywołaną przez EC można odwrócić poprzez oczyszczenie ligandów TLR2, TLR3, TLR4, TLR9 i NOD2. Metoda kontrasupresji indukowanej przez skórę została również zastosowana w modelu zwierzęcym atopowego zapalenia skóry (AD), wykazując, że leczenie EC antygenem w obecności syntetycznych jednoniciowych cząsteczek DNA zawierających niemetylowane oligodeoksynukleotydy (CpG) – ligand TLR9 może tłumić odpowiedzi pośredniczone przez Th2 w sposób specyficzny dla antygenu (przesuwając odpowiedź immunologiczną w kierunku fenotypu Th1/Th17)17. Opisana metoda została również przetestowana w pneumokokowym zapaleniu płuc, wykazując, że szczepienie EC polisacharydem pneumokokowym sprzężonym z albuminą surowicy bydłej (PC-BSA), wraz z CpG, może potencjalnie wzmocnić odporność na Streptococcus pneumoniae18.
Kluczowym aspektem immunomodulacji indukowanej przez EC jest wybór modelu oraz charakter antygenu. Artykuł zawiera tabelę opisującą użyte antygeny, czas ekspozycji na antygeny oraz specyficzność testowanych modeli w limfocytach T (patrz Tabela 1). Opisana metoda immunomodulacji jest skierowana do chorób związanych z limfocytami T specyficznymi dla antygenów. Skuteczność tej metody oceniano poprzez zastosowanie kompatybilnego antygenu EC. Kompatybilność antygenu jest kluczowa, aby skutecznie oddziaływać z limfocytami T zaangażowanymi w proces chorobowy. Zastosowanie plastra białkowego lub peptydowego na nienaruszoną skórę ułatwia penetrację antygenów przez skórę19,20. Zwiększone przenikanie antygenu przypisuje się zwiększonej potności pod opatrunkiem. Zmiany w przepuszczalności naskórka występują w ciągu 4-10 godzin od założenia plastra, podczas gdy immunomodulacja wywołana EC-indukowana może pozostać skuteczna do dwóch tygodni 5,14.
Chociaż leczenie EC jest szeroko stosowane, istnienie wielu wariantów tej metody może budzić pytania. Obecne ustalenia sugerują, że zakres uszkodzenia naskórka przed podaniem antygenu może wpływać na charakter powstałej odpowiedzi immunologicznej21. Powierzchowne uszkodzenie naskórka wywołuje uwalnianie przeciwzapalnych cytokin przez komórki Langerhansa, co sprzyja inicjacjiodpowiedzi Th22. Natomiast bardziej rozległe uszkodzenia naskórka sprzyjają uwalnianiu cytokin prozapalnych i ułatwiają dostarczanie antygenów do komórek dendrytycznych skórnych23. Przedstawiony protokół podkreśla (a) rozpoznanie wyzwań związanych z zastosowaniem tej metody u małych i aktywnych zwierząt, szczególnie myszy; (b) uwzględnienie takich czynników jak stan skóry po goleniu maszynką, prawidłowy kontakt substancji ze skórą, czas ekspozycji oraz higieniczne warunki skóry podczas leczenia EC, co może decydować o skuteczności zabiegu. Przed zastosowaniem antygenu ważne jest rozważenie metody depilacji skóry, zarówno fizycznej, jak i chemicznej, ponieważ różne preparaty skóry mogą wpływać na jej stan na różne sposoby. Uznaje się, że wszystkie te procedury mogą aktywować komórki odpornościowe skóry, co może prowadzić do infekcji skóry lub wpływać na postęp choroby. Potencjalne skutki uboczne związane z chorobami skóry po depilacji powinny być głównym czynnikiem przy wyborze metody depilacji. Naukowcy opisali metodę immunosupresji stymulowanej limfocytami T, indukowaną za pomocą zastosowania antygenu EC na skórze grzbietowej ogolonej brzytwą, demonstrując jej wpływ na różne mysie modele odpowiedzi immunologicznych. Zastosowanie antygenu EC wraz z PAMPs indukuje antygenowo-specyficzne komórki T-kontrasupresorowe. Ponadto przedstawiona metoda stosowania EC, szczególnie przy powtarzającej się ekspozycji na antygeny lub PAMP, nie powoduje niepokojących skutków ubocznych.
Opisany protokół podkreśla znaczenie różnych czynników w osiąganiu wiarygodnych i powtarzalnych wyników tą metodą, zwłaszcza u małych zwierząt, takich jak myszy. Nieinwazyjny charakter tego podejścia zazwyczaj skutkuje mniejszym ryzykiem niepożądanych reakcji (takich jak ból, infekcja czy bliznowactwo) w porównaniu z technikami immunizacji śródskórnej lub iniekcyjnymi. Szczepienia nadoskórne są przyjazne dla użytkownika i łatwe do podawania w warunkach nieklinicznych, poprawiając dostępność i przestrzeganie przepisów w porównaniu z bardziej inwazyjnymi metodami.
Tabela 1: Modulacja odpowiedzi immunologicznej wywołana przez EC w różnych modelach chorób myszy. Skróty: ACD = alergiczne kontaktowe zapalenie skóry; AD = atopowe zapalenie skóry; Ag = antygen; CIA = zapalenie stawów wywołane kolagenem; CHS = nadwrażliwość kontaktowa; CFA = kompletny adiuwant Freunda; COLL II = kolagen typu II; DNFB = 2,4-dinitrofluorobenzen; DNP-BSA = dinitrofenyl sprzężony z albuminą surowicy bydłej; EAE = eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia; EC = naskórny; LPS = lipopolisacharyd; OVA = owalbumina; PAMP = wzorzec molekularny związany z patogenem; PC-BSA = polisacharyd pneumokokowy sprzężony z albuminą surowicy bydlęcej; Th1 = limfocyt pomocniczy typu 1 T; Tc1 = T limfocyt cytotoksyczny typu 1; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzen; TNP-Ig = 2,4,6-trinitrofenylowo-sprzężone immunoglobuliny myszy; Ts = Komórki supresorowe T; Tcs = T komórki kontrasupresyjne. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67578/Table 1.xlsx" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>

<table><tbody><tr><td>2,4,6-trinitrochlorobenzen (TNCB)</td><td>Tokyo Chemical Industry CO., LTD, Japonia</td><td>C0307</td><td></td></tr><tr><td>2,4,6-trinitrofenylowo-sprzężona immunoglobulina myszy (TNP-Ig)</td><td>Katedra Nauk Biomedycznych, Wydział Nauk o Zdrowiu, Jagielloński Uniwersytet Medyczny, Kraków, Polska</td><td></td><td></td></tr><tr><td>aceton (odczynnik ACS, &ge; 99.5%)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>179124</td><td></td></tr><tr><td>Folia aluminiowa</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z185140&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>analityczna waga &nbsp;</td><td>Sartorius Weighing Technology GmbH, Getyndka, Niemcy</td><td>PRACTUM224-1, 29105177</td><td></td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydła (BSA)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>CBA/J (H-2k) &nbsp;</td><td>Jednostka hodowlana Katedry Nauk Biomedycznych, Wydział Nauk o Zdrowiu, Jagielloński Uniwersytet Medyczny, Kraków, Polska</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sitko komórkowe, por o rozmiarze 70 & mu; m</td><td>BIOLOGIX, Chiny</td><td>15-1070</td><td></td></tr><tr><td>pojemność jednorazowych pipet: 5 mL, 10 mL, 25 mL</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z740301, Z740302, Z740303</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; fosforanem buforowana sól fizjologiczna (DPBS)</td><td>ThermoFisher Scientific,&nbsp; Waltham, Massachusetts, USA</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Tubki Safe-Lock eppendorf 1,5ml</td><td>Eppenforf, Niemcy</td><td>30120086</td><td></td></tr><tr><td>Rurki bezpieczne eppendorf, 2,0 ml</td><td>Eppenforf, Niemcy</td><td>30120094</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 100% (absolutny alkohol)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>1.07017</td><td></td></tr><tr><td>etanol 96%</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>1.59010</td><td></td></tr><tr><td>Serum bydła płodowego (FBS)</td><td>ThermoFisher Scientific,&nbsp; Waltham, Massachusetts, USA</td><td>A3160802</td><td></td></tr><tr><td>szkiełka mikroskopowe (piaskowane, pojedyncze, matowe)</td><td>ThermoScientific, Portsmouth, NH, USA</td><td>421-004T</td><td></td></tr><tr><td>Pryzmat grafowego podkładu</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>v. 10.2.3</td><td></td></tr><tr><td>Szare mydło (mydło Bialy Jelen)</td><td>Pollena Ostrzesz&oacute; w, Producent Chemii Gospodarczej Sp. Z.o.o., Sp. K., Polska</td><td>163057</td><td></td></tr><tr><td>Hemocytometr</td><td>VWR, Avantor, USA</td><td>612-5719</td><td></td></tr><tr><td>inkubator Heracell 150i</td><td>Termoelektron &nbsp; LED Gmbh, Niemcy</td><td>41071068</td><td></td></tr><tr><td>izofluran (Aerrane)</td><td>Baxter, Deerfield, IL, USA</td><td>8AGG9623</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina 100 mg/mL, roztwór do wstrzykiwania</td><td>Biowet Puławy Sp. z o.o., Puławy, Polska</td><td>kat.# niedostępny</td><td></td></tr><tr><td>laboratorium Wirówka (Heraeus Fresco 21)</td><td>Thermo Scientific, Niemcy</td><td>75002425</td><td></td></tr><tr><td>Laboratorium Wirówka (Heraeus Megafuge 1.0R)</td><td>&nbsp; Thermo Scientific, Niemcy</td><td>B00013899</td><td></td></tr><tr><td>lipopolisacharyd (LPS)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>L-8274</td><td></td></tr><tr><td>maska (FFP2)</td><td>VWR, Radnor, Pensylwania, Stany Zjednoczone</td><td>111-0917</td><td></td></tr><tr><td>Mikrometr</td><td>Mitutoyo, Tokio, Japonia</td><td>193-111</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop z obiektywami</td><td>Leica Microsystems CMS GmbH, Niemcy</td><td>DM1000, 294011-082007</td><td></td></tr><tr><td>glikol propylenowy&nbsp;</td><td>Chempur, Piekary <img alt="Równanie 1" src="/files/ftp_upload/67578/67578eq01.jpg" style="margin: auto; "/> Polska</td><td>114489005</td><td></td></tr><tr><td>Żyletka</td><td>VWR, Radnor, Pensylwania, Stany Zjednoczone</td><td>PERS94-0462</td><td></td></tr><tr><td>przezroczyste koszulki dokumentów 30 & Micro; m</td><td>SCHEMAT</td><td>5906961126542</td><td></td></tr><tr><td>trypan blue</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>rurki 15 mL sterylne</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>CLS430055 (Corninig)</td><td></td></tr><tr><td>rurki 50 mL, sterylne</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>CLS430290 (Corning)</td><td></td></tr><tr><td>fiolki, z zakrętką, przezroczyste szkło (tylko fiolka) 22 mL</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>27173</td><td></td></tr><tr><td>Viscoplast Polovis, klej jedwabny, 5x0,0125m</td><td>3M Polska, Nadarzyn, Polska</td><td>7100231620</td><td></td></tr><tr><td>kąpiel wodna&nbsp;</td><td>AJL Electronic, Polska</td><td>LW102</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór ksylazyny (xylapan 20 mg/mL) do zastrzyków</td><td>Vetoquinol Biowet Sp. z o.o., Gorzów Wielkopolski, Polska</td><td>kat.# niedostępny</td><td></td></tr></tbody></table>

model murinowy immunomodulacji indukowanej przez skórę

Murine Model of Epicutaneously-Induced Immunomodulation

Skóra, jako największy organ w ludzkim ciele współpracujący ze środowiskiem zewnętrznym, odgrywa kluczowe funkcje fizjologiczne, w tym (1) chroni organizm przed ksenobiotykami i mikroorganizmami, (2) ułatwia termoregulację, (3) utrzymuje równowagę wody i elektrolitów, (4) syntezuje witaminę D oraz (5) uczestniczy w odporności. Niniejszy artykuł podkreśla kluczowe zaangażowanie skóry w mechanizmy immunologiczne, ukazując jej zdolność do immunomodulacji poprzez tłumienie lub wzmacnianie odpowiedzi immunologicznej. Wcześniejsze wyniki pokazują, że u myszy immunizacja naskórna (EC) antygenem, samodzielnie lub w połączeniu z patogenowymi wzorcami molekularnymi (PAMP), może odpowiednio tłumić lub wzmacniać odpowiedzi immunologiczne. Konkretnie zaobserwowano, że szczepienia EC antygenem mogą hamować odpowiedzi immunologiczne w różnych modelach mysich chorób autoimmunologicznych lub alergicznego kontaktowego zapalenia skóry. Wyniki wskazują, że szczepienia EC antygenem w połączeniu z PAMPs mogą stanowić skuteczną strategię wzmacniającą odporność przeciw patogenom lub łagodząc alergie zależne od limfocytów typu 2 (Th2) wspierających T. Protokół ten określa metodę indukowania tłumienia skóry poprzez nadoskórne zastosowanie antygenu w mysiim modelu ludzkiego alergicznego zapalenia skóry kontaktowego (ACD) z nadwrażliwością kontaktową (CHS), pośredniczonego przez komórki Th1. Można jednak stosować go także do różnych modeli chorób myszy. Artykuł przedstawia immunomodulację indukowaną przez EC jako atrakcyjny model na myszy dla immunoterapii bezigiełowej w różnych zaburzeniach.

Badanie to analizuje, czy antygeny stosowane wyłącznie przez skórę lub w połączeniu z PAMP mogą indukować odpowiednio komórki T lub Tcs, które modulują reakcję CHS. Immunizacja myszy CBA/J za pomocą EC 100 μg TNP-Ig lub TNP-Ig plus 100 μg LPS indukuje odpowiednio komórki Ts lub Tcs. Myszy zostały następnie uwrażliwione na 5% TNCB i poddane temu samemu haptenie 4 dni później. Reakcję oceniono poprzez pomiar obrzęku uszu przed i po wyzwaniu. Każdy eksperyment ma kontrolę ujemną, która służy do oceny niesp...

Badanie pokazuje rolę skóry w modulacji odpowiedzi immunologicznych u myszy poprzez immunizację epikutanną (EC). Szczepienie EC antygenem białkowym może hamować odpowiedzi immunologiczne w przypadku nadwrażliwości kontaktowej lub odwracać supresję indukowaną przez skórę, gdy jest połączona z molekularnymi wzorcami związanymi z patogenem. Szczepienia EC wykazują obiecujące zastosowanie jako skuteczne, bezigłowe podejście do immunoterapii.

Model murinowy immunomodulacji indukowanej przez skórę

The skin, as the largest organ in the human body interfacing with the external environment, plays crucial physiological roles, including (1) protecting ...

Protokół ten określa metodę immunomodulacji indukowanej skórą w mysiim modelu ludzkiego alergicznego zapalenia skóry kontaktowego, pośredniczonej przez limfocyty pomocnicze T-1. Najnowsze badania wykazały, że immunizacja nadoskórna samym antygenem białkowym tłumi odpowiedzi immunologiczne pośredniczone limfocytami T, podczas gdy współpodanie z pompami odwraca supresję wywołaną przez skórę. To podkreśla potencjał strategii opartych na skórze i bez igieł do generowania komórek regulacyjnych do modulacji odpowiedzi immunologicznej.Powszechnie wiadomo, że stopień uszkodzenia naskórka przed podaniem antygenu może decydować o rodzaju wywołanej odpowiedzi immunologicznej. Nasze badanie wykazało, że immunomodulacja indukowana nadskórnie jest pośredniczona przez antygenowo-niespecyficzne komórki supresyjne T oraz antygenowo-specyficzne limfocyty T-kontrasupresorowe. Pomimo powszechnego stosowania szczepienia epikutannego, brak ustandaryzowanych protokołów i zróżnicowane metody stosowania powodują niespójności w wynikach.Nasz protokół odpowiada na wyzwania, oferując powtarzalny i kontrolowany model myszy. Na początek ogol skórę pleców znieczulonej myszy żyletką w dniu zero. Pierwszego dnia przygotuj roztwór o stężeniu 1 miligrama na mililitr antygenu 2, 4, 6-trinitrofenylowej sprzężonej immunoglobuliny myszy w sterylnym DPBS.Chroń antygen przed światłem, przykrywając fiolkę folią aluminiową. Rozmieszaj roztwory tuż przed użyciem w fiolce dwumililitrowej. Roztwór antygenowy należy nałożyć na ogoloną skórę, przykładając plastr gazy o średnicy jednego centymetra kwadratowego, nasączoną 100 mikrolitrami antygenu.Przykryj tę gazę plastikową plastrą o cienkości dwóch centymetrów kwadratowych i zabezpiecz taśmą klejącą na tkaninę. Gdy mysz wyzdrowieje z znieczulenia, należy ją odłożyć do klatki. Piątego dnia, po znieczuleniu myszy, użyj nożyczek bezpieczeństwa z zaokrąglonymi rogami, aby ostrożnie wyciąć tę łatę.Delikatnie zdejmij taśmę klejącą. Po odzyskaniu przytomności i powrocie do klatki pozwól jej swobodnie się poruszać i naturalnie czyścić skórę przez co najmniej cztery godziny. Ósmego dnia, aby przetestować komórki supresorowe T indukowane przez EC w reakcji nadwrażliwości kontaktowej wywołanej Th1, należy nałożyć 150 mikrolitrów świeżo przygotowanego roztworu haptenowego TNCB na ogoloną skórę brzucha znieczulonej myszy, aby indukować komórki efektorowe T.Cztery dni po indukcji komórek efektorowych T oceń reakcję nadwrażliwości kontaktowej, mierząc poziom wyjściowy ucha i aplikując TNCB hapten po obu stronach uszu. Zmierz grubość ucha mikrometrem 24 godziny później. Aby izolować siedmodniowe komórki supresorowe testosteronu lub czterodniowe efektory testosteronu od myszy dawcy, należy zdezynfekować całą okolicę brzucha znieczulonej myszy 70% etanolem.Wykonaj nacięcie o średnicy jednego centymetra, aby odsłonić jamę otrzewną. Za pomocą sterylnych kleszczy izoluj pomocnicze i pachwinowe węzły chłonne oraz śledzionę do rurek wypełnionych sterylnym DPBS uzupełnionym surowicą bydła o 1% płodu, czyli FBS. Usuń węzły chłonne wszystkich dawców w jednej fiolce i śledzionę w innej, a fiolki trzymaj w lodzie.Zgniatać węzły chłonne i śledzionę między zmarzniętymi końcami dwóch szkiełek mikroskopowych, aby stworzyć zawiesinę komórkową. Przecedź zawiesinę komórkową przez sitko o porach 70 mikrometrów. Przepłucz ogniwa 30 mililitrami DPBS z dodatkiem 1% FBS i wiruj w 300g przez 10 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Usuń supernatant i ponownie zawiesij granulkę w jednym do pięciu mililitrach DPBS. Aby policzyć żywotność komórek, wymieszaj 10 mikrolitrów zawiesiny komórkowej z 90 do 990 mikrolitrami trypanowego niebieskiego, w zależności od liczby komórek, i policz komórki za pomocą hemocytometru. Następnie przygotuj mieszankę 1:1 pomocniczych komórek węzłów chłonnych i śledziony, aby uzyskać od 1 do 5 razy 10 do mocy 7 komórek supresorowych 7 T na biorcę w jednym mililitrze DPBS z 1% FBS.Dla komórek efektorowych T przygotuj 7 razy 10 do mocy 7 komórek na biorcę w jednym mililitrze tego samego buforu. Przepłucz izolowane komórki 30 mililitrami DPBS, następnie wiruj je w 300g przez 10 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza i ponownie zawiesij granulki w 200 mikrolitrach DPBS na odbiorcę. Do adopcyjnego transferu należy podać dożylny zastrzyk przygotowanej mieszaniny zawierającej 1 do 5 razy 10 o mocy 7 T komórek supresorowych w 200 mikrolitrach do znieczulonego biorcy, zanim wywoła reakcję nadwrażliwości kontaktowej wywołaną Th1.Tego samego dnia uwrażliw znieczulone myszy, aplikując 150 mikrolitrów HAp10 na wcześniej ogolone miejsce. Cztery dni później oceń reakcję nadwrażliwości kontaktowej, mierząc poziom wyjściowy ucha i aplikując HAp10 po obu stronach uszu. Zmierz grubość ucha 24 godziny później.Przy adopcyjnym transferze, po indukcji i izolacji komórek supresorowych T i efektora T od dawców, należy podzielić komórki efektorowe T na dwie oddzielne fiolki, oznaczone jako grupa testowa TS oraz kontrola CHS. Dodaj komórki supresyjne T do efektorowych komórek T dla grupy testowej TS i delikatnie wymieszaj. Następnie dodaj DPBS uzupełniony tylko 1% FBS do komórek efektorowych T w fiolce kontrolnej CHS i wymieszaj to.Umieść fiolki w kąpieli wodnej o temperaturze 37 stopni Celsjusza na 30 minut, mieszając zawartość delikatnie co pięć minut. Każdą fiolkę przepłucz 30 mililitrami DPBS, a następnie wiruj w 300g przez 10 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Przelej supernatant i ponownie zawiesij granulek w 200 mikrolitrach DPBS na biorcę.Następnie przeprowadź każdą zawiesinę komórkową przez 70-mikrometrowy sitko komórek porowych. Podaj dożylny zastrzyk przygotowanych komórek biorcowym myszom. Ekspozycja naskórna na antygen, niezależnie od wzorca molekularnego związanego z patogenem, wpływa na indukcję i modulację reakcji nadwrażliwości kontaktowej.Immunizacja naskórna antygenem TNP-Ig istotnie tłumiła nadwrażliwość kontaktową, co wykazano mniejszym obrzękiem ucha w porównaniu z grupą kontrolną z nadwrażliwością kontaktową. Współdziałanie z lipopolisacharydem odwróciło supresję, przywracając poziomy obrzęku podobne do kontrolnego. Dożylny transfer komórek węzłów chłonnych i śledziony od myszy tolerowanych TNP-Ig istotnie zmniejszył obrzęk uszu wywołany TNCB u myszy biorcy w porównaniu do kontroli kontaktowej nadwrażliwości, potwierdzając supresyjną rolę komórek supresorowych T.Transfer komórek efektorowych T inkubowanych z komórkami supresorowymi T znacząco tłumił reakcję nadwrażliwości kontaktowej u biorców, podczas gdy sam transfer komórek efektorowych T wywoływał reakcję nadwrażliwości kontaktowej.

murine-model-of-epicutaneously-induced-immunomodulation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ten film demonstruje technikę in vivo oceny testowego antygenu poprzez wywoływanie stanu zapalnego skóry w modelu mysim. Antygen testowy - hapten w roztworze oleju / acetonu - jest miejscowo nakładany na skórę ucha myszy, a stan zapalny skóry ocenia się po odpowiednim czasie.

Technika oceny odpowiedzi immunologicznej na antygen poprzez wywoływanie stanu zapalnego skóry

Ten film pokazuje indukcję ogólnoustrojowego stanu zapalnego u znieczulonej myszy. Wstrzyknięcie zapasów antygenu prątkowego z adiuwantem wyzwala uwalnianie cytokin i miejscowy stan zapalny. Naczynia limfatyczne otwierają się, umożliwiając wnikanie komórek odpornościowych do węzłów chłonnych i aktywację limfocytów T, które uwalniają cytokiny prozapalne, prowadząc do rozległego stanu zapalnego.

Podskórne wstrzyknięcie antygenu bakteryjnego w celu wywołania ogólnoustrojowego stanu zapalnego w modelu mysim

Film demonstruje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u myszy poprzez wstrzyknięcie kombinacji glikoprotein oligodendrocytów mielinowych i inaktywowanych Mycobacterium tuberculosis. Model umożliwia naukowcom badanie mechanizmów chorobowych i testowanie interwencji terapeutycznych.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego w modelu mysim

W tym filmie mysi model stwardnienia rozsianego jest tworzony za pomocą eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE). Myszowi wstrzykuje się emulsję zawierającą peptyd neuronalny i adiuwant, wywołując odpowiedź immunologiczną, która aktywuje autoreaktywne limfocyty T. Następnie podaje się wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (PTX) w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając autoreaktywnym limfocytom T infiltrację mózgu. Ten naciek inicjuje kaskadę...

Przeszczep komórek macierzystych/progenitorowych (NPC) jest bardzo obiecujący w neurologii regeneracyjnej. Systemowe dostarczanie NPC przekształciło się w skuteczny, mało inwazyjny i bardzo skuteczny terapeutycznie protokół dostarczania komórek macierzystych do mózgu i rdzenia kręgowego gryzoni i naczelnych dotkniętych eksperymentalnym przewlekłym uszkodzeniem zapalnym ośrodkowego układu nerwowego.

Systemowe wstrzykiwanie nerwowych komórek macierzystych/progenitorowych u myszy z przewlekłym EAE

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) jest uznanym zwierzęcym modelem stwardnienia rozsianego. Myszy C57BL/6 są immunizowane peptydem 35-55 (MOG) glikoproteiny oligodendrocytów mieliny (MOG) (MOG35-55), co powoduje narastający porażenie wiotkie spowodowane przez autoreaktywne komórki odpornościowe w ośrodkowym układzie nerwowym. Omówione zostaną protokoły indukcji i monitorowania choroby.

Glikoproteina oligodendrocytów mielinowych (MOG35-55) indukowana eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego (EAE) u myszy C57BL / 6

W tym raporcie prezentujemy protokół, który pozwala badaczowi na wygenerowanie mysiego modelu wewnątrzgałkowego zapalenia błony naczyniowej oka. Ten uznany model, częściej określany jako eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie błony naczyniowej oka (EAU), obejmuje wiele aspektów chorób u ludzi. W tym miejscu opiszemy, jak indukować i monitorować postęp choroby za pomocą kilku odczytów.

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie błony naczyniowej oka: wewnątrzgałkowy model zapalny myszy

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia jest jednym z najczęściej stosowanych mysich modeli stwardnienia rozsianego. W obecnym protokole myszy C57BL/6J obu płci są immunizowane peptydem glikoproteinowym oligodendrocytów mielinowych, co skutkuje głównie wznoszącym się niedowładem ogona i kończyn. W tym miejscu omówiono protokół indukcji i oceny EAE.

Modelowanie stwardnienia rozsianego u obu płci: eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia wywołane MOG35-55

Tutaj przedstawiamy protokół ustanawiający mysi model reumatoidalnego zapalenia stawów (RA) poprzez adoptywny transfer limfocytów T CD4+ od myszy SKG, dostarczając szybkiego i niezawodnego narzędzia eksperymentalnego do badania mechanizmów immunologicznych, patologicznego postępu i rozwoju nowych metod leczenia RZS.

Adoptywny model transferowy reumatoidalnego zapalenia stawów u myszy

W tym filmie prezentujemy procedurę aktywacji CD40 i ekspansji mysich limfocytów B z splenocytów myszy C57BL/6, które mogą służyć jako model komórki prezentującej antygen (APC) do badania indukcji odporności.

Mysi model aktywacji limfocytów B przez CD40

Poznaj metodę immunomodulacji indukowanej przez skórę w modelu mysim używanym w badaniach nad alergicznym kontaktowym zapaleniem skóry. Ta bezigłowa strategia pozwala generować komórki regulacyjne i modulować odpowiedzi immunologiczne.

Model murinowy immunomodulacji indukowanej przez skórę

Przeglądaj więcej filmów