Name: Wyrafinowany mysi model idiopatycznego włóknienia płuc (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: Poznaj ulepszoną metodę wywoływania włóknienia płuc u myszy poprzez powtarzalne podawanie bleomycyny drogą krtaniowo-gardłową. Model ten lepiej odwzorowuje patologię idiopatycznego włóknienia płuc przy niższej śmiertelności zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Badania te zostały sfinansowane przez Shenzhen Scienceand Technology Program (grant #JCYJ20230807110800002 dla CL), Natural Science Foundation of Guangdong (#2024A1515011087 do CL) oraz Science and Technology Program of Guangzhou (# 202201020299 do Z.L.).

Wykorzystano tu samce myszy C57BL/6 w wieku 4-6 miesięcy. Wszystkie eksperymenty na myszach przeprowadzono zgodnie z protokołem zwierzęcym zatwierdzonym przez Centrum Badań nad Zwierzętami Laboratoryjnymi Uniwersytetu Sun Yat-sen (numer zgody SYSU-IACUC-MED-2021-B0076). Badanie było zgodne z wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami określonymi przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Wykorzystania Zwierząt Uniwersytetu Sun Yat-sen.
1. Przygotowanie do eksperymentu
<ol>
	<li>Odczynniki: Zdobądź bleomycynę w proszku, sól fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) i izofluran.</li>
	<li>Wyposażenie: Zaopatrz się w końcówki do pipet (200 μl), pipetę, stojak do wstrzykiwań tchawicy, pudełko na końcówki do pipet o pojemności 1 ml i waciki nasączone alkoholem.</li>
</ol>
2. Procedura doświadczalna
<ol>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy bleomycyny o stężeniu 1,5 mg/ml, stosując PBS jako rozpuszczalnik. Porcję 600 μl roztworu podstawowego rozlać do probówek mikrowirówek o pojemności 2 ml i rozcieńczyć 1200 μl PBS do uzyskania 3-krotnego rozcieńczenia (stężenie końcowe: 0,5 mg/ml). UWAGA: Roztwór podstawowy bleomycyny przechowywano w temperaturze -20 °C i pozostawał stabilny przez okres do 3 miesięcy.</li>
	<li>Zważ każdą mysz przed podaniem jamy ustnej i gardła. Oblicz wymaganą objętość roztworu bleomycyny na podstawie masy ciała myszy. Dawka wynosi 1,5 mg/kg, a objętość wstrzyknięcia (w μl) jest równa masie myszy (w gramach) pomnożonej przez 3 (ze względu na 3-krotne rozcieńczenie).</li>
	<li>Umieść mysz w komorze indukcyjnej znieczulenia izofluranem. Monitoruj mysz, aż jej oddech zwolni, wskazując na odpowiednie znieczulenie, a następnie natychmiast ją usuń. UWAGA: Przejście od przyspieszonego oddechu do bradypnei oznacza udane znieczulenie. Natychmiastowe usunięcie po zaobserwowaniu bradypnei ma kluczowe znaczenie dla zapobieżenia przedawkowaniu środka znieczulającego. Przedwczesne usunięcie podczas przyspieszonego oddechu może prowadzić do pobudzenia zwierząt podczas kolejnych zabiegów.</li>
	<li>Przymocuj mysz do stojaka do wstrzykiwań tchawicy, zaczepiając jej zęby. Delikatnie wyciągnij język za pomocą kleszczy i przytrzymaj go kciukiem i palcem wskazującym (unikaj używania kleszczy, aby zminimalizować dyskomfort). Zakryj nos myszy środkowym palcem, aby zapewnić prawidłowe podawanie.</li>
	<li>Za pomocą końcówki do pipety o pojemności 200 μl odessać obliczoną objętość rozcieńczonego roztworu bleomycyny, a następnie powoli podawać roztwór bleomycyny do jamy ustnej i gardła myszy bez głębokiego wkładania końcówki pipety. Takie podejście minimalizuje uszkodzenia tkanek i zapewnia skuteczne dostarczanie.</li>
	<li>Posłuchaj wyraźnego bulgotania, wskazującego na pomyślne wniknięcie roztworu do płuc. Gdy dźwięk ucichnie, zdejmij mysz z podstawki i umieść ją na poduszce grzewczej w celu odzyskania. UWAGA: Charakterystyczny bulgoczący dźwięk służy jako wiarygodny wskaźnik udanego dostarczania bleomycyny do jamy ustnej gardła. Brak tej wskazówki akustycznej sugeruje osadzanie się przełyku, w którym to momencie badany jest wykluczony z kolejnych procedur eksperymentalnych z powodu nieudanego podania.</li>
	<li>Procedurę podawania doustno-gardłowego należy powtórzyć 7 dni po podaniu dawki początkowej. UWAGA: W ciągu 60-dniowego okresu po bleomycynie codziennie monitoruj myszy pod kątem: utraty masy ciała (>20% masy wyjściowej), niewydolności oddechowej (utrudnione oddychanie, przyspieszony oddech >160 uderzeń na minutę), spadku aktywności (garbienie się, izolacja).</li>
</ol>
3. Pobieranie tkanek
<ol>
	<li>Poddaj myszy eutanazji przez zwichnięcie szyjki macicy w określonych punktach czasowych (14 i 60 dni po ostatecznym podaniu bleomycyny).</li>
	<li>Wykonaj sternotomię w linii środkowej, aby odsłonić klatkę piersiową. Uszek lewego przedsionka został chirurgicznie nacięty. Następnie przeprowadź perfuzję płuc przez prawą komorę za pomocą 10 ml lodowatego PBS, aby usunąć krążące krwinki.</li>
	<li>Kanniuluj tchawicę i napompuj płuca 1% paraformaldehydem (PFA), aby zapewnić całkowite utrwalenie tkanek.</li>
	<li>Wyciąć płuca i zanurzyć je w 1% PFA na 1 godzinę w temperaturze pokojowej, aby umożliwić prawidłowe utrwalenie.</li>
	<li>W celu przetworzenia tkanek należy płukać utrwalone tkanki w PBS 3x przez 5 minut każda. Odwadniaj tkanki sekwencyjnie za pomocą serii stopniowanych etanoli: 70% etanolu, 95% etanolu i 100% etanolu, zapewniając całkowite odwodnienie na każdym etapie. Po odwodnieniu oczyść tkanki z ksylenu przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Następnie zanurzyć tkanki w stopionym wosku parafinowym w temperaturze 60 °C przez co najmniej 2 godziny lub do pełnej infiltracji. Na koniec należy przeciąć osadzone tkanki na grubość 7 μm za pomocą mikrotomu obrotowego.</li>
</ol>
4. Ocena próby
<ol>
	<li>Wykonaj barwienie hematoksyliną i eozyną (H&E) oraz trichromem Massona, aby ocenić nasilenie zwłóknienia.<ol>
		<li>W przypadku barwienia H&E należy przeprowadzić sekwencyjną deparafinizację ksylenu przez 5 minut, 2x i stopniowane ponowne uwodnienie etanolu 100% etanolem przez 5 minut, a następnie 100% etanolem przez 1 minutę, następnie 95% etanolem przez 1 minutę, a na końcu 80% etanolem przez 1 minutę. Spłucz wodą destylowaną. Bejcować hematoksyliną przez 5 min, następnie spłukać 3x wodą z kranu i moczyć przez 5 min. Następnie zanurz 80% etanol przez 1 minutę i przeciwbarwienie eozyną przez 45 s. Wykonaj odwodnienie za pomocą stopniowanego etanolu przy użyciu 95% etanolu przez 5 zanurzeń, następnie 100% etanolu przez 5 zanurzeń, a na koniec zanurz w 100% etanolu na 2 minuty. Oczyścić ksylenem, zanurzając go na 5 minut, 2x, a następnie wykonać montaż neutralnego balsamu.</li>
		<li>W przypadku barwienia Massona, po odparafinowaniu, jak wykonano w kroku 4.1.1, przepłucz szkiełka w ddH2O i zabarwij Pąsem S-fuchsin przez 5 s, a następnie 0,2% roztwór słabego kwasu (kwas octowy/woda) płucz przez 1 min. Przeprowadzić różnicowanie w roztworze kwasu fosfomolibdenowego przez 5 minut, a następnie płukać słabym kwasem przez 1 minutę, następnie barwienie przeciwstawne błękitem anilinowym przez 1 minutę i końcowe płukanie słabym kwasem przez 1 minutę. Odwodnić sekcje przez sortowany etanol, zaczynając od 95% etanolu przez 2-3 s, a następnie etanol absolutny przez 5-10 s, 2x. Bezbarwny w ksylenie i zamontowany za pomocą żywicy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przeprowadź barwienie immunohistochemiczne (IHC) i immunofluorescencyjne (IF) dla markerów takich jak α-SMA, KRT5 i ΔN-p6314,15 w celu oceny przebudowy zwłóknienia i nabłonka.<ol>
		<li>W przypadku barwienia immunohistochemicznego przeprowadzić odparafinowanie i ponowne uwodnienie skrawków tkanek zatopionych w parafinie przed pobraniem antygenu we wrzącym 0,1 M buforze cytrynianu sodu (pH 6,0) zawierającym 0,5% Tween-20 przez 90 s. Stłumić aktywność endogennej peroksydazy za pomocą 3%H2O2, a następnie przepuszczalność błony za pomocą 0,5% Triton X-100/PBS i niespecyficzne blokowanie. Inkubować w przeciwciałie pierwszorzędowym w temperaturze 4 °C przez noc, a następnie przez 1 godzinę inkubować w temperaturze pokojowej z dopasowanymi gatunkowo przeciwciałami drugorzędowymi i 30-minutową koniugację streptawidyny z HRP. Do rozwoju chromogennego należy użyć podłoża Vector SK-4100 DAB z barwieniem przeciwstawnym hematoksyliny, odwadnianiem etanolu i mocowaniem neutralnego balsamu, aby uzupełnić protokół.</li>
		<li>W przypadku barwienia immunofluorescencyjnego, po standardowym przetwarzaniu immunohistochemicznym (odparafinowanie, pobieranie antygenu, blokowanie, inkubacja przeciwciał pierwotnych i wtórnych), znakować biotynylowane cele za pomocą Alexa Fluor 594 lub 647 sprzężonego ze streptawidyną (rozcieńczenie 1:500, 30 minut inkubacji w temperaturze pokojowej). Wykonaj barwienie przeciwjądrowe za pomocą DAPI (stężenie końcowe 20 μg/ml) przez 5 minut, a następnie montaż za pomocą pożywki zapobiegającej blaknięciu w celu zachowania sygnałów fluorescencyjnych.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Albera, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+idiopathic+pulmonary+fibrosis+trials%3A+the+point+on+end-points%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+Rev%22%5BJournal%5D)">Challenges in idiopathic pulmonary fibrosis trials: the point on end-points.</a> Eur Respir Rev. 20 (121), 195-200 (2011).</li>
<li>du Bois, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+Mortality+in+Patients+with+Idiopathic+Pulmonary+Fibrosis+%28IPF%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Predictors of Mortality in Patients with Idiopathic Pulmonary Fibrosis (IPF).</a> Am J Respir Crit Care Med. 179, A1114(2009).</li>
<li>Martinez, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17074(2017).</li>
<li>Wollin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mode+of+action+of+nintedanib+in+the+treatment+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Mode of action of nintedanib in the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Eur Respir J. 45 (5), 1434-1445 (2015).</li>
<li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bleomycin+animal+model%3A+A+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The bleomycin animal model: A useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).</li>
<li>Fernanda de Mello Costa, M., Weiner, A. I., Vaughan, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal-like+Progenitor+Cells%3A+A+Review+of+Dysplastic+Alveolar+Regeneration+and+Remodeling+in+Lung+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Basal-like Progenitor Cells: A Review of Dysplastic Alveolar Regeneration and Remodeling in Lung Repair.</a> Stem Cell Rep. 15 (5), 1015-1025 (2020).</li>
<li>Kathiriya, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+alveolar+type+2+epithelium+transdifferentiates+into+metaplastic+KRT5%28%2B%29+basal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human alveolar type 2 epithelium transdifferentiates into metaplastic KRT5(+) basal cells.</a> Nat Cell Biol. 24 (1), 10-23 (2022).</li>
<li>Chung, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+repeated+lung+injury+and+genetic+background+in+bleomycin-induced+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of repeated lung injury and genetic background in bleomycin-induced fibrosis.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 29 (3 Pt 1), 375-380 (2003).</li>
<li>Ley, B., Collard, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Clin Epidemiol. 5, 483-492 (2013).</li>
<li>Costabel, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+treatment+landscape+in+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+Rev%22%5BJournal%5D)">The changing treatment landscape in idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Eur Respir Rev. 24 (135), 65-68 (2015).</li>
<li>Degryse, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+intratracheal+bleomycin+models+several+features+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).</li>
<li>Rydell-Törmänen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+alterations+and+acute+inflammation%3B+developing+in+parallel+during+early+induction+of+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix alterations and acute inflammation; developing in parallel during early induction of pulmonary fibrosis.</a> Lab Invest. 92 (6), 917-925 (2012).</li>
<li>Wang, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+pulmonary+fibrosis%3A+twice-repeated+oropharyngeal+bleomycin+administration+mimicking+human+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of pulmonary fibrosis: twice-repeated oropharyngeal bleomycin administration mimicking human pathology.</a> Biochem Cell Biol. 103, 1-7 (2025).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-184+targets+TP63+to+block+idiopathic+pulmonary+fibrosis+by+inhibiting+proliferation+and+epithelial-mesenchymal+transition+of+airway+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">miR-184 targets TP63 to block idiopathic pulmonary fibrosis by inhibiting proliferation and epithelial-mesenchymal transition of airway epithelial cells.</a> Lab Invest. 101 (2), 142-154 (2021).</li>
<li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p63%28%2B%29Krt5%28%2B%29+distal+airway+stem+cells+are+essential+for+lung+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">p63(+)Krt5(+) distal airway stem cells are essential for lung regeneration.</a> Nature. 517 (7536), 616-620 (2015).</li>
<li>Parlar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cannabinoid+receptor+2+synthetic+agonist%2C+AM1241%2C+on+bleomycin+induced+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Effects of cannabinoid receptor 2 synthetic agonist, AM1241, on bleomycin induced pulmonary fibrosis.</a> Biotech Histochem. 96 (1), 48-59 (2021).</li>
<li>Uysal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Cannabinoid-1+Receptor+Ligands+in+the+Ovalbumin-Induced+Mouse+Model+of+Allergic+Asthma%3A+Is+It+Related+to+Transient+Receptor+Potential+Vanilloid-1+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Cannabis+Cannabinoid+Res%22%5BJournal%5D)">The Role of Cannabinoid-1 Receptor Ligands in the Ovalbumin-Induced Mouse Model of Allergic Asthma: Is It Related to Transient Receptor Potential Vanilloid-1 Channels.</a> Cannabis Cannabinoid Res. 10 (1), e121-e133 (2025).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

W tym badaniu przedstawiamy wyrafinowany mysi model IPF wykorzystujący dwukrotnie powtórzone podawanie bleomycyny w jamie ustnej i gardle. Podejście to odnosi się do krytycznych ograniczeń tradycyjnych modeli pojedynczej dawki, które nie są w stanie podsumować kluczowych patologicznych cech charakterystycznych ludzkiego IPF, takich jak strąki komórek podstawnych KRT5 + i p63 + 7,14,15, przetrwałe ogniska fibroblastyczne 3 i nieodwracalne zwłóknienie ...

Idiopatyczne włóknienie płuc (IPF) jest postępującą i śmiertelną śródmiąższową chorobą płuc charakteryzującą się nieodwracalnym uszkodzeniem miąższu płuc, prowadzącym do wyniszczających objawów, takich jak duszność i poważne pogorszenie jakości życia 1,2. Histologicznie IPF objawia się jak zwykle śródmiąższowym zapaleniem płuc (UIP), charakteryzującym się przestrzennie heterogenicznym zwłóknieniem, oskrzelikami nabłonka pęcherzyków płucnych i ogniskami fibroblastycznymi3. Pomimo znaczenia klinicznego, złożona patogeneza IPF i ograniczone możliwości terapeutyczne wskazują na pilną potrzebę opracowania solidnych modeli eksperymentalnych w celu pogłębienia wiedzy mechanistycznej i rozwoju leczenia.
Istniejące modele bleomycyny w pojedynczej dawce, choć szeroko stosowane4, nie są w stanie podsumować kluczowych patologicznych cech charakterystycznych ludzkiego IPF, takich jak strąki podstawnokomórkowe KRT5 + 5,6,7 i przetrwałe ogniska fibroblastyczne oraz wykazują samoustępujące zwłóknienie 8. Powtarzalne podawanie bleomycyny poprawia patologiczne wierność 9,10, ale jest utrudnione przez złożoność techniczną, wysoką śmiertelność i wydłużone cykle modelowania11,12. Aby rozwiązać te problemy, opracowaliśmy zoptymalizowany model mysi z dwukrotnie powtarzanym podawaniem bleomycyny w jamie ustnej i gardle13. Podejście to łączy patologiczną kompletność modeli powtarzających się urazów 9,10 z technicznymi zaletami nieinwazyjnego porodu, osiągając trwałą progresję zwłóknienia powyżej 60 dni przy zachowaniu niskiej śmiertelności. Dzięki ścisłemu naśladowaniu ludzkiej patologii IPF, w tym powstawania torbieli przypominającej plaster miodu i uporczywego zwłóknienia, nasza metoda stanowi solidną platformę do badania mechanizmów chorobowych i oceny interwencji terapeutycznych.
Protokół jest szczególnie odpowiedni dla badaczy wymagających przewlekłych modeli zwłóknienia bez powikłań chirurgicznych. Oferuje ona znaczące korzyści w porównaniu z istniejącymi podejściami pod względem odtwarzalności, przydatności klinicznej i zgodności z wytycznymi dotyczącymi dobrostanu zwierząt. Opierając się na uznanych technikach badania jamy ustnej i gardła, udoskonalenia te naprzód przedkliniczne badania IPF, wypełniając krytyczne luki między modelami eksperymentalnymi a patologią chorób u ludzi.

<table><tbody><tr><td>Użyty odczynnik</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bleomycyna</td><td>MCE (Certyfikat MCE)</td><td>HY-17565</td><td></td></tr><tr><td>H& Zestaw do barwienia E</td><td>Solarbio (Słoneczna Biologia)</td><td>G1120 powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Izofluran</td><td>RWD</td><td>Przekaźnik Przemysłowy R510-22-10</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do barwienia Massona</td><td>Solarbio (Słoneczna Biologia)</td><td>Silnik G1340</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Ostrze biologiczne</td><td>BL302A</td><td></td></tr><tr><td>Zastosowane przeciwciała</td><td></td><td></td><td>Rozcieńczeniu</td></tr><tr><td>&alfa;-SMA</td><td>Księga Abcam</td><td>ab5694 powiedział:</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Cytokeratyna 5</td><td>Droga immunologiczna</td><td>YT1271 powiedział:</td><td>1:100</td></tr><tr><td>DeltaN p63 powiedział:</td><td>CST</td><td>67825</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Kozia Anty-Królicza IgG H& L(biotyna)</td><td>Księga Abcam</td><td>ab6720 powiedział:</td><td>1:800</td></tr><tr><td>Hydroksyproliny</td><td>CST</td><td>73812</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Streptawidyna sprzężona z peroksydazą</td><td>Jackson</td><td>016-030-084</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Streptawidyna / AF594</td><td>Życiorys (Życiorys)</td><td>bs-0437P-AF594 powiedział:</td><td>1:500</td></tr></tbody></table>

wyrafinowany mysi model idiopatycznego włóknienia płuc

Refined Murine Model of Idiopathic Pulmonary Fibrosis

Modele zwierzęce odgrywają kluczową rolę w zrozumieniu mechanizmów choroby i testowaniu potencjalnych podejść terapeutycznych. Jednak tradycyjne mysie modele idiopatycznego włóknienia płuc (IPF), które opierają się na wstrzyknięciu pojedynczej dawki bleomycyny, nie są w stanie dokładnie odtworzyć złożonych cech patologicznych obserwowanych u pacjentów z IPF. Badanie to wprowadza ulepszoną metodę wykorzystującą dwa kolejne podania bleomycyny do jamy ustnej i gardła u myszy, która skuteczniej naśladuje progresję IPF. Ten nowy protokół indukuje kluczowe zmiany patologiczne, takie jak tworzenie torbieli przypominających plaster miodu, ogniska fibroblastyczne i oskrzeliki nabłonka pęcherzyków płucnych, bardzo przypominające histopatologię obserwowaną w ludzkim IPF. Wykorzystując ten model, jesteśmy w stanie uchwycić postępujące zmiany zwłóknieniowe w dłuższym horyzoncie czasu, co zapewnia bardziej wiarygodny wgląd w patogenezę IPF. Co więcej, to podejście oparte na dwóch dawkach ma kilka zalet w porównaniu z konwencjonalnymi modelami jednodawkowymi, w tym lepszą odtwarzalność i dokładniejsze odwzorowanie rozwoju choroby. Metoda ta zwiększa naszą zdolność do badania mechanizmów leżących u podstaw IPF i oceny potencjalnych interwencji terapeutycznych. Proponowany protokół oferuje znaczący postęp w badaniach przedklinicznych i stanowi cenne narzędzie do badania zarówno biologii zwłóknienia płuc, jak i skuteczności nowych metod leczenia.

W porównaniu do tradycyjnego jednorazowego podania bleomycyny do gardła, metoda ta skutecznie odtwarza charakterystyczne cechy patologiczne IPF, w tym ogniska fibroblastyczne (Rycina 1B), zmiany plastromiodkowate (Rycina 1G) oraz bronchiolizację nabłonka pęcherzyków płucnych (Rycina 1H). Co istotne, model ten wykazuje utrzymywanie się tych cech w czasie (Rycina 1B), co ściśle naśladuje przewlekły i post...

Protokół ten określa metodę wywoływania zwłóknienia płuc u myszy poprzez wielokrotne podawanie bleomycyny do jamy ustnej i gardła, uzyskując cechy patologiczne bardzo podobne do idiopatycznego zwłóknienia płuc.

Wyrafinowany mysi model idiopatycznego włóknienia płuc

Animal models play a crucial role in understanding disease mechanisms and testing potential therapeutic approaches. However, traditional murine models of ...

Zwłóknienie płuc jest wyniszczającą i nieodwracalną chorobą charakteryzującą się zwłóknieniowymi bliznami i uszkodzeniem oskrzeli pęcherzyków płucnych. Badania te odnoszą się do ograniczeń istniejących modeli zwierzęcych poprzez wprowadzenie ulepszonej metody u myszy, która bardziej naśladuje patologię zwłóknienia płuc. Standardowy model zwłóknienia płuc wykorzystuje wstrzyknięcie międzytchawikowe pojedynczej dawki bradiomisyny, ale nie naśladuje kluczowych cech. Opracowano metodę wykorzystującą powtarzające się iniekcje, ale jest ona czasochłonna i skutkuje wysoką śmiertelnością. Stosujemy dwukrotnie powtórzone wstrzyknięcie do jamy ustnej i gardła w celu wywołania zwłóknienia płuc. Podsumowuje podstawowe cechy choroby, jednocześnie oszczędzając czas i zmniejszając śmiertelność myszy w porównaniu z modelami powtarzających się iniekcji błędu A.[Narrator] Na początek zważ każdą mysz przed podaniem do jamy ustnej i gardła, aby obliczyć wymaganą objętość roztworu bleomycyny na podstawie jej masy ciała. Umieść mysz na stojaku do wstrzykiwań tchawicy i zabezpiecz ją, zaczepiając zębami. Za pomocą kleszczy delikatnie wysuń język i przytrzymaj go kciukiem i palcem wskazującym. Zakryj nos

refined-murine-model-of-idiopathic-pulmonary-fibrosis

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten artykuł przedstawia szybką i prostą metodę podawania bleomycyny bezpośrednio do tchawicy myszy poprzez intubację. Kluczowymi zaletami tej metody jest to, że jest wysoce powtarzalna, łatwa do opanowania i nie wymaga specjalistycznego sprzętu ani długiego czasu rekonwalescencji.

Ulepszona metoda szybkiej intubacji tchawicy u myszy

Opisujemy nieinwazyjne podejście do obrazowania multimodalnego oparte na Micro-CT i fluorescencyjnej tomografii molekularnej do podłużnej oceny modelu zwłóknienia płuc myszy wywołanego podwójnym wkropleniem dotchawiczym bleomycyny.

Multimodalne podejście do obrazowania oparte na mikrotomografii komputerowej i fluorescencyjnej tomografii molekularnej do podłużnej oceny zwłóknienia płuc wywołanego bleomycyną u myszy

Różne modele zwierzęce zwłóknienia płuc zostały stworzone przy użyciu bleomycyny, aby wyjaśnić patogenezę zwłóknienia płuc i znaleźć nowe cele leków. Jednak większość modeli zwłóknienia płuc ukierunkowanych na tkankę płucną ma nierównomierne podawanie leków. W tym miejscu proponujemy model jednolitego zwłóknienia płuc wywołanego nebulizacją bleomycyny nosowej.

Mysi model zwłóknienia płuc wywołanego nebulizacją bleomycyny w nosie

Ten protokół opisuje izolację makrofagów śródmiąższowych płuc (IM) i ich adoptywny transfer po stymulacji pęcherzyków płucnych przez IL-33 w modelu mysim, co może ułatwić badanie in vivo idiopatycznego zwłóknienia płuc (IPF).

Adoptywny transfer makrofagów stymulowanych przez IL-33 do modeli mysich indukowanych bleomycyną w celu zbadania ich wpływu na idiopatyczne zwłóknienie płuc in vivo

Ten protokół opisuje metodę tworzenia mysiego modelu krzemicy poprzez wielokrotne wystawienie na działanie zawiesin krzemionki za pomocą kroplówki z nosa. Model ten może wydajnie, wygodnie i elastycznie naśladować patologiczny proces krzemicy u ludzi z wysoką powtarzalnością i oszczędnością.

Mysi model krzemicy utworzony przez wielokrotne wdychanie krystalicznego pyłu krzemionkowego

Tutaj przedstawiono metodę wywoływania tętniczego nadciśnienia płucnego związanego ze zwłóknieniem płuc (PF-PH) model szczurzy poprzez wstrzykiwanie bleomycyny do dróg oddechowych. Zapewniamy również podejście krok po kroku do walidacji tego modelu zwierzęcego.

Ustalenie i walidacja szczurzego modelu tętniczego nadciśnienia płucnego związanego ze zwłóknieniem płuc

Ten protokół demonstruje technikę aspiracji ustno-gardłowej do użycia w mysim modelu zwłóknienia płuc z bleomycyną.

Podawanie bleomycyny w jamie ustnej i gardłowej w mysim modelu zwłóknienia płuc

Przedstawiamy protokół modelowania włóknienia płuc u myszy z wykorzystaniem aerozozolizowanej bleomycyny podanej przez tchawicę. Ta zoptymalizowana metoda umożliwia jednolite, ilościowe i precyzyjne podanie bez nacięcia chirurgicznego, zwiększając powtarzalność i wiarygodność włóknienia wywołanego bleomycyną.

Udoskonalona metoda podawania bleomycyny wewnątrztchawicowej oparta na aerozoli dla powtarzalnych i minimalnie inwazyjnych modeli myszy z włóknieniem płuc

Przedstawiono procedurę chirurgiczną indukcji jednostronnego niedokrwienia kończyny tylnej, z potwierdzeniem niedokrwienia za pomocą obrazowania perfuzji metodą laserowego Dopplera.

Mysi model niedokrwienia kończyny dolnej

W niniejszym materiale wideo zaprezentowano sposób wykorzystania szybkiego i wiarygodnego modelu do badania procesów patobiologicznych i patofizjologicznych niedokrwienia mięśnia sercowego.

Ligacja LAD: mysi model zawału mięśnia sercowego

Poznaj ulepszoną metodę wywoływania włóknienia płuc u myszy poprzez powtarzalne podawanie bleomycyny drogą krtaniowo-gardłową. Model ten lepiej odwzorowuje patologię idiopatycznego włóknienia płuc przy niższej śmiertelności zwierząt.

Wyrafinowany mysi model idiopatycznego włóknienia płuc

Przeglądaj więcej filmów