Name: Modelowanie dysplastycznej i funkcjonalnej naprawy płuc pęcherzyków płucnych po zakażeniu grypą (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Poznaj metodę wewnątrznosowego podawania wirusa grypy A myszom w celu analizy uszkodzeń płuc i zmian transkrypcyjnych w komórkach śródbłonka oraz makrofagów pęcherzykowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania te były wspierane przez Intramural Research Program amerykańskich National Institutes of Health (NIH), National Cancer Institute oraz Center for Cancer Research.

<ol><li>Mammoto, A., Mammoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+niche+in+lung+alveolar+development%2C+homeostasis%2C+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vascular niche in lung alveolar development, homeostasis, and regeneration.</a> Front Bioeng Biotechnol. 7, 318(2019).</li>
<li>Tsikis, S. T., Hirsch, T. I., Fligor, S. C., Quigley, M., Puder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+lung+endothelial+niche+to+promote+angiogenesis+and+regeneration%3A+a+review+of+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Targeting the lung endothelial niche to promote angiogenesis and regeneration: a review of applications.</a> Front Mol Biosci. 9, 1093369(2022).</li>
<li>Torrego, A., Pajares, V., Mola, A., Lerma, E., Franquet, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+%28H1N1%29+organising+pneumonia%3A+figure+1%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Influenza A (H1N1) organising pneumonia: figure 1.</a> BMJ Case Rep. 2010, bcr1220092531(2010).</li>
<li>Murota, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+H1N1+virus-associated+pneumonia+often+resembles+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease+seen+in+collagen+vascular+diseases+and+COVID-19+pneumonia%3B+CT-pathologic+correlation+in+24+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Radiol+Open%22%5BJournal%5D)">Influenza H1N1 virus-associated pneumonia often resembles rapidly progressive interstitial lung disease seen in collagen vascular diseases and COVID-19 pneumonia; CT-pathologic correlation in 24 patients.</a> Eur J Radiol Open. 7, 100297(2020).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Klomp, M., Ghosh, S., Mohammed, S., Khan, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+virus+to+inflammation%2C+how+influenza+promotes+lung+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">From virus to inflammation, how influenza promotes lung damage.</a> J Leukoc Biol. 110 (1), 115-122 (2021).</li>
<li>Newton, A. H., Cardani, A., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+host+immune+response+in+respiratory+virus+infection%3A+balancing+virus+clearance+and+immunopathology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">The host immune response in respiratory virus infection: balancing virus clearance and immunopathology.</a> Semin Immunopathol. 38 (4), 471-482 (2016).</li>
<li>Jones, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+injury-induced+mesenchymal-epithelial+cell+niche+coordinates+regenerative+responses+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An injury-induced mesenchymal-epithelial cell niche coordinates regenerative responses in the lung.</a> Science. 386 (6727), eado5561(2024).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+single-cell+profiles+of+lung+regeneration+after+viral+infection+reveal+persistent+injury-associated+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Longitudinal single-cell profiles of lung regeneration after viral infection reveal persistent injury-associated cell states.</a> Cell Stem Cell. 32 (2), 302-321.e6 (2025).</li>
<li>Belser, J. A., Gustin, K. M., Katz, J. M., Maines, T. R., Tumpey, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+traditional+intranasal+and+aerosol+inhalation+inoculation+of+mice+with+influenza+A+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Comparison of traditional intranasal and aerosol inhalation inoculation of mice with influenza A viruses.</a> Virology. 481, 107-112 (2015).</li>
<li>Oltean, T., Maelfait, J., Saelens, X., Vandenabeele, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Need+for+standardization+of+influenza+A+virus-induced+cell+death+in+vivo+to+improve+consistency+of+inter-laboratory+research+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Need for standardization of influenza A virus-induced cell death in vivo to improve consistency of inter-laboratory research findings.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 247(2024).</li>
<li>Nguyen, T. -Q., Rollon, R., Choi, Y. -K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+influenza+research%3A+strengths+and+weaknesses%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal models for influenza research: strengths and weaknesses.</a> Viruses. 13 (6), 1011(2021).</li>
<li>Jin, X. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+pathogenicity+of+influenza+virus-induced+pneumonia+mouse+model+following+intranasal+and+aerosolized+intratracheal+inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Comparative pathogenicity of influenza virus-induced pneumonia mouse model following intranasal and aerosolized intratracheal inoculation.</a> Virol J. 21 (1), 240(2024).</li>
<li>Revelli, D. A., Boylan, J. A., Gherardini, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-invasive+intratracheal+inoculation+method+for+the+study+of+pulmonary+melioidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A non-invasive intratracheal inoculation method for the study of pulmonary melioidosis.</a> Front Cell Infect Microbiol. 2, 164(2012).</li>
<li>Cantu, A., Gutierrez, M. C., Dong, X., Leek, C., Anguera, M., Lingappan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+recovery+from+neonatal+hyperoxic+lung+injury+by+sex+as+a+biological+variable%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of recovery from neonatal hyperoxic lung injury by sex as a biological variable.</a> Redox Biol. 68, 102933(2023).</li>
<li>Sunagar, R., Kumar, S., Namjoshi, P., Rosa, S. J., Hazlett, K. R. O., Gosselin, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+an+outbred+mouse+model+for+Francisella+tularensis+vaccine+development+and+testing%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of an outbred mouse model for Francisella tularensis vaccine development and testing.</a> PLoS One. 13 (12), e0207587(2018).</li>
<li>Cowley, P. M., Roberts, C. R., Baker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+health+status+of+mice+with+bleomycin-induced+lung+injury+by+using+body+condition+scoring%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring the health status of mice with bleomycin-induced lung injury by using body condition scoring.</a> Comp Med. 69 (2), 95-102 (2019).</li>
<li>Gonzalez, A. J., Ijezie, E. C., Balemba, O. B., Miura, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+influenza+A+virus+disease+severity+by+viral+coinfection+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Attenuation of influenza A virus disease severity by viral coinfection in a mouse model.</a> J Virol. 92 (23), e00881-e00918 (2018).</li>
<li>Lv, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+pulmonary+immune+cells%2C+antibody+responses+and+their+correlations+with+the+viral+clearance+of+influenza+A+fatal+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Kinetics of pulmonary immune cells, antibody responses and their correlations with the viral clearance of influenza A fatal infection in mice.</a> Virol J. 11, 57(2014).</li>
<li>Liberti, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+cell+fate+is+maintained+in+a+spatially+restricted+manner+to+promote+lung+regeneration+after+acute+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial cell fate is maintained in a spatially restricted manner to promote lung regeneration after acute injury.</a> Cell Rep. 35 (6), 109092(2021).</li>
<li>Cipolla, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+and+nasal+biologics%3A+analytical%2C+formulation%2C+development%2C+and+regulatory+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Aerosol+Med+Pulm+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Inhalable and nasal biologics: analytical, formulation, development, and regulatory considerations.</a> J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 2024, (2025).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), (2014).</li>
<li>Bouvier, N. M., Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+influenza+virus+pathogenesis+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal models for influenza virus pathogenesis and transmission.</a> Viruses. 2 (8), 1530-1563 (2010).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Tutaj przedstawiliśmy wygodną metodę przeniesienia wirusa grypy do myszy, aby szybko i skutecznie uszkadzać płuca myszy oraz badać mechanizmy skutecznej regeneracji i dysplastycznej naprawy. Wykazujemy, że donośna inokulacja A/PR/8/34 IAV może być techniką bezstresową. Zakończenie inokulacji po znieczuleniu izofluranem zajmuje mniej niż 2 minuty na mysz. Jest to prosta i nieinwazyjna technika szczepienia wirusa, która podąża naturalną ścieżką infekcji i pozwala badać reakcję zarówno tkanki, jak i układu odpornościowego w sposób bardziej fizjologicznie istotny. Wirus zaszczepiony przez nozdrza myszy może wywołać zarówno odporność śluzową, jak i ogólnoustrojową21. Co ważniejsze, uszkodzenia spowodowane infekcją wirusową są wyraźnie widoczne w przecinkach tkanki płuc zabarwionych hematoksyliną i eozyną (HE)22 (Rysunek 1). Pełna oś czasu oczekiwanych zmian transkrypcjowych w typach komórek płuc w każdym przedziale płuca została wcześniej opublikowana9. Tutaj ponownie przeanalizowaliśmy część tych danych, aby wykazać, że w kapilarnych przedziałach immunologicznych płuc myszy zachodzą przejściowe i trwałe zmiany transkrypcyjne w ciągu odpowiedzi na zakażenie grypą u niezakażonych myszy do roku po zakażeniu (Rysunek 2).
W tym protokole jest kilka kluczowych etapów, a odpowiednie rozwiązywanie problemów z tymi krokami prowadzi do udanego eksperymentu. Wirus grypy A/PR/8/34 to szczep grypy przystosowany do myszy, który nie zakaża produktywnie ludzi23, ale zawsze ważne jest, aby podczas eksperymentu przestrzegać wszystkich wskazanych procedur bezpieczeństwa, aby uniknąć ryzyka zakażenia personelu laboratoryjnego. Podanie znieczulenia izofluranem jest kluczowym krokiem zapewniającym skuteczne dostarczenie wirusa, ponieważ myszy nie wdychają wirusa dobrze, gdy są przytomne. Sprawdź oddech i monitoruj ruchy głowy myszy podczas zabiegu, aby upewnić się, że wirus został zaszczepiony w obu nozdrzach. Jeśli myszy nie są całkowicie znieczulone, mogą powstać pęcherzyki, które zarówno ograniczają wdychanie wirusa, jak i generują aerozole. Oba wypadki powinny być unikane, a myszy powinny być ponownie umieszczone na stożku izofluranowym, jeśli zaobserwuje się kichanie lub pęcherzyki przy nozdrzach. Monitorowanie po infekcji, takie jak mierzenie utraty masy ciała, oceny kondycji ciała i stanu zdrowia, a także dostarczanie suplementu diety do regeneracji, jest również ważnym elementem tego eksperymentu. Jeśli zaobserwuje się, że myszy nie tracą wystarczającej ilości masy ciała lub nie mają oczekiwanego poziomu uszkodzenia tkanek (Rysunek 1), możliwe, że dawka jest zbyt niska; Z drugiej strony, jeśli wiele myszy osiągnie 30% utraty masy ciała, możliwe, że dawka jest zbyt wysoka. W obu przypadkach najlepiej określić właściwą dawkę poprzez empiryczne miano serii wirusa, korzystając z kohorty myszy C57BL/6, jak opisujemy tutaj.
Ponieważ zakażenie grypą nadal jest powszechne na całym świecie, powoduje ciężkie choroby układu oddechowego i może być śmiertelne, zrozumienie procesu zakaźności wirusowej oraz odpowiedzi komórkowej na infekcję i uszkodzenie tkanek w płucach jest niezwykle ważne. Metoda infekcji wewnątrznosowej opisana w tym badaniu może zatem pomóc w identyfikacji ważnych mechanizmów regulacyjnych oraz opracowaniu nowych metod terapeutycznych w leczeniu chorób płuc. Ponadto przyszłe zastosowania tej techniki mogłyby wykorzystać inny szczep wirusa grypy przystosowanej do myszy, taki jak X31, aby określić wpływ na strukturę i funkcjonowanie tkanki płucnej w przypadku powtarzających się infekcji dróg oddechowych. Ponieważ wiele osób w ciągu życia cierpi na liczne infekcje dróg oddechowych, takie rozszerzenie tego modelu mogłoby mieć istotne znaczenie dla badań nad regeneracją tkanek płucnych, a tym samym dla zdrowia publicznego.

Płuca odgrywają kluczową rolę w dostarczaniu tlenu i składników odżywczych do lokalnych tkanek. Komórki śródbłonka (EC), które wypełniają małe naczynia krwionośne w naczyniach kapilarnych płuc, są niezbędne do prawidłowego funkcjonowania tkanki płucnej, utrzymując integralność naczyń i efektywną wymianę gazów1. EC tworzą niszę naczyniową i wzajemnie komunikują się z innymi komórkami, takimi jak komórki nabłonkowe, układy odpornościowe i komórki mezenchymalne. Przyczynia się to do regulacji rozwoju płuc oraz naprawy tkanek w odpowiedzi na uraz lub chorobę2.
Zakażenie wirusem grypy H1N1 A to problem na całym świecie3. U pacjentów z zakażeniem H1N1 często diagnozuje się wysypane uszkodzenie pęcherzyka wysypowego (DAD)4. Zakażenie H1N1 może prowadzić do poważnych uszkodzeń płuc i poważnych konsekwencji, w tym zapalenia płuc, ciężkiego ostrego uszkodzenia płuc (ALI) oraz ostrego zespołu niedowładności oddechowej (ARDS)5. Uszkodzenia wynikają głównie z infekcji komórek nabłonka płuc przez wirusa, co wywołuje nadmierną reakcję immunologiczną prowadzącą do stanu zapalnego, uszkodzenia tkanek i gromadzenia się płynu w płucach. Komórki nabłonkowe wyściełające drogi oddechowe i pęcherzyki oddechowe, odpowiedzialne za wymianę gazów, są bezpośrednio uszkadzane przez wirusa H1N1, co prowadzi do zaburzenia prawidłowej struktury płuc 6,7. Stało się jasne, że inne typy komórek, choć nie są bezpośrednio zakażone IAV, mogą ulec uszkodzeniu w odpowiedzi na infekcję 8,9. Uszkodzenie tkanek po zakażeniu grypą dotyka więc wszystkie przedziały komórkowe płuc, a ostatnio wykazano, że infekcja IAV powoduje zarówno przejściowe, jak i trwałe zmiany stanu komórkowego w wielu przedziałach komórkowych9. Ta plastyczność komórek w odpowiedzi na chorobę może być pomocna lub szkodliwa dla skutecznej naprawy tkanek i wymaga dalszych badań.
Najczęściej stosowanym modelem eksperymentalnym do badania grypy i jej patogenezy jest zakażenie myszy przez nos wirusem grypy A/PR/8/3410. Jest to ważna technika umożliwiająca badanie nasilenia choroby, śmiertelności i zakaźności wirusowej. Infekcja wewnątrznosowa myszy naśladuje naturalną drogę zakażenia u ludzi i umożliwia badanie zarówno adaptacyjnej, jak i wrodzonej odporności na wirusa. W 1934 roku wyizolowano konkretny szczep wirusa grypy A "A/PR/8/34" z pacjenta w Portoryko11. Ten szczep wirusa grypy został już przystosowany do myszy i nie infekuje już produktywnie ludzi. Ze względu na podobieństwa między myszami a ludzkim układem odpornościowym, myszy są najpopularniejszym modelem zwierzęcym do badań nad IAV12. W tej metodzie szczep H1N1 A/PR/8/34 jest podawany myszom bezpośrednio przez nozdrza, naśladując naturalne zakażenie13. Jest to łatwa, opłacalna i wygodna metoda badania wpływu infekcji wirusowej na tkankę płuc gospodarza w warunkach typu dzikiego (WT) oraz knockoutu (KO). Alternatywne techniki mają zalety i wady w porównaniu z modelem donosowym. Szczepienie wewnątrztchawicowe (IT) pozwala na dokładne dostarczenie wirusa do płuc, jednak ta technika nie w pełni naśladuje infekcji przez wdech i nie dostarcza informacji o toksyczności w górnych dróg oddechowych. Szczepienie IT wymaga również dużych umiejętności, aby zmniejszyć ryzyko uszkodzenia tchawicy13,14. Inokulacja inhalacją aerozolem (AR) naśladuje naturalną drogę zakażenia i tworzy bardziej jednolitą patologię płuc w porównaniu z infekcją wewnątrznosową, jednak może być trudno utrzymać jednolite stężenie wirusa w aerozoli i osiągnąć dokładne podanie aerozolu wirusowego. Bezpieczeństwo jest również ważnym aspektem metody szczepienia AR10. Dlatego technika donośnej inokulacji w podawaniu IAV jest kluczowym podejściem do badań skoncentrowanych na płucach nad dalszymi skutkami infekcji wirusowej w uszkodzeniach i naprawie tkanek. W przeciwieństwie do modeli chemicznych czy mechanicznych, zapewnia bardziej realistyczny i mniej inwazyjny sposób badania uszkodzeń płuc wywołanych przez grypę oraz interakcji gospodarz-patogen.
Tutaj ustalamy powtarzalną metodę zakażenia myszy wirusem grypy A u myszy (A/PR/8/34) oraz do charakteryzowania zarówno krótkotrwałych, jak i długoterminowych zmian komórkowych i strukturalnych w pęcherzyku płucnym wynikających z uszkodzenia wirusowego. Badania z użyciem tej metody mogą pomóc w odkrywaniu mechanizmów uszkodzeń i naprawy tkanek płucnych, aby zidentyfikować nowe cele terapeutyczne dla chorób płuc.

<table><tbody><tr><td>1,5 mL w tubce;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-557</td><td></td></tr><tr><td>100 &mikro; Sitnik komórek M</td><td>Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>15 mL stożkowa lampa</td><td>Falcon</td><td>352196</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibc0</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>40 & mikro; Sitnik komórek M</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Rurka 5 mL</td><td>Globe</td><td>6101C</td><td></td></tr><tr><td>50 mL stożkowa rurka</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Akcje A/PR/8/34 Influenza Virus</td><td>ATCC&nbsp;</td><td>VR-95PQ</td><td>Różne grupy mają różne miary wirusowe</td></tr><tr><td>Bufor lizy ACK</td><td>Jakość biologiczna</td><td>118-156-101</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało anty-TRKB</td><td>R& D Systems</td><td>AF1494</td><td></td></tr><tr><td>Wybielacz</td><td>Clorox</td><td></td><td>10% wybielacza</td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A8022</td><td></td></tr><tr><td>Komora indukcyjna do znieczulenia CO2</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Kolagenaza typu I</td><td>Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Milipore Sigma</td><td>28718-90-3</td><td></td></tr><tr><td>Dyspos</td><td>Corning</td><td>CB-40235</td><td></td></tr><tr><td>Narzędzia do sekcji: nożyczki, zakrzywione kleszcze, proste kleszcze</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>4716728001</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Szklane fiolki</td><td>DWK Nauki o Życiu</td><td>986562</td><td></td></tr><tr><td>Wiadro z lodem</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Izofluran</td><td>Covetrus</td><td>29404</td><td></td></tr><tr><td>Igły, 21 i poduszka; 23 G</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>P20/P200 pipetka & nbsp;</td><td>Pipetman</td><td>F144056M/F144058M,</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki pipety P20/P200</td><td>Thomas Scientific</td><td>1159M43/1159M40</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA) &nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>J19943-k2</td><td>2% PFA</td></tr><tr><td>Pipetman</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Plastikowe lub kartonowe pudełka do zamrażania</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Żyletka</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Ring Stand</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Pipety serologiczne, 5 mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Komora izofluranowa z indukcyjną myszą z wysuwem na górze</td><td>Somni Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szew</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9422522</td><td></td></tr><tr><td>Rurki strzykawkowe i blokady luer-lock</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka, 10 mL</td><td>Dowolny</td><td>Nie ma</td><td></td></tr><tr><td>Aparat do znieczulenia stołowego izofluran</td><td>Ohmeda</td><td>Ohmeda Isotec- 4</td><td>Przepływ powinien wynosić 2,5 i smysł; 3%</td></tr><tr><td>Agaroza o ultra-niskim topnieniu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5030-1G</td><td></td></tr><tr><td>Waga waga</td><td>OHAUS</td><td>CS200</td><td></td></tr></tbody></table>

modelowanie dysplastycznej i funkcjonalnej naprawy płuc pęcherzyków płucnych po zakażeniu grypą

Modeling Dysplastic and Functional Lung Alveolar Repair after Influenza Infection

Zakażenie wirusowe powoduje zarówno ostre, jak i długotrwałe uszkodzenia pęcherzyka płucnego, wyspecjalizowanej struktury tkanki odpowiedzialnej za wymianę gazów między układem sercowo-naczyniowym a środowiskiem zewnętrznym. Zakażenie wirusem grypy A (IAV) u myszy stanowi model translacyjny odpowiedzi ludzkiego płuca na infekcję wirusową i wywołuje zarówno przejściowe, jak i trwałe zmiany stanu komórkowego w pęcherzyku płucnym. W niektórych przypadkach nieprawidłowe stany komórkowe wywołane uszkodzeniem wirusowym, które nie ustępują z czasem, mogą trwale upośledzić kluczową funkcję wymiany gazowej płuc. Niniejszy artykuł demonstruje metody zakażenia nosa myszy IAV A/PR/8/34 oraz charakteryzuje przejściowe i długotrwałe zmiany w składzie komórkowym i strukturze tkanek uszkodzonych płuc. Model ten umożliwia szczegółowe badanie molekularnych i komórkowych mechanizmów leżących u podstaw naprawy płuc i przewlekłych zaburzeń. Takie podejście stanowi również platformę do oceny interwencji terapeutycznych mających na celu wspieranie skutecznej regeneracji płuc i przywracanie funkcji oddechowej po uszkodzeniu spowodowanym wirusem.

W porównaniu z myszami niezainfekowanymi, leczonymi PBS, myszy zakażone IAV wykazują niejednorodne uszkodzenia tkanek (Rysunek 1A). Uszkodzenia tkanek można ilościowo określić za pomocą algorytmu klastrowania k-średnich w MATLAB20 (Rysunek 1B). Myszy zakażone IAV zaczną tracić na wadze między 3 a 4 dniami po zakażeniu. Przy idealnym mianie myszy tracą od 20 do 30% początkowej masy ciała, a maksymalna utrata masy ciała następuje 8-10 dni po zakażeniu (dpi) (Rysunek 1C). Do 11-12 dpi myszy powinny zacząć przybierać na wadze i wrócić do 10-15% swojej początkowej masy ciała do 14 dpi. W badaniach regeneracji jest przydatne, jeśli większość myszy w eksperymencie schudnie i doznała uszkodzeń tkanek, ale nie umiera. Jednak ze względu na heterogeniczność uszkodzeń tkanek (rysunek 1A,B) oraz możliwą zmienność podawania donastopustowego, normalne jest, że kilka myszy w eksperymencie nie traci na wadze ani nie dochodzi do uszkodzenia tkanek, a kilka myszy traci >30% masy ciała, co prowadzi do eutanazji (rysunek 1D). Eksperymenty mające na celu określenie różnicy w przeżyciu i utracie masy ciała pomiędzy na przykład myszami z KO danego genu a ich kontrolnymi grupami WT mogą wymagać korekty miana i dawki IAV oraz wykonania obliczenia mocy, aby określić wielkość próbki potrzebnej do wykrycia takiej różnicy w tych dwóch parametrach.
Oprócz zmian w ogólnej strukturze tkanek i zdrowiu myszy, zmiany transkrypcyjne we wszystkich przedziałach komórkowych płuc zachodzą w trakcie reakcji tkanek na uszkodzenia. Obejmuje to zarówno stany przejściowe, które ostatecznie ustępują w miarę naprawy tkanki, w tym stany komórek nabłonka przejściowego lub pośredniego oraz stany komórek odpornościowych szpiku, jak i stany komórek utrzymujących, które nie przyczyniają się do funkcjonalnej naprawy, w tym komórki nabłonkowe Krt5+ i śródbłonkowe TrkB+9. Na przykład w śródbłonku kapilarnym płuca myszy pojawia się przejściowy stan komórek śródbłonka stymulowany interferonem przy 6 dpi, charakteryzujący się wysoką ekspresją genów stymulowanych interferonem (Rysunek 2A). Ten stan rozwiązuje się o 11-19 dpi (Rysunek 2A). Stan śródbłonka kapilarnego (iCAP) wywołany urazem powstaje przy 11 dpi, charakteryzujący się wysoką ekspresją Ntrk2 (TRKB), Sparcl1 i Bnip3 (Rysunek 2B). W przeciwieństwie do stanu komórek śródbłonka stymulowanego interferonem, stan komórki śródbłonka iCAP utrzymuje się w obszarach poważnie uszkodzonych tkanek i jest obecny rok po zakażeniu (Rysunek 2C). Po infekcji pojawiają się także przejściowe stany komórek nabłonka pęcherzykowego, w tym komórki przejściowe i niedojrzałe stany nabłonka pęcherzyka pęcherzyka I (AT1), które powstają po infekcji (Rysunek 2D). Wreszcie, infekcja prowadzi do utraty wielu endogennych makrofagów pęcherzykowych (aMAC_a) oraz ich odbudowy zarówno z monocytów zapalnych (iMON), jak i endogennych aMACów. Makrofagi pęcherzykowe rok po zakażeniu mają różne stany transkrypcyjne (aMAC_a i aMAC_b) w zależności od swojego pochodzenia (Rysunek 2E)9. Przejściowe i utrzymujące się stany komórkowe pojawiające się po ostrym uszkodzeniu płuc wymagają dalszych badań, ponieważ ich nieprawidłowe zachowanie w niszy może przyczyniać się do skutecznej naprawy tkanek i jej funkcjonowania zarówno produktywnie, jak i negatywnie. Dane sekwencjonowania RNA pojedynczych komórek zostały wcześniej opublikowane9 i są deponowane w Omnibusie Ekspresji Genów jako GEO: GSE262927.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69062/69062fig1.jpg" /> 
Rysunek 1: Monitorowanie urazów płuc i zdrowia zwierząt. (A) Barwienie hematoksyliny i eozyny (HE) przekrojów tkanki płucnej z płuca zakażonego pozornie (PBS) po lewej stronie oraz płuca zakażonego IAV po prawej stronie. W porównaniu z nieuszkodzonym płucem, płuco zakażone IAV wykazuje niejednorodne uszkodzenia tkanek. Paski skalowe, 1 mm. (B) Stosując algorytm klasteryzacji k-średniej w MATLAB20, uszkodzenia tkanek można scharakteryzować jako poważne (czerwone), uszkodzone (zielone) lub normalne (niebieskie). Ważne jest, aby zauważyć, że w płatku płuca leczonym PBS po lewej stronie struktury dróg oddechowych są klasyfikowane jako "ciężkie" ze względu na gęstość i intensywność barwienia komórek nabłonka dróg oddechowych. Jednak nadal można łatwo dostrzec różnicę między płucami leczonymi PBS a zakażonymi grypą, biorąc pod uwagę ten poziom wyjściowy. Paski łuski, 1 mm. (C) Przykład krzywej utraty masy ciała z reprezentatywnego eksperymentu z infekcją IAV, w którym płuca myszy zostały pobrane 13 dni po zakażeniu (dpi). Krzywa zawiera dane od sześciu myszy typu dzikiego, a kropki oznaczają średnią, natomiast słupki błędu oznaczają standardowy błąd średniej. (D) Przykładowa krzywa przeżycia z reprezentatywnego eksperymentu z infekcją IAV, w którym płuca myszy zostały pobrane 14 dni po zakażeniu (dpi). Krzywa zawiera dane od siedmiu dzikich myszy. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69062/69062fig1large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69062/69062fig2.jpg" /> 
Rysunek 2: Monitorowanie zmian stanu komórek śródbłonka kapilarnych po zakażeniu IAV. (A) Stan EC stymulowany interferonem powstaje przy 6 dpi, który jest rozdzielany między 11-19 dpi. Ponowna analiza opublikowanych danych sekwencjonowania RNA pojedynczych komórek z płuc myszy w kilku różnych momentach po zakażeniu grypą pokazuje, że wskaźnik modułów interferonowych we wszystkich typach komórek śródbłonka kapilarnych jest najwyższy i wynosi 6 dpi. Dane zostały ponownie przeanalizowane za pomocą R, a wynik modułu interferonu opiera się na ekspresji 87 genów stymulowanych interferonem w każdym typie komórek. CAP1, komórka śródbłonka kapilarnego typu 1; iCAP, komórka śródbłonka wywołanego urazem; CAP2, komórka śródbłonka typu kapilarnego typu 2; EC, komórka śródbłonkowa. (B) Dla porównania, stan EC wywołany urazem, charakteryzujący się ekspresją Ntrk2 (TRKB), pojawia się przy 11 dpi i utrzymuje się do roku po zakażeniu. Pasek skalowy, 500 μm. (C) Dane transkrypcyjne z sekwencjonowania pojedynczych komórek RNA komórek śródbłonka śródbłonka śródbłonka płuc po zakażeniu grypą pokazują dynamiczny charakter stanu komórek śródbłonka kapilarnego podczas naprawy tkanek. (D) Komórki nabłonka pęcherzyka również doświadczają plastyczności komórkowej po zakażeniu grypą. Typ komórki przejściowej pęcherzyka wyrostowego powstaje między 6-11 dpi i jest rozdzielony przez 19 dpi. Niedojrzały stan komórkowy AT1 (AT1_c) powstaje przy 11 dpi i utrzymuje się do 90 dpi. (E) Po zakażeniu wiele istniejących makrofagów pęcherzyków (aMAC_a) zostaje utracone, a napływ zapalnych monocytów (iMON) obserwuje się przy 6 dpi. Populacja makrofagów pęcherzykowych jest rekonstytuowana zarówno przez istniejące aMAC, aby odtworzyć populację aMAC_a, jak i przez zapalne monocyty, generując populację aMAC_b. Chociaż oba reprezentują stan makrofagów pęcherzykowych, powstałe aMAC można rozróżnić transkrypcjono. Wykresy w (C-E) pokazują procent komórek w każdej populacji w każdym momencie czasowym w zbiorze danych o zakażeniu grypą podłużnym i zostały wygenerowane za pomocą R. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69062/69062fig2large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego wykresu.</a>
Plik uzupełniający 1: Dziennik próbek urazów, wagi i wskaźnika kondycji ciała (BCS) do monitorowania zwierząt po zakażeniu grypą. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69062/Supplementary File 1.xlsx" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.</a>

Protokół ten zawiera instrukcje dotyczące podawania IAV w ciągu nosa oraz dalszej analizy uszkodzeń płuc myszy i związanych z tym zmian transkrypcyjnych typów komórek płucnych.

Modelowanie dysplastycznej i funkcjonalnej naprawy płuc pęcherzyków płucnych po zakażeniu grypą

Viral infection causes both acute and long-term damage to the lung alveolus, the specialized tissue structure responsible for gas exchange between the ...

Nasze badania koncentrują się na poprawie naprawy płuc po uszkodzeniach spowodowanych infekcją lub chorobą przewlekłą. Badamy komórki śródbłonka wyściełające naczynia krwionośne w płucach, które wykonują wymianę gazową. Postępy w technologiach sekwencjonowania pojedynczych komórek pozwalają nam identyfikować niezwykłą heterogeniczność stanów komórek płucnych, w tym chorób, ale wciąż nie rozumiemy w pełni funkcji tych stanów komórkowych.Zakażenie wewnątrznosowe to prosta i nieinwazyjna techniczna szczepionka wirusowa, która podąża za naturalnym źródłem infekcji i umożliwia badanie zarówno adaptacyjnej, jak i wrodzonej odpowiedzi immunologicznej przeciwko wirusowi. Grypa pozostaje powszechna na całym świecie i powoduje poważne choroby układu oddechowego. Dlatego zrozumienie zakaźności wirusowej oraz odpowiedzi komórkowej na infekcje i uszkodzenia tkanek jest kluczowe dla opracowania skutecznych terapii.Na początek sprawdź oddech znieczulonej myszy. Wykonaj szczypnięcie palca i obserwuj reakcję. Postępuj tylko wtedy, gdy mysz zareaguje lekkim drgawką lub podskoczy, nie poruszając głową.Używając pipety P200 ustawionej na 50 mikrolitrów, aspiruj rozcieńczonego wirusa grypy A z fiolki na lodzie. Postaw pipetę na pudełku na końcówki lub ręczniku papierowym, upewniając się, że końcówka nie dotyka rękawiczek ani powierzchni szafki na zabezpieczenia biologicznego. Teraz podnieś znieczuloną mysz, łapiąc za kark i trzymaj ją pionowo pod kątem 45 stopni.Utrzymuj mocny chwyt, aby wydłużyć tchawicę dla lepszego wdechu, jednocześnie dbając o płytki i równy oddech bez łapania powietrza. Wpuszczaj wirusowe rozcieńczenie do nozdrzy kropelowo, na przemian przez nozdrza, aby wirus dostał się do obu stron nosa. Alternatywnie, stworzyć bańkę wirusowego rozcieńczenia obejmującą oba nozdrza, powoli i konsekwentnie pipetując podczas wdychania płynu przez mysz.Trzymaj końcówkę pipety blisko nosa myszy, nie dotykając jej z nią. Jeśli mysz zaczyna się budzić, podaj tylko połowę dawki. Po podaniu wirusa grypy typu A trzymaj mysz pionowo przez jedną do dwóch minut, aby utrzymać drożność dróg oddechowych i zapewnić skuteczne dostarczanie do płuc.Delikatnie połóż po jednym palcu po każdej stronie klatki piersiowej myszy, aby wyczuć trzaski, co wskazuje na pomyślny podanie do płuc. Gdy mysz zacznie się regenerować, odłóż ją do klatki, aby w pełni się zregenerowała. Obserwuj mysz, aż stanie się poruszająca.Po uśpieniu myszy rozcinaj klatkę piersiową, aby odsłonić klatkę piersiową i tchawicę. Rozciąń przeponę i delikatnie oddziel ją od klatki piersiowej, nie przebijając płuc. Następnie przetnij wzdłuż obu stron klatki piersiowej i zdejmij ją z góry.Przeciąć obojczyki i rozdzielić otaczającą kość oraz tkanki miękkie z przodu tchawicy. Następnie rozciągnij mięsień i tkanki otaczające tchawicę, aż pierścienie chrząstkowe będą wyraźnie widoczne, nie przebijając tchawicy. Za pomocą zakrzywionych kleszczy wypchnij przełyk zza tchawicy i całkowicie go rozcinaj.Następnie przewiń kawałek szwu za tchawicę i zawiąż luźny supeł. Przeciąć duże naczynie krwionośne i przekręcić układ krążenia, powoli wstrzykując DPBS przez prawą komorę serca. Aby napompować płuca do histologii lub immunofluorescencji, napompuj płuca w 2% paraformaldehydu i odwodnij przez serię etanolową w celu osadzenia parafiny.Do napompowania płuc ręcznie użyj strzykawki i igły o grubości 21–23 z rurką lub bez, albo przymocuj rurkę z 2% paraformaldehydu do podstawki pierścieniowej ustawionej 30 centymetrów nad stołem w celu napompowania grawitacyjnego. Włóż igłę na górę tchawicy tak, że faza jest skierowana do góry, uważając, by nie przebić dolnej części tchawicy. Przed wprowadzeniem utrwalacza dokręć szew, nie wokół tchawicy i igły.Aby przygotować zawiesinę jednokomórkową do cytometrii przepływowej lub sekwencjonowania jednokomórkowego, usuń tkankę płucną z DPBS i siekaj nożyczkami. Dalej tnij tkankę żyletką przez dwie do trzech minut, aby uzyskać równomierne kawałki. Rozłącz tkankę w buforze trawiennym zawierającym kolagenazę 1, rozprowadź i DNazę w DPBS w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 do 35 minut.Następnie przefiltruj rozłączoną tkankę przez filtry komórek o średnicy 100 i 40 mikrometrów. Liz czerwonych krwinek z użyciem chlorku amonu i buforu lizy potasu. Ponownie zawiesić ostatni pellet komórkowy w 1% Albuminie surowicy bydlęcej w PBS do dalszej analizy.Płuca zakażone grypą wykazywały zróżnicowane uszkodzenia strukturalne w porównaniu do fałszywie zakażonych płuc. Heterogeniczność tkanek w płucach zakażonych grypą, zmierzona za pomocą algorytmu klastrowania K-średnich, ujawniła wiele klastrów przestrzennych. Zakażone myszy zaczęły tracić na wadze trzy do czterech dni po zakażeniu, a szczytowa utrata masy ciała wynosiła około 25% po ośmiu do dziesięciu dniach po zakażeniu.Do 14 dni po infekcji masa ciała wróciła do poziomu 10 do 15% wartości wyjściowej. Ze względu na zmienność reakcji na infekcję, wskaźniki przeżycia u zakażonych myszy stopniowo spadały – niektóre myszy zostały uśpione po utracie ponad 30% masy ciała. Stan komórek śródbłonkowych stymulowany interferonem pojawił się sześć dni po zakażeniu i ustąpił do 19. dnia.Natomiast stan komórek śródbłonka naczyniowatego wywołanego urazem pojawił się w 11. dniu i utrzymywał się przez rok po infekcji. Utrzymujący się stan komórek śródbłonka kapilarnych wywołany uszkodzeniem charakteryzował się długotrwałą ekspresją ścieżki B i obserwowano go rok po infekcji. Tranzycyjne stany komórek nabłonka pęcherzyka żółtego, w tym niedojrzałe komórki typu 1, pojawiły się po infekcji i ustępowały wraz z naprawą tkanki.Po zakażeniu makrofagi pęcherzykowe zostały wyczerpane i odtworzone zarówno z monocytów zapalnych, jak i pozostałych makrofagów, co skutkowało wyraźnymi stanami transkrypcyjnymi utrzymującymi się co najmniej rok.

modeling-dysplastic-functional-lung-alveolar-repair-after-influenza

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Opisujemy metodę szybkiej izolacji pierwotnych pęcherzykowych komórek nabłonkowych typu II (AECII) myszy za pomocą negatywnej selekcji cytometrycznej. Uzyskane komórki AECII wykazują wysoką żywotność oraz czystość i nadają się do szerokiego zakresu badań funkcjonalnych i molekularnych dotyczących ich roli w schorzeniach układu oddechowego, takich jak choroby autoimmunologiczne lub zakaźne.

Izolacja pierwotnych komórek nabłonkowych pęcherzyków płucnych typu II myszy metodą cytometrii przepływowej do badań funkcjonalnych i molekularnych

Opracowaliśmy model uszkodzenia płuc myszy poprzez wstrzyknięcie do tchawicy bakterii Pseudomonas aeruginosa. Model ten naśladuje uszkodzenie płuc podczas zapalenia płuc i ma znaczenie kliniczne.

Pseudomonas aeruginosa Model indukowanego uszkodzenia płuc

Opisujemy sposób szybkiego i prostego pomiaru zdolności dyfuzyjnej płuc u myszy i pokazujemy, że jest ona wystarczająco wrażliwa na zmiany fenotypu w wielu powszechnych patologiach płuc.  Metryka ta ma zatem bezpośrednie znaczenie translacyjne dla modeli mysich, ponieważ zdolność dyfuzji można również łatwo zmierzyć u ludzi.

Fenotypowanie funkcji płuc myszy in vivo ze zdolnością dyfuzyjną płuc

Mysia pneumonektomia jest powszechnie stosowanym modelem kompensacyjnego wzrostu płuc. Procedura ta może być stosowana w połączeniu ze śledzeniem linii lub transgenicznymi modelami myszy w celu wyjaśnienia podstawowych mechanizmów.

Mysi model pneumonektomii kompensacyjnego wzrostu płuc

Wewnętrzna powierzchnia płuc (ISA) jest krytycznym kryterium oceny morfologii i fizjologii płuc w chorobach płuc i regeneracji pęcherzyków płucnych wywołanej urazem. Opisujemy tutaj znormalizowaną metodę, która może zminimalizować błąd systematyczny pomiaru ISA zarówno w modelach myszy do pneumonektomii płuc, jak i implantacji protez.

Ustandaryzowana metoda pomiaru wewnętrznej powierzchni płuc za pomocą pneumonektomii u myszy i implantacji protezy

Tutaj prezentujemy metody poprawy badań nad wtórnym bakteryjnym zapaleniem płuc poprzez zapewnienie nieinwazyjnej drogi wkraplania do dolnych dróg oddechowych, po której następuje odzyskiwanie patogenów i analiza transkryptów. Zabiegi te są powtarzalne i mogą być wykonywane bez specjalistycznego sprzętu, takiego jak kaniule, druty doprowadzające czy światłowodowe.

Precyzyjny system dostarczania i odzyskiwania patogenów dla mysich modeli wtórnego bakteryjnego zapalenia płuc

Ten manuskrypt opisuje stworzenie zakaźnego modelu zapalenia płuc u myszy i odpowiednią charakterystykę leczenia urazów wraz z metodami hodowli bakterii i wkraplania dotchawiczego. Opisano również nowatorskie podejście wykorzystujące wysokowymiarową cytometrię przepływową do oceny krajobrazu immunologicznego.

Eksperymentalny model do oceny ustąpienia zapalenia płuc

Modele płuc na chipie przewyższają tradycyjne hodowle 2D, naśladując granicę powietrze-ciecz i perfuzję komórek śródbłonka, symulując przepływ krwi i wymianę składników odżywczych, co jest kluczowe dla badań nad fizjologią płuc. Zwiększa to znaczenie badań nad płucami, oferując dynamiczne, fizjologicznie dokładne środowisko, które pomaga w lepszym zrozumieniu i leczeniu infekcji dróg oddechowych.

Immunokompetentny model pęcherzyka płucnego na chipie do badania odpowiedzi immunologicznej błony śluzowej pęcherzyków płucnych

Ten protokół demonstruje technikę aspiracji ustno-gardłowej do użycia w mysim modelu zwłóknienia płuc z bleomycyną.

Podawanie bleomycyny w jamie ustnej i gardłowej w mysim modelu zwłóknienia płuc

Protokół ten określa metodę wywoływania zwłóknienia płuc u myszy poprzez wielokrotne podawanie bleomycyny do jamy ustnej i gardła, uzyskując cechy patologiczne bardzo podobne do idiopatycznego zwłóknienia płuc.

Wyrafinowany mysi model idiopatycznego włóknienia płuc

Poznaj metodę wewnątrznosowego podawania wirusa grypy A myszom w celu analizy uszkodzeń płuc i zmian transkrypcyjnych w komórkach śródbłonka oraz makrofagów pęcherzykowych.

Modelowanie dysplastycznej i funkcjonalnej naprawy płuc pęcherzyków płucnych po zakażeniu grypą

Przeglądaj więcej filmów