Ultrasonografia Dopplera do obrazowania na żywo i ilościowej funkcji naczyń jajników u myszy

Celem tych badań jest scharakteryzowanie przepływu krwi w jajniku przed owulacją przy użyciu nieinwazyjnej metody in vivo. Dziedzina ta nie posiada nieinwazyjnych metod badania przebudowy naczyń jajników w czasie rzeczywistym bez zakłócania normalnej fizjologii u myszy. Aby zacząć, włącz główne zasilanie znajdujące się z tyłu systemu obrazowania.

Po uruchomieniu systemu włącz przełącznik czuwania komputera po lewej stronie kartridża, aby obudzić monitor i komputer. Podłącz przetwornik MS700 do aktywnego portu przetwornika na urządzeniu obrazującym, znajdującym się na najbardziej prawym porcie. Wyrównaj sworzeń blokujący na złączu przetwornika z nacięciem w porcie.

Wcisnąć złącze do końca i przekręć dźwignię blokującą do pozycji pionowej, aby ją zabezpieczyć. Uruchom oprogramowanie analityczne, klikając ikonę programu. Kliknij Nowe, aby utworzyć nowe badanie i wybrać odpowiednią nazwę z rozwijanego menu.

W oknie Informacje o studiu wpisz nazwę badania, nazwę serii. Pakiet aplikacji to jajnik, a pakiet pomiarowy jest naczyniowy. Po otwarciu programu i automatycznym wykryciu przetwornika, wybierz pakiet aplikacji ovari.

Następnie nałóż niewielką ilość kremu elektrod na każdą elektrodę, aby zapewnić prawidłowy kontakt do monitorowania tętna. Gdy zwierzę jest całkowicie uśpione, przekieruj przepływ gazu, otwierając zaworek do stożka nosa na platformie obrazującej i zamykając zaworek do komory doprowadzającej. Delikatnie przenieś mysz na podgrzewaną platformę obrazującą.

Umieść mysz w pozycji leżącej tak, że grzbiet skierowany jest do góry i zabezpiecz stożek nosa na jej nosie, aby utrzymać znieczulenie. Przyklej każdą stopę w kremie elektrody na odpowiednią podkładkę elektrody dla monitorowania fizjologicznego. Nakładaj maść okulistyczną na oczy, aby zapobiec wysychaniu rogówki podczas znieczulenia.

Sprawdź odpowiednią głębokość znieczulenia metodą odruchu zaciskania palców. Monitoruj parametry życiowe zwierzęcia, takie jak tempo oddechu i tętno, ruchy wskazujące na dyskomfort oraz temperaturę platformy co pięć minut. Następnie gol dolny prawy kwadrant pleców za pomocą golarki elektrycznej od prawej tylnej kończyny do linii środkowej, pozostając bocznie od kręgosłupa.

Nałóż cienką warstwę kremu do usuwania owłosienia na tele. Po minucie dokładnie zetrzyj krem wilgotną gazą. Następnie nałóż obfitą i równomierną warstwę żelu ultrasonograficznego na ogolone miejsce.

Ustaw sondę przetwornika w trybie poprzecznym względem myszy na podstawce mechanicznej, z nacięciem orientacyjnym skierowanym w lewo od operatora. Zabezpiecz sondę na miejscu za pomocą zacisku. Naciśnij klawisz B-Mode na panelu sterowania, aby aktywować standardowe okno obrazowania w skali szarości.

Upewnij się, że mysz i platforma są płaskie, a przetwornik ustawiony prostopadle do powierzchni. Następnie pociągnij skórę w lewo i ustaw przetwornik blisko górnej ogolonej części, bliżej linii środkowej pleców. Delikatnie opuszczaj przetwornik na ogolone miejsce pokryte żelem ultrasonograficznym.

Wyrównaj lewą krawędź sondy z grzbietem, a prawą krawędź nad prawym bokiem. Aby zidentyfikować jajnik, najpierw zidentyfikować nerkę, dużą jasnoszarą strukturę owalną z korą i rdzeniem przedłużonym. Przesuń lekko platformę obrazową w stronę głowy myszy, aby odsłonić jajnik i tkankę tłuszczową okołowojajnika.

Naciśnij przycisk Cine Store, aby przechwycić wideo w trybie B. Teraz naciśnij klawisz trybu Power Doppler na panelu sterowania, aby zobaczyć naczynia krwionośne o wysokiej czułości na przepływ o niskiej prędkości. Reguluj wzmocnienie Dopplera na 32–55 decybeli, czułość na 5, zakres dynamiczny na 15 DR oraz prędkość do jednego kiloherca.

Delikatnie przesuwaj platformę tam i z powrotem, aby uzyskać najlepszy widok na naczynia jajnikowe i rozpoznać tętnicę jajnikową wchodzącą do wrzaska jajnika, naczynia rdzeniowe w środkowej rdzeniu przednim oraz naczynia korowe wokół rozwijających się pęcherzyków. Naciśnij Cine Store, aby zapisać wyświetlane wideo jajnika i naczyń w trybie Power Dopplera. Aby odróżnić przepływ tętniczy od żylnego, naciśnij tryb Color Doppler.

Czerwony oznacza przepływ w kierunku przetwornika, a niebieski – oddalający się od niego. Naczyniem o wyższej średniej prędkości jest tętnica jajnikowa. Naciśnij przycisk Pulsed Wave PW Doppler, aby wyświetlić linie datowe próbki.

Naciśnij ponownie, aby aktywować falę spektralną Dopplera. Po ustawieniu bramki próbkowej w centrum lumenu naczynia, wyreguluj kąt insonacji tak, aby był mniejszy lub równy 60 stopniom i równoległy do przepływu za pomocą pokrętła kątowego. W przypadku tętnicy jajnikowej umieść bramkę tuż przed wejściem do jajnika.

W przypadku naczynia rdzeniowego umieść je w centralnym rozgałęzieniu. W przypadku naczyń korowych umieść ją u podstawy rosnącego pęcherzyka. Naciśnij Cine Store, aby zapisać zarówno obraz ultradźwiękowy, jak i formę fali spektralnej.

Po zakończeniu obrazowania zetrzyj żel ultradźwiękowy z tyłu i delikatnie usuń mysz z platformy obrazowania. I połóż mysz na termoforze, aż do całkowitego przebudzenia. Obrazowanie Power Doppler wykazało widoczny wzrost obfitości w naczyniach rdzeniowych godzinę po wstrzyknięciu gonadotropiny kosmówkowej u człowieka, następnie powrót do stanu wyjściowego po ośmiu godzinach i dalszy spadek o 12 godzin po wstrzyknięciu.

Obrazowanie kolorowe Dopplera umożliwiło wyraźne rozróżnienie między tętnicą jajową a żyłą jajnikową oraz poprawiło wizualizację kierunku przepływu w naczyniach jajnikowych. Reprezentatywne fale PW Dopplera wykazywały wyraźne cykle z mierzalnymi szczytowymi prędkościami skurczowymi i końcowymi rozkurczowymi w tętnicy jajowej myszy reagującej na hormony, podczas gdy mysz niereagująca wykazywała niskie ślady sygnału bez wykrywalnego przebiegu. Godzinę po wstrzyknięciu gonadotropiny kosmówkowej prędkość przepływu krwi w tętnicy jajnikowej, naczyniach rdzeniowych i naczyniach korowych u myszy reagujących na stymulację nie zaobserwowano takiego wzrostu.

U myszy niereagujących prędkość w naczyniach korowych spadała poniżej progu wykrywania w wybranych punktach czasowych wskazywanych przez przypisane wartości zastępcze. Za pomocą ultrasonografii Dopplera ustaliliśmy, że szybkość przepływu krwi w jajnikach szybko wzrasta po wybuchu DLH u myszy. USG Dopplera pozwala na powtarzaną, nieinwazyjną ocenę hemodynamiki jajnika w okresie przedowulacyjnym, czego inne metody nie są w stanie zapewnić.

Po scharakteryzowaniu prawidłowej hemodynamiki przedowulacyjnej, przyszłe badania mogą teraz wykorzystać ten protokół do badania zaburzeń przepływu krwi w modelach zaburzeń jajników, takich jak PCOS.