Name: Choroba zwojów wzrokowych wywołana wirusem lentywirusowym jako prekliniczny model poliglutaminowyej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-13T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Poznaj model choroby zwojów wzrokowych wywołanej wirusem lentywirusowym jako narzędzie do badania poliglutaminowej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji typu 2. Ta metoda umożliwia szybkie testowanie mechanizmów choroby i terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Laboratorium Clévio Nóbrega's jest sfinansowanie przez projekt Cure CSB, przez Stowarzyszenie Viljem Julijan dla Dzieci z Rzadkimi Chorobami (Słowenia) oraz przez Algarve Biomedical Center Research Institute (ABC-Ri). Niektórzy z autorów tego artykułu mają stypendium doktoranckie sfinansowane przez Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT), z następującymi odniesieniami: Tiago Moreira-Gomes (2022.11008.BD), Inês T Afonso (2022.10161.BD) i Rafael G Costa (2022. 11973.BD).

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE) oraz National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Niniejsze badanie zostało zatwierdzone przez Direção-Geral da Alimentação e Veterinária (DGAV). W badaniu tym użyto myszy C57BL/6J, które były trzymane w grupach w standardowych klatkach w cyklu 12 h światło/12 h ciemność, z pokarmem i wodą dostępnymi ad libitum.
UWAGA: Materiały użyte w tym protokoąe są szczegóĆowo opisane w Tabeli MateriaĆów.
1. Pakowanie wektorów lentiwirusowych
UWAGA: Wszystkie procedury związane z wektorami lentiwirusowymi muszą być przeprowadzane w laboratorium BSL-2 zgodnie z wytycznymi bezpieczeństwa instytucji. Użyto systemu transfekcji z 4 plazmidami ze względu na jego wyższą bezpieczność biologiczną w porównaniu z innymi systemami produkującymi lentiwirusy (zobacz Rysunek 1 na szczegóły dotyczące plazmidu transferowego).
<ol>
	<li>Odtapiaj komórki HEK 293T w kópielu wodnym i zasiej je w kolbie T75 używając poórednio zmodyfikowanego poórednia Dulbecco (DMEM) uzupeònione o 2 mM L-glutaminy, 10% FBS i 1% Pen-Strep. To poórednie DMEM byĆo uđywane we wszystkich krokach protokoąu. Używaj komórek na przeĆyciu nie wyższym niđ 10, aby zapewnić wysokie tytuły wirusa i spóåniejsze wyniki. 
	UWAGA: Zawsze sprawdzaj zakađenie mykoplazmą przed kontynuacją.</li>
	<li>Kiedy komórki osiągną 80%-90% stÍpienia pokrycia, rozmnóđ je do 2 kolb T175 przez podzielenie początkowej kultury 1:2. Zasiej 20 100-mm kultur platerów 3,8 x 106 komórek na plater (ostateczny objętość 10 mL) i inkubauj je przez 24 h w temperaturze 37 °C w inkubatorze zimnym z 5% CO₂. Licz komórki metodą wykluczenia trypanowym niebieskim za pomocą hemocitometru Neubauera. 
	UWAGA: Rozwađ ekskluzję Pen-Strep z poórednia, aby zmniejszyć stres komórkowy, a tym samym zmaksymalizować transfekcję komórkową.</li>
	<li>Następnego dnia przygotuj mieszaninę transfekcyjną zgodnie z Tabelą 1. Wstrząśnij i krótko wiruj w dół, aby wyhomogenizować. Inkubuuj mieszaninę w temperaturze pokojowej przez 10-20 min, aby pozwolić na utworzenie się kompleksów DNA: PEI.</li>
	<li>Po pozwoleniu na utworzenie się kompleksów DNA: PEI przez 15 min w temperaturze pokojowej, uzupeònij mieszaninę do 5 mL ukoño DMEM. 
	Usuń 5 mL poórednia z kađdego platera (poòowyca łącznej objętości) i zastąp je 5 mL mieszanki transfekcyjnej. Dzięki temu ostateczny objętość kultury utrzymuje się na poziomie 10 mL podczas transfekcji.</li>
	<li>Transfekuj komórki trzema plazmidami pakującymi i plazmidem transferowym zgodnie z Tabelą 1. 
	UWAGA: Wszystkie plazmidy używane do produkcji lentiwirusów powinny być przygotowane za pomocą zestawów do czyszczenia bez endotoksyn. Co więcej, integralność plazmidów powinna być zweryfikowana za pomocą analizy enzymów restrykcyjnych, aby potwierdzić poprawność regionów LTR i kaset transgenowych przed transfekcją.</li>
	<li>Dodaj 5 mL mieszanki transfekcyjnej kroplą do kađdego platera i inkubuj przez 6 h. Odsópnij całe poórednie i zastąp je 10 mL świeđego poórednia. Inkubuj przez 48 h. 
	UWAGA: Aby zwiększyć tytuł wirusa, pobierz poórednie w 48 h, dodaj 10 mL świeđego poórednia do kađdego platera i pobierz ponownie po 24 h. Pobrany wcześniej poórednie można przechowywać w temperaturze 4 °C do 24 h. Dzięki temu można skoncentrować dwa razy więcej i zwiększyć tytuł wirusa.</li>
	<li>Filtruj wszystkie poórednie warunkowe zawierające wektory lentiwirusowe za pomocą jednostki filtra 0,22 µm.</li>
</ol>
2. Oczyszczanie i tytulacja wektorów lentiwirusowych
<ol>
	<li>Przenieć przefiltrowany nadstan do odpowiednich szkłanych rurek ultrawirówkowych i wyśrodkuj w temperaturze 4 °C przez 1 h 30 min z prędkością 65 000 x g, używając na przykład wirówki z obrotową misą.</li>
	<li>Ostrođnie wyrzuć nadstan i ponownie zawieđ kađdy pellet w 400 µL 1% BSA rozciägniętej w 1x PBS, unikając powstawania bąbelek

<ol><li>Afonso-Reis, R., Afonso, I. T., Nóbrega, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Status+of+Gene+Therapy+Research+in+Polyglutamine+Spinocerebellar+Ataxias%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Current Status of Gene Therapy Research in Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias.</a> Int J Mol Sci. 22 (8), 4249(2021).</li>
<li>Durr, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autosomal+dominant+cerebellar+ataxias%3A+polyglutamine+expansions+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Autosomal dominant cerebellar ataxias: polyglutamine expansions and beyond.</a> Lancet Neurol. 9 (9), 885-894 (2010).</li>
<li>McIntosh, C. S., Li, D., Wilton, S. D., Aung-Htut, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyglutamine+Ataxias%3A+Our+Current+Molecular+Understanding+and+What+the+Future+Holds+for+Antisense+Therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Polyglutamine Ataxias: Our Current Molecular Understanding and What the Future Holds for Antisense Therapies.</a> Biomedicines. 9 (11), 1499(2021).</li>
<li>Henriques, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral-based+animal+models+in+polyglutamine+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Viral-based animal models in polyglutamine disorders.</a> Brain. 147 (4), 1166-1189 (2024).</li>
<li>Doyle, A., McGarry, M. P., Lee, N. A., Lee, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Construction+of+Transgenic+and+Gene+Knockout%2FKnockin+Mouse+Models+of+Human+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transg+Res%22%5BJournal%5D)">The Construction of Transgenic and Gene Knockout/Knockin Mouse Models of Human Disease.</a> Transg Res. 21 (2), 327-349 (2012).</li>
<li>Tello, J. A., Williams, H. E., Eppler, R. M., Steinhilb, M. L., Khanna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Neurodegenerative+Disease%3A+Recent+Advances+in+Fly+Highlight+Innovative+Approaches+to+Drug+Discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Neurodegenerative Disease: Recent Advances in Fly Highlight Innovative Approaches to Drug Discovery.</a> Front Mol Neurosci. 15, 883358(2022).</li>
<li>Moreira-Gomes, T., Nóbrega, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+gene+therapy+with+lentiviral+vectors+for+spinocerebellar+ataxias%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of a gene therapy with lentiviral vectors for spinocerebellar ataxias.</a> Methods Mol Biol. 2974, 215-225 (2026).</li>
<li>Parr-Brownlie, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+vectors+as+tools+to+understand+central+nervous+system+biology+in+mammalian+model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lentiviral vectors as tools to understand central nervous system biology in mammalian model organisms.</a> Front Mol Neurosci. 8, 14(2015).</li>
<li>Zwi-Dantsis, L., Mohamed, S., Massaro, G., Moeendarbary, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-Associated+Virus+Vectors%3A+Principles%2C+Practices%2C+and+Prospects+in+Gene+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Adeno-Associated Virus Vectors: Principles, Practices, and Prospects in Gene Therapy.</a> Viruses. 17 (2), 239(2025).</li>
<li>Moreira-Gomes, T., Nóbrega, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+the+disruption+of+RNA+metabolism+to+the+targeting+of+RNA-binding+proteins%3A+The+case+of+polyglutamine+spinocerebellar+ataxias%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">From the disruption of RNA metabolism to the targeting of RNA-binding proteins: The case of polyglutamine spinocerebellar ataxias.</a> J Neurochem. 168 (8), 1442-1459 (2024).</li>
<li>Matsuzaki, Y., Oue, M., Hirai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+neurodegenerative+disease+mouse+model+using+lentiviral+vectors+carrying+an+enhanced+synapsin+I+promoter%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Meth%22%5BJournal%5D)">Generation of a neurodegenerative disease mouse model using lentiviral vectors carrying an enhanced synapsin I promoter.</a> J Neurosci Meth. 223, 133-143 (2014).</li>
<li>Marcelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+Spinocerebellar+ataxia+type+2%2C+a+dysregulated+pathway%2C+and+a+target+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Autophagy in Spinocerebellar ataxia type 2, a dysregulated pathway, and a target for therapy.</a> Cell Death Dis. 12 (12), 1117(2021).</li>
<li>Alves, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+and+nigral+pathology+in+a+lentiviral+rat+model+of+Machado-Joseph+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Striatal and nigral pathology in a lentiviral rat model of Machado-Joseph disease.</a> Human Mol Genet. 17 (14), 2071-2083 (2008).</li>
<li>Alves, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+vector-mediated+overexpression+of+mutant+ataxin-7+recapitulates+SCA7+pathology+and+promotes+accumulation+of+the+FUS%2FTLS+and+MBNL1+RNA-binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegenerat%22%5BJournal%5D)">Lentiviral vector-mediated overexpression of mutant ataxin-7 recapitulates SCA7 pathology and promotes accumulation of the FUS/TLS and MBNL1 RNA-binding proteins.</a> Mol Neurodegenerat. 11 (1), 58(2016).</li>
<li>Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+lentiviral+vector+titration+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Comparison of lentiviral vector titration methods.</a> BMC Biotechnol. 6 (1), 34(2006).</li>
<li>Arrasate, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+Characterization+of+a+Stable+Producer+Cell+Line+Generation+Platform+for+the+Manufacturing+of+Clinical-Grade+Lentiviral+Vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Establishment and Characterization of a Stable Producer Cell Line Generation Platform for the Manufacturing of Clinical-Grade Lentiviral Vectors.</a> Biomedicines. 12 (10), 2265(2024).</li>
<li>Nóbrega, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Mutant+Ataxin-3+in+Mouse+Cerebellum+Induces+Ataxia+and+Cerebellar+Neuropathology%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebellum%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Mutant Ataxin-3 in Mouse Cerebellum Induces Ataxia and Cerebellar Neuropathology.</a> Cerebellum. 12 (4), 441-455 (2013).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Compact Second Edition, Gulf Professional Publishing. (2004).</li>
<li>Bateup, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+subclasses+of+medium+spiny+neurons+differentially+regulate+striatal+motor+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinct subclasses of medium spiny neurons differentially regulate striatal motor behaviors.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14845-14850 (2010).</li>
<li>Nóbrega, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+hallmarks+of+neurodegeneration+in+polyglutamine+spinocerebellar+ataxias%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Molecular hallmarks of neurodegeneration in polyglutamine spinocerebellar ataxias.</a> Cell Death Dis. 16 (1), 826(2025).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV-based+gene+therapy+ameliorated+CNS-specific+GPI+defect+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Meth+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">AAV-based gene therapy ameliorated CNS-specific GPI defect in mouse models.</a> Mol Ther Meth Clin Dev. 32 (1), 101176(2024).</li>
<li>Wada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV-based+gene+therapy+ameliorates+neurological+deficits+in+a+mouse+model+of+childhood-onset+neurodegeneration+with+cerebellar+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+J+Am+Soc+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">AAV-based gene therapy ameliorates neurological deficits in a mouse model of childhood-onset neurodegeneration with cerebellar atrophy.</a> Mol Ther J Am Soc Gene Ther. 33 (11), 5829-5839 (2025).</li>
<li>Konno, A., Shinohara, Y., Hirai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Spinocerebellar+Ataxia+Type+3+Model+Mice+by+Intravenous+Injection+of+AAV-PHP.B+Vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Production of Spinocerebellar Ataxia Type 3 Model Mice by Intravenous Injection of AAV-PHP.B Vectors.</a> Int J Mol Sci. 25 (13), 7205(2024).</li>
<li>Jansen-West, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+PolyQ-ATXN3+Levels+Associate+With+Cerebellar+Degeneration+and+Behavioral+Abnormalities+in+a+New+AAV-Based+SCA3+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Plasma PolyQ-ATXN3 Levels Associate With Cerebellar Degeneration and Behavioral Abnormalities in a New AAV-Based SCA3 Mouse Model.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 863089(2022).</li>
<li>Nóbrega, C., Mendonça, L., Matos, C. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aN%C3%B3brega%2C+C+%22A+Handbook+of+Gene+and+Cell+Therapy%22">A Handbook of Gene and Cell Therapy</a>. , Springer International Publishing. Cham. (2020).</li>
<li>Thomas, C. E., Ehrhardt, A., Kay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+problems+with+the+use+of+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Progress and problems with the use of viral vectors for gene therapy.</a> Nat Rev Genet. 4 (5), 346-358 (2003).</li>
<li>Schambach, A., Zychlinski, D., Ehrnstroem, B., Baum, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosafety+Features+of+Lentiviral+Vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Biosafety Features of Lentiviral Vectors.</a> Human Gene Ther. 24 (2), 132-142 (2013).</li>
<li>de Almeida, L. P., Ross, C. A., Zala, D., Aebischer, P., Déglon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral-Mediated+Delivery+of+Mutant+Huntingtin+in+the+Striatum+of+Rats+Induces+a+Selective+Neuropathology+Modulated+by+Polyglutamine+Repeat+Size%2C+Huntingtin+Expression+Levels%2C+and+Protein+Length%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lentiviral-Mediated Delivery of Mutant Huntingtin in the Striatum of Rats Induces a Selective Neuropathology Modulated by Polyglutamine Repeat Size, Huntingtin Expression Levels, and Protein Length.</a> J Neurosci. 22 (9), 3473-3483 (2002).</li>
<li>Fisher, E. M. C., Bannerman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+neurodegeneration%3A+Know+your+question%2C+know+your+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Mouse models of neurodegeneration: Know your question, know your mouse.</a> Sci Transl Med. 11 (493), eaaq1818(2019).</li>
<li>Bii, V. M., Collins, C. P., Hocum, J. D., Trobridge, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication-incompetent+gammaretroviral+and+lentiviral+vector-based+insertional+mutagenesis+screens+identify+prostate+cancer+progression+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Replication-incompetent gammaretroviral and lentiviral vector-based insertional mutagenesis screens identify prostate cancer progression genes.</a> Oncotarget. 9 (21), 15451-15463 (2018).</li>
<li>Alves-Cruzeiro, J. M. D. C., Mendonça, L., Pereira de Almeida, L., Nóbrega, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+Dysfunctions+and+Neuropathology+in+Mouse+Models+of+Spinocerebellar+Ataxia+Type+2%3A+A+Comprehensive+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Motor Dysfunctions and Neuropathology in Mouse Models of Spinocerebellar Ataxia Type 2: A Comprehensive Review.</a> Front Neurosci. 10, 572(2016).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Niniejszy artykuł opisuje wygenerowanie modelu mysiego z wirusowymi wektorami lentywirusowymi dla poliQ SCA. Opisuje również produkcję wysokotytułowych wektorów lentywirusowych kodujących formę dziko-rodzajową i rozszerzoną formę białka przyczynowego oraz dwustronne wstrzyknięcie LV do mózgu mysiego przez operację stereotaktyczną. Dodatkowo, opisuje procedurę pobrania mózgu, przetwarzanie histologiczne oraz oparte na obrazach określanie ilościowe znamion chorobowych. Razem, te metody umożliwiają stworzenie lenty...

Ataksie rdzeniowo-móżdżkowe poliglutaminowe (poliQ SCA) to grupa sześciu autosomalnie dominujących zaburzeń neurodegeneracyjnych spowodowanych ekspansją powtórzeń trójnukleotydowych CAG w różnych genach przyczynowych, co prowadzi do toksycznych fragmentów poliglutaminowych (poliQ) w kodowanych białkach1. Wśród nich, najczęstszymi poliQ SCA są SCA3/choroba Machado-Joseph i SCA22. Zaburzenia te wpływają głównie na komórki neuronalne w określonych obszarach mózgu, w tym w móżdżku i pniu mózgu, a także w zwojsku i innych obszarach. W konsekwencji powodują postępującą niekoordynację ruchów, zaburzenia chodu, poważną neurodegenerację i przedwczesną śmierć3.
Opracowano wiele modeli zwierzęcych w celu badania poliQ SCA i testowania podejść terapeutycznych. Za pomocą myszy transgenicznych, linii knock-in i modeli myszy z warunkowym wyrażaniem genów, udało się wyjaśnić podstawy molekularne progresji choroby oraz zaangażowane ścieżki komórkowe4,5. Jednak generowanie nowego modelu zwierzęcego choroby jest czasochłonne i kosztowne, a często nie nadaje się do badań regionalnego zaangażowania mózgu w patogenezie choroby6.
Modele mysie oparte na wirusach lentywirusowych (LV) oferują alternatywę uzupełniającą dla konwencjonalnych modeli, o niższych kosztach i możliwością badania określonych obszarów mózgu7,8. Wektory lentiwirusów umożliwiają dostarczenie dużych transgenów (do 8 kb), prowadząc do szybkiej indukcji patologii w określonych obszarach mózgu bez konieczności modyfikacji linii komórkowych, i mogą być stosowane u zwierząt w różnym wieku. Bezpośrednie wstrzyknięcie wektorów lentiwirusowych do docelowego obszaru mózgu może osiągnąć regionowo-specyficzne wyrażanie genów patogennych lub terapeutycznych o niższej immunogeniczności w porównaniu z innymi wektorami wirusowymi4. Ponadto, postnatalne podanie umożliwia uniknięcie kompensacji rozwojowej w celu zbadania mechanizmów choroby w warunkach bardziej zbliżonych do ludzkiego początku9. Poziom wyrażania można regulować poprzez dostosowanie dawki wirusa, co pozwala na uzyskanie fenotypu o kontrolowanej ciężkości i ułatwia modelowanie postępującej progresji choroby. Dodatkowo, ta metoda umożliwia wybór specyficzności dla typu komórki, w zależności od wybranego promotora4,7.
Liczne badania wykazały praktyczność i przydatność modeli mysich opartych na LV w modelowaniu poliQ SCA10,11,12,13. My i inni naukowcy opracowali modele oparte na LV dla SCA111, SCA212, SCA311,12 oraz SCA714, stanowiące platformy dla szybkiego, regionowo-specyficznego wyrażania lub wyciszenia genów chorobowych przy jednoczesnym odtwarzaniu kluczowych aspektów neuropatologii.
Podsumowując, opisane tu podejście lentiwirusowe zapewnia wszechstronne i efektywne narzędzie do modelowania patogenezy poliQ SCA. Przez pokonanie niektórych z głównych wad obecnych modeli zwierzęcych, ta metoda przyspiesza badania koncepcyjne i zapewnia większą kontrolę nad początkiem, lokalizacją i ciężkością choroby - cechy, które czynią ją bardzo przydatną do przesiewowych badań terapeutycznych i badań mechanizmów molekularnych. W tym miejscu opisujemy metodę reproduktybilną w celu generowania i charakteryzacji zwojskowego modelu lentiwirusowego ataksji rdzeniowo-móżdżkowej poliglutaminowej, umożliwiającą szczegółową analizę wczesnych zdarzeń patogennych i ocenę kandydatów terapeutycznych.

<table><tbody><tr><td>0.9% NaCl</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Stosowane do przygotowania mieszanek znieczulających i antagonistów</td></tr><tr><td>100 mm naczynia do hodowli tkankowej</td><td>SPL Life Sciences</td><td>11090</td><td></td></tr><tr><td>ABC kit (Avidin-Biotin Complex)</td><td>VECTASTAIN Elite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole (5.0 mg/mL)</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Antagonista medetomidyny</td></tr><tr><td>Centryfuga stołowa</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Szafka biobezpieczeństwa klasy II (zgodna z BSL-2)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Biotynowany przeciwciało wtórny</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej (BSA)</td><td>NZYTech</td><td>MB47002</td><td></td></tr><tr><td>Przescinki mózgu (np. przescinki koronarne o grubości 30–40 μm) wybarwione immunochemicznie na DARPP-32</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Wtyczka Cell Counter (FIJI)</td><td>Wbudowana / ImageJ</td><td>&mdash;</td><td>Narzędzie do ręcznego zliczania agregatów</td></tr><tr><td>Inkubator CO2 (37 &deg;C, 5% CO2, nawilżony)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Stanowisko komputerowe</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Stosowane do przetwarzania obrazów i uruchomienia oprogramowania</td></tr><tr><td>Lejki ultrawirówkowe</td><td>Beckman Coulter</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>Bąbelki bawełniane</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Stosowane do usuwania okostnej</td></tr><tr><td>Kryostat z uchwytem na próbki</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>DAB (Diaminobenzydyna)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Cyfrowy czytnik współrzędnych stereotaksyjnych</td><td>Stoelting/WPI</td><td>51725</td><td>Wyświetlacz cyfrowy do pomiaru współrzędnych</td></tr><tr><td>Modyfikowany przez Dulbecco środek Eagle (DMEM, z wysokim poziomem glukozy)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>11-965-092</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 70, 96 i 100%</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, 70%</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Do dezynfekcji skóry głowy</td></tr><tr><td>Fentanil (0,05 mg/mL)</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Składnik znieczulenia</td></tr><tr><td>Płodowe surowce krowie (FBS), inaktywowane cieplnie</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>10500064</td><td></td></tr><tr><td>FIJI (dystrybucja ImageJ)</td><td>NIH / ImageJ</td><td>https://fiji.sc/</td><td>Oprogramowanie open source do ręcznego ilościowego pomiaru agregatów</td></tr><tr><td>Drobne kleszcze (do ściągania palców)</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Do monitorowania głębokości znieczulenia</td></tr><tr><td>Flumazenil (0,1 mg/mL)</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Antagonista midazolamu</td></tr><tr><td>Pęsety i skalpel</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Do usuwania okostnej i ekspozycji czaszki</td></tr><tr><td>Strzykawki mikrolitrowe/szczelne Hamilton 700/1700 Series</td><td>Hamilton / Fisher Sci.</td><td>7653-01/10550203</td><td>Do wprowadzania roztworów wirusowych</td></tr><tr><td>Strzykawki Hamilton Small Hub Removable Needles (26G)</td><td>Hamilton / Fisher Sci.</td><td>7804-03/ 10698205</td><td>Do wprowadzania wirusów</td></tr><tr><td>Podgrzewacz (dla gryzoni)</td><td>Kent Scientific / SOMNI</td><td>np. 04-777-177</td><td>Do utrzymania temperatury ciała</td></tr><tr><td>Komórki HEK 293T (≤ przelew 10, wolne od mikoplazm)</td><td>ATCC lub równoważne</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>Nadmianok</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie IHC AggreCount</td><td>Dostarczane na życzenie</td><td>N/A</td><td>Firmowe oprogramowanie do półautomatycznego wykrywania i ilościowego pomiaru agregatów</td></tr><tr><td>Mikroskop inwertowany (na przepływność komórek)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Miksarka wirówkowa laboratoryjna</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Wektory lentiwirusowe (dziki typ i mutant)</td><td>W firmie / Jednostka centralna</td><td>N/A</td><td>Roztwór wirusowy do wstrzykiwań</td></tr><tr><td>L-glutamina (200 mM)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop świetlny z aparatem (jasnopolowy)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidyna (1,0 mg/mL)</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Składnik znieczulenia</td></tr><tr><td>Wiertło mikro (kompatybilne ze stereotaksją)</td><td>Stoelting / Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Do przeprowadzania przetok</td></tr><tr><td>Pompa do wstrzykiwań mikro (np. Stoelting)</td><td>Stoelting/WPI</td><td>53210</td><td>Zautomatyzowana pompa do wlewu wirusów</td></tr><tr><td>Mikropipety (P1000, P200, P10) i końcówki</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Zdjęcia mikroskopowe (przescinki IHC)</td><td>Generowane w firmie</td><td>N/A</td><td>Zdjęcia immunohistochemiczne do analizy</td></tr><tr><td>Ostrza mikrotomowe (niskie, jednorazowe)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam (5,0 mg/mL)</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Składnik znieczulenia</td></tr><tr><td>Środek montażowy</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Nalozon (0,4 mg/mL)</td><td>Dostawca lokalny</td><td>&mdash;</td><td>Antagonista fentanil</td></tr><tr><td>Trzymający igły i drobne igły do sekcjonowania</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Normalne surowce kozie (NGS)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Związek O.C.T.</td><td>Tissue-Tek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maść okulistyczna (Bepanthen Eye and Nose Ointment, 5% Dexpanthenol)</td><td>Bayer</td><td>11568-0053</td><td>Zapobiega wysychaniu rogówki podczas operacji</td></tr><tr><td>Mieszarka orbitalna</td><td>-</td><td>-</td>

choroba zwojów wzrokowych wywołana wirusem lentywirusowym jako prekliniczny model poliglutaminowyej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji

Lentiviral-Induced Striatal Pathology as a Preclinical Model of Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias

Ataksje rdzeniowo-móżdżkowe z poliglutaminą to grupa sześciu chorób neurodegeneracyjnych wywołanych mutacją w regionie trójnukleotydowym CAG w obrębie regionu kodującego każdego genu przyczyniającego się do choroby. Mutacja ta prowadzi do nieprawidłowego wydłużenia fragmentu poliglutaminowego w białku, co sprawia, że jest ono podatne na agregację i prowadzi do powstawania śródneuronowych inkluzji, które są charakterystyczne dla tych chorób. Mechanizmy molekularne leżące u podstaw patogenezy tych chorób są złożone i nie są w pełni rozumiane. Jak dotąd choroby te pozostają nieuleczalne. Zrozumienie mechanizmów molekularnych w podatnych regionach mózgu jest niezbędne do rozwoju terapii. Elastyczne, specyficzne dla regionów eksperymentalne platformy są potrzebne, aby szybko testować mechanizmy i interwencje bez konieczności generowania wielu linii transgenicznych, nawet jeśli nie rozwiązują one problemu selektywnej podatności. W ostatnich latach, my i inni, opracowaliśmy kilka modeli opartych na lentivirusach w celu zbadania wpływu zwiększonej ekspresji białka w określonych regionach mózgu. Modele te wykazują cechy neuropatologiczne i behawioralne, które naśladują niektóre objawy choroby, podkreślając ich znaczenie w zrozumieniu patogenezy i rozwoju nowych strategii terapeutycznych. W niniejszym artykule opisujemy opracowanie modelu zwojowego używając SCA2 jako przykładu. Podkreślamy rozwój wektorów lentivirusowych i ich produkcję oraz stereotaktyczne wstrzyknięcie wektorów wyrażających zwiększoną formę ataksyny-2 (białka wywołującego chorobę). Na koniec charakteryzujemy dwie główne neuropatologiczne cechy charakterystyczne: tworzenie inkluzji i utratę markerów neuronalnych. Dzięki zapewnieniu kontrolowanej platformy, która odtworzy te kluczowe patologiczne cechy, model ten oferuje cenne narzędzie do analizy regionowo-specyficznych mechanizmów neurodegeneracji i oceny ukierunkowanych interwencji terapeutycznych.

To badania z powodzeniem zidentyfikowały ekspresję ataxin-2 i DARPP-32 stosując obecny protokół. Po stereotaksyjnym wstrzyknięciu wektorów lentiwirusowych do zwojów czepcowych myszy C57BL/6J, po 12 tygodniach wykryto mocną ekspresję zarówno dzikiego typu jak i mutantnego ataxin-2. Wcześniej wykazaliśmy12, że konstrukty te są specyficzne dla neuronów, skutecznie transdukują średnio 20 000 neuronów na mm3. W naszych warunkach eksperymentalnych, immunobarwienie na ataxin-2 ujawnił...

Atakie rdzeniowo-móżdżkowe poliglutaminowe są spowodowane ekspansjami CAG prowadzącymi do tworzenia białek predysponowanych do agregacji. Ten protokół opisuje produkcję wektorów, stereotaksyczne wprowadzenie oraz analizę inkluzji i utraty markerów neuronowych, zapewniając kontrolowaną platformę do badania mechanizmów i oceny ukierunkowanych terapii chorób neurodegeneracyjnych.

Choroba zwojów wzrokowych wywołana wirusem lentywirusowym jako prekliniczny model poliglutaminowyej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji

Polyglutamine spinocerebellar ataxias are a group of six neurodegenerative diseases caused by a mutation in the trinucleotide CAG tract within the coding ...

Niniejsze badanie opisuje rozwój lintiwirowego modelu mysiego dla rzadkich chorób neurodegeneracyjnych, w szczególności ataksji rdzeniowo-móżdżkowych. Protokół ten opracowuje modele mysie z niektórymi zaletami w porównaniu z konwencjonalnymi modelami mysimi transgennymi. Mianowicie są szybsze, są opłacalne kosztowo i pozwalają na określoną transakcję w określonych obszarach mózgu.Jest to odpowiednie do badań mechanyzmu i do opracowywania strategii terapeutycznych. Na początek umieść znieczulonego szczura C57BL6J na czystym biurku i potwierdź głębokość znieczulenia, oceniajac refleks z ściągnięcia palca. Po ogolenie czubka głowy zwierzęcia, umieść je w ramie stereotaksycznej na podgrzewanej poduszce i ustal głowę za pomocą chwytaków usznych i klocka gryzącego.Zamontuj strzykawkę zawierającą dwa mikrolitery roztworu wektora lentiwiralnego do zautomatyzowanej pompy mikroiniekcyjnej. Ustaw parametry pompy, w tym prędkość 0,25 mikrolitra na minutę, objętość na półkulę dwóch mikrolitrów i odpowiedni typ strzykawki. Przygotuj miejsce operacyjne za pomocą naprzemiennych rund jodoforu povidone lub chloroheksydyny lub alkoholu 70% powtarzanych trzykrotnie przed wykonaniem nacięcia.Za pomocą sterylnej ostrza skalpela wykonaj nacięcie środkowe o długości około jednego do 1,5 centymetra od między uszami do oczu. Odsłoń czaszkę i wyczyść powierzchnię, usuwając okostną wacikami. Zlokalizuj bregmę i ręcznie lub cyfrowo zarejestruj punkt zerowy stereotaksyczny.Wyznacz współrzędne wstrzyknięcia względem bregmy z przednią-tylną na plus 0,6 milimetrów i środkowo-boczną na plus lub minus 1,8 milimetra. Ostrożnie wiercij w zaznaczonych współrzędnych przednio-tylnych i środkowo-bocznych, aby uniknąć przebicia mózgu. Powoli obniżaj igłę wstrzykiwania do współrzędnej grzbietowo-brzusznej, a następnie przetestuj zatykanie igły, wstrzykując część roztworu, aż kropka będzie wyraźnie widoczna.Sprawdź, czy dziurka jest we właściwej pozycji, obniżając igłę wstrzykiwania. Wstrzyknij dwa mikrolitery lentiwirusu kodującego dla dzikiego typu aksyny do jednej półkuli z prędkością 0,25 mikrolitra na minutę. Po pięciu minutach powoli wycofaj igłę, aby uniknąć refluksu.Podobnie wstrzyknij mutacyjny lub ekspansyjny białko do przeciwnej strony. Zamknij nacięcie za pomocą trzech do pięciu przerwianych szwów nylonowych 5-O. Podaj mieszankę leków antagonistycznych podskórnie, aby odwrócić działanie początkowego znieczulenia, zanim zwierzę zostanie zwrócone do klatki odzyskowawczej, a mózg zostanie odizolowany po 12 tygodniach.Wypełnij komórki 48-dołkowej płytki PBS zawierającym 0,05% azydu sodu. Następnie transportuj mózg na lodowym węglu i pozwól mu zrównoważyć się wewnątrz wstępnie schłodzonego kryostatu przez pięć do 10 minut, aby zapobiec uszkodzeniu tkanki. Za pomocą skalpela usuń cebulki wzgórzowe, ponieważ są miękkie i łatwe do przecięcia.Nałóż kroplę OCT o wielkości groszku na tarczę próbki i umieść móżdżek w kontakcie. Po zamrożeniu dodaj dodatkowy OCT, aby osadzić cały mózg. Zamontuj tarczę próbki w uchwycie i przytnij, aż zostanie zauważone widać jako dwa białe kółka na każdej półkuli.Jeśli półkule otrzymały różne leki, przekłuj jedną półkulę igłą, aby zachować orientację i zarejestruj to do późniejszej analizy. Następnie przełącz się do trybu cięcia na panelu instrumentu i zbieraj wolno wiszące sekcje do 48-dołkowej płytki za pomocą drobnego pędzelka lub wypolerowanej szkła pasterki. Umieść pierwszą sekcję w dołku A1, a drugą w A2, kontynuując sekwencyjnie.Gdy płyta jest pełna, kontynuuj w nowej płycie lub kontynuuj, aż cała cześć widlasta zostanie przecięta. Uszczelń płyty przezroczystą folią i przechowuj w czterech stopniach Celsjusza do momentu użycia. Przeprowadź immunohistochemiczne badanie sekcji przy użyciu odpowiednich przeciwciał i rozwijaj barwienie diaminobenzydyna.Monitoruj rozwój brązowego koloru i pozwól reakcji osiągnąć oczekiwany poziom intensywności. Zrób zdjęcia przekrojów mózgu rozciągających się na całej części widlastej. Do ręcznego liczenia otwórz obraz w Fiji, aby załadować go i skalibrować wielkość piksela, jeśli jest to konieczne, gdy metadane nie są dostępne.Wybierz, analizuj i wybierz skalę ustawienia, aby wprowadzić znaną odległość, taką jak jeden piksel równy 0,5 mikrometrów. Przejdź do wtyczek, następnie analizuj licznik komórek i wybierz licznik komórek. Kliknij inicjalizuj i wybierz obraz.Wybierz typ markera, takich jak typ jeden dla agregatów. Kliknij ręcznie na każdym widocznym agregacie, aby go oznaczyć. Zarejestruj liczbę wyświetlaną na panelu licznika komórek dla każdego obrazu lub sekcji i eksportuj liczby ręcznie lub skompiluj wyniki za pomocą makra.W przypadku półautomatycznej ilościowej oceny otwórz IHC

lentiviral-induced-striatal-pathology-as-preclinical-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Opisujemy protokół szybkiej i czułej kwantyfikacji stopnia nasilenia choroby w mysich modelach ataksji móżdżkowej. Pomiary obejmują kleszczenie kończyn tylnych, test krawędzi, chód oraz kifozę. Protokół ten skutecznie rozróżnia osobniki dotknięte chorobą od osobników zdrowych i pozwala wykryć postęp choroby u osobników dotkniętych w czasie.

Prosty system punktacji złożonego fenotypu do oceny modeli mysich ataksji móżdżkowej

Źródło: Tagliafierro, L., et al. Platforma wektorów lentiwirusowych do efektywnego dostarczania narzędzi do edycji epigenomu do modeli chorób pochodzących z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych. J. Vis. Exp. (2019 rok)Ten film pokazuje transdukcję lentiwirusową nerwowych komórek progenitorowych (NPC) w celu ukierunkowanej modyfikacji epigenetycznej alfa-synukleiny, kluczowego białka w chorobie Parkinsona. Protokół umożliwia metylację DNA za pośrednictwem metylotransferazy,...

Transdukcja lentiwirusowa nerwowych komórek progenitorowych w celu epigenetycznej regulacji ekspresji alfa-synukleiny

Przedstawiamy protokół biochemiczny i behawioralny do oceny skuteczności związków rozpuszczalnych w wodzie ukierunkowanych na mitochondria w leczeniu ataksji rdzeniowo-móżdżkowej typu 1 (SCA1) i innych chorób neurodegeneracyjnych móżdżku.

Leczenie myszy SCA1 związkami rozpuszczalnymi w wodzie w celu niespecyficznego wzmocnienia funkcji mitochondriów

Celem tego protokołu jest dostarczenie systemu opartego na komórkach, który replikuje tworzenie agregatów alfa-synukleiny in vivo. Wewnątrzkomórkowe inkluzje alfa-synukleiny są wysiewane w pierwotnych neuronach przez internalizację i propagację egzogennych, podawanych natywnych agregatów alfa-synukleiny związanych z mikrosomami wyizolowanych z chorych myszy transgenicznych alfa-synukleiny.

Egzogenne podawanie agregatów alfa-synukleiny związanych z mikrosomami do neuronów pierwotnych jako potężny model komórkowy tworzenia włókienek

Celem tej techniki jest przygotowanie wysoce wzbogaconej kultury pierwotnych neuronów ruchowych (MN) z mysiego rdzenia kręgowego. Aby ocenić konsekwencje mutacji powodujących choroby MN, opisujemy tutaj izolację tych izolowanych MN i ich transfekcję przez magnetofekcję.

Modelowanie choroby Charcota-Marie-Tootha in vitro poprzez transfekcję pierwotnych neuronów ruchowych myszy

Ten protokół szczegółowo opisuje procedurę, w której ludzkie kultury neuronalne są transdukowane za pomocą lentiwirusowych konstruktów kodujących zmutowane ludzkie tau. Transdukowane kultury wykazują agregaty tau i związane z nimi patologie.

Model in vitro do badania agregacji tau za pomocą transdukcji ludzkich neuronów za pośrednictwem lentiwirusa

Różne regiony móżdżku są zaangażowane w różne procesy behawioralne, jednak leżące u ich podstaw mechanizmy molekularne pozostają nieznane. W pracy opisano metodę powtarzalnego i szybkiego preparowania kory móżdżku półkul, przednich i tylnych obszarów robaka oraz głębokich jąder móżdżku w celu zbadania różnic molekularnych poprzez wyizolowanie RNA i zbadanie różnic w ekspresji genów.

Rozwarstwienie regionalne móżdżku do analizy molekularnej

Opisano dwie powiązane metody wizualizacji zdarzeń subkomórkowych wymaganych do transmisji synaptycznej. Protokoły te umożliwiają monitorowanie w czasie rzeczywistym dynamiki napływu presynaptycznego wapnia i fuzji błony pęcherzyków synaptycznych przy użyciu obrazowania żywych komórek neuronów hodowanych in vitro.

Fluorescencyjny pomiar funkcji synaptycznych w czasie rzeczywistym w modelach stwardnienia zanikowego bocznego

Tutaj prezentujemy protokół oceny neuroprotekcyjnych aktywności testowych związków u Caenorhabditis elegans, w tym agregacji poliglutaminy, śmierci neuronów i zachowania chemounikania, a także przykładowej integracji wielu fenotypów.

Caenorhabditis elegans jako modelowy system do odkrywania związków bioaktywnych przeciwko neurotoksyczności za pośrednictwem poliglutaminy

Ta praca analizuje dawkę wektora i czas ekspozycji wymagane do wywołania zapalenia nerwów, neurodegeneracji i upośledzenia motorycznego w tym przedklinicznym modelu choroby Parkinsona. Te wektory kodujące ludzką α-synukleinę są dostarczane do istoty czarnej w celu podsumowania patologii synukleiny związanej z chorobą Parkinsona.

Analiza mysiego modelu choroby Parkinsona indukowanego przez wektory wirusowe związane z adenowirusem kodujące ludzką α-synukleinę

Poznaj model choroby zwojów wzrokowych wywołanej wirusem lentywirusowym jako narzędzie do badania poliglutaminowej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji typu 2. Ta metoda umożliwia szybkie testowanie mechanizmów choroby i terapii.

Choroba zwojów wzrokowych wywołana wirusem lentywirusowym jako prekliniczny model poliglutaminowyej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji (Wideo) | JoVE Journal

Choroba zwojów wzrokowych wywołana wirusem lentywirusowym jako prekliniczny model poliglutaminowyej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji

Przeglądaj więcej filmów