Ocena właściwości antyoksydacyjnych i anthelmintycznych ekstraktów Tithonia diversifolia przeciwko jajeczom nicieni pokarmowych z wykorzystaniem testów in vitro

Moje badania koncentrują się na pasożytologii, obecnie badając naturalne składniki roślin w celu zwalczania pasożytów wewnętrznych u małych przeżuwaczy. Chcemy zintegrować tradycyjną wiedzę i alternatywne metody kontroli populacji małych przeżuwaczy na świecie. Obecnie coraz częściej korzystamy z technologii takich jak modelowanie predykcyjne, automatyczne liczniki oraz narzędzia molekularne do wykrywania konkretnych alertów.

Ponadto kilka instytutów na całym świecie opracowuje prototypy szczepionek przeciwko wygineniom Haemonchusa. To duży krok naprzód. Inni wykorzystują silniki organiczne, aby zmniejszyć zależność od zwierząt laboratoryjnych, co jest wartościowe zarówno etycznie, jak i naukowo.

Ogólnie rzecz biorąc, istnieje silny i skoordynowany globalny wysiłek na rzecz rozwoju narzędzi diagnostycznych i badań, mających na celu opracowanie innowacyjnych i trwałych strategii zwalczania pasożytów na całym świecie oraz zapobieganie oporności na leki. Na początek wymieszaj 30 gramów każdej próbki kału z 50 mililitrami roztworu soli nasyconej o gęstości 1,2 grama na mililitr, aby przygotować się do badań kopologicznych. Ujednolic trzy gramy próbki kału w 50 mililitrach roztworu nasyconego chlorku sodu i przefiltruj mieszankę przez gazę.

Obejrzyj preparat pod mikroskopem przy 10-krotnym powiększeniu i policzyj jaja typu strongyle. Oblicz liczbę jajek na gram, korzystając z podane formuły. Przefiltruj kał dwa razy sterylną gazą.

Następnie przefiltruj powstałą zawiesinę i przelej ją do sitka. Umyj materiał zatrzymany na sicie wodą destylowaną i zbieraj wypraną zawiesinę do rurek o pojemności 15 mililitrów. Umieść próbki w wirówce stołowej z obrotowym wirnikem kubełowym i obracaj z częstotliwością około 4 800 G przez pięć minut w temperaturze pokojowej.

Ponownie zawiesij jaja i PBS oraz dostosuj stężenie jaj do 100 na mililitr do przygotowania testu. Przygotować dodatnią kontrolę, rozpuszczając fenbendazol w PBS, aby uzyskać roztwór 1 000 mikrogramów na mililitr. Po dodaniu mieszanki jeden do jednego ekstraktu i zawiesiny jaj, dodaj około 100 jaj na mililitr do każdego dołku płytki 48-dołkowej.

Głównym wyzwaniem tej techniki jest zmienność reakcji na wykluk jaj. Nawet przy przestrzeganiu wszystkich procedur proceduralnych, wykluwanie się może nastąpić między 48 a 72 godzinami, a w niektórych przypadkach wcale. Hamujący efekt ekstraktu Tithonia diversifolia na wykłuwanie jaj wykazał wzorzec zależny od dawki, odzwierciedlony w wartości EC50 wynoszącej 521,6 mikrogramów na mililitr.

Wynik ten wskazuje, że do osiągnięcia 50% hamowania potrzebne są umiarkowane stężenia ekstraktu surowego, co sugeruje obecność związków bioaktywnych o potencjale anthelmintycznym. Przy niskich dawkach 150 do 300 mikrogramów na mililitr hamowanie było minimalne, a zmienność pozostawała niska, co odpowiadało niewystarczającej ekspozycji na zakłócenie embrigenezy lub wylęgania larw. Zmienność osiągnęła szczyt przy dawce pośredniej 1 200 mikrogramów na mililitr, co jest zgodne z nieliniową strefą przejściową krzywej odpowiedzi dawki, gdzie niewielkie różnice biologiczne lub eksperymentalne mogą powodować duże zmiany wyniku.

Jest to oczekiwane w przypadku surowych ekstraktów roślinnych zawierających wiele aktywnych związków. Ogólnie wyniki potwierdzają działanie przeciw wykluciu Tithonia diversifolia ze wzrostem skuteczności przy wyższych dawkach. Rafinacja lub frakcjonowanie ekstraktu może zwiększyć jego skuteczność, dlatego zaleca się dalsze badania fitochemiczne i in vivo, aby ocenić jego przydatność w programach zwalczania pasożytów.

Nasze wyniki pokazują aktywność in vitro, potwierdzając potencjał antypasożytniczy. Są one znaczące odkrycia i potencjalne zastosowania kliniczne poprawiające zdrowie zwierząt. Dodatkowo, niskokosztowe i etyczne podejście tego testu potwierdzają wykorzystanie tradycyjnej wiedzy w kontekście przyszłych badań.

Nasze badanie dostarczało opartych na dokumentach wglądów w metody anthelmintyczne, które potwierdziły ekologiczne elementy wspierające strategie kontroli mające na celu zmniejszenie uzależnienia od narkotyków.