Name: Połączony test amplifikacji polimerazy rekombinazy CRISPR/Cas12a do wykrywania Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T13:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Poznaj połączony test RPA i CRISPR/Cas12a do szybkiego wykrywania Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4 u bananów. Ta metoda oferuje tanią i dokładną alternatywę dla istniejących technik diagnostycznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Przyjmujemy wsparcie finansowe od National Research Foundation of South Africa, numer grantu: 138109, w ramach konkurencyjnego wsparcia dla programu badaczy bez oceny. Dziękujemy również stypendium programu badawczo-innowacyjnym Unii Europejskiej Horyzont 2020 Marie Sklodowska-Curie Fellowship w ramach grantu INDICANTS Project Grant: 890856.

1. Uproszczona ekstrakcja DNA z materiału roślinnego
UWAGA: Zobacz Rysunek 1 dla przeglądu.
<ol>
	<li>Wykonaj ekstrakcję DNA.<ol>
		<li>Przelej 250 mg każdego kawałka objawowego pseudostemu do osobnego worka ekstrakcyjnego (patrz Tabela materiałów).</li>
		<li>Dodaj 2 mL 0,5 M NaOH-PVP (Tabela materiałów) do worków z materiałem roślinnym. Mielę zainfekowane naczynia w worku ekstrakcyjnym, używając ręcznego młynka jak tłuczka. UWAGA: Dodaj 1-2 mL dodatkowego 0,5 M NaOH-PVP, jeśli to konieczne, aby uzyskać wystarczającą ilość płynnego ekstraktu z worka.</li>
		<li>Dodaj 195 μL 100 mM Tris-HCL (pH 8,0) (Tabela materiałów) do probówek o pojemności 1,5 mL.</li>
		<li>Pipeta 5 μL ekstraktu z worka do probówki 1,5 mL z 195 μL 100 mM Tris-HCL (pH 8,0), rozcieńczając ekstrakt 40-krotnie.</li>
		<li>Przekręć rurki przez 15-30 sekund i przechowywać w temperaturze -20 °C do użycia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. synteza crRNA i kontrola jakości
<ol fo:break-after="page">
	<li>Wykonaj transkrypcję.<ol>
		<li>Korzystając z zestawu transkrypcyjnego RNA (Tabela materiałów), do probówki PCR o pojemności 0,2 mL dodaj następujące składniki: 1,5 μL buforu reakcji 10x T7, 1,5 μL każdego dNTP, 1,5 μL mieszanki polimerazy DNA T7, 1 μL wody wolnej od nukleazy oraz 10 μL 100 μM szablonowego DNA T7, co daje łączną objętość 20 μL.</li>
		<li>Inkubuj probówkę w temperaturze 37 °C w kąpieli wodnej lub na maszynie PCR przez co najmniej 4 godziny.</li>
		<li>Użyj spektrofotometru (Tabela materiałów) do określenia ilości przepisanego RNA. Rozcieńcz RNA do 250 ng/μL (10 μg) w objętości 40 μL przy użyciu wody wolnej od nukleazy lub buforu TE (Plik uzupełniający 1). UWAGA: Przepisane RNA można przechowywać w temperaturze -80 °C do czasu kontynuowania leczenia DNazą i etapów oczyszczania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wykonaj leczenie DNazą i czyszczenie crRNA. UWAGA: Wszystkie kroki wykonuj w temperaturze pokojowej. Trzymaj RNA i enzymy DNazy I na lodzie.<ol>
		<li>Traktuj próbkę RNA DNazą I zawartą w zestawie do czyszczenia RNA (Tabela materiałów) zgodnie z instrukcją producenta22.</li>
		<li>Oczyść próbkę RNA za pomocą zestawu do czyszczenia RNA zgodnie z instrukcjami producenta, zgodnie z protokołem II22.</li>
		<li>Nanodrop oczyszczonego crRNA, aby określić ilość i jakość. Rozcieńcz RNA do 100 ng/μL w wodzie wolnej od nukleazy i przechowuj w temperaturze -80 °C do czasu użycia.</li>
		<li>Podgrzej crRNA barwnikiem ładującym RNA (Tabela materiałów) do 70 °C przez 10 minut w kąpieli wodnej i poddaj crRNA elektroforezie na żelu agarozowym o 1,5% w celu wizualizacji syntezy crRNA (Rysunek 2).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Reakcja jednorurkowa amplifikacji polimerazy rekombinazowej (RPA)-Cas12a do wykrywania in vitro Foc TR4
UWAGA: Zobacz Rysunek 3 dla przeglądu.
<ol>
	<li>Przygotuj miksy reakcji RPA i Cas12a. UWAGA: Upewnij się, że te kroki są wykonywane w przestrzeni wolnej od DNA na lodzie, z odczynnikami i materiałami wstępnie schładzonymi. Przed eksperymentem przetrzyj powierzchnię roboczą i pipety wybielaczem i 70% etanolem. Zobacz Tabelę 1 , aby uzyskać informacje o wszystkich oligonukleotydach używanych w tym badaniu.<ol>
		<li>Przygotuj mieszaninę reakcji Cas12a o pojemności 20 μL w osobnej probówce 0,5 mL (Tabela materiałów) z następującymi objętościami odczynników: 2 μL 10x NEBuffer r2.1 (50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/mL rekombinowanej albuminy, pH 7,9), 0,4 μL 10 μM białka LbCas12a, 0,6 μL crRNA o pojemności 100 ng/μL, 0,4 μL raportu 10 μM oraz 16,6 μL wody zdejonizowanej. UWAGA: Końcowe stężenia białka LbCas12a, crRNA i reportera wynoszą odpowiednio 200 nM.</li>
		<li>Przygotuj mieszaninę reakcji RPA o pojemności 9,5 μL w osobnej probówce 0,5 mL o następujących objętościach odczynników: 5 μL buforu reakcji 2x (stężenie końcowe 1x zgodnie z wytycznymi producenta), 1,6 μL mieszanki dNTP (stężenie końcowe 1,6 mM), 1 μL 10x bazowej mieszanki E-Mix (stężenie końcowe 1x zgodnie z wytycznymi producenta), 0,5 μL każdego zapalnika RPA o pojemności 10 μM (końcowe stężenie 0,5 μM każda), 0,5 μL mieszanki reakcji rdzeniowej 20x (stężenie końcowe 1x zgodnie z wytycznymi producenta) oraz 0,4 μL wody dejonizowanej.</li>
		<li>Włóż 8-rurkowy pasek do stojaka na rury (Tabela Materiałów) na lodzie.</li>
		<li>Przelej mieszankę reakcji Cas12a o stężeniu 20 μL do podstawy rurki.</li>
		<li>Przelej mieszankę reakcji RPA o pojemności 9,5 μL do pokrywy rurki. Dodaj 0,5 μL 280 nM MgOAc (końcowe stężenie 14 nM) do mieszanki reakcji RPA w pokrywce rurki i mieszaj przez pipetowanie w górę i w dół.</li>
		<li>Dodaj 0,5 μL wody dejonizowanej do pokrywy rurki bez szablonu (NTC) i ostrożnie zamknij, aby nie połączyć się mieszanin reakcji RPA i Cas12a. UWAGA: Uwzględniono kontrolę nieszablonową (NTC), aby zapewnić wiarygodność wyników.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dodaj szablonowe DNA i rozpocznij reakcję.<ol>
		<li>Dodaj 0,5 μL DNA szablonowego do 10 μL mieszaniny reakcji RPA zawierającej MgOAc w pokrywce rurki, z wyjątkiem NTC, z dejonizowaną wodą zamiast DNA. Zawsze dodaj znane pozytywnie kontrolowane DNA Foc TR4 do jednego dołku, aby upewnić się, że test zadziałał zgodnie z zamierzeniem. Mieszaj, pipetując w górę i w dół.</li>
		<li>Ostrożnie zamknij pokrywki z rurką, aby reakcja RPA i Cas12a się nie pomieszała.</li>
		<li>Włącz przenośny fluorometr (Tabela materiałów) i stwórz profil przebiegu dla testu RPA-Cas12a (Plik Uzupełniający 2). Otwórz zapisany profil Run i umieść pasek rurki w przenośnym fluorometrze, aby inkubował przez 30 minut w temperaturze 37 °C. UWAGA: Uważaj, aby nie dotykać dna rurek podczas obsługi paska rurkowego; zamiast tego trzymaj zewnętrzne krawędzie na górnym lewym i prawym końcu.</li>
		<li>Usuń pasek z przenośnego fluorometru po 30 minutach. Odwróć rurki sześć razy, aby wymieszać reakcje RPA i Cas12a, i obracaj w mini wirówce (patrz Tabela materiałów) przez 5 sekund.</li>
		<li>Włóż pasek rurki z powrotem do przenośnego fluorometru i inkubuj przez kolejne 30 minut w temperaturze 37 °C, korzystając z zapisanego profilu biegu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wyobraź sobie efekty.<ol>
		<li>Interpretuj średnie względne jednostki fluorescencji (RFU) mierzone na przenośnym fluorometrze (Plik uzupełniający 2 oraz instrukcja obsługi23).</li>
		<li>Zwizualizuj lampy pod niebieskim światłem LED o długości fali wzbudzenia 465 nm za pomocą transiluminatora niebieskiego światła (Plik uzupełniający 3). Rób zdjęcia aparatem w telefonie.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Viljoen, A., Ma, L. J., Molina, A. B. Fusarium Wilt (Panama Disease) and Monoculture in Banana Production: Resurgence of a Century-Old Disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aViljoen%2C+A+%22Emerging+Plant+Diseases+and+Global+Food+Security%22">Emerging Plant Diseases and Global Food Security</a>. , The American Phytopathological Society. St. Paul, MN. (2020).</li>
<li>Viljoen, A., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aViljoen%2C+A+%22Banana+Diseases+and+Pests%3A+Field+Guide+for+Diagnostics+and+Data+Collection%22">Banana Diseases and Pests: Field Guide for Diagnostics and Data Collection</a>. , IITA, Ibadan. (2017).</li>
<li>Dita, M. A., Waalwijk, C., Buddenhagen, I. W., Souza, M. T., Kema, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+diagnostic+for+tropical+race+4+of+the+banana%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">A molecular diagnostic for tropical race 4 of the banana.</a> Plant Pathol. 59 (2), 348-357 (2010).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+application+of+a+unique+genetic+locus+in+diagnosis+of+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+tropical+race+4%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Identification and application of a unique genetic locus in diagnosis of Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4.</a> Can J Plant Pathol. 35 (4), 482-493 (2013).</li>
<li>Aguayo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+hydrolysis+probe-based+real-time+assay+for+the+detection+of+tropical+strains+of+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+race+4%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of a hydrolysis probe-based real-time assay for the detection of tropical strains of Fusarium oxysporum f. sp. cubense race 4.</a> PLoS One. 12 (2), e0171767(2017).</li>
<li>Matthews, M. C., Mostert, D., Ndayihanzamaso, P., Rose, L. J., Viljoen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+detection+of+economically+important+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+strains+in+Africa+in+plants%2C+soil+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantitative detection of economically important Fusarium oxysporum f. sp. cubense strains in Africa in plants, soil and water.</a> PLoS One. 15 (7), e0236110(2020).</li>
<li>Ordóñez, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+loop-mediated+isothermal+amplification+%28LAMP%29+assay+based+on+unique+markers+derived+from+genotyping+by+sequencing+data+for+rapid+in+planta+diagnosis+of+Panama+disease+caused+by+tropical+race+4+in+banana%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay based on unique markers derived from genotyping by sequencing data for rapid in planta diagnosis of Panama disease caused by tropical race 4 in banana.</a> Plant Pathol. 68 (9), 1682-1693 (2019).</li>
<li>Martzy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+perspectives+in+the+application+of+isothermal+DNA+amplification+methods+for+food+and+water+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Challenges and perspectives in the application of isothermal DNA amplification methods for food and water analysis.</a> Anal Bioanal Chem. 411, 1695-1702 (2019).</li>
<li>Ghouneimy, A., Mahas, A., Marsic, T., Aman, R., Mahfouz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-based+diagnostics%3A+Challenges+and+potential+solutions+toward+point-of-care+applications%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">CRISPR-based diagnostics: Challenges and potential solutions toward point-of-care applications.</a> ACS Synth Biol. 12 (1), 1-16 (2023).</li>
<li>Chen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas12a+target+binding+unleashes+indiscriminate+single-stranded+DNase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas12a target binding unleashes indiscriminate single-stranded DNase activity.</a> Science. 360 (6387), 436-439 (2018).</li>
<li>Gootenberg, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleic+acid+detection+with+CRISPR-Cas13a%2FC2c2%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2.</a> Science. 356 (6336), 438-442 (2017).</li>
<li>Chen, Y., Mei, Y., Jiang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Universal+and+high-fidelity+DNA+single+nucleotide+polymorphism+detection+based+on+a+CRISPR%2FCas12a+biochip%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Sci%22%5BJournal%5D)">Universal and high-fidelity DNA single nucleotide polymorphism detection based on a CRISPR/Cas12a biochip.</a> Chem Sci. 12 (12), 4455-4462 (2021).</li>
<li>Shin, K., Kwon, S. H., Lee, S. C., Moon, Y. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+and+rapid+detection+of+citrus+scab+using+an+RPA-CRISPR%2FCas12a+system+combined+with+a+lateral+flow+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Plants+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Sensitive and rapid detection of citrus scab using an RPA-CRISPR/Cas12a system combined with a lateral flow assay.</a> Plants (Basel). 10 (10), 2132(2021).</li>
<li>Zhang, Y. M., Zhang, Y., Xie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+CRISPR%2FCas12a-based+DNA+detection+for+fast+pathogen+diagnosis+and+GMO+test+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Breed%22%5BJournal%5D)">Evaluation of CRISPR/Cas12a-based DNA detection for fast pathogen diagnosis and GMO test in rice.</a> Mol Breed. 40 (1), 11(2020).</li>
<li>Wang, Q., Qin, M., Coleman, J. J., Shang, W., Hu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+Verticillium+dahliae+from+complex+samples+using+CRISPR%2FCas12a+technology+combined+with+RPA%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of Verticillium dahliae from complex samples using CRISPR/Cas12a technology combined with RPA.</a> Plant Dis. 107 (6), 1664-1669 (2023).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+two+fungal+pathogens+in+soybeans+using+the+recombinase+polymerase+amplification%2FCRISPR-Cas12a+method+for+potential+on-site+disease+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of two fungal pathogens in soybeans using the recombinase polymerase amplification/CRISPR-Cas12a method for potential on-site disease diagnosis.</a> Pest Manag Sci. 80 (3), 1168-1181 (2024).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+frontline%2C+rapid%2C+nucleic+acid-based+Fusarium+circinatum+detection+system+using+CRISPR%2FCas12a+combined+with+recombinase+polymerase+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis%22%5BJournal%5D)">A frontline, rapid, nucleic acid-based Fusarium circinatum detection system using CRISPR/Cas12a combined with recombinase polymerase amplification.</a> Plant Dis. 107 (6), 1902-1910 (2023).</li>
<li>Mu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas12a-based+diagnostics+of+wheat+fungal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas12a-based diagnostics of wheat fungal diseases.</a> J Agric Food Chem. 70 (23), 7240-7247 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+detection+of+Fusarium+temperatum+by+using+CRISPR-Cas12a+empowered+LAMP+assay+coupled+with+AuNPs-based+colorimetric+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22LWT%22%5BJournal%5D)">Visual detection of Fusarium temperatum by using CRISPR-Cas12a empowered LAMP assay coupled with AuNPs-based colorimetric reaction.</a> LWT. 185, 115190(2023).</li>
<li>Liang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+RPA-based+CRISPR%2FCas12a+assay+in+combination+with+a+lateral+flow+strip+for+rapid+detection+of+toxigenic+Fusarium+verticillioides+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Development of an RPA-based CRISPR/Cas12a assay in combination with a lateral flow strip for rapid detection of toxigenic Fusarium verticillioides in maize.</a> Food Control. 157, 110172(2024).</li>
<li>Matthews, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combined+recombinase+polymerase+amplification+CRISPR%2FCas12a+assay+for+detection+of+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+tropical+race+4%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A combined recombinase polymerase amplification CRISPR/Cas12a assay for detection of Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4.</a> Sci Rep. 15 (1), 2436(2025).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22RNA+Clean+%26+Concentrator-5%3A+Instruction+Manual+Version+3.1.3%22">RNA Clean & Concentrator-5: Instruction Manual Version 3.1.3</a>. , Zymo Research Corporation. Irvine, CA. (2023).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genie+III+user+manual%2C+instrument+software+version+v3.18.2%22">Genie III user manual, instrument software version v3.18.2</a>. , Optigene. Horsham, U.K. (2021).</li>
<li>Li, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas12a-assisted+nucleic+acid+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection.</a> Cell Discov. 4, 1-4 (2018).</li>
<li>Magdama, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+uncovers+the+limitations+of+current+molecular+detection+methods+for+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+race+4+strains%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis uncovers the limitations of current molecular detection methods for Fusarium oxysporum f. sp. cubense race 4 strains.</a> PLoS One. 14 (9), e0222727(2019).</li>
<li>Mckillop, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMckillop%2C+C+%22Independent+review+blames+unreliable+test%2C+not+Biosecurity+Queensland%2C+for+false+Panama+diagnosis%22">Independent review blames unreliable test, not Biosecurity Queensland, for false Panama diagnosis</a>. , ABC News, Australia. (2016).</li>
<li>Mckillop, C., Craig, Z. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMckillop%2C+C+%22Quarantine+lifted+on+Mareeba+banana+farm+suspected+of+having+Panama+disease%22">Quarantine lifted on Mareeba banana farm suspected of having Panama disease</a>. , ABC News, Australia. (2015).</li>
<li>Wang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cas12aVDet%3A+A+CRISPR%2FCas12a-based+platform+for+rapid+and+visual+nucleic+acid+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Cas12aVDet: A CRISPR/Cas12a-based platform for rapid and visual nucleic acid detection.</a> Anal Chem. 91 (19), 12156-12161 (2019).</li>
<li>Fozouni, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amplification-free+detection+of+SARS-CoV-2+with+CRISPR-Cas13a+and+mobile+phone+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Amplification-free detection of SARS-CoV-2 with CRISPR-Cas13a and mobile phone microscopy.</a> Cell. 184 (2), 323-333 (2021).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+and+visual+detection+of+SARS-CoV-2+using+all-in-one+dual+CRISPR-Cas12a+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive and visual detection of SARS-CoV-2 using all-in-one dual CRISPR-Cas12a assay.</a> Nat Commun. 11 (1), 4711(2020).</li>
<li>Parida, M., Sannarangaiah, S., Dash, P. K., Rao, P. V., Morita, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loop-mediated+isothermal+amplification+%28LAMP%29%3A+A+new+generation+of+innovative+gene+amplification+technique%3B+perspectives+in+clinical+diagnosis+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): A new generation of innovative gene amplification technique; perspectives in clinical diagnosis of infectious diseases.</a> Rev Med Virol. 18 (6), 407-421 (2008).</li>
<li>Zeng, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas12a-driven+MXene-PEDOT%3APSS+piezoresistive+wireless+biosensor%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Energy%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas12a-driven MXene-PEDOT:PSS piezoresistive wireless biosensor.</a> Nano Energy. 82, 105711(2021).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+toxigenic+Fusarium+asiaticum+integrating+recombinase+polymerase+amplification%2C+CRISPR%2FCas12a%2C+and+lateral+flow+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of toxigenic Fusarium asiaticum integrating recombinase polymerase amplification, CRISPR/Cas12a, and lateral flow techniques.</a> Int J Mol Sci. 24 (18), 14134(2023).</li>
<li>Manzo-Sánchez, G., Orozco-Santos, M., Martínez-Bolaños, L., Garrido-Ramírez, E., Canto-Canche, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+of+quarantine+and+economic+importance+in+banana+tree+%28Musa+sp.%29+in+M%C3%A9xico%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Mex+Fitopatol%22%5BJournal%5D)">Diseases of quarantine and economic importance in banana tree (Musa sp.) in México.</a> Rev Mex Fitopatol. 32 (2), 89-107 (2014).</li>
<li>Blomme, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+diseases+of+bananas+and+enset%3A+Current+state+of+knowledge+and+integrated+approaches+toward+sustainable+management%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Bacterial diseases of bananas and enset: Current state of knowledge and integrated approaches toward sustainable management.</a> Front Plant Sci. 8, 1290(2017).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych ani intelektualnych.

Regularna inwigilacja to ważna strategia skutecznej zapobiegawczej i zwalczającej Foc TR4 oraz innych ważnych inwazyjnych szkodników. Protokoły wykrywania, które można stosować w terenie, a które umożliwiają szybkie i precyzyjne identyfikowanie patogenów, mogą przyspieszyć podejmowanie decyzji i ograniczyć koszty związane z działaniami nadzorczymi. W tym celu przedstawiony tutaj protokół łączył uproszczoną ekstrakcję DNA, przeprowadzoną bezpośrednio na próbce materiału roślinnego, która następnie została włączona do jedn...

Więdnięcie fusarium, spowodowane przez glebowego patogena grzybowego Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc), jest globalnie uznawane za jeden z najbardziej niszczycielskich patogenów roślin transgranicznych w historii1. Po wprowadzeniu do nowego obszaru Foc pozostaje niewidoczny, dopóki zainfekowane rośliny nie rozwiną objawów. Może to zająć miesiące, pozwalając grzybowi rozprzestrzenić się i rozprzestrzenić nieświadomie. Po ugruntowaniu jest niemal niemożliwe ekonomiczne wyeliminowanie ze względu na produkcję odpornych chlamydospor oraz wieloletni charakter uprawy bananów. Znaczenie profilaktyki i wczesnego wykrywania jest zatem kluczowe dla ochrony wrażliwych hodowców1. Obecna epidemia choroby, wywołana przez tropikalną rasę Foc 4 (TR4), wymaga regularnego monitorowania w celu identyfikacji objawowych bananowców w obszarach wysokiego ryzyka. Ograniczenia abiotyczne, takie jak stres wodny i niedobory składników odżywczych, powodują żółknięcie zewnętrzne, które jest podobne do objawów wywołanych infekcją Foc TR4. Dodatkowo, nie można odróżnić objawów zakażenia przez różne rasy Foc. Dlategodo wiarygodnego wykrywania Foc TR4 2 konieczne jest oczyszczanie laboratoryjne oraz późniejsze wykrywanie fenotypowe i molekularne. Dostępne są różne testy molekularne do wykrywania Foc TR4, w tym PCR, ilościowe (q) PCR oraz testy amplifikacji izotermicznej z pętlą (LAMP) 3,4,5,6,7. Większość tych protokołów jednak nadal wymaga kosztownych i specjalistycznych umiejętności oraz sprzętu, które muszą być realizowane w warunkach laboratoryjnych. Amplifikacja polimerazy rekombinazy (RPA) może być przeprowadzana izotermicznie, co eliminuje potrzebę stosowania takiego sprzętu i może być rozważane jako metoda detekcji w terenie8.
Systemy CRISPR)-Cas są coraz częściej wykorzystywane do ulepszaniadiagnostyki molekularnej w regularnych przestrzeniach i regularnych powtórek palindromicznych (CRISPR)-Cas. Systemy te są stosowane, ponieważ są tanie, proste i nie wymagają użycia specjalnej aparatury instrumentacyjnej, dlatego mogą być rozważane do wykrywania w terenie. Diagnostyka oparta na CRISPR zazwyczaj polega na izotermicznej amplifikacji sekwencji docelowej, następnie rozpoznaniu celu za pomocą białek CRISPR-Cas oraz rozszczepienia bocznego barwnika fluorescencyjnego DNA lub RNA, aby wskazać obecność celu 10,11. W systemach CRISPR-Cas12a, konkretnie, RNA CRISPR (crRNA) kieruje Cas12a, aby rozpoznać i rozszczepić cele kwasów nukleinowych. To crRNA może być zaprojektowane tak, aby celować w konkretny obszar DNA lub RNA poprzez hybrydyzację do sekwencji komplementarnej. Po związaniu powoduje rozszczepienie celu przez Cas12a specyficzność pojedynczych nukleotydów, a następnie rozszczepienie cząsteczek reporterowych12. Ostatnio zastosowano systemy CRISPR-Cas12a do wykrywania różnych ekonomicznie ważnych grzybowych patogenów roślinnych 13,14,15,16,17,18,19,20.
W tym protokole opisano opracowanie techniki detekcji pojedynczej rurki, łączącej uproszczoną ekstrakcję DNA, amplifikację polimerazy rekombinazowej (RPA) oraz technologię CRISPR/Cas12a (RPA-Cas12a) do wykrywania Foc TR4, co było wizualizowane zarówno na przenośnym fluorometrze, jak i gołym okiem pod niedrogim diodą LED w transilluminatorze niebieskim światłem21. Metoda ta może być dodatkowo optymalizowana pod kątem wykrywania w terenie, aby poprawić strategie zapobiegania i ograniczania działań. Podobne podejście można również wykorzystać do projektowania testów wykrywających na podstawie Cas12a dla innych patogenów roślinnych.

<table><tbody><tr><td>Białko EnGen Lba Cas12a (Cfp1)</td><td>New England Biolabs</td><td>M0653T</td><td></td></tr><tr><td>EnGen Lba Cas12a Diluent</td><td>New England Biolabs</td><td>B0653A</td><td></td></tr><tr><td>Rurki PCR Eppendorf</td><td>Merck</td><td>EP0030124332</td><td></td></tr><tr><td>Mikroprobówki Eppendorf Safe-Lock</td><td>Merck</td><td>EP0030121708</td><td></td></tr><tr><td>Worki ekstrakcyjne uniwersalne</td><td>BIOREBA</td><td>430100</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 100 bp drabiny DNA</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>SM0241 / SM0242</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka Genie Mini-6KO</td><td>OptiGene</td><td>OP-FUGE</td><td></td></tr><tr><td>Dżin III</td><td>OptiGene</td><td>https://www.optigene.co.uk/instruments/genie-iii/&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt na paski Genie</td><td>OptiGene</td><td>GBLOCK-01 / GBLOCK-02 / GBLOCK-03</td><td></td></tr><tr><td>Genie Strips</td><td>OptiGene</td><td>OP-0008-50 / OP-0008-500</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe T7 Zestaw do syntezy RNA o wysokiej wydajności</td><td>New England Biolabs</td><td>E2040S</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000 spektrofotometr UV/Vis</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>https://caeonline.com/buy/spectrometers/nanodrop-nd-1000/293669253</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 3</td><td>New England Biolabs</td><td>B7003S</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer r2.1</td><td>New England Biolabs</td><td>B6002S</td><td></td></tr><tr><td>Proszek poliwinylpirolidion (PVP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9003-39-8</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do czyszczenia RNA i koncentratora-5</td><td>Zymo Research</td><td>R1013</td><td></td></tr><tr><td>Barwnik ładunkowy RNA</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>R0641</td><td></td></tr><tr><td>Transiluminator światła SmartBlue Blue</td><td>Accuris Instruments</td><td>E4000-E</td><td></td></tr><tr><td>Pellety wodorotlenku sodu (NaOH)</td><td>Merck, EMPARTA</td><td>K277</td><td></td></tr><tr><td>Tris (hydroksylmetylo) aminometan</td><td>Merck</td><td>77-86-1</td><td></td></tr><tr><td>TwistAmp Liquid Basic Kit</td><td>TwistDx</td><td>TALQBAS01</td><td></td></tr></tbody></table>

połączony test amplifikacji polimerazy rekombinazy crispr/cas12a do wykrywania fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4

Combined Recombinase Polymerase Amplification CRISPR/Cas12a Assay for Detecting Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4

Regularny i dokładny nadzór jest kluczowy dla skutecznego zarządzania chorobami roślin. Może wskazywać, który sposób działania jest najbardziej odpowiedni oraz czy konieczne jest zapobieganie, zwalczanie działań lub brak działania. Monitorowanie oparte wyłącznie na symptomologii u roślin żywicielskich często nie jest wiarygodne ze względu na podobieństwa objawów wywołanych stresem biotycznym i abiotycznym. Laboratoryjne metody molekularne, takie jak reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) i ilościowe (q)PCR, są najczęściej i najbardziej wiarygodnie stosowane do wykrywania patogenów roślinnych, ale opierają się na kosztownym sprzęcie i wykwalifikowanych operatorach. Tutaj opisujemy protokół łączący uproszczoną ekstrakcję DNA, amplifikację polimerazy rekombinazy (RPA) oraz regularnie skupione, przeplatane krótkie powtórzenia palindromiczne (CRISPR)/Cas12a (RPA-Cas12a) do wykrywania inwazyjnego patogenu, Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4 (Foc TR4). Technika ta stanowi prostą alternatywę dla detekcji w pojedynczej rurce, która jest analitycznie odporna i ma lepszą specyficzność w porównaniu z dostępnymi testami detekcji molekularnej i eliminuje potrzebę drogiego i zaawansowanego sprzętu laboratoryjnego.

Skuteczne wykrycie Foc TR4 z zakażonego materiału roślinnego za pomocą uproszczonej ekstrakcji DNA, a następnie połączonego testu RPA-Cas12a przeprowadzonego w przenośnym fluorometrze Genie III zostało zilustrowane na Rysunku 4A. Próbki pozytywne wykazują widoczną fluorescencję (ścieżki 6-8), natomiast próbki negatywne wykazują niską fluorescencję końcową (ścieżka 1-5). Gdy próbki były oglądane pod niebieskim światłem LED, próbki zakażone Foc TR4 również wykazywały widoczną fluorescencję (<s...

W tym protokole ilustrowano test amplifikacji polimerazy rekombinazowej CRISPR/Cas12a do wykrywania inwazyjnego patogenu roślinnego, Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4.

Połączony test amplifikacji polimerazy rekombinazy CRISPR/Cas12a do wykrywania Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4

Regular and accurate surveillance stands central to the efficient management of plant diseases. It can indicate which course of action is most ...

Interesuje nas szybkie i dokładne wykrycie więdnięcia Fusarium patogenu bananowego, znanego jako Foc TR4. Połączenie amplifikacji polimerazy rekombinazowej i CRISPR eliminuje użycie kosztownych maszyn i poprawia dokładność bieżących testów. Na początek przelej 250 miligramów każdego kawałka objawowego pseudostemu do osobnego woreczka ekstrakcyjnego.Do każdego worka ekstrakcyjnego zawierającego materiał roślinny dodaj dwa mililitry roztworu wodorotlenku sodu o stężeniu 0,5 mola. Używając ręcznego młynka, takiego jak tłuczek, dokładnie zmiel zainfekowane naczynia wewnątrz worka ekstrakcyjnego. Następnie do probówki o pojemności 1,5 mililitra dodaj 195 mikrolitrów buforu Tris-HCl o pojemności 100 milimolarów przy pH 8.Pipetą podaj pięć mikrolitrów ekstraktu roślinnego z worka ekstrakcyjnego do rurki o pojemności 1,5 mililitra zawierającej bufor Tris-HCl, aby rozcieńczyć ekstrakt 40-krotnie. Rozkręć rurkę przez 15 do 30 sekund i przechowywać ją w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza do dalszego użycia. Korzystając z zestawu do transkrypcji RNA, dodaj podane składniki do rurki PCR o pojemności 0,2 mililitra.Inkubuj przygotowaną probówkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza w kąpieli wodnej lub do aparatu PCR przez co najmniej cztery godziny. Teraz użyj spektrofotometru, aby ilościowo określić przepisane RNA. Rozcieńcz RNA do stężenia 250 nanogramów na mikrolitr w końcowej objętości 40 mikrolitrów przy użyciu wody wolnej od nukleazy.Następnie poddaję próbce RNA DNazie, którą dołączyłem do zestawu do czyszczenia RNA, zgodnie z instrukcjami producenta. Następnie oczyść próbkę RNA za pomocą zestawu do czyszczenia RNA. Użyj urządzenia NanoDrop, aby określić ilość i jakość oczyszczonego RNA CRISPR.Następnie rozcieńcz RNA do 100 nanogramów na mikrolitr wodą wolną od nukleazy. Następnie podgrzej RNA CRISPR zmieszane z barwnikiem RNA do 70 stopni Celsjusza przez 10 minut w kąpieli wodnej i przeprowadź próbkę na żelu 1,5% agarozy, aby zwizualizować RNA CRISPR za pomocą elektroforezy. Przygotuj 20 mikrolitrów mieszaniny reakcji Cas12a w osobnej probówce o pojemności 0,5 mililitra, używając podanych składników.Następnie przygotuj 9,5 mikrolitra mieszaniny reakcji RPA w osobnej probówce o pojemności 0,5 mililitra z przedstawionymi tutaj składnikami. Włóż pasek z ośmioma probówek do stojaka na lodzie i przelej 20 mikrolitrów mieszaniny reakcji Cas12a do podstawy każdej probówki w pasku. Następnie przelej 9,5 mikrolitra mieszaniny reakcji RPA do pokrywki każdej probówki w pasku.Dodaj 0,5 mikrolitra octana magnezu o stężeniu 280 nanomolowych do mieszanki RPA w pokrywce i mieszaj przez pipetowanie w górę i w dół. Następnie dodaj 0,5 mikrolitra wody dejonizowanej do pokrywy rurki sterującej bez szablonu i ostrożnie ją zamknij, aby zapobiec mieszaniu się mieszanin reakcji RPA i Cas12a. Teraz dodaj 0,5 mikrolitra szablonowego DNA do 10 mikrolitrów mieszaniny reakcji RPA zawierającej octan magnezu w pokrywce paska probówki.Wymieszaj zawartość, pipetując w górę i w dół. Ostrożnie zamykaj wszystkie pokrywki rurek, aby upewnić się, że mieszaniny reakcji RPA i Cas12a się nie mieszają. Następnie włącz przenośny fluorimetr i stwórz profil przebiegu do testu RPA Cas12a.Otwórz zapisany profil biegu i umieść pasek rurki wewnątrz fluorymetru, aby inkubował przez 30 minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Po 30 minutach wyjmij pasek z fluorymetru, odwróć rurkę sześć razy, aby wymieszać reakcje RPA i Cas12a, i krótko obróć pasek w mini wirówce przez pięć sekund. Następnie znowu złóż pasek rurki do fluorymetru i inkubuj przez kolejne 30 minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza, korzystając z zapisanego profilu biegu.Interpretuj średnie względne jednostki fluorescencji mierzone na przenośnym fluorimetrze. Na koniec zwizualizuj lampy reakcyjne pod niebieskim światłem LED o długości fali wzbudzenia 465 nanometrów za pomocą transiluminatora niebieskiego światła i rejestruj obraz sygnału fluorescencyjnego za pomocą aparatu telefonu. Próbki pozytywne wykazały widoczną fluorescencję w przenośnym fluorimetrze Genie III po wykryciu DNA Foc TR4 przez RPA Cas12a, natomiast próbki negatywne wykazały niską fluorescencję końcową.Pod niebieskim światłem LED probówki zawierające DNA z roślinnego materiału zakażonego Foc TR4 wykazywały widoczną fluorescencję, natomiast probówki z DNA z niezakażonej tkanki nie wykazywały fluorescencji. Opracowaliśmy pierwszy test wykorzystujący technologię CRISPR do wykrywania Foc TR4. Po optymalizacji test zapewnia szybsze i dokładniejsze wykrywanie na tańszych urządzeniach niż istniejące testy komercyjne.Nasze dalsze badania będą dotyczyć detektora fluorescencyjnego połączonego ze smartfonem, który zostanie połączony z testem.

combined-recombinase-polymerase-amplification-crisprcas12a-assay-for

Research

JoVE Journal

Environment

Środowisko

Korzystając z montażu DNA, wiele wektorów CRISPR może być konstruowanych równolegle w jednej reakcji klonowania, co sprawia, że budowa dużej liczby wektorów CRISPR jest prostym zadaniem. Owłosione korzenie pomidora są doskonałym systemem modelowym do walidacji wektorów CRISPR i generowania zmutowanych materiałów.

Wysokoprzepustowa konstrukcja wektora CRISPR i charakterystyka modyfikacji DNA przez generowanie owłosionych korzeni pomidora

Opisujemy solidną strategię wymiany genów w celu genetycznego manipulowania grzybem Ustilago maydis. Ten protokół wyjaśnia, jak generować mutanty delecji w celu zbadania fenotypów infekcji. Można go rozszerzyć o modyfikację genów w dowolny sposób, np. poprzez dodanie sekwencji kodującej znacznik białka fluorescencyjnego.

Manipulacja genetyczna patogenu roślinnego Ustilago maydis w celu zbadania biologii grzybów i interakcji mikroorganizmów roślinnych

Tutaj prezentujemy metodę inżynierii genomu C. elegans przy użyciu rybonukleoprotein CRISPR-Cas9 i szablonów naprawy zależnych od homologii.

Szybki i łatwy proces generowania punktowych mutantów genomowych u C. elegans przy użyciu rybonukleoprotein CRISPR/Cas9

Celem tego protokołu jest umożliwienie bezproblemowej edycji genomu C. elegans za pomocą CRISPR/Cas9 przy użyciu złożonych kompleksów rybonukleoproteinowych i markera co-CRISPR dpy-10 do badań przesiewowych. Protokół ten może być stosowany do dokonywania różnych modyfikacji genetycznych u C. elegans, w tym insercji, delecji, wymiany genów i podstawiania kodonów.

Edycja CRISPR/Cas9 genu rbm-3.2 C. elegans przy użyciu markera przesiewowego dpy-10 Co-CRISPR i złożonych kompleksów rybonukleoproteinowych.

W tej pracy opracowano szybką, czułą i przenośną metodę wykrywania Candidatus Liberibacter asiaticus, opartą na amplifikacji polimerazy rekombinazy w połączeniu z CRISPR-Cas12a.

Wykrywanie Candidatus Liberibacter asiaticus do stosowania w terenie za pomocą amplifikacji polimerazy rekombinazy w połączeniu z CRISPR-Cas12a

Systemy CRISPR-Cas i białka anty-CRISPR zostały zintegrowane ze schematem bramek Boole'a u Saccharomyces cerevisiae. Nowe małe obwody logiczne wykazały się dobrą wydajnością i pogłębiły wiedzę zarówno na temat czynników transkrypcyjnych opartych na dCas9/dCas12a, jak i właściwości białek anty-CRISPR.

Genowe obwody cyfrowe oparte na systemach CRISPR-Cas i białkach anty-CRISPR

Prezentujemy protokół, który łączy amplifikację polimerazy rekombinazy z systemem CRISPR/Cas12a do wykrywania śladów wirusów DNA i tworzy przenośną mikroskopię smartfonów z klasyfikacją wspomaganą sztuczną inteligencją do wykrywania wirusów DNA w miejscu opieki nad pacjentem.

System detekcji wirusów DNA oparty na RPA-CRISPR/Cas12a-SPM i głębokim uczeniu

Tutaj prezentujemy krok po kroku przygotowanie premiksowanej, liofilizowanej amplifikacji izotermicznej opartej na rekombinazie i reakcji opartych na Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR), które mogą być wykorzystane do wykrywania biomarkerów kwasów nukleinowych patogenów chorób zakaźnych lub innych markerów genetycznych.

Diagnostyka oparta na CRISPR w miejscu opieki nad pacjentem z wstępnie zmieszanymi i liofilizowanymi odczynnikami

Aby ułatwić szybkie i precyzyjne wykrywanie Acinetobacter baumannii, przedstawiamy protokół, który wykorzystuje amplifikację polimerazy rekombinazy (RPA) w połączeniu z endonukleazą LbaCas12a do identyfikacji infekcji A. baumannii.

Szybkie i swoiste wykrywanie zakażeń Acinetobacter baumannii za pomocą systemu opartego na amplifikacji polimerazy rekombinazy/Cas12a

Tutaj opisujemy prostą i szybką procedurę wykrywania DNA z patogenów pszczół, takich jak Lotmaria passim i Nosema ceranae, przy użyciu lizy komórek gotowej do amplifikacji, amplifikacji polimerazy rekombinazy i testów CRISPR/Cas12a.

Wykrywanie DNA pasożytów trypanosomatydów i Nosema ceranae na miejscu poprzez alkaliczną lizę sprzężoną z systemem RPA/CRISPR/Cas12a

Poznaj połączony test RPA i CRISPR/Cas12a do szybkiego wykrywania Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4 u bananów. Ta metoda oferuje tanią i dokładną alternatywę dla istniejących technik diagnostycznych.

Połączony test amplifikacji polimerazy rekombinazy CRISPR/Cas12a do wykrywania Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4 (Wideo) | JoVE Journal

Połączony test amplifikacji polimerazy rekombinazy CRISPR/Cas12a do wykrywania Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4

Przeglądaj więcej filmów