Automatyczne rozdzielanie HPLC z wykorzystaniem LC-Mate: zintegrowany powtarzalny automatyczny próbnik i kolektor frakcji do mikroskalowego oczyszczania

Nasze badania koncentrują się na zaprojektowaniu instrumentu, który podłącza się bezpośrednio do konfiguracji HPLC, aby zautomatyzować wszystkie powtarzalne kroki manualne. Ręczne wstrzykiwanie próbek i pobieranie frakcji są bardzo żmudne. LC-Mate oferuje zautomatyzowane rozwiązanie wieloplatformowe do oczyszczania próbek HPLC.

Na początek zweryfikowaj połączenia rozpuszczalnikowe między systemem HPLC, LC-Mate a kolumną chromatograficzną, aby zapewnić prawidłowe ścieżki przepływu. Aby sprawdzić połączenie linii transmisyjnej sygnału między detektorem UV a LC-Mate, podłącz przewód do czerwonego zacisku, a biały do czarnego zacisku, aby dopasować polaryzację sygnału analogowego. Obserwuj wyświetlacz LC-Mate, aby potwierdzić, że pojawia się przebieg sygnału analogowego.

Jeśli fala nie jest widoczna, odwróć połączenia przewodu, łącząc przewód do czarnego zacisku, a biały do czerwonego. Aby sprawdzić połączenie wyzwalające między detektorem ultrafioletowym a LC-Mate, podłącz pojedynczy koniec kabla danych do portu wyjściowego detektora ultrafioletowego. Podłącz i biały przewód z drugiego końca kabla do czarnego i niebieskiego zacisku spustowego na LC-Mate odpowiednio. Dokręć zaciski, aby zapewnić solidne połączenie spustu.

Następnie należy zapewnić prawidłowe uruchomienie systemu HPLC i LC-Mate. Kliknij ikonę LC Mate na interfejsie, aby automatycznie uruchomić program samotestu systemu i zaikalizować kluczowe moduły sprzętowe. Poczekaj na krótki komunikat i zniknięcie komunikatu o samotestie, aby potwierdzić, że inicjalizacja jest zakończona.

Skonfiguruj warunki separacji HPLC i rozpocznij elucię, aby wyrównać kolumnę. W interfejsie testowym wprowadź objętość wstrzykiwania, czas elucii i czasy powtórzeń, a następnie naciśnij ikonę Start, aby uruchomić auto-sampler, kolektor frakcji i operację HPLC. Zidentyfikuj możliwe warunki separacji, w tym rozdzielczość, czas działania, czas retencji, objętość wtrysku oraz długość fali ultrafioletowej.

Wybierz moduł funkcji Threshold po lewej stronie interfejsu, aby otworzyć ekran ustawienia parametrów. Wprowadź objętość wstrzykiwania, czasy powtórzeń, próg i czas elucii, a następnie naciśnij Start, aby rozpocząć automatyczną pracę. Monitoruj wskaźniki statusu.

Obserwuj iniekcję w trakcie, aby potwierdzić wprowadzenie próbki. Sprawdź wskaźnik "separacja w toku", aby potwierdzić, że separacja chromatograficzna faktycznie zachodzi. Zwróć uwagę na wskaźnik opróżniania strzykawki, aby rozpoznać, kiedy strzykawka oczyszcza resztki płynu.

Aby wykonać zbieranie ułamków na podstawie czasu, wybierz moduł kolekcji czasowej po lewej stronie interfejsu, aby otworzyć menu parametrów. Objętość wtrysku wejściowego, czasy powtórzeń, czas elucii oraz wymagane czasy zbierania. Naciśnij przycisk Start, aby rozpocząć powtarzającą się automatyczną sekwencję.

Następnie wybierz moduł funkcji Collect All po lewej stronie interfejsu. Ustaw wartość progową zbioru, aby zebrać wszystkie piki chromatograficzne osobno. Do oczyszczania rurociągu włóż rurociąg wtryskowy automatycznego próbkatora do małej butelki zawierającej czysty rozpuszczalnik.

Wybierz moduł Czyszczenie z lewej strony interfejsu, aby otworzyć menu parametrów. Następnie ustaw objętość wtrysku od zera do 1000 oraz czas powtarzania czyszczenia rurociągu wtryskowego. Kliknij na Oczyszczanie poniżej Czyszczenie zakończone, aby rozpocząć oczyszczanie rurociągu wstrzymujących.

Monitoruj liczbę cykli, aby śledzić ukończone cykle prania. Ustaw czas oczyszczania pipeline'u pobierania. Kliknij na Oczyszczanie poniżej Current Pipeline, aby rozpocząć oczyszczanie pipeline'u zbiorowego.

Monitoruj aktualny wyświetlacz rurociągu, aby potwierdzić sekwencyjne czyszczenie od rurociągu 0 do 10. Włącz automatyczne zapisywanie, aby system mógł zapisywać chromatogramy po każdym cyklu elucii. Alternatywnie, kliknij przycisk Zapisz po ewolucji, aby ręcznie zapisać dane.

Po wejściu metadanych do okna dialogowego wybierz miejsce przechowywania z lokalnej pamięci, karty SD lub zewnętrznej uniwersalnej magistrali szeregowej. Półprzygotowawcze rozdzielenie HPLC z użyciem LC-Mate pozwoliło na ciągłe i stabilne wstrzykiwanie próbek oraz zbieranie frakcji podczas oczyszczania 2"O-galloyl-hiperozydu. Drobne zanieczyszczenia zostały skutecznie usunięte, aby uzyskać oczyszczony 2"O-galloyl-hyperozid przy użyciu systemu LC-Mate.

Ciągłe i stabilne wstrzykiwanie próbek oraz pobieranie frakcji również zostały pomyślnie osiągnięte podczas oczyszczania florydyny i trilobatyny. Wykazanie, że system LC-Mate znacząco poprawia efektywność operacyjną poprzez znaczne ograniczenie ręcznej interwencji. Względne odchylenie standardowe pełnej powierzchni szczytowej iniekcji pierścienia wyniosło 0,813%, co wskazuje na doskonałą stabilność i powtarzalność zastrzyków LC-Mate.

System ten umożliwia automatyczne oczyszczanie oraz precyzyjne zbieranie frakcji dla efektywnych procesów HPLC na dużą skalę. Poprawna modyfikacja sygnału, właściwy wybór trybów oraz ustawienie parametrów są kluczowe dla skutecznego zastosowania instrumentu LC-Mate. Planujemy zwiększyć pojemność kanału i zintegrować nowe detektory dla lepszej kompatybilności międzyplatformowej.