Name: Fibroblasty związane z rakiem z guzów sutka myszy jako narzędzia do badań molekularnych i obliczeniowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Odkryj analizę fibroblastów związanych z rakiem w guzach sutka myszy przy użyciu metod molekularnych i obliczeniowych. Poznaj rolę czynnika transkrypcyjnego STAT3 w progresji nowotworu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Prace te były wspierane przez Włoskie Stowarzyszenie Badań nad Rakiem (AIRC, IG16930 i IG24851 do V.P.); włoskie Ministerstwo Szkolnictwa Wyższego i Badań Naukowych (MIUR PRIN 2017 i 2022 do V.P.); Fundacja Truus i Gerrita van Riemsdijk, Liechtenstein, darowizna na rzecz V.P.; Region Piemontu (Deflect). A.S. był wspierany przez Włoską Fundację Badań nad Rakiem (FIRC) w ramach stypendium podoktorskiego, a Los Angeles było wspierane przez Fondazione Umberto Veronesi.

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów.

W tym badaniu przedstawiamy zoptymalizowane protokoły unieśmiertelnienia mysich CAF i scharakteryzowania ich działania pronowotworowego zarówno in vitro , jak i in vivo. Zamiast selektywnie izolować określone podtypy CAF na podstawie ekspresji markerów, zdecydowaliśmy się zachować całą populację komórek, aby zachować heterogeniczność. Komórki zostały funkcjonalnie scharakteryzowane jako całość, a ich profile ekspresji genów zostały przeanalizowane w celu uchwycenia ich różnorodności. Unieśmiertelnienie ...

Rak piersi (BC) jest najczęstszym nowotworem złośliwym dotykającym kobiety i charakteryzuje się znaczną niejednorodnością molekularną, z odrębnymi profilami molekularnymi kierującymi diagnozą, decyzjami dotyczącymi leczenia i rokowaniem. Mikrośrodowisko guza (TME) jest również wysoce niejednorodne i odgrywa kluczową rolę w progresji guza, odporności i wynikach leczenia.
Fibroblasty związane z rakiem (CAF) są najliczniejszym typem komórek w TME i kluczowymi regulatorami rozwoju nowotworu. Przyczyniają się do odkładania i przebudowy macierzy zewnątrzkomórkowej, angiogenezy, unikania odpowiedzi immunologicznej i opornościna leki 1,2,3,4,5,6. CAF wpływają na komórki nowotworowe poprzez bezpośredni kontakt komórka-komórka, uwalnianie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych7 i wydzielanie różnych rozpuszczalnych czynników 2,5 w celu promowania wzrostu guza, inwazji i oporności na terapię 8,9,10. Rzeczywiście, sygnatury genów związane ze zrębem mają wartość predykcyjną dla progresji BC i odpowiedzi na terapię oraz są związane z opornością na chemioterapię 11,12,13,14. Jednak pomimo istotnych dowodów sugerujących, że CAF są atrakcyjnym celem terapeutycznym, badania kliniczne ukierunkowane na te komórki w dużejmierze zakończyły się niepowodzeniem. Jednym z głównych wyzwań jest ograniczone zrozumienie mechanizmów molekularnych, za pomocą których CAF modulują zachowanie guza. Ostatnie postępy w jednokomórkowych i przestrzennych analizach transkryptomicznych dostarczyły głębszego wglądu w złożoność CAF w BC 16,17,18,19,20,21, umożliwiając identyfikację odrębnych podtypów CAF z określonymi programami funkcjonalnymi 16,22 i dodatkowo podkreślając ich złożoność i plastyczność23.
Genetycznie modyfikowane modele myszy (GEMM), w których onkogeny lub geny supresorowe są nadmiernie eksprymowane lub inaktywowane, są dobrze ugruntowanymi modelami do badania raka u ludzi 24,25,26,27. W porównaniu z modelami syngenicznymi, które obejmują przeszczepianie komórek nowotworowych u myszy typu dzikiego 23,28, GEMM dokładniej naśladują wieloetapową progresję BC i interakcje między komórkami rakowymi a TME. Manipulowanie aktywnością CAF w GEMM było jednak wyzwaniem ze względu na ich niejednorodność, co utrudnia celowanie we wszystkie podtypy CAF bez wpływu poza cel na inne komponenty zrębu lub nabłonka5. Połączenie GEMM z uzupełniającymi podejściami, takimi jak manipulacja CAF in vitro, może pomóc w generowaniu modeli komórkowych do eksperymentów z utratą funkcji zarówno w warunkach in vitro, jak i in vivo. Jednak opracowanie stabilnych modeli komórkowych w celu zbadania funkcjonalnych ról określonych genów pozostaje wyzwaniem ze względu na szybki początek starzenia się.
W tym miejscu opisujemy solidną platformę do stabilnych eksperymentów z utratą funkcji w CAF, a następnie funkcjonalnej analizy in vitro i in vivo oraz profilowania transkrypcyjnego zmodyfikowanych komórek; podejście to oferuje kompleksową strategię analizy funkcjonalnego znaczenia genów wyrażających ekspresję CAF w raku piersi, z korzyściami w zakresie swoistości, odtwarzalności i zdolności adaptacyjnych w porównaniu z istniejącymi metodami. Podejście to zostało również uzupełnione przez nowatorskie narzędzie internetowe do badania transkryptomów mikrowypreparowanych laserowo przedziałów zrębu i nabłonka ludzkich guzów piersi, umożliwiając porównania międzygatunkowe i ułatwiając generowanie hipotez na podstawie danych pochodzących z badań ludzkich.

<table><tbody><tr><td>1Kb plus drabinka DNA</td><td>ThermoFisher Naukowy</td><td>10787018</td><td></td></tr><tr><td>Płytka 24-dołkowa</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>Płytka 96-dołkowa</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Kwas octowy</td><td>Sigma Aldirch</td><td>695092</td><td></td></tr><tr><td>WiekI-HF</td><td>Laboratoria biologiczne w Nowej Anglii</td><td>Czynnik R3552</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C</td></tr><tr><td>Betadine (Betadyna)</td><td>Meda Pharma</td><td>23907076</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml; rker Komora zliczająca&nbsp;</td><td>Firma VWR</td><td>40443703</td><td></td></tr><tr><td>Kauteryzacja Low Temp FineTip Disp</td><td>Keeler</td><td>AX10339KL</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka</td><td>Eppendorf powiedział:</td><td>Zobacz materiał 5810R</td><td></td></tr><tr><td>Rurka stożkowa 15 ml</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Probówka stożkowa 50 ml</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Mikroprobówki Cryopure 2 ml</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Kryształowy fiolet</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Zobacz materiał C0775 powiedział:</td><td>Przechowywać w RT, używać w dygestorium&nbsp;</td></tr><tr><td>Płytka hodowlana o średnicy 100 mm&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>833902</td><td></td></tr><tr><td>Płytka hodowlana o średnicy 60 mm&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>ddH20 powiedział:</td><td>Domowej roboty</td><td></td><td>Przechowywać w RT, używać w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Suwmiarka cyfrowa</td><td>Preciva</td><td>02-301-2</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop cyfrowy</td><td>Księga Leica</td><td>DM6B (Biblioteka DM6B)</td><td></td></tr><tr><td>Dimetylosulfotlenek</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Zobacz materiał D8418</td><td>Zastosowanie w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Zmodyfikowany Orzeł" s Średni (DMEM)</td><td>Gibco (firma Gibco)</td><td>11965092</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>EcoRI-HF</td><td>Laboratoria biologiczne w Nowej Anglii</td><td>Czynnik R3101</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C</td></tr><tr><td>Kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>E6758 powiedział:</td><td>Przechowywać w RT, używać w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>Gibco (firma Gibco)</td><td>16000044</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Końcówki z filtrem 10 i mikro; L</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki z filtrem 100 &micro; L</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki z filtrem 1000 &micro; L</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki z filtrem 20 i mikro; L</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki z filtrem 200 &micro; L</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &mikro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,45 &mikro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>831826</td><td></td></tr><tr><td>Cienkie nożyczki</td><td>2Biol</td><td>1406009</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcz</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>Geneticin (Genetyka)</td><td>Gibco (firma Gibco)</td><td>10131035</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Odczynnik do transfekcji Lipofectamine 2000</td><td>ThermoFisher Naukowy</td><td>11668019</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Komory inwazyjne Matrigel z 8 &mu; m Membrana PET&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Czytnik mikropłytek (absorbancja 600 nm)</td><td>Preparat Promega</td><td>Zobacz materiał GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Mikroprobówki 1,5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Optymam</td><td>Gibco (firma Gibco)</td><td>31985047</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>158127</td><td>Przechowywać w RT, używać w dygestoriach</td></tr><tr><td>pBABE-neo largeTcDNA&nbsp;</td><td>Addgene powiedział:</td><td>1780</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>pCL-Ampułka</td><td>Novus Biological&nbsp;</td><td>18746853</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>pCMV-R8.74</td><td>Addgene powiedział:</td><td>22036</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>pCMV-VSVG&nbsp;</td><td>Addgene powiedział:</td><td>8454</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna (Pen Strepto, 10 000 &mu; g/ml)&nbsp;</td><td>Gibco (firma Gibco)</td><td>15140122</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Mikroskop z kontrastem fazowym&nbsp;</td><td>Olimpia&nbsp;</td><td>Zobacz materiał BX42</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanami&nbsp; (PBS)</td><td>Domowej roboty</td><td></td><td>Przechowywać w RT, używać w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>pLKO.1-Puro&nbsp;</td><td>Addgene powiedział:</td><td>10878</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Roztwór poli-L-lizyny</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Zobacz materiał P8920 powiedział:</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Dichlorowodorek puromycyny z&nbsp; Streptomyces alboniger</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Zobacz materiał P8833 powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Bufor rCutSmart&nbsp;</td><td>Laboratoria biologiczne w Nowej Anglii</td><td>Zobacz materiał B6004</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C</td></tr><tr><td>Golarka dla gryzoni</td><td>Aesculap powiedział:</td><td>Zobacz materiał GT416</td><td></td></tr><tr><td>Instytut Pamięci Roswell Park (RPMI)</td><td>Gibco (firma Gibco)</td><td>61870010</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & deg; C, użyj w okapie biologicznym</td></tr><tr><td>Okrągłe waciki do spragnienia</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z744127</td><td></td></tr><tr><td>Skalpel</td><td>Gima</td><td>27041</td><td></td></tr><tr><td>Secura Semi Micro Balance</td><td>Sartorius Sartorius (Wyspa Sar</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna 10 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna 2 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna 25 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna 5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt powiedział:</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>Szwy 5-0</td><td>Etyka</td><td>1866G</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka 10 ml</td><td>Pentaferte</td><td>00202250E14</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka 5 ml</td><td>Pentaferte</td><td>Numer katalogowy: 00202250E12</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka Omnican Insulina 1 ml</td><td>Braun</td><td>9151125S</td><td></td></tr><tr><td>Anatomiczny</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Wkładki Transwell 8 i mikro; m pore&nbsp;</td><td>Sokół</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Wkłady Transwell Matrigel 8 i mikro; m pore&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna-EDTA (0,5%), bez czerwieni fenolowej</td><td>Gibco (firma Gibco)</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Koncentrator odśrodkowy Vivaspin 20 MWCO 10 000 Da&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td></td></tr></tbody></table>

fibroblasty związane z rakiem z guzów sutka myszy jako narzędzia do badań molekularnych i obliczeniowych

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies

Liczne badania potwierdziły kluczową rolę mikrośrodowiska guza (TME) we wzroście i agresywności raka piersi (BC). Fibroblasty związane z rakiem (CAF), dominujący składnik komórkowy TME, znacząco wpływają na jego zachowanie poprzez złożone przesłuchy z komórkami nowotworowymi i innymi komórkami zrębu w odpowiedzi na sygnały aktywujące pochodzące z nowotworu. Modele mysie są szeroko stosowane do badania mechanizmów leżących u podstaw roli CAF w progresji BC, ponieważ pozwalają na ocenę endogennego TME i ocenę zaangażowania układu odpornościowego za pomocą badań ksenoprzeszczepu syngenicznego. W tym miejscu przedstawiamy zestaw metod hodowli CAF pochodzących z BC, manipulowania ekspresją genów i oceny ich funkcji pronowotworowych przy użyciu podejść zarówno in vitro , jak i in vivo . Opisujemy również protokoły profilowania ekspresji genów CAF i analizy transkryptomicznej, wraz z procedurą obliczeniową do wnioskowania o sygnaturach transkrypcyjnych w guzach pierwotnych przy użyciu publicznie dostępnych masowych danych sekwencyjnych RNA. Dodatkowo wprowadzamy przyjazne dla użytkownika, internetowe narzędzie do analizy transkryptomów składników zrębu i nabłonka z mikrowypreparowanych laserowo guzów BC. Ostatecznie metody te mogą dostarczyć cennych informacji na temat mechanizmów molekularnych kierujących interakcjami między CAF a nowotworem i mają potencjał w zakresie identyfikacji nowych celów terapeutycznych.

In vitro ocena aktywności CAF-ów 
Wkład fibroblastów towarzyszących nowotworom (CAF) pochodzących z guzów piersi w agresywne cechy raka piersi (BC) badano z wykorzystaniem unieśmiertelnionych CAF (iCAF) wygenerowanych zgodnie z krokiem 3. iCAF poddano superaktywacji zgodnie z opisem w kroku 6, a następnie inkubowano w sDMEM w warunkach głodzenia w celu zebrania ich pożywki warunkowej (CM), której użyto do traktowania komórek 4T1 przez 48 h (patrz krok 7.1). Następnie po tym...

Protokół ten przedstawia metody hodowli, manipulowania i analizowania mysich CAF, w tym testy funkcjonalne in vitro/in vivo , transkryptomikę i analizę obliczeniową. Ponadto opisano w nim platformę internetową opracowaną w celu analizy publicznie dostępnych transkryptomów mikrowypreparowanych składników zrębu i nabłonka z kolekcji ludzkich nowotworów raka piersi.

Fibroblasty związane z rakiem z guzów sutka myszy jako narzędzia do badań molekularnych i obliczeniowych

A compelling body of research has confirmed the critical role of the tumor microenvironment (TME) in the growth and aggressiveness of breast cancer (BC). ...

Nasze badania badają, w jaki sposób fibroblasty związane z rakiem kształtują progresję raka piersi przy użyciu podejść molekularnych, in vitro, in vivo i obliczeniowych w celu przeanalizowania mechanizmów molekularnych i identyfikacji potencjalnych celów terapeutycznych. Najnowsze narzędzia, takie jak organoidy nowotworowe, transkryptomika pojedyncza komórka i transkryptomika przestrzenna, zmieniają sposób, w jaki możemy modelować mikrośrodowisko guza, umożliwiając precyzyjne i dynamiczne zrozumienie zrębu guza lub udarów. Badania nad rakiem borykają się z niejednorodnością mikrośrodowiska i złożonością zrębu i nabłonka.Resekcja, której resekcja zarówno in vitro, jak i na modelu mysim może ujawnić kluczowe mechanizmy molekularne sprzyjające interwencjom terapeutycznym. Ustaliliśmy kluczową rolę czynnika transkrypcyjnego STAT3 i jego genów docelowych w pośredniczeniu w bronchogennych funkcjach fibroblastów związanych z rakiem w guzach piersi. Wykorzystamy rusztowania pochodzące od pacjentów, aby zweryfikować biologiczne i kliniczne znaczenie naszych odkryć w organizmie ludzkim, w tym indukcję oporności na leki.Aby rozpocząć, zdobądź odczynniki i sprzęt laboratoryjny wymagany do eksp

cancer-associated-fibroblasts-from-mouse-mammary-tumors-as-tools-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

W niniejszym raporcie prezentujemy system izolacji i hodowli komórek donora z gruczołu mlekowego myszy oraz ich ortotopowego przeszczepienia do myszy biorców w celu analizy interakcji zrąb-nabłonek podczas rozwoju guza piersi.

Przeszczepienie komórek zrębowych i komórek raka do gruczołu mlekowego u myszy C57BL/6J

Fibroblasty związane z rakiem (CAFs), bogate w myofibroblasty obecne w zrębie guza, odgrywają kluczową rolę w stymulowaniu progresji nowotworu. Opracowaliśmy model ksenoprzeszczepu guza z jednoczesną implantacją w celu eksperymentalnego generowania CAF z ludzkich fibroblastów gruczołu piersiowego. Protokół opisuje sposób tworzenia myofibroblastów CAF, które nabywają zdolności do promowania tumorigennezy.

Doświadczalne generowanie fibroblastów towarzyszących rakowi (CAF) z ludzkich fibroblastów gruczołu piersiowego

Fibroblasty związane z nowotworem (CAFs) wspomagają inicjację, wzrost i progresję guza poprzez sygnalizację promującą proliferację, angiogenezę i stan zapalny. W niniejszej pracy opisujemy metodę izolacji czystych populacji prawidłowych fibroblastów oraz CAFs z pobranych na świeżo tkanek mysich i ludzkich za pomocą sortowania komórek, wykorzystując PDGFRα jako marker powierzchniowy.

Izolacja fibroblastów prawidłowych i związanych z nowotworem z tkanek świeżych za pomocą sortowania komórek aktywowanego fluorescencją (FACS)

Tutaj opisujemy model i podejście do badania funkcji makrofagów pęcherzyków płucnych w przerzutach raka. Aby zademonstrować rolę tych komórek w przerzutach, wykorzystano syngeniczny (4T1) model raka piersi w połączeniu z wyczerpaniem makrofagów pęcherzykowych za pomocą liposomów klodronianowych.

Badanie roli makrofagów pęcherzykowych w przerzutach raka piersi

Dostępny jest protokół jednoczesnego wstrzykiwania komórek rakowych i fibroblastów oraz monitorowania wzrostu guza w czasie. Protokół ten można wykorzystać do zrozumienia molekularnych podstaw roli fibroblastów jako regulatorów wzrostu guza.

Mysi model do badania roli fibroblastów związanych z rakiem we wzroście guza

Ten artykuł ma na celu dostarczenie protokołu izolacji i hodowli pierwotnych fibroblastów związanych z rakiem z syngenicznego mysiego modelu potrójnie ujemnego raka piersi oraz ich zastosowanie w badaniach przedklinicznych nowych nanocząstek zaprojektowanych do celowania w mikrośrodowisko guza.

Izolacja pierwotnych fibroblastów związanych z rakiem z syngenicznego mysiego modelu raka piersi w celu zbadania celowanych nanocząstek

Wielokomórkowe sferoidy guza 3D zostały przygotowane z komórkami gruczolakoraka płuc, fibroblastami i monocytami, a następnie wyizolowano fibroblasty związane z rakiem (CAF) z tych sferoidów. Izolowane CAF porównano z normalnymi fibroblastami w celu oceny zdrowia mitochondriów poprzez badanie potencjału transbłonowego mitochondriów, reaktywnych form tlenu i aktywności enzymatycznej.

Ocena zdrowia mitochondriów w fibroblastach związanych z rakiem wyizolowanych z wielokomórkowych sferoid 3D guza płuc

Opracowaliśmy metodę skutecznego usuwania, przetwarzania, cięcia i barwienia, w celu oceny histopatologicznej, tkanki sutka, która pierwotnie była utrwalona na szkiełkach jako całe wierzchowce. Metoda ta może sprzyjać gromadzeniu i ocenie całych wierzchowców gruczołu mlekowego w badaniach wytycznych dotyczących badań reprodukcyjnych i rozwojowych.

Cięcie gruczołu sutkowego w całości w celu identyfikacji zmian chorobowych

Celem tej metodologii jest identyfikacja komórek macierzystych raka (CSC) w liniach komórek rakowych i pierwotnych próbkach guzów ludzkich za pomocą protokołu formowania kuli, w solidny sposób, przy użyciu testów funkcjonalnych i charakterystyki fenotypowej za pomocą cytometrii przepływowej i Western blot.

Pozyskiwanie kulek komórek macierzystych raka z guzów ginekologicznych i raka piersi

Celem tego protokołu jest stworzenie modelu 3D in vitro do badania różnicowania fibroblastów związanych z rakiem (CAF) w środowisku podobnym do masy guza, które mogą być adresowane w różnych systemach analizy, takich jak immunofluorescencja, analiza transkrypcyjna i obrazowanie żywych komórek.

Model sferoidalny 3D jako bardziej fizjologiczny system do różnicowania i inwazji fibroblastów związanych z rakiem w badaniach in vitro

Odkryj analizę fibroblastów związanych z rakiem w guzach sutka myszy przy użyciu metod molekularnych i obliczeniowych. Poznaj rolę czynnika transkrypcyjnego STAT3 w progresji nowotworu.

Fibroblasty związane z rakiem z guzów sutka myszy jako narzędzia do badań molekularnych i obliczeniowych

Przeglądaj więcej filmów