Name: Automatyczne przygotowanie 68Ga GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T14:50:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: Poznaj zautomatyzowaną metodę radiomarkowania [68Ga]GA-3BP-3940 do obrazowania PET mikrośrodowiska guza. Protokół syntezy trwa 20 minut i spełnia wymogi GMP, zapewniając wysoką czystość radiochemiczną oraz gotowość kliniczną.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują Yasmine Soualy, Stéphane Renaud i Élodie Gaven za pomoc w przygotowaniu reakcji radioznakowania przedstawionych w tym manuskrypcie.

Autorzy nie mają żadnych partnerstw komercyjnych ani źródeł finansowania, które skutkowałyby rzeczywistym lub domniemanym konfliktem interesów związanym z tą pracą.

W niniejszej pracy przedstawiono zgodny z GMP protokół automatycznego przygotowania do syntezy [68Ga]Ga-3BP-3940 przy użyciu modułu GAIA i generatora GALIAD. Metoda ta została zaadaptowana z protokołów stosowanych w naszym centrum do znakowania radioaktywnego galu-68 wektorów, takich jak ligandy PSMA44 i inne inhibitory FAP43,46 do klinicznego obrazowania PET, z niewielkimi modyfikacjami.
Proces produ...

W ostatnich latach celowanie w mikrośrodowisko guza (TME) wzbudziło znaczne zainteresowanie w zastosowaniach diagnostycznych i terapeutycznych1. Obfitość typów komórek, cząsteczek sygnałowych i makrocząsteczek macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM) w obrębie TME oferuje szeroki wachlarz potencjalnych celów molekularnych2. Wśród rezydentnych i naciekających komórek gospodarza, fibroblasty związane z nowotworem (CAFs) tworzą odrębną podgrupę fibroblastów w TME, fenotypowo różniącą się od fibroblastów prawidłowych. CAFs odgrywają kluczową rolę w progresji guza, przerzutowaniu, ucieczce immunologicznej i oporności na terapię dzięki unikalnym charakterystykom komórkowym i molekularnym3. Te komórki mezenchymalne wykazują fenotyp aktywowany, charakteryzujący się ekspresją białka aktywacji fibroblastów (FAP). Na poziomie molekularnym CAFs wydzielają złożony zestaw cytokin, chemokin, czynników wzrostu (np. TGF-β, IL-6 i CXCL12) oraz białek ECM (np. kolagenu, fibronektyny), które przebudowują ECM i sprzyjają środowisku pro-tumorigenicznemu4.
Jako białko o wysokiej specyficzności, które ulega nadekspresji i lokalizuje się na powierzchni zewnątrzkomórkowej błony CAF, FAP wykazuje wszystkie cechy wiarygodnego celu molekularnego, szczególnie w zastosowaniach medycyny nuklearnej i radiofarmaceutyki5. W tym kontekście opracowano i szybko wprowadzono do użytku klinicznego chinolinowe małocząsteczkowe inhibitory FAP (FAPI), funkcjonalizowane grupą DOTA6,7,8. W szczególności FAPI-04 i FAPI-46 znakowane radiologicznie galem-68 (emiter β+, t1/2 = 68 min) do obrazowania pozytonową tomografią emisyjną (PET) wykazały znaczną wartość w chorobach włóknistych, kardiologii i onkologii8,9, zwłaszcza w przypadku nowotworów, w których [18F]fluorodeoksyglu koza ([18F]FDG) ma ograniczoną użyteczność10. Jednakże, mimo że ich wkład w obrazowanie onkologiczne i chorób niezłośliwych jest niezaprzeczalny, małocząsteczkowe FAPI wykazują pewne ograniczenia w zastosowaniach terapii celowanej radionuklidami (TRT), szczególnie ze względu na suboptymalny czas retencji wewnątrzguzowej, co może prowadzić do niezamierzonego napromieniowania zdrowych tkanek11. Aby rozwiązać ten problem, zbadano kilka strategii, takich jak projektowanie ligandów wielowartościowych11,12 lub stosowanie terapeutycznych radionuklidów o krótkich okresach półtrwania13,14,15. Opracowano również nowe rusztowania molekularne o wysokim powinowactwie do FAP, które wywołują wysoki stopień internalizacji komórkowej.
Jednym z nich jest pochodna pseudopeptydowa FAP-2286. Zawiera ona sekwencję 7 aminokwasów, w formie cyklicznej, połączoną z chelatorem DOTA za pomocą grupy 1,3,5-benzenotrimetanotiolu16. Wstępne badanie z udziałem ludzi wykazało, że [68Ga]Ga-FAP-2286 wykazuje profil biodystrybucji podobny do [68Ga]Ga-FAPI-46, z nieco wyższym fizjologicznym wychwytem w wątrobie, nerkach i sercu17. W niniejszym badaniu 64 pacjentów, głównie z nowotworami szyi, wątroby, żołądka, trzustki, jajników i przełyku, poddano obrazowaniu PET z użyciem [68Ga]Ga-FAP-2286 w celu oceny stopnia zaawansowania raka lub wykrycia nawrotu: wychwyt [68Ga]Ga-FAP-2286 był wyraźnie wyższy niż w przypadku [18F]FDG w guzach pierwotnych, przerzutach do węzłów chłonnych i przerzutach odległych, co poprawiło kontrast obrazu i wykrywalność zmian. Wszystkie guzy pierwotne były widoczne w badaniu [68Ga]Ga-FAP-2286 PET/CT, podczas gdy w [18F]FDG PET/CT pominięto prawie 20% zmian. W przypadku zajętych węzłów chłonnych, a także przerzutów do kości i narządów wewnętrznych, wskaźniki wykrywalności były wyższe dla [68Ga]Ga-FAP-2286. Inne badanie przeprowadzone na mniejszej grupie 21 pacjentów z różnymi rodzajami nowotworów również wykazało doskonałą czułość tego środka obrazującego, co odzwierciedla efektywność diagnostyczną [68Ga]Ga-FAP-228618. Bardziej specyficzne badania koncentrowały się na pojedynczym typie nowotworu, takim jak rak urothelialny lub rak płuca, ponownie podkreślając wysoki potencjał [68Ga]Ga-FAP-2286 w klinicznym obrazowaniu molekularnym4,5. W zakresie terapii, wstępne badanie analizowało zastosowanie FAP-2286 znakowanego lutetem-177 (emitery β-, t1/2 = 6.7 d) u 11 pacjentów z różnymi postępującymi nowotworami z przerzutami19. Większość pacjentów otrzymała dwa cykle leczenia w odstępach 8 tygodni, a średnia podana dawka na cykl wynosiła 5.8 ± 2.0 GBq [177Lu]Lu-FAP-2286. Lek wykazał przedłużoną retencję wewnątrzguźową, z efektywnym okresem półtrwania wynoszącym około 44 h w przerzutach do kości. Biorąc pod uwagę akceptowalne działania niepożądane, odkrycia te utorowały drogę do szeroko zakrojonych badań klinicznych: bezpieczeństwo i skuteczność [177Lu]Lu-FAP-2286 są obecnie oceniane w badaniu klinicznym fazy 1/2 LuMIERE, sponsorowanym przez Novartis (NCT04939610)7,8. W literaturze udokumentowano dalsze badania na mniejszą skalę9,20, a opublikowano wiele opisów przypadków21,22,23,24,25,26, wykazujących skuteczność i doskonałą tolerancję tej TRT.
Minimalne modyfikacje strukturalne wprowadzone w FAP-2286 doprowadziły do powstania zoptymalizowanego analogu 3BP-3940 (Rysunek 1)27. Choć literatura naukowa na temat tej cząsteczki wektora pozostaje ograniczona, przeprowadzono wczesne badania dotyczące zarówno zastosowań obrazowych, jak i terapeutycznych. Wstępny raport opisuje zastosowanie [68Ga]Ga-3BP-3940 u 18 pacjentów z różnymi stadium końcowymi przerzutowymi nowotworami złośliwymi i wyciąga wniosek, że radiofarmaceutyk ten jest odpowiednim środkiem do obrazowania PET, podkreślając jego doskonały stosunek sygnału z guza do tła oraz bardzo niski wychwyt przez nerki28. W innej pracy pojedynczy pacjent z rakiem trzustki z przerzutami do wątroby otrzymał 150 MBq [68Ga]Ga-3BP-3940 do obrazowania PET, co wykazało intensywny wychwyt w guzie pierwotnym i zmianach przerzutowych29. Ten sam pacjent otrzymał następnie pojedynczą dawkę 9,7 GBq [177Lu]Lu-3BP-3940 w ramach TRT. Leczenie było dobrze tolerowane, bez istotnych zmian w parametrach życiowych lub biologicznych. Inne badanie przedstawiło wstępne wyniki u ludzi w podejściu teranostycznym z wykorzystaniem 3BP-3940: pacjentów wyselekcjonowano za pomocą obrazowania PET z użyciem [68Ga]Ga-3BP-3940, a następnie podano im 3BP-3940 znakowany różnymi izotopami (177Lu, 90Y lub 225Ac), podawane pojedynczo lub w kombinacjach tandemowych (np. 177Lu + 225Ac) w 1–5 cyklach terapeutycznych30. Wyniki obejmowały jedną całkowitą remisję, cztery częściowe remisje, trzy przypadki stabilizacji choroby i 12 progresji choroby. Mediana przeżycia całkowitego w kohorcie (n = 28) wyniosła 9 miesięcy od rozpoczęcia TRT.
<img alt="Struktura chemiczna, związek znakowany 68Ga, schemat cząsteczki organicznej, medycyna nuklearna." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68356/68356fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Struktura chemiczna [68Ga]Ga-3BP-3940. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68356/68356fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
Proces znakowania radioizotopowego 68Ga dla eksperymentalnych radiofarmaceutyków, takich jak FAP-2286 i 3BP-3940, zazwyczaj obejmuje wykorzystanie modułu syntezy w celu zautomatyzowania etapu przygotowania. Warto zaznaczyć, że automatyzacja metody zapewnia powtarzalność procesu i zgodność z zasadami GMP oraz minimalizuje ekspozycję operatora na promieniowanie w porównaniu z metodami przygotowania manualnego31,32,33. W wielu przypadkach taki protokół jest wymagany przez organy regulacyjne jako część dokumentacji produktu leczniczego badanego (IMPD) przed wydaniem centrum zezwolenia na wytwarzanie odpowiedniego eksperymentalnego radiofarmaceutyku34. Do tej pory w literaturze dostępnych jest bardzo mało szczegółowych informacji na temat zautomatyzowanego znakowania 68Ga pseudopeptydów przeciw-FAP29,35,36,37,38. Co więcej, raportowane dane zazwyczaj odnoszą się jedynie do konkretnego modelu syntezatora. Rodzaj zastosowanego generatora 68Ga może również wprowadzać pewne specyficzne uwarunkowania, ponieważ różne dostępne komercyjnie rozwiązania charakteryzują się określonymi objętościami eluatu 68Ga3+ w HCl (zazwyczaj 0.1 M), co może mieć bezpośredni wpływ na warunki zautomatyzowanego znakowania radioizotopowego.
W związku z tym przedstawiamy szczegółowy protokół szybkiego i wydajnego zautomatyzowanego znakowania radiolitycznego pseudopeptydu 3BP-3940 izotopem 68Ga z wykorzystaniem modułu syntezy GAIA V2. Syntetyzator ten opiera się na zastosowaniu zestawu przewodów obejmującego trzy rampy po pięć kolektorów każda, połączonych z pompą perystaltyczną w celu kontrolowania przepływu cieczy. Posiada on również piecyk do fiolek do podgrzewania medium reakcyjnego, kilka sond radioaktywności oraz czujnik ciśnienia do monitorowania tych parametrów w systemie. Choć nie jest on tak powszechny jak niektóre inne modele, automat ten jest rutynowo używany w naszym ośrodku i jest instalowany w coraz większej liczbie placówek31,39,40,41,42,43,44. W niniejszej pracy zastosowano generator GALLIAD 68Ge/68Ga bez wstępnego oczyszczania eluatu 68Ga. Metoda ta została opracowana, aby zapewnić solidne, szybkie i wygodne rozwiązanie do produkcji [68Ga]Ga-3BP-3940, optymalizując jednocześnie ochronę radiologiczną operatorów podczas znakowania. Jest to również pierwszy opisany w tak szczegółowy sposób protokół przygotowania tego radiofarmaceutyku na tym konkretnym modelu syntetyzatora.

<table><tbody><tr><td>Filtry 0,2 i mikro</td><td>VWR</td><td>514-0515</td><td>Do filtracji roztworów buforowych i przeciwutleniaczy oraz końcowego produktu znakowania radioaktywnego</td></tr><tr><td>Acetonitryl do HPLC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>34851-2.5L</td><td>Do kontroli czystości radiochemicznej HPLC</td></tr><tr><td>Octan amonu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>238074</td><td>Do przygotowania jednej z faz ruchomych do kontroli TLC</td></tr><tr><td>Kolumna C18 do HPLC</td><td>VWR</td><td>EQV-3C18-1503</td><td>Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC</td></tr><tr><td>Kalibrowany kalibrator dawki (CRC25)</td><td>Capintec-Do</td><td></td> <td>pomiaru radioaktywności produktu końcowego i różnych składników modułu po syntezie</td></tr><tr><td>Roztwór buforowy cytrynianu, pH 4</td><td>258585000</td><td>Thermofisher Faza ruchoma do kontroli TLC</td><td></td></tr><tr><td>Probówka Eppendorfa 5 ml Biopur</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EP0030119479</td><td>Do przygotowania roztworów buforowych i przeciwutleniaczy</td></tr><tr><td>Przedłużacz (30 cm)</td><td>Vygon</td><td>1159.03</td><td>Do podłączenia generatora do zestawu przewodów</td></tr><tr><td>Generator galu-68</td><td>IRE Elit-Do</td><td></td> <td>wytwarzania in situ [68Ga]chlorek galu</td></tr><tr><td>Licznik gamma (Hidex AMG)</td><td>Hidex-Do</td><td></td> <td>oceny okresu półtrwania i czystości radiochemicznej</td></tr><tr><td>Stacja HPLC</td><td>Shimadzu</td><td>-</td><td>Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC</td></tr><tr><td>Płytki iTLC-SG</td><td>Agilent</td><td>SGI0001</td><td>Do kontroli czystości radiochemicznej</td></tr><tr><td>L-metioniny</td><td>metodą</td> TLC <td>A1340</td><td>Do przygotowania roztworu przeciwutleniacza</td></tr><tr><td>Adapter męski/męski</td><td>Vygon</td><td>893.00</td><td>Do podłączenia generatora do zestawu przewodów</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>320390-1L</td><td>Do przygotowania jednej z faz ruchomych do kontroli TLC</td></tr><tr><td>Igły (21G, Sterican)</td><td>B Braun</td><td>4657543B</td><td>Do przenoszenia roztworu przed znakowaniem radioaktywnym</td></tr><tr><td>Papier pH</td><td>VWR</td><td>85409.600</td><td>Do badania pH produktu znakowanego radioizotopem</td></tr><tr><td>Pipeta 1000 &micro; L (Gilson PIPETMAN)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12346132-1000</td><td>Do precyzyjnego pomiaru i przenoszenia cieczy</td></tr><tr><td>Pipeta 200 &micro; L (Gilson PIPETMAN)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12326132-200</td><td>Do precyzyjnego pomiaru i przenoszenia cieczy</td></tr><tr><td>Końcówki do pipet, 100-1000 &mu; L</td><td>Charles River</td><td>D1000IW</td><td>Do precyzyjnego pomiaru i przenoszenia cieczy</td></tr><tr><td>Końcówki do pipet, 2-200 &mu; L</td><td>Charles River</td><td>D200IW</td><td>Do precyzyjnego pomiaru i transferu cieczy</td></tr><tr><td>Radiochromatograf</td><td>Elysia-Raytest-Do</td><td></td> <td>kontroli czystości radiochemicznej TLC</td></tr><tr><td>Radiosensor do HPLC</td><td>Elysia-Raytest-Do</td><td></td> <td>kontroli czystości radiochemicznej HPLC</td></tr><tr><td>Zestaw odczynników</td><td>ABX</td><td>RT-101</td><td>Dostarcza etanol 60%, NaCl 0,9%, worek WFI, wkład C18, 0,2 i mikro; Filtr końcowy, igły napowietrzające, igła końcowa i fiolka na odpady</td></tr><tr><td>Pojemnik ekranowany</td><td>LemerPax</td><td></td><td>Do tłumienia promieniowania produktu znakowanego radioizotopowo</td></tr><tr><td>Jednorazowa szpatułka z tworzywa sztucznego</td><td>Corning</td><td>3005</td><td>Do przygotowania odczynników</td></tr><tr><td>Octan sodu trójwodny EMPROVE</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.28204</td><td>Do przygotowania buforu reakcyjnego</td></tr><tr><td>Sterylnie zamknięte fiolki (typ szklany 1)</td> <td>Curium</td><td>TC-ELU-5</td><td>Do końcowego kondycjonowania roztworów buforowych, przeciwutleniaczy i znakowania radioaktywnego</td></tr><tr><td>Sterylny zestaw przewodów</td><td>ABX</td><td>RT-01-H</td><td>Do automatycznej syntezy [68Ga]Ga-3BP-3940</td></tr><tr><td>Sterylna woda do nawadniania</td><td>B Braun</td><td>0082479E</td><td>Do przygotowania jednej z faz ruchomych do kontroli TLC</td></tr><tr><td>Moduł syntezy (GAIA)</td><td>Elysia-Raytest</td><td>-</td><td>Do automatycznej syntezy strzykawki [68Ga]Ga-3BP-3940</td></tr><tr><td>(1 ml, niska objętość martwa)</td><td>B Braun</td><td>9166017V</td><td>Do peptydu w kondycjonowaniu buforu i dodawaniu metioniny w NaCl 0,9%</td></tr> <tr><td>Strzykawki (10 ml)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309649</td><td>Do metioniny w NaCl 0,9% i kondycjonujące</td></tr><tr><td>Strzykawki (3 ml)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309658</td><td>Do kondycjonowania</td></tr> <tr><td>metioniny i etanolu 60%Zbiorniki migracyjne TLC</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-212-281</td><td>Do kontroli TLC czystości radiochemicznej</td></tr><tr><td>Kwas trifluorooctowy (odpowiedni do HPLC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>302031-100ML</td><td>Do kontroli czystości radiochemicznej HPLC</td></tr><tr><td>Rurki do licznika gamma</td> <td>-</td><td></td> <td>Do przygotowania testów półtrwania i czystości radiochemicznej</td></tr><tr><td>Kąpiel</td><td>ultradźwiękowa Selecta</td><td>3000683</td><td>Do sonikacji przygotowane roztwory</td></tr><tr><td>Cząsteczka wektorowa (3BP-3940)</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-P10131&nbsp;</td><td>Cząsteczka wektora do znakowania radioizotopowego</td></tr><tr><td>Fiolka do HPLC z wkładką szklaną</td><td>Sigma Aldrich</td><td>29385-u i SU860066</td><td>Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC</td></tr><tr><td>Mieszalnik wirowy</td><td>VWR</td><td>444-5900P</td><td>Do mieszania przygotowanych roztworów</td></tr><tr><td>Woda do HPLC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>34877-2.5L-M</td><td>Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC</td></tr><tr><td>Woda do wstrzykiwań, kolby 10 ml</td><td>Aguettan</td><td>34009 370 641 0 1</td><td>Do roztworów preparat</td></tr></tbody></table>

automatyczne przygotowanie [68ga]ga-3bp-3940 na module syntezy do obrazowania pet mikrośrodowiska guza

Automated Preparation of [68Ga]Ga-3BP-3940 on a Synthesis Module for PET Imaging of the Tumor Microenvironment

Na module syntezy GAIA opracowano szybką, efektywną metodę automatycznego znakowania radioaktywnego galu-68 3BP-3940, sondy do obrazowania molekularnego ukierunkowanej na białko aktywujące fibroblasty do obrazowania mikrośrodowiska guza za pomocą pozytonowej tomografii emisyjnej. Warunki reakcji obejmowały bufor octanowy (stężenie końcowe: 0,1 M), metioninę jako środek przeciwradiolizujący (stężenie końcowe: 5,4 mg/ml) oraz 30 μg 3BP-3940, z ogrzewaniem przez 8 minut w temperaturze 98 °C. Końcowy etap oczyszczania na kartridżu C18 był konieczny do uzyskania znakowanego radioaktywnie produktu o wysokiej czystości. W przeciwieństwie do tego, wyprodukowany przez generator 68Ga był używany bezpośrednio, bez etapu zatężania na kartridżu kationowym. Wyprodukowanie trzech serii walidacyjnych potwierdziło wiarygodność metody, pozwalając na syntezę [68Ga]Ga-3BP-3940 w czasie 22,3 ± 0,6 min o wysokiej czystości radiochemicznej (RCP), oznaczonej zarówno metodą radio-HPLC (99,1% ± 0,1%), jak i radio-TLC (99,2% ± 0,1%). Średnia wydajność radiochemiczna, oparta na wartościach RCP mierzonych metodą radio-HPLC, wynosiła 74,4% ± 3,3%. Wykazano stabilność produktu znakowanego radioizotopem przez okres do 4 godzin po przygotowaniu. Protokół ten zapewnia niezawodną, szybką i wydajną metodologię przygotowania [68Ga]Ga-3BP-3940, którą można łatwo przenieść do warunków klinicznych.

Proces syntezy opracowany na module GAIA umożliwia szybkie znakowanie radioizotopem 68Ga związku 3BP-3940 w czasie 21-22 min. Protokół ten został zaprojektowany do pracy z generatorem 68Ge/68Ga GALLIAD klasy farmaceutycznej, który wytwarza 1,1 mL eluatu 68Ga w 0,1 M HCl. Objętość i molalność buforu reakcyjnego zostały precyzyjnie dostosowane do tej ilości kwasu, aby uzyskać pH reakcji w zakresie od 3,5 do 4, co jest niezbędne dla optymalnego znakowania radioaktywnego<sup class=...

To badanie opisuje zautomatyzowany proces produkcji [68Ga]Ga-3BP-3940 za pomocą syntezatora GAIA V2, do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty. Przedstawiono również wyniki badań kontroli jakości przeprowadzonych na trzech seriach testowych.

Automatyczne przygotowanie [68Ga]GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza

A fast, efficient method has been developed on the GAIA synthesis module for automated gallium-68 radiolabeling of 3BP-3940, a molecular imaging probe ...

Badania te koncentrują się na opracowaniu zautomatyzowanego protokołu etykietowania radiowego do przygotowania galu 68 3BP3940. Związek ten jest eksperymentalnym radiofarmaceutykiem do petaobrazowania mikrośrodowiska guza. Celowanie w mikrośrodowisko guza zyskało w ostatnich latach znaczne zainteresowanie. W dziedzinie radiofarmaceutyków kluczowym wyzwaniem jest opracowanie wydajnych i bezpiecznych protokołów automatycznego etykietowania radiowego do ich przygotowania. Głównym wyzwaniem eksperymentalnym w produkcji eksperymentalnych radiofarmaceutyków znakowanych galem jest wdrożenie protokołu znakowania radiowego, który jest ostatecznie dostosowany zarówno do cząsteczki, która ma być znakowana radiowo, jak i do zastosowanego syntezatora. W dziedzinie galu 68 znakowane eksperymentalne radiofarmaceutyki. Podkreśliliśmy, że staranna optymalizacja warunków zautomatyzowanej reakcji może znacznie usprawnić proces znakowania radiowego dla danego związku. Protokół ten rozwiązuje problem braku automatycznego znakowania radiowego galu 68 dla trzech BP 3940 i oferuje metodę "pod klucz" do jego przygotowania przy użyciu danego syntezatora, umożliwiając syntezę w zaledwie 20 minut. Zgodność z GMP umożliwia znakowanie radiowe farmaceutycznego BP3940, wspierając kliniczne zastosowania tego innowacyjnego radioznacznika.[Narrator] Aby rozpocząć, rozpakuj kopertę kasety z galem 68. Po sprawdzeniu, czy nie ma uszkodzeń, dokręć każde połączenie przynęty na kasecie za pomocą pięciomililitrowej strzykawki z blokadą przynęty wyposażonej w igłę o rozmiarze 21. Pobrać pięć mililitrów absolutnego etanolu z zestawu odczynników i przepuścić go bardzo powoli przez wkład C18. Następnie, za pomocą tej samej strzykawki, pobrać pięć mililitrów wody do wstrzykiwań i bardzo powoli przepuścić ją przez ten sam wkład. Ustaw rampę A zestawu przewodów na module syntezy i przekręć dwa zatrzaski, aby utrzymać go na miejscu. Podłącz wolny koniec pionowej rurki A do igły o rozmiarze 19 i włóż ją do fiolki na odpady. Włożyć igłę odpowietrzającą do fiolki na odpady i ustawić ją do tyłu za osłoniętym pojemnikiem, w którym zostanie zainstalowana fiolka ewakuacyjna, umieszczając filtr 0,22 mikrometra w pozycji czterech. Podłącz poziomą rurkę A one do czujnika ciśnienia znajdującego się w lewym dolnym rogu panelu przedniego modułu. Za pomocą adaptera męskiego na męski podłącz 30-centymetrową linię przedłużającą w poziomej pozycji A w pięciu pozycjach zakończonych filtrem końcowym 0,22 mikrometra i igłą o średnicy 20 milimetrów 80 milimetrów. Wprowadzić igłę o rozmiarze 20 do szczelnie zamkniętej sterylnej fiolki ewakuacyjnej. Następnie dodać igłę napowietrzającą i umieścić fiolkę w osłoniętym pojemniku. Umieść przewód rurowy łączący pionowy A jeden z pionowym C jeden za hakami mocującymi nad rampą B. Połącz poziome kolektory A dwa i b jeden za pomocą krótkiej linii przedłużającej. Po wyjęciu adaptera zamontowanego w pozycji A drugiej, ustaw rampę B na module syntezy i zabezpiecz go poprzez przekręcenie dwóch zatrzasków. Podłącz wkład warunku C 18 do poziomego położenia C dwa, upewniając się, że adapter łączący zawór poziomy B pięć z C dwa jest trzymany po lewej stronie. Ustaw rampę C na module syntezy przed jego zabezpieczeniem poprzez zablokowanie obu zatrzasków. Za pomocą adaptera męskiego na męski podłącz 50-centymetrowe przedłużenie od poziomej C pięć do generatora galu 68. Umieść witrażową fiolkę reakcyjną zestawu rurek w piekarniku modułowym. Następnie ostrożnie umieść rurkę od pionu A pięć do pionu C pięć w pompie perystaltycznej. Zamknij pompę i po sprawdzeniu, czy rurka jest prawidłowo umieszczona, przeprowadź rurkę przez czujnik aktywności po lewej stronie pompy. Podłącz worek o pojemności 250 ml wody do wstrzykiwań do czterech rurek za pomocą adaptera kolców i zawieś worek na wyznaczonym haczyku znajdującym się po prawej stronie modułu. Za pomocą trzymililitrowej, trzyczęściowej strzykawki z blokadą przynęty z igłą o rozmiarze 20 pobrać 1,5 mililitra 10 miligramów na mililitr litra roztworu metioniny. Podłączyć strzykawkę do poziomego C jednego przewodu i zawiesić ją w przeznaczonym do tego gnieździe po prawej stronie modułu. Pozostaw około dwóch mililitrów powietrza między powierzchnią cieczy a uszczelką tłoka strzykawki, aby zapewnić całkowite przeniesienie. Za pomocą jednomililitrowej strzykawki z igłą o rozmiarze 20 należy pobrać 750 mikrolitrów 10 miligramów na mililitr roztworu metioniny i wstrzyknąć go do fiolki z 0,9% chlorkiem sodu po zdezynfekowaniu przegrody. Za pomocą 10-mililitrowej, trzyczęściowej strzykawki z blokadą przynęty z igłą o rozmiarze 20, należy pobrać zawartość fiolki z 0,9% chlorkiem sodu i L-metioniną. Dostosuj głośność do 8,6 mililitra. Usunąć kolec w pozycji B cztery i zamiast tego podłączyć strzykawkę w B cztery. Po zdezynfekowaniu przegrody należy pobrać zawartość fiolki z 60% etanolem za pomocą trzymililitrowej, trzyczęściowej strzykawki z blokadą przynęty z igłą o rozmiarze 20. Po upewnieniu się, że objętość wynosi co najmniej 1,5 mililitra, usunąć kolec z pozycji B pięć i podłączyć strzykawkę w jej miejsce. Za pomocą strzykawki o małej objętości martwej o pojemności jednego mililitra wyposażonej w igłę o rozmiarze 20 należy pobrać 0,25 mililitra 0,8-molowego roztworu buforowego octanu sodu i wstrzyknąć go do fiolki zawierającej 30 mikrogramów trzech BP3940. Rozpuszczaj go w kolejnych cyklach iniekcji i aspiracji. Pobrać 0,25 mililitra roztworu do tej samej strzykawki. Wyjąć igłę i umieścić strzykawkę w pozycji B trzy. Kliknij uruchom syntezę, gdy wszystkie odczynniki zostaną umieszczone na rampach, a wszystkie wymagane informacje zostaną poprawnie zapisane w oprogramowaniu. Przenieść fiolkę z terminalem do odpowiedniej osłoniętej komórki. Aby przygotować go do pomiaru radioaktywności i przygotowania dawki dla pacjenta. Zmierzyć radioaktywność fiolki końcowej za pomocą prawidłowo skalibrowanego kalibratora dos i zapisać preparat na komputerze. Po prawidłowym oznakowaniu fiolki, umieścić ją w odpowiednim osłoniętym pojemniku. Stosując techniki aseptyczne i ochrony przed promieniowaniem, należy pobrać około 0,5 mililitra próbki z fiolki końcowej w celu przeprowadzenia testów kontroli jakości. Zbadaj próbkę wizualnie, aby ocenić klarowność i kolor. Oceń pH, nakładając kroplę produktu na pasek papieru pH. Umieść kroplę roztworu produktu na każdej z dwóch płytek ITLCSG, aby zmierzyć czystość radiochemiczną za pomocą radiowej TLC. Pozwolić, aby płytki rozwinęły się w odpowiednich fazach ruchomych i odczytać je za pomocą chromatografu radiowego. Zintegrować wynikowy chromatogram radiowy, mierząc obszar pod krzywą sygnału produktu i sygnału zanieczyszczenia. Następnie oblicz czystość chemiczną radia zgodnie ze wzorem pokazanym na ekranie, aby zmierzyć czystość chemiczną radia. Za pomocą radiowej HPLC wstrzyknąć około 50 mikrolitrów próbki do fiolki HPLC. Załadować fiolkę do próbnika automatycznego HPLC we właściwej pozycji i rozpocząć sekwencję analizy. Po wstrzyknięciu próbki należy wyjąć fiolkę z próbnika automatycznego przed ponownym umieszczeniem jej w osłoniętym pojemniku, aby zminimalizować narażenie. Na końcu serii należy zintegrować chromatogram radiochromatogramowy, mierząc powierzchnię pod krzywą dla sygnału produktu i zanieczyszczeń, jak pokazano wcześniej, i obliczyć czystość radiochemiczną przy użyciu podanego wzoru. Porównanie skuteczności różnych środków antyradiologicznych w zachowaniu czystości radiochemicznej podczas syntezy surowego galu 3 BP 3940 przedstawiono na tym rysunku. Bez końcowego oczyszczania metionina w ilości 10 miligramów na mililitr osiągnęła najwyższą czystość radiochemiczną wynoszącą 94,7% w porównaniu z kwasem gentyzynowym i kwasem askorbinowym. Produkt końcowy zebrany w fiolce końcowej zawierał średnio ponad 75,1% całkowitej radioaktywności, co potwierdza wysoką wydajność i skuteczne zbieranie. Całkowite straty związane z syntezą wynosiły średnio tylko około 24,9% rozłożone na fiolkę na odpady, kartridże SPE i fiolkę reakcyjną, co wskazuje na niskie wytwarzanie odpadów. Średnia końcowa aktywność związku znakowanego radiowo w trzech partiach testowych wynosiła powyżej 737 megabekereli, co wskazuje na stałą wydajność syntezy.

automated-preparation-68gaga-3bp-3940-on-synthesis-module-for-pet

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Bioortogonalna cykloaddycja Dielsa-Aldera została wykorzystana do stworzenia skutecznej i modułowej, pretargetowanej strategii obrazowania PET dla raka. W niniejszym protokole etapy tej metodologii są opisane w kontekście systemu modelowego wykorzystującego przeciwciało ukierunkowane na raka jelita grubego huA33 i radioligand znakowany 64Cu.

Wykorzystanie bioortogonalnej cykloaddycji Dielsa-Aldera z odwróconym zapotrzebowaniem elektronów do wstępnie ukierunkowanego obrazowania PET

Demonstrujemy półautomatyczną syntezę radiochemiczną [18F]3F4AP i procedury kontroli jakości.

Zautomatyzowana synteza radiochemiczna [18F]3F4AP: nowy znacznik PET do obrazowania chorób demielinizacyjnych

Integrynaα vβ3 jest rodzajem białka adhezyjnego, które ulega silnej ekspresji na aktywowanych komórkach śródbłonka przechodzących angiogenezę. W związku z tym ocena integralności integryny jest bardzo interesująca w onkologii. W tym miejscu przedstawiamy metodę otrzymywania 68radiopeptydów znakowanych Ga oraz metodę oceny jej skuteczności biologicznej.

Przygotowanie peptydu argininowo-glicynowego asparaginianu (RGD) znakowanego 68Ga do angiogenezy

Tutaj prezentujemy protokół do uzyskania 68Ga domieszkowanych rdzeniem nanocząstek tlenku żelaza poprzez szybką syntezę mikrofalową. Metodologia ta pozwala uzyskać nanocząstki PET/(T1)MRI o skuteczności znakowania radioaktywnego wyższej niż 90% i czystości radiochemicznej 99% w 20-minutowej syntezie.

Synteza nanocząstek tlenku żelaza domieszkowanego rdzeniem 68Ga do podwójnej pozytonowej tomografii emisyjnej /(T1)Obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego

Miejsca obrazowania pozytonowej tomografii emisyjnej (PET), które biorą udział w wielu wczesnych badaniach klinicznych, wymagają solidnych i wszechstronnych możliwości produkcji radioznaczników. Na przykładzie radioznacznika [18F] Klofarabiny ilustrujemy, jak zautomatyzować syntezę radioznacznika za pomocą elastycznego radiosyntezatora opartego na kasecie i zwalidować syntezę do użytku klinicznego.

Automatyzacja protokołu syntezy radioznacznika metodą pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) do produkcji klinicznej

Dobrze zróżnicowane guzy neuroendokrynne nadmiernie eksprymują receptory somatostatyny, które mogą być wykorzystane do diagnostyki obrazowej za pomocą radioznakowanego analogu somatostatyny 68Ga-DOTATATE. Protokół ten szczegółowo opisuje znakowanie radioizotopowe 68Ga-DOTATATE, kontrolę jakości, przygotowanie pacjenta i późniejsze obrazowanie PET/CT. Pod uwagę brane jest bezpieczeństwo radiologiczne i ograniczenia czasowe wynikające z krótkiego okresu połowicznego rozpadu wynoszącego 68Ga.

Praktyczny przewodnik po wytwarzaniu i obrazowaniu PET/CT 68GA-DOTATATE w guzach neuroendokrynnych w codziennej praktyce klinicznej

To badanie opracowało nieinwazyjną metodę oceny rozkładu programowanego ligandu śmierci 1 w całym ciele, na podstawie obrazowania tomograficznego emisji pozytonów antagonisty D-dodekapeptydu [68Ga]. Technika ta ma przewagę nad konwencjonalną immunohistochemią i poprawia skuteczność identyfikacji odpowiednich pacjentów, którzy odniosą korzyści z terapii blokującej immunologiczne punkty kontrolne.

Opracowanie znacznika PET znakowanego 68galem peptydu D do obrazowania ekspresji programowanego ligandu śmierci 1

Ta praca opisuje zautomatyzowaną produkcję do 1,7 GBq [68Ga]Ga-FAPI-46 na syntezatorze iPHASE MultiSyn do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty.

Zautomatyzowana radiosynteza [68Ga]Ga-FAPI-46 do rutynowego stosowania klinicznego

Ten artykuł opisuje radiosyntezę, formułowanie, kontrolę jakości nowej sondy znakowanej radioaktywnie (tj. nanoniki NM-02 znakowanej 68Ga) oraz jej zastosowanie do obrazowania PET/CT małych zwierząt w modelu ksenoprzeszczepu.

Radiosynteza, kontrola jakości i obrazowanie pozytonowej tomografii emisyjnej małych zwierząt 68nanocząsteczek znakowanych Ga

Opisano prostą procedurę otrzymywania dijodku samaru (SmI2) w THF. Zaprezentowano rolę dwóch głównych dodatków, mianowicie heksametylofosforamidu (HMPA) oraz Ni(acac)2, w reakcjach katalizowanych samarem na przykładzie reakcji Barbiera z użyciem Sm.

Przygotowanie i zastosowanie dijodku samaru (SmI2) w syntezie organicznej: mechanistyczna rola HMPA i soli Ni(II) w reakcji Barbiera z użyciem samaru

Poznaj zautomatyzowaną metodę radiomarkowania [68Ga]GA-3BP-3940 do obrazowania PET mikrośrodowiska guza. Protokół syntezy trwa 20 minut i spełnia wymogi GMP, zapewniając wysoką czystość radiochemiczną oraz gotowość kliniczną.

Automatyczne przygotowanie [⁶⁸Ga]GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza

Przeglądaj więcej filmów