Mysi model do oceny długoterminowych wyników strukturalnych i funkcjonalnych po odwróceniu przedłużającej się jednostronnej niedrożności moczowodu

Moje laboratorium pracuje nad mechanizmami i terapią mającą na celu poprawę długoterminowych wyników po uszkodzeniu nerek, a szczególnym celem tego protokołu jest opracowanie narzędzia do badania długoterminowych wyników po odwróceniu niedrożności dróg moczowych. Opracowaliśmy mysi model jednostronnej odwracalnej niedrożności moczowodu, który pozwala nam ocenić długoterminowe funkcjonalne i strukturalne skutki odwrócenia niedrożności dróg moczowych w nerkach. Inne metody wymagają wielu operacji lub specjalistycznej wiedzy mikrochirurgicznej, do których większość laboratoriów nie ma dostępu. Ponadto, ponieważ jest to jednostronna niedrożność, większość innych metod nie pozwala na funkcjonalną ocenę powrotu do zdrowia bez wykonania podzielonych testów czynnościowych nerek. Tak naprawdę jest ich tylko dwóch. Pierwszym z nich jest konsekwentne umieszczanie klamry naczyniowej w tej samej pozycji na bliższym moczowodzie w każdym eksperymalnym eksperymencie, a drugim jest usunięcie zacisku naczyniowego kilka dni później bez powodowania uszkodzenia moczowodu lub nerki.

[Rachela] Na początek przygotuj chirurgiczną stronę znieczulonej myszy za pomocą środków antyseptycznych. Wykonaj 1,5-centymetrowe podłużne nacięcie grzbietowe wzdłuż linii środkowej przez skórę i warstwy podskórne za pomocą nożyczek i kleszczy. Wykonaj małe nacięcie przez lewy mięsień boczny i powięź nad nerką. Następnie za pomocą kleszczy zewnętrznij lewą nerkę. Za pomocą kleszczy. Ostrożnie wypreparuj tłuszcz na dolnym biegunie i trochę tkanki łącznej w pobliżu moczowodu. Zlokalizuj obszar moczowodu. Następnie oddziel moczowód wraz z jego tkanką łączną od szypułki nerki, aby uniknąć objęcia zaciskiem żyły nerkowej i tętnicy. Użyj aplikatorów zaciskowych, aby otworzyć zacisk naczyniowy i umieścić go bezpośrednio pod miedniczką nerkową na moczowodzie. Użyj oznaczeń na zacisku, aby zapewnić równomierny nacisk na wszystkie myszy. Teraz użyj sterylnego wacika nasączonego solą fizjologiczną, aby delikatnie wepchnąć nerkę z zaciskiem z powrotem do przestrzeni zaotrzewnowej. Następnie zszyj warstwę mięśniową za pomocą szwu wchłanialnego. Użyj klipsów do skóry, aby zamknąć warstwę skóry. Aby usunąć zacisk moczowodu, zdejmij klipsy do ran, a następnie oczyść obszar operacyjny bez zmiany kształtu przy użyciu oryginalnych nacięć w celu uzyskania dostępu do zacisku. Ponownie otwórz warstwę mięśniową i odsłoń przestrzeń zaotrzewnową. Użyj kleszczy, aby ostrożnie zlokalizować zacisk w przestrzeni zaotrzewnowej bez zewnętrznego wyglądu nerki. Za pomocą aplikatorów zaciskowych delikatnie otwórz zacisk, jednocześnie odciągając otaczającą tkankę za pomocą kleszczy, aby bezpiecznie ją usunąć. Teraz wyegzekwuj nerkę, aby sprawdzić miednicę nerkową pod kątem niedrożności. Obrzęk miedniczki nerkowej potwierdza wodonercze. Wepchnij nerkę z powrotem do przestrzeni zaotrzewnowej za pomocą sterylnego wacika nasączonego solą fizjologiczną i zszyj nacięcie, jak pokazano. Aby wykonać nefrektomię przeciwległą, ponownie otwórz miejsce grzbietowe za pomocą oryginalnego nacięcia skóry. Wielkość mięśnia prawej strony i powięź nad nerką. Następnie zewnętrzizuj prawą nerkę za pomocą kleszczy. Przytrzymaj prawą nerkę gładkimi, zakrzywionymi kleszczami i wypreparuj górny i dolny biegun z otaczającej tkanki. Po uwolnieniu nerki zawiąż jedwabny szew Foro wokół naczyń nerkowych i moczowodu za pomocą podwójnego węzła chirurgicznego. Odczekaj około 30 sekund, aż nerka ciemnieje. Następnie przytrzymaj go gładkimi zakrzywionymi kleszczami i usuń, przecinając dystalnie do węzła za pomocą zakrzywionych nożyczek. Delikatnie wepchnij pozostałą szypułkę nerki z powrotem do przestrzeni zaotrzewnowej za pomocą sterylnego wacika nasączonego solą fizjologiczną, a następnie zamknij warstwy mięśni i skóry za pomocą szwów i klipsów. Typowe pomiary przeżycia i czynności nerek wykonano 84 dni po odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu. W badaniach funkcjonalnych porównywano odwracalną jednostronną niedrożność moczowodu z samą nefrektomią w przypadku azotu mocznikowego we krwi, przezskórnej filtracji kłębuszkowej i osmolarności moczu po 18 godzinach pozbawienia wody. Wartości osmolarności moczu były znacznie niższe niż u myszy kontrolnych nefrektomii w tych samych punktach czasowych.