Name: In Vivo Mikroskopia konfokalna w diagnostyce i leczeniu suchego oka: Skupienie się na protokołach obrazowania i interpretacji (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Poznaj mikroskopię konfokalną in vivo w diagnostyce suchego oka. Ta metoda umożliwia szczegółowe obrazowanie powierzchni oka na poziomie komórkowym, identyfikując zmiany w nabłonku rogówki, włóknach nerwowych i gruczołach Meiboma.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują Linie Jin z Hankou Aier Eye Hospital oraz Min Chen z Oddziału Okulistyki Wuhan Asia Heart Hospital za pomoc przy kilku zdjęciach oraz wszystkim uczestnikom i pracownikom pracującym przy zabiegu operacyjnym. Badania te zostały wsparte grantem z Projektów Naukowych Komisji Zdrowia Miejskiej Wuhan (WX23A20).

Procedura badania została zatwierdzona przez Komisję Etyki Szpitala Okulistycznego Hankou Aier, a wszyscy pacjenci uzyskali świadomą zgodę.
UWAGA: Kryteria włączenia do wyboru pacjentów obejmują pacjentów zgłaszających się z dolegliwościami suchości i swędzącego oczu oraz osoby poszukujące rutynowych badań wzroku. Kryteria wykluczające przy wyborze pacjentów obejmują pacjentów z perforacją rogówki lub nadchodzącą perforacją, osoby uczulone na miejscowe znieczulenie oczne, osoby zbyt młode (np. poniżej 3 roku życia) lub zbyt stare, by współpracować, pacjentów z wąskimi szczelinami popalnymi niezdolnymi do umieszczenia wziernika powieki, kobiety w ciąży oraz osoby niezdolne do współpracy z innych powodów. Krótki diagram przepływu pracy można znaleźć na Rysunku 2. Szczegółowe kroki operacyjne przedstawiają się następująco.
1. Wstępne przesłuchanie
<ol>
	<li>Przygotowanie materiałów: urządzenie IVCM, nasadka kontaktowa do rogówki, znieczulenie okulistyczne miejscowe, środek sprzęgający, medyczne patyczki waciowe, wziernik do powiek, kulki alkoholowe, zbiornik alkoholu, krople przeciwzapalne do oczu (Rysunek 3).</li>
	<li>Zrozum kluczowe elementy sprzętu IVCM (Heidelberg Retinal Tomography Rostock Cornea Module (HRT-RCM)), pokrętło ostrości, kamerę monitorującą, lampkę naprowadzającą wzrok, podpórkę pod brodę, podpórkę pod czoło, przycisk przełączania między lewym a prawym okiem, obrotowe pokrętła do trójosiowego ruchu HRT-RCM, przycisk do przechwytywania obrazu i pedał nożny, komputer z dedykowanym oprogramowaniem IVCM) oraz przygotuj urządzenie IVCM z żelem sprzęgającym.</li>
	<li>Przygotowanie do egzaminatora: Noś maseczkę i dezynfekuj ręce żelem na bazie alkoholu lub jednorazowe rękawiczki.</li>
	<li>Dezynfekcja urządzeń: Przetrzyj podpierki czoła i podbródka sprzętu za pomocą wymazów alkoholowych.</li>
	<li>Wyjaśnienie procedury: Krótko wyjaśnij pacjentowi, że badanie jest bezbolesne, aby złagodzić lęk.</li>
</ol>
2. Podczas egzaminu
<ol>
	<li>Zweryfikować i utworzyć nową dokumentację pacjenta za pomocą towarzyszącego oprogramowania na komputerze.</li>
	<li>Podawaj znieczulenie miejscowe: Podaj dwie krople do dolnego wyczworka w odstępie 3 minut przed zabiegiem.</li>
	<li>Przygotuj moduł rostocka rogówki (RCM) urządzenia IVCM: Posmaruj obszar emitujący laser RCM żelem sprzęgającym (upewnij się, że nie powstają pęcherzyki powietrza) (Rysunek 4 i Rysunek 5), a tylko odpowiednia ilość środka sprzężenia (zwykle jedna lub dwie krople, nie za dużo) zapewni pełny kontakt z nasadką rogówki i ostatecznie osiągnie idealny interfejs zerowania. Przymocuj jednorazową nakrętkę kontaktową na rogówkę.</li>
	<li>Ustawij urządzenie: Całkowicie cofnij RCM. Przymocuj podpórkę czoła poziomo. Dostosuj kamerę monitorującą do strony czasowej obiektu. Znajdź pozycję punktu zatrzymania aparatu, który jest prostopadle do osi optycznej RCM.</li>
	<li>Kalibruj ostrość: Obróć pokrętło ostrości, aż oprogramowanie wyświetli maksymalną białą faculę z wartością jakości obrazu dokładnie 100. Zresetuj wartość głębokości do zera (zerowanie).</li>
	<li>Wybierz tryb skanowania: Domyślnie tryb sekcji , chyba że zawskazano inaczej. Aby obserwować aktywność roztoczy Demodex, można użyć trybu sekwencji do ciągłego rejestrowania dynamicznych obrazów.</li>
	<li>Ustawij pacjentów: Oprzyj podbródek mocno na podbródku. Przyłóż czoło do podkładki czołowej. Dostosuj stół i podbródek do wysokości pacjenta.</li>
	<li>Wprowadzenie wziernika powieki: Poproś pacjenta, aby spojrzał w dół, używając patyczka watowego do podniesienia górnej powieki podczas zakładania, oraz o spojrzenie w górę, delikatnie opuszczając dolną powiekę patyczkiem w celu umieszczenia.</li>
	<li>Ostateczne instrukcje: Ponownie potwierdź prawidłowe ustawienie głowy. Przypomnij pacjentowi, aby pozostał zrelaksowany i unikał ruchów. Natychmiast zgłaszaj wszelkie dyskomforty.</li>
	<li>Protokół badania rogówki<ol>
		<li>Zacznij od makroskopowego wyrównania: Wizualnie dostosuj RCM, aby przybliżył wierzchołek rogówki (Rysunek 6). Przełącz się na kamerę monitorującą urządzenia, aby precyzyjnie dostrojić ją, gdy RCM zbliża się do rogówki. Kieruj pacjenta do obracania wzroku w poszukiwaniu rogówek zmian, centrując zmianę pod RCM. Utrzymuj delikatny kontakt, aby uniknąć uszkodzenia rogówki.</li>
		<li>Kluczowa technika: Nasadka kontaktowa rogówki ma duży fizyczny rozmiar, ale niezwykle małą strefę optyczną (ograniczoną do centralnej części emitującej laserowo). Krytyczny wymóg: Osiągnięcie wysokiej precyzji kontaktu między kapką a docelową tkanką, ponieważ słaba przyczepność powoduje artefakty obrazowania (np. pęcherzyki, zakłócenia oleju lub całkowitą utratę sygnału). UWAGA: Do obrazowania ciągłego należy naciśnąć pedał nożny, aby przez dłuższe skanowanie przechwycić kolejne obrazy głębokości i uniknąć braku kluczowych danych.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Warstwowa ocena rogówki: skanowanie od warstw powierzchownych do głębokich w kolejności: CEC, SNF, komórki zapalne podnabłonka.<ol>
		<li>Skup się na dolnym zawoju, który jest zalecanym punktem orientacyjnym, oraz na sąsiednich obszarach górnych/niższych18.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Badanie spojówkowe nosa<ol>
		<li>Zresetuj płaszczyznę ogniskową do wartości głębokości zera. Nałóż żel sprzęgający na nakrążek. Poinstruuj pacjenta, aby patrzył w kierunku czasowym lub inferotemporem. Delikatnie przesuwaj RCM na powierzchnię spojówki. Manewry jednoczesne: Reguluj pozycję RCM dla optymalnego pola widzenia prawą ręką. Obróć pokrętło ostrości, aby zidentyfikować komórki pucharowe w najbardziej zewnętrznej warstwie spojówki lewą ręką.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Usuwanie wziernika powieki: Poinstruuj pacjenta, aby patrzył w dół, a następnie użyj patyczka watowego do podniesienia górnej powieki w celu jej zdjęcia. I polec pacjentowi, by spojrzał w górę i delikatnie nacisnął dolną powiekę za pomocą wymazu do usunięcia.</li>
	<li>Reset urządzenia: Zwolnij i unieś podpórkę pod czoło. Wyzeruj pokrętło ostrości. Ponownie nałóż żel sprzęgający na powierzchnię RCM.</li>
	<li>Ocena gruczołów Meiboma i mieszków rzęs<ol>
		<li>Pozycja pacjenta: Poleć spojrzenie w dół. Manewr egzaminatora: Delikatnie unieś i docisnąć skórę górnej powieki do środka, aby wyrównać margines powieki równolegle do płaszczyzny korony rogówki. Przesuń RCM poziomo, aby zobaczyć więcej obrazów o tej samej strukturze typu; Przesuń RCM pionowo (od dołu do góry), aby przejść od badania otworów gruczołów Meiboma do gruczołu Acini, a następnie do korzeni rzęs. UWAGA: Początkujący mogą podnieść powiekę, aby lepiej eksponować podczas badania otworów gruczołów meiboma. Sugerujemy umieszczenie inspekcji w centralnej 1/3 górnej powieki w tej części.</li>
		<li>Standardy ilościowe (protokół instytucjonalny): Ocenić 8 kolejnych pęcherzyków z przylegającymi15 oraz zbadać 4-8 kolejnych otworów gruczołów. Kalibracja głębokości: Aby uzyskać wyraźne obrazy mieszków włosowych, skup się, aż roztocza Demodex pokażą ostre brzegi (jeśli są obecne). Do uzyskania wyraźnych obrazów acinis zalecana wartość wynosi około 30-50 μm głębokości. A dla otworów to około 30 μm (uwzględnij widoczność Demodex brevis, jeśli jest infekowane)19.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Po przesłuchaniu
<ol>
	<li>Opieka po zabiegu: Dbaj o higienę rąk i dokładnie je dezynfekuj. Delikatnie zetrzyj resztki żelu łączącego, rozdarć lub zanieczyszczenia z powierzchni oka za pomocą patyczka watowego. Podawaj krople do oczu z antybiotykiem, aby zapobiec infekcji.</li>
	<li>Instrukcje dla pacjenta: Zalec pacjentowi, aby nie pocierał oczu w dniu badania.</li>
	<li>Raportowanie: Przeanalizuj wszystkie zebrane obrazy kompleksowo i sporządź raport diagnostyczny. Wymogi raportowania: Dołącz co najmniej jedno zdjęcie na każdą strukturę tkanki, dodając kolejne w razie nieprawidłowości. Wszystkie wybrane obrazy mają być uporządkowane według sekwencji badań i wartości głębokości, a następnie precyzyjne opisy i pomiary.</li>
	<li>Instrukcje dotyczące utylizacji odpadów: W przypadku materiałów jednorazowych (nakładki kontaktowe, wymazy, pojemniki na środki znieczulającye) prosimy o wyrzucanie ich do pojemnika na medyczne odpady do dalszej profesjonalnej utylizacji.</li>
</ol>

<ol><li>Craig, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+definition+and+classification+report%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II definition and classification report.</a> Ocul Surf. 15 (3), 276-283 (2017).</li>
<li>Ralene, S., Kenneth, Y., Yu-Chi, L., Louis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+confocal+microscopy+in+different+types+of+dry+eye+and+meibomian+gland+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo confocal microscopy in different types of dry eye and meibomian gland dysfunction.</a> J Clin Med. 11, 2349(2022).</li>
<li>Bron, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+pathophysiology+report%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II pathophysiology report.</a> Ocul Surf. 15, 438-510 (2017).</li>
<li>Kheirkhah, A., Rahimi, D. R., Cruzat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+epithelial+immune+dendritic+cell+alterations+in+subtypes+of+dry+eye+disease%3A+a+pilot+in+vivo+confocal+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Corneal epithelial immune dendritic cell alterations in subtypes of dry eye disease: a pilot in vivo confocal microscopic study.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56, 7179-7185 (2015).</li>
<li>Jodi, H., Harrison, D., Anat, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+in+vivo+confocal+microscopy+differentiate+between+subtypes+of+dry+eye+disease%3F+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Can in vivo confocal microscopy differentiate between subtypes of dry eye disease? A review.</a> Clin Exp Ophthalmol. 49 (4), 373-387 (2021).</li>
<li>Jeremy, C. B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+corneal+confocal+microscopy%3A+imaging+analysis%2C+biological+insights+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo corneal confocal microscopy: imaging analysis, biological insights and future directions.</a> Commun Biol. 6 (1), 652(2023).</li>
<li>Lemp, M. A., Dilly, P. N., Boyde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tandem-scanning+%28confocal%29+microscopy+of+the+full-thickness+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Tandem-scanning (confocal) microscopy of the full-thickness cornea.</a> Cornea. 4 (4), 205-209 (1985).</li>
<li>Kobayashi, A., Yoshita, T., Sugiyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+findings+of+the+bulbar%2Fpalpebral+conjunctiva+and+presumed+meibomian+glands+by+laser+scanning+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">In vivo findings of the bulbar/palpebral conjunctiva and presumed meibomian glands by laser scanning confocal microscopy.</a> Cornea. 24 (8), 985-988 (2005).</li>
<li>Yiran, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demodex+folliculorum+infestation+in+meibomian+gland+dysfunction-related+dry+eye+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Demodex folliculorum infestation in meibomian gland dysfunction-related dry eye patients.</a> Front Med (Lausanne). 24 (9), 833778(2022).</li>
<li>Orla, M., Veronica, O. D., Aoife, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+Demodex+folliculorum%3A+prevalence+and+associated+symptoms+in+an+Irish+population%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Ocular Demodex folliculorum: prevalence and associated symptoms in an Irish population.</a> Int Ophthalmol. 39 (2), 405-417 (2019).</li>
<li>Al-Aqaba, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+nerves+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Corneal nerves in health and disease.</a> Prog Retin Eye Res. 73, 100762(2019).</li>
<li>Liu, Y. C., Lin, M. T. Y., Mehta, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+corneal+nerve+plexus+in+corneal+confocal+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Analysis of corneal nerve plexus in corneal confocal microscopy images.</a> Neural Regen Res. 16, 690-691 (2021).</li>
<li>Zhixin, W., Xuguang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+the+study+of+conjunctival+goblet+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Progress in the study of conjunctival goblet cell.</a> Int Rev Ophthalmol. 4 (3), 1673-5803 (2005).</li>
<li>Bilian, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+study+of+goblet+cells+in+human+conjunctiva%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Anat%22%5BJournal%5D)">Quantitative study of goblet cells in human conjunctiva.</a> Chin J Anat. 3 (10), 1001-1633 (2001).</li>
<li>Yan, T., Dai, Q., Yu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+confocal+microscopy%3A+a+standard+operating+procedure+for+the+detection+of+Demodex+mites+at+the+eyelid+margin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo confocal microscopy: a standard operating procedure for the detection of Demodex mites at the eyelid margin.</a> J Vis Exp. (221), e68534(2025).</li>
<li>Matthieu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+confocal+microscopy+as+a+novel+and+reliable+tool+for+the+diagnosis+of+Demodex+eyelid+infestation%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">In vivo confocal microscopy as a novel and reliable tool for the diagnosis of Demodex eyelid infestation.</a> Br J Ophthalmol. 99 (3), 336-341 (2015).</li>
<li>Jalbert, I., Rejab, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+numbers+of+Demodex+in+contact+lens+wearers%5BTitle%5D)+AND+%22Optom+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Increased numbers of Demodex in contact lens wearers.</a> Optom Vis Sci. 92 (6), 671-678 (2015).</li>
<li>Patel, D. V., McGhee, C. N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+the+normal+human+corneal+sub-basal+nerve+plexus+by+in+vivo+laser+scanning+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Mapping of the normal human corneal sub-basal nerve plexus by in vivo laser scanning confocal microscopy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46, 4485-4488 (2005).</li>
<li>Nanyu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lid+margin+score+is+the+strongest+predictor+of+meibomian+area+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Lid margin score is the strongest predictor of meibomian area loss.</a> Cornea. 41 (6), 699-708 (2022).</li>
<li>Cañadas, P., Alberquilla, G. V. M., Hernández, V. J. L., Teus, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+corneal+confocal+microscopy+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics%22%5BJournal%5D)">Update on corneal confocal microscopy imaging.</a> Diagnostics. 13, 46(2023).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+confocal+microscopic+evaluation+of+corneal+dendritic+cell+density+and+subbasal+nerve+parameters+in+dry+eye+patients%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo confocal microscopic evaluation of corneal dendritic cell density and subbasal nerve parameters in dry eye patients: a systematic review and meta-analysis.</a> Front Med. 8, 578233(2021).</li>
<li>Baikai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+increased+corneal+subbasal+nerve+tortuosity+in+dry+eye+disease+and+its+correlation+with+clinical+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Quantification of increased corneal subbasal nerve tortuosity in dry eye disease and its correlation with clinical parameters.</a> Transl Vis Sci Technol. 10, 26(2021).</li>
<li>Michael, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+in+vivo+assessment+of+goblet+cells+of+the+human+bulbar+conjunctiva+by+confocal+microscopy%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cont+Lens+Anterior+Eye%22%5BJournal%5D)">On the in vivo assessment of goblet cells of the human bulbar conjunctiva by confocal microscopy: a review.</a> Cont Lens Anterior Eye. 43 (4), 315-321 (2020).</li>
<li>Allgeier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+to+analyze+the+progression+of+measured+corneal+sub-basal+nerve+fiber+length+in+continuously+expanding+mosaic+images%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">A novel approach to analyze the progression of measured corneal sub-basal nerve fiber length in continuously expanding mosaic images.</a> Curr Eye Res. 42, 549-556 (2017).</li>
<li>Matuszewska-Iwanicka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+vs+single+image+analysis+with+confocal+microscopy+of+the+corneal+nerve+plexus+for+diagnosis+of+early+diabetic+peripheral+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Ther%22%5BJournal%5D)">Mosaic vs single image analysis with confocal microscopy of the corneal nerve plexus for diagnosis of early diabetic peripheral neuropathy.</a> Ophthalmol Ther. 11 (6), 2211-2223 (2022).</li>
<li>Kryszan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial-intelligence-enhanced+analysis+of+in+vivo+confocal+microscopy+in+corneal+diseases%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics%22%5BJournal%5D)">Artificial-intelligence-enhanced analysis of in vivo confocal microscopy in corneal diseases: a review.</a> Diagnostics. 14, 694(2024).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Wyszukiwanie literatury w PubMed za pomocą słów kluczowych "in vivo confocal microscopy" oraz "dry eye disease" (dostęp czerwiec 2025) dało > 300 publikacji. Co istotne, roczne wskaźniki publikacji ustabilizowały się na poziomie około 40 artykułów rocznie od 2021 roku. Szersze zastosowania IVCM w zaburzeniach powierzchni oka zaowocowały > 2000 badań w ciągu ostatnich dwóch dekad (2004-2024). Klinicznie IVCM zrewolucjonizowało ocenę patologii powierzchni oczu na poziomie komórkowym. Technologia ta umożliwia wykry...

Ze względu na ograniczenia lokalnych zasobów medycznych lub obciążenia finansowe pacjentów, kliniczna diagnoza DED często koncentruje się tylko na podstawowym aspekcie (np. obserwacji pod mikroskopem lampy szczelinowej, skargach na suchość i swędzenie oczu) lub nawet na jednym wskaźniku (np. czas rozbicia inwazyjnej błony łzowej, test wydzieliny łzowej lub inwazja Demodex). Zastosowanie IVCM nie jest powszechnie dostępne, nie mówiąc już o standaryzowaniu protokołów dla niego. Jednak dla placówek okulistycznych wyposażonych w IVCM autor zaleca poddanie pacjentom po raz pierwszy kompleksowe badanie mikroskopowe, aby uniknąć pominięć, w tym rogówki, spojówki i brzegu poddrobiowego. W przypadku niejasnych przypadków DED lub wykrywania Demodexu, IVCM jest szczególnie odpowiednie do udzielenia jednoznacznej odpowiedzi.
Choroba suchego oka (DED) definiowana jest jako przewlekła choroba powierzchni oka spowodowana nieprawidłowościami jakości lub ilością płynu łzowego oraz obniżoną stabilnością filmu łzowego. W Warsztatach Suchego Oka II (DEWS II) DED dzieli się na pięć typów: suche oko z niedoborem wody (ADE), suche oko z niedoborem wody (ADE), suche oko z niedoborem wody (EDE), mieszane suche oko (MDE), predyspozycje do suchości oka oraz stan suchości okaprzedkliniczny 1. Ralene i in. podsumowali ważną praktykę kliniczną IVCM w różnych typach suchego oka, w tym literaturę opublikowaną w latach 2017–20222. Najnowsze badania wykazały, że stan zapalny odgrywa kluczową rolę w patogenezie DED 3,4. Szczególnie gęstość komórek dendrytycznych (DC) może być dobrym wskaźnikiem DED związanego z układowym procesem immunologicznym5.
IVCM wykorzystuje technologię konfokalnej tomografii laserowej. Oferuje rozdzielczość poziomą i pionową 1 μm. Szczegółowe specyfikacje techniczne urządzenia zostały udokumentowane w raporcie Jeremy'ego i in.6. Podczas badania powierzchni oka najpierw stosuje się IVCM do rogówki7, następnie do spojówki i gruczołów Meiboma8. Demodex blepharitis w ostatnich latach wzbudzało coraz większą uwagę kliniczną 9,10. IVCM zapewnia wyraźne obrazy rogówki, spojówki i brzegu poddechowego. Obrazy te pozwalają klinicystom ocenić stan choroby oraz ułatwić obrazowanie i ilościowe określenie komórek zapalnych i układu odpornościowego.
W ocenie DED koncentrujemy się na: komórki nabłonkowe rogówki (CEC); włókna nerwowe podnabłonkowe (SNF); komórki zapalne/immunologiczne śródnabłonkowe i podnabłonkowe; komórki pucharowe spojówki (CGC); komórki zapalne/układowe spojówki; gruczoły Meiboma i otwory; Demodex folliculorum i Demodex brevis; oraz komórki zapalne w otaczających tkankach. Ten nacisk wynika z patofizjologii: dysfunkcja gruczołów Meiboma prowadzi do zmniejszonej wydzieliny lub zmienionego składu warstwy lipidowej filmu łzowego, co skutkuje przyspieszonym parowaniem łez i uszkodzeniem powierzchni oka. Infestacja Demodex przyczynia się do swędzenia i dyskomfortu oczu. CGC wydzielają mucynę, kluczowy składnik filmu łzawiącego; ich wyczerpanie może powodować DED niedoborowy w mucynie. Natomiast DED sam w sobie uszkadza struktury powierzchni oka, w tym CEC i SNF, a następnie podnosi gęstość komórek zapalnych/immunologicznych w tkankach rogówki i spojówek. Po uzyskaniu idealnych obrazów możemy skutecznie wykorzystać wbudowane narzędzia ilościowe oprogramowania do liczenia wielu wymienionych komórek (Rysunek 1). Ale dla morfologicznej różnorodności SNF musimy polegać na oprogramowaniu analitycznym, które pomoże w ilościfikacji11,12.
IVCM jest niezbędne do oceny w czasie rzeczywistym warstw rogówki, włókien nerwowych oraz komórek zapalnych/immunologicznych w tkankach powierzchni oka. Do oceny CGC cytologia odcisków służy jako alternatywna metoda. Technika ta celuje w spojówkę wydzielnicową, gdzie gęstość komórek pucharowych osiąga szczyt, dając wartości zazwyczaj wyższe niż pomiary IVCM13,14. Jednak wyniki podlegają zmienności barwienia i doświadczeniu operatora, podczas gdy czasochłonny protokół ogranicza rutynowe wdrożenie kliniczne. Niedrożność otworu gruczołu Meiboma jest bezpośrednio obserwowalna za pomocą mikroskopii lampowej szczelinowej, jednak ta metoda nie wykrywa blokad wywołanych przez Demodex brevis, które IVCM dokładnie identyfikuje. Aby zdiagnozować infestację Demodex, epilacja rzęs za pomocą mikroskopu świetlnego to niedroga metoda. Choć technicznie proste, podejście to niesie ze sobą istotne ograniczenia: dyskomfort pacjenta ogranicza wielokrotne pobieranie próbek, a roztocza zamieszkujące głęboko w mieszkach rzęsowych lub otworach gruczołów Meiboma pozostają niewykrywalne15. Dla porównania, IVCM umożliwia kompleksowe badanie wielu miejsc na marginesach powiek, w tym mieszków rzęsowych i otworów gruczołów Meiboma, przy minimalnym dyskomfortie pacjenta. To podejście pozwala na znacznie wyższe wskaźniki pozytywności diagnostycznej dzięki wizualizacji pasożytów in vivo w czasie rzeczywistym w ich mikrohabitatach16,17.

<table><tbody><tr><td>Chłonne waciki</td><td>JIAN QI, Chiny</td><td>http://www.hnjianqi.com</td><td>Do robienia małych piłek alkoholowych</td></tr><tr><td>Żel na bazie alkoholu</td><td>Li Kang, Szanghaj, Chiny</td><td>31107904</td><td>Żel bez środków antyseptycznych do płukania rąk, 500ml</td></tr><tr><td>Krople do oczu Carbomer</td><td>Vidisic, Niemcy</td><td>8187195</td><td>Sterylny żel okulistyczny jako środek sprzęgający, 10g</td></tr><tr><td>Nasadka kontaktowa rogówki (TomoCap)</td><td>Heidelberg, Niemcy</td><td>18829</td><td>Ośrodek optyczny i kontakt z rogówką aseptyczny</td></tr><tr><td>Wziernik powieki</td><td>Asicon, Chiny</td><td>6102A</td><td>Za otwarcie oczu</td></tr><tr><td>Oprogramowanie Heidelberg Eye Explorer</td><td>Heidelberg, Niemcy</td><td>Wersja 1.5.2.0</td><td>Oprogramowanie dołączone do urządzenia IVCM</td></tr><tr><td>Urządzenie IVCM</td><td>Heidelberg, Niemcy</td><td>HRT-?,08398</td><td>Główne wyposażenie egzaminu</td></tr><tr><td>Medyczne patyczki watowe</td><td>Esound Med, Chiny</td><td>www.e-soundmed.com</td><td>Do czyszczenia oczu pacjentów i wspomagania ich otwarcia, 10 cm</td></tr><tr><td>75% alkohol leczniczy</td><td>HUICHANG, Chiny</td><td>www.huichang888.cn</td><td>Do robienia kulek alkoholowych, 75% &plusmn; 5% 500ml</td></tr><tr><td>Krople do oczu z tlenem oksybuprokainy 0,4%</td><td>Santen, Japonia</td><td>http://www.santen.co.jp</td><td>Znieczulenie miejscowe okulistyczne, 0,4% (0,5 ml: 2 mg)</td></tr><tr><td>Krople do oczu z tobramycyną</td><td>TOBREX, Belgia</td><td>8453824</td><td>Krople przeciwzapalne do oczu, 0,3% (5ml: 15mg)</td></tr></tbody></table>

in vivo mikroskopia konfokalna w diagnostyce i leczeniu suchego oka: skupienie się na protokołach obrazowania i interpretacji

In Vivo Confocal Microscopy in the Diagnosis and Management of Dry Eye: A Focus on Imaging Protocols and Interpretation

Mikroskopia konfokalna in vivo (IVCM) zyskała znaczną uwagę ze względu na swoją nieinwazyjną naturę i wysoką rozdzielczość. Umożliwia on in vivo obserwację i obiektywne ilościowe określenie licznych struktur powierzchni oczu związanych z chorobą suchego oka (DED), w tym rogówki, spojówki, marginesu powieki, gruczołów meiboma oraz pasożytów takich jak Demodex, na poziomie komórkowym. Ta zdolność pomaga okulistom w identyfikacji specyficznych etiologii i podtypów DED, co ułatwia precyzyjną diagnozę, leczenie celowane i prognozowanie. Jednak ustandaryzowane protokoły dotyczące pracy i raportowania IVCM nadal pozostają niewystarczające. Biegłość zarówno w wiedzy okulistycznej, jak i w zakresie obsługi technicznej jest niezbędna, aby skutecznie korzystać z tego urządzenia i generować wysokiej jakości raporty. Artykuł ten szczegółowo opisuje proceduralne etapy i niuanse badania IVCM u pacjentów z DED. Jest to pierwszy krok po kroku protokół IVCM JoVE dla DED. Ma na celu służyć jako punkt odniesienia dla klinicystów, pomagając im unikać operacyjnych nieefektywności i konsekwentnie uzyskiwać wysokiej jakości obrazy powierzchni rogówki i oczu, które wspierają zarządzanie kliniczne.

Wszystkie mikroskopowe obrazy IVCM zostały wykonane w rozdzielczości 384 piksele × 384 piksele, pole obserwacyjne 400 μm × 400 μm. Po prawidłowym "zerowaniu" badanie to pokaże tylko trzy możliwe wyniki w ramce obrazu: i) Brak obrazu (nieudany eksperyment): Centralna strefa optyczna nie miała kontaktu z tkanką docelową. ii) Tylko częściowy obraz (rysunek 7) lub inne nieprawidłowe sytuacje (rysunek 8) (nieudany eksperyment): centralna strefa optyczna miała niepełn...

Niniejszy artykuł demonstruje działanie i wpływ mikroskopii konfokalnej in vivo w diagnozie i leczeniu suchego oka oraz bada zastosowanie i wyniki mikroskopii konfokalnej in vivo , aby stanowić podstawę przyszłych badań.

In Vivo Mikroskopia konfokalna w diagnostyce i leczeniu suchego oka: Skupienie się na protokołach obrazowania i interpretacji

In vivo confocal microscopy (IVCM) has gained significant attention for its non-invasive nature and high resolution. It enables in vivo observation and ...

Badania te pokazują, jak wykorzystać IVCM do obserwacji mikroskopowej struktury powierzchni oka u pacjentów z chorobą suchego oka. Główne wyzwania eksperymentalne to brak pozycjonowania opartego na markerach oraz ograniczone pole widzenia. Na początek przygotuj wszystkie niezbędne materiały do zabiegu.Zbadaj i zrozum kluczowe elementy urządzenia do mikroskopii konfokalnej in vivo oraz załóż ochronną maseczkę i jednorazowe rękawiczki. Dokładnie wytrzyj podpórki pod czoło i podbródek urządzenia za pomocą gazów alkoholowych, aby je zdezynfekować. Na podłączonym komputerze otwórz dołączone oprogramowanie IVCM.Zweryfikować obecne informacje o pacjencie i w razie potrzeby utworzyć nową dokumentację pacjenta. Podaj dwie krople znieczulenia okulistycznego miejscowo do dolnego wylotu oka pacjenta, zachowując trzyminutowy odstęp między każdym kroplą. Następnie przygotuj moduł rogówki Rostock, pokrywając jego obszar emitujący laser żelem sprzęgającym, aby upewnić się, że nie ma pęcherzyków powietrza.I mocno przymocuj jednorazową nakrętkę rogówkową do modułu rogówki Rostock. Następnie całkowicie wyciągnij moduł rogówki Rostock. Zabezpiecz podpórkę czoła w pozycji poziomej i przesuń kamerę moni

in-vivo-confocal-microscopy-diagnosis-management-dry-eye-focus-on

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film pokazuje barwienie uszkodzonej rogówki za pomocą barwnika fluoresceinowego, aby ocenić zakres autoimmunologicznej choroby suchego oka na modelu szczurzym. Zielone plamki fluorescencyjne barwionych włókien kolagenowych wskazują na uszkodzone komórki nabłonka rogówki.

Barwienie fluoresceiną w autoimmunologicznym modelu szczura z suchym okiem w celu zbadania uszkodzenia rogówki

Źródło: Bosco, A., et al.  In Vivo Dynamika aktywacji mikrogleju siatkówki podczas neurodegeneracji: konfokalne obrazowanie oftalmoskopowe i morfometria komórkowa w jaskrze myszy. J. Vis. Exp. (2015) Ten film przedstawia obrazowanie in vivo mikrogleju siatkówki w mysim modelu jaskry. Transgeniczna mysz z mikroglejem siatkówki wykazującym ekspresję białka fluorescencyjnego jest umieszczana pod oftalmoskopem. Oświetlenie w podczerwieni służy do zlokalizowania głowy nerwu wzrokowego (ONH), a...

Obrazowanie in vivo mikrogleju siatkówki w mysim modelu jaskry

Aktywacja mikrogleju i mikroglejoza są kluczowymi odpowiedziami na przewlekłą neurodegenerację. W tym miejscu przedstawiamy metody długoterminowej wizualizacji in vivo komórek mikrogleju CX3CR1-GFP+ siatkówki za pomocą oftalmoskopii konfokalnej oraz analiz progowych i morfometrycznych w celu identyfikacji i ilościowego określenia ich aktywacji. Monitorujemy zmiany mikrogleju we wczesnych stadiach jaskry związanej z wiekiem.

In vivo (in vivo)Dynamika aktywacji mikrogleju siatkówki podczas neurodegeneracji: konfokalne obrazowanie oftalmoskopowe i morfometria komórkowa w jaskrze myszy

Ten protokół opisuje, jak techniki obrazowania o wysokiej rozdzielczości, takie jak optyczna koherentna tomografia w domenie spektralnej i skaningowa oftalmoskopia laserowa, mogą być wykorzystane u małych gryzoni, przy użyciu systemu platformy obrazowania okulistycznego, aby uzyskać informacje odpowiednio o grubości siatkówki i rozmieszczeniu komórek mikrogleju.

In vivo (in vivo) Obrazowanie myszy reporterowych Cx3cr1gfp/gfp z optyczną koherentną tomografią w domenie spektralnej i skaningową oftalmoskopią laserową

Tutaj prezentujemy przydatność podłużnego obrazowania in vivo w obserwacji zmian morfologicznych wywołanej laserem neowaskularyzacji naczyniówkowej u myszy.

In vivo (in vivo) Multimodalne obrazowanie i analiza mysiego modelu neowaskularyzacji naczyniówki indukowanej laserem

Suche oko to coraz częstsza dolegliwość, która znacznie pogarsza jakość życia pacjentów. Niedawno wykazano, że nowe urządzenie wykorzystujące intensywne światło pulsacyjne, zaprojektowane specjalnie dla obszaru okołogałkowego, poprawia stabilność filmu łzowego i objawy dyskomfortu ocznego w chorobie suchego oka spowodowanej dysfunkcją gruczołów Meiboma.

Intensywne światło pulsacyjne w leczeniu zespołu suchego oka spowodowanego dysfunkcją gruczołów Meiboma

Tutaj opisujemy użycie optycznej koherentnej tomografii spektralnej (SD-OCT) do wizualizacji struktur siatkówki i oka in vivo w modelach zwyrodnienia siatkówki, jaskry, retinopatii cukrzycowej i krótkowzroczności.

Strukturalne oceny in vivo chorób oczu w modelach gryzoni przy użyciu optycznej koherentnej tomografii

Przedstawiamy protokół użycia światłowodowej konfokalnej laserowej mikroendoskopii (CLM) do nieinwazyjnego badania czasoprzestrzennego rozkładu liposomów w oku po wstrzyknięciu podspojówkowym.

Przestrzenno-czasowe obrazowanie in vivo ocznych systemów dostarczania leków za pomocą światłowodowej konfokalnej laserowej mikroendoskopii

Obecny protokół przedstawia kroki do wyrównania in vivo obrazów światłowodowej optycznej koherentnej tomografii koherentnej (vis-OCTF) in vivo z obrazami konfokalnymi ex vivo tej samej siatkówki myszy w celu weryfikacji obserwowanej morfologii pęczka aksonów komórek zwojowych siatkówki na obrazach in vivo.

Wyrównanie światłowodów światłowodowej koherentnej tomografii koherentnej w świetle widzialnym z obrazami konfokalnymi tej samej siatkówki myszy

Mikroskopia konfokalna in vivo jest obiecującą techniką obrazowania o wysokiej rozdzielczości. Przedstawiamy następującą procedurę dla klinicystów w celu wykrycia nużeńca na brzegu powieki in vivo.<br...

In vivo (in vivo ) Mikroskopia konfokalna: standardowa procedura operacyjna do wykrywania roztoczy nużeńca na brzegu powieki

Poznaj mikroskopię konfokalną in vivo w diagnostyce suchego oka. Ta metoda umożliwia szczegółowe obrazowanie powierzchni oka na poziomie komórkowym, identyfikując zmiany w nabłonku rogówki, włóknach nerwowych i gruczołach Meiboma.

In Vivo Mikroskopia konfokalna w diagnostyce i leczeniu suchego oka: Skupienie się na protokołach obrazowania i interpretacji

Przeglądaj więcej filmów