Name: Kolonizacja przez myszą pks+ Escherichia coli w warunkach niezapalnych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-10T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Poznaj metodę kolonizacji myszy bakterią pks+ Escherichia coli w warunkach niezapalnych, wykorzystującą podawanie doustne i suplementację inuliną. Protokół umożliwia badanie interakcji gospodarz-mikrobiota w kontekście rozwoju raka jelita grubego.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Prace te zostały sfinansowane z grantu od Canadian Institutes of Health Research [CIHR, grant CSV-198232]. Dziękujemy ośrodku zwierzęckiemu CRCHUM. Figurki tworzono przy użyciu BioRender.com.

Wszystkie procedury były wykonywane zgodnie z wytycznymi Kanadyjskiej Rady Opieki nad Zwierzętami po zatwierdzeniu przez Instytucjonalny Komitet Opieki nad Zwierzętami Centrum Badań Szpitalnych Uniwersytetu Montrealskiego (CRCHUM). Siedmiotygodniowe myszy pozyskano z komercyjnego źródła i aklimatyzowano przez tydzień przed rozpoczęciem eksperymentu. Schematyczne przedstawienie tej metody przedstawiono na Rysunku 1. Szczegóły dotyczące zwierząt, odczynników i sprzętu używanego w tym badaniu są wymienione w Tabeli Materiałów.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70204/70204fig1.jpg" /> 
Rysunek 1: Schemat przygotowania i kolonizacji pks+ E.coli . Dzień (D)-4: Cztery dni przed gavage'em zacznij myszy z antybiotykami. D-1: 24 godziny przed gavage, usunąć antybiotyki. Przygotuj hodowlę pks+ E. coli do inkubacji na noc. D0: Przygotuj szczepionkę bakteryjną pks+ E. coli . Podaj myszom pks+ E. coli lub środek kontrolny (sól fizjologiczna) za pomocą doustnego gavage jak najszybciej po przygotowaniu szczepionki. D7+ Zbieraj kał myszy w celu wykrywania i ilościowego określenia kolonizacji pks+ E. coli . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70204/70204fig1large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.</a>
1. Leczenie antybiotykami
<ol>
	<li>Rozcieńcz ampycylinę, kolizinę i streptomycynę w sterylnej wodzie pitnej do końcowego stężenia 1 mg/mL ampicyliny, 1 mg/mL kolistyny oraz 5 mg/mL streptomycyny.</li>
	<li>Pozwól na ad libitum dostęp do antybiotyków w wodzie pitnej przez 3 dni.</li>
	<li>Usuń antybiotyki i przywróć dostęp do sterylnej wody na 24-godzinny okres płukania przed zaszczepieniem szczepionki E. coli NC101. UWAGA: Roztwór antybiotyku powinien być przygotowywany świeżo do każdego eksperymentu. Należy monitorować odpowiednie przyjmowanie roztworu antybiotykowego. W razie potrzeby do wody można dodać słodzik.</li>
</ol>
2. Przygotowanie inokulum E. coli NC101 (do n = 12 myszy)
UWAGA: Kroki 2.1-2.8 należy wykonać techniką aseptyczną.
<ol>
	<li>Przygotuj i podkłuj bulion lizogenetyczny (LB).</li>
	<li>Smuga E. coli NC101 z bulionu glicerolowego na płytkę agarową LB za pomocą sterylnej pętli inokulacyjnej. Inkubuj przez noc w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Zaszczep 5 mL jałowego bulionu LB w tubce hodowlowej z pojedynczą kolonią z płytki agarowej LB za pomocą pętli inokulacyjnej. Inkubuj przez noc w temperaturze 37 °C w shakerze inkubacyjnym na ławce stołowej przy 150 obr./min.</li>
	<li>Wiruj probówkę hodowlę w temperaturze 1500 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Usuń i wyrzuć supernatant, unikając osadu bakteryjnego, który pojawi się jako kremowy osad u podstawy rurki.</li>
	<li>Ponownie zawiesij granulat bakteryjny w 5 mL soli fizjologicznej o stężeniu 0,9% sterylnej.</li>
	<li>Myj, powtarzając kroki od 4 do 6.</li>
	<li>Zmierz gęstość optyczną przy 600 nm (OD600) za pomocą gęstości komórek i dostosuj OD600 do 0,625 (~1 x 10,8 CFU/mysz) za pomocą sterylnej soli fizjologicznej. UWAGA: Aby zapobiec zanieczyszczeniu bulionu bakteryjnym w kroku 3, inkubuj osobną tubkę 2-3 mL sterylnego bulionu LB przez noc. Bulion powinien pozostać przezroczysty po inkubacji przez noc, co wskazuje na brak zakażenia bakteryjnym. Jeśli początkowy przedawk600 jest mniejszy niż 0,625, powtórz kroki 4 do 6, używając mniejszej objętości do ponownego zawieszenia pelletu. Aby zapewnić dokładną dawkę E. coli NC101, seryjne rozcieńczenia płynu gavage należy nakładać i hodować przez noc. Liczba CFU dla każdego rozcieńczenia może posłużyć do oszacowania początkowej ilości CFU w zawiesinie bakteryjnej.</li>
</ol>
3. Badanie doustne E. coli NC101
<ol>
	<li>Delikatnie poruszaj inokulum bakteryjne, aby zapewnić równomierne rozmieszczenie bakterii.</li>
	<li>Włóż igłę do gavage do strzykawki o pojemności 1 mL i napełnij 0,2 mL szczepionki bakteryjnej, usuwając wszelkie pęcherzyki powietrza.</li>
	<li>Wyjmij mysz z klatki i delikatnie, ale stanowczo stuknij ją za kark, chwytając skórę od tuż za uszami do łopatek, używając poduszki kciuka i boku palca wskazującego. Zabezpiecz ogon środkowym lub serdecznym palcem tej samej ręki.</li>
	<li>Trzymaj mysz w pozycji pionowej i włóż igłę gavage z boku ust. Przesuwaj końcówkę igły gavage wzdłuż podniebienia i do przełyku oraz żołądka, delikatnie odpychając głowę myszy, aby wyprostować szyję. Jeśli poczujesz opór, usuń igłę gavage. Jeśli trzeba, ponownie przełóż mysz na szyję przed kolejną próbą.</li>
	<li>Powoli wstrzykuj szczepionkę bakteryjną (0,2 mL) i wyjmij igłę, podążając tym samym kątem co przy włożeniu.</li>
	<li>Wróć mysz do klatki i przejdź do pozostałych myszy. UWAGA: Szczepienie bakteryjne należy podać jak najszybciej po przygotowaniu. Myszy kontrolne powinny otrzymać 0,2 mL 0,9% bezpłodnej soli fizjologicznej (pojazd). Odpowiednia długość, przełomowy i średnica kulki igły gavage powinny być ustalane na podstawie średniej masy ciała myszy w każdym eksperymencie. Sprawdź wzór oddechu i aktywność myszy po 5 minutach i przed opuszczeniem ośrodka dla zwierząt. Jeśli zaobserwowane są trudne oddechy lub zaburzenia oddechowe, należy uśpić mysz zgodnie z zatwierdzonym protokołem. Gavage doustne powinny być wykonywane wyłącznie przez wykwalifikowany personel badawczy. Nieprawidłowe wykonanie gavage doustnego może prowadzić do poważnych powikłań lub śmierci z powodu perforacji przełyku lub wstrzyknięcia płynu gavage do płuc. W przypadku przeprowadzania przez doświadczonych naukowców nie oczekuje się śmiertelności przy tym zabiegu. Myszy użyte w tym eksperymencie powinny być trzymane w warunkach SPF. Aby zapobiec zanieczyszczeniu między klatkami, należy stosować indywidualnie wentylowane klatki, a myszy manipulować w szafie bezpieczeństwa biologicznego. Przed otwarciem każdej klatki ręce i zewnętrzną część pokrywy należy przetrzeć odpowiednim środkiem dezynfekującym (np. przyspieszonym nadtlenkiem wodoru). Wymagania dotyczące PPE do manipulacji myszami używanymi w tym protokole obejmują fartuch (jednorazowy lub wielokrotnego użytku) oraz rękawiczki. Dodatkowe środki ochrony osobistej mogą być wymagane przez placówkę prowadzącą dla zwierząt. Wszystkie manipulacje z udziałem myszy kontrolnych powinny być wykonywane jako pierwsze.</li>
</ol>
4. Pobieranie próbek kału
<ol>
	<li>Pobierz granulat kałowy od każdej myszy w rurce mikrowirówki o pojemności 1,5 mL, chwytając mysz za karku, jak opisano w kroku 3.3. Mysz powinna natychmiast się wypróżnić. Alternatywnie, umieść mysz w czystej pustej klatce i poczekaj do 30 minut, aż nastąpi defekcja.</li>
	<li>Próbkę zamroz szybko, umieszczając ją w ciekłym azocie. Przechowuj próbkę w temperaturze -80 °C do czasu dalszej analizy. UWAGA: Wykrywanie clbA lub ilościowe określenie clbP w stolcu za pomocą PCR w czasie rzeczywistym powinno być przeprowadzone przed rozpoczęciem eksperymentu, aby potwierdzić, że myszy nie są kolonizowane przez pks+ E. coli. Aby utrzymać kolonizację dłużej niż tydzień, może być konieczne powtarzające się gavage bakteryjne bez wcześniejszego podania antybiotyków (kroki 2.1-3.6), w zależności od warunków eksperymentalnych. Ilościowa identyfikacja E. coli NC101 w stolcu za pomocą odzyskiwania CFU lub PCR w czasie rzeczywistym powinna być przeprowadzana co najmniej raz w tygodniu przez cały czas trwania eksperymentu podczas pierwszego wdrażania tego protokołu, aby zoptymalizować częstotliwość podawania.</li>
</ol>
5. Ekstrakcja DNA bakterii kałowych
<ol>
	<li>Ekstrakt bakteryjnego DNA z pobranych próbek stolca za pomocą zestawu do ekstrakcji DNA zgodnie z instrukcjami producenta.</li>
	<li>Zmierz stężenie DNA spektrofotometrem i dostosuj je do 5 ng/μL.</li>
</ol>
6. Potwierdzenie kolonizacji poprzez wykrycie genów clbA i E. coli 16S
<ol>
	<li>Wykonanie jednoczesnej amplifikacji genów RNA (rRNA) clbA i E. coli 16S (Tabela Uzupełniająca 1) za pomocą PCR, używając odpowiedniego miksu i instrumentu do PCR, zgodnie z instrukcjami producenta.</li>
	<li>Wizualizacja genów clbA i E. coli 16S u myszy E. coli NC101 skolonizowanych przez elektroforezę żelu agarozowego, jak opisanowcześniej 19. Myszy niekolonizowane nie powinny mieć pasma clbA .</li>
</ol>
7. Ilościowa identyfikacja E. coli NC101 przez odzysk CFU
UWAGA: Wykonaj kroki 7.1-7.7 z użyciem techniki aseptycznej.
<ol>
	<li>Zważ pustą rurkę mikrowirówki o pojemności 1,5 mL.</li>
	<li>Dodaj około 20 mg stolca do probówki mikrowirówki o pojemności 1,5 mL i zapisz wagę probówki wraz z dodaną próbką.</li>
	<li>Dodaj 200 μL soli fizjologicznej 0,9% bezpłodnej do każdej probówki.</li>
	<li>Odczekaj 10-15 minut, aż stolce zmiękną w temperaturze pokojowej, a każdą rurkę przez 5 minut z maksymalną prędkością przewijaj, aby uzyskać jednorodną zawiesinę. Widoczne będą drobne cząsteczki niestrawionego materiału pokarmowego.</li>
	<li>Przelej 100 μL każdego zawiesienia na płytę agarową MacConkey i równomiernie rozprowadz homogenat za pomocą rozpraszacza w kształcie L.</li>
	<li>Inkubuj płytki przez noc w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Policz liczbę różowych kolonii i normalizuj według wagi każdego pelletu kałowego oraz objętości pokrytej kału. UWAGA: Agar MacConkey wybiera bakterie gram-ujemne. Dodatkowo bakterie potrafiące fermentować laktozę (takie jak E. coli) tworzą różowe kolonie, podczas gdy te, które nie mogą tworzyć bezbarwnych lub żółtych kolonii. Do celów tego protokołu należy liczyć tylko różowe kolonie. Jeśli liczba kolonii jest zbyt podwyższona, można przeprowadzić seryjne rozcieńczenia początkowej homogenity przy użyciu soli fizjologicznej o stężeniu 0,9%. Uwzględnij współczynnik rozcieńczenia przy obliczaniu liczby kolonii na próbkę. Waga granulatu = waga rurki mikrowirówki wraz z próbką granulatu – waga pustej rurki mikrowirówki.</li>
</ol>
8. Ilościowość genu clbP
<ol>
	<li>Wykonaj amplifikację genów clbP i uniwersalnego 16S rRNA (Tabela Uzupełniająca 1) za pomocą ilościowego PCR, używając odpowiedniego mastermixa i instrumentu do PCR w czasie rzeczywistym, zgodnie z instrukcjami producenta.</li>
</ol>
9. Ilościowa identyfikacja Enterobacteriaceae
<ol>
	<li>Wykonaj amplifikację genów Enterobacteriaceae i uniwersalnego RNA 16S (uzupełniające) za pomocą ilościowego PCR z użyciem odpowiedniego mastermixu i instrumentu do PCR w czasie rzeczywistym.</li>
</ol>

<ol><li>Hou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota+in+health+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Microbiota in health and diseases.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 135(2022).</li>
<li>Martin, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Escherichia+coli+adherence+and+invasion+in+Crohn%27s+disease+and+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Enhanced Escherichia coli adherence and invasion in Crohn's disease and colon cancer.</a> Gastroenterology. 127 (1), 80-93 (2004).</li>
<li>Arthur, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+Inflammation+targets+cancer-inducing+activity+of+the+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intestinal Inflammation targets cancer-inducing activity of the microbiota.</a> Science. 338 (6103), 120-123 (2012).</li>
<li>Nougayrède, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+Induces+DNA+double-strand+breaks+in+eukaryotic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli Induces DNA double-strand breaks in eukaryotic cells.</a> Science. 313 (5788), 848-851 (2006).</li>
<li>Dziubańska-Kusibab, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colibactin+DNA-damage+signature+indicates+mutational+impact+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Colibactin DNA-damage signature indicates mutational impact in colorectal cancer.</a> Nat Med. 26 (7), 1063-1069 (2020).</li>
<li>Iftekhar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+aberrations+after+short-term+exposure+to+colibactin-producing+E.+coli+transform+primary+colon+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Commun%22%5BJournal%5D)">Genomic aberrations after short-term exposure to colibactin-producing E. coli transform primary colon epithelial cells.</a> Nature Commun. 12 (1), 1003(2021).</li>
<li>Yang, Y., Gharaibeh, R. Z., Newsome, R. C., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amending+microbiota+by+targeting+intestinal+inflammation+with+TNF+blockade+attenuates+development+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">Amending microbiota by targeting intestinal inflammation with TNF blockade attenuates development of colorectal cancer.</a> Nat Cancer. 1 (7), 723-734 (2020).</li>
<li>Rosendahl Huber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+detection+of+colibactin-induced+mutations+by+genotoxic+E.+coli+in+organoids+and+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Improved detection of colibactin-induced mutations by genotoxic E. coli in organoids and colorectal cancer.</a> Cancer Cell. 42 (3), 487-496.e6 (2024).</li>
<li>Díaz-Gay, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geographic+and+age+variations+in+mutational+processes+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Geographic and age variations in mutational processes in colorectal cancer.</a> Nature. 643 (8070), 230-240 (2025).</li>
<li>Arthur, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+genomic+analysis+reveals+the+essential+role+of+inflammation+in+bacteria-induced+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Microbial genomic analysis reveals the essential role of inflammation in bacteria-induced colorectal cancer.</a> Nat Commun. 5 (1), 4724(2014).</li>
<li>Tronnet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+iron+supply+inhibits+the+synthesis+of+the+genotoxin+colibactin+by+pathogenic+Escherichia+coli+through+a+non-canonical+Fur%2FRyhB-mediated+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Pathog+Dis%22%5BJournal%5D)">High iron supply inhibits the synthesis of the genotoxin colibactin by pathogenic Escherichia coli through a non-canonical Fur/RyhB-mediated pathway.</a> Pathog Dis. 75 (5), ftx066(2017).</li>
<li>Arima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western-style+diet%2C+pks+Island-carrying+Escherichia+coli%2C+and+colorectal+cancer%3A+Analyses+from+two+large+prospective+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Western-style diet, pks Island-carrying Escherichia coli, and colorectal cancer: Analyses from two large prospective cohort studies.</a> Gastroenterology. 163 (4), 862-874 (2022).</li>
<li>Oliero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligosaccharides+increase+the+genotoxic+effect+of+colibactin+produced+by+pks%2B+Escherichia+coli+strains%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Oligosaccharides increase the genotoxic effect of colibactin produced by pks+ Escherichia coli strains.</a> BMC Cancer. 21 (1), 172(2021).</li>
<li>Thakur, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fibre+counters+the+oncogenic+potential+of+colibactin-producing+Escherichia+coli+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Dietary fibre counters the oncogenic potential of colibactin-producing Escherichia coli in colorectal cancer.</a> Nat Microbiol. 10 (4), 855-870 (2025).</li>
<li>Oliero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inulin+impacts+tumorigenesis+promotion+by+colibactin-producing+Escherichia+coli+in+ApcMin%2F%2B+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Inulin impacts tumorigenesis promotion by colibactin-producing Escherichia coli in ApcMin/+ mice.</a> Front Microbiol. 14, 067505(2023).</li>
<li>Jans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colibactin-driven+colon+cancer+requires+adhesin-mediated+epithelial+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Colibactin-driven colon cancer requires adhesin-mediated epithelial binding.</a> Nature. 635 (8038), 472-480 (2024).</li>
<li>Devaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-serine+promotes+pro-carcinogenic+effects+of+colibactin-producing+E.+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">L-serine promotes pro-carcinogenic effects of colibactin-producing E. coli.</a> Gut Microbes. 17 (1), 2515480(2025).</li>
<li>Li, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inulin+with+different+degrees+of+polymerization+protects+against+diet-induced+endotoxemia+and+inflammation+in+association+with+gut+microbiota+regulation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Inulin with different degrees of polymerization protects against diet-induced endotoxemia and inflammation in association with gut microbiota regulation in mice.</a> Sci Rep. 10 (1), 978(2020).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> J Vis Exp. (62), e3923(2012).</li>
<li>Oliero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putrescine+supplementation+limits+the+expansion+of+pks%2B+Escherichia+coli+and+tumor+development+in+the+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Putrescine supplementation limits the expansion of pks+ Escherichia coli and tumor development in the colon.</a> Cancer Res Commun. 4 (7), 1777-1792 (2024).</li>
<li>Jans, M., Vereecke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+drivers+of+pks%2B+E.+coli+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Physiological drivers of pks+ E. coli in colorectal cancer.</a> Trends Microbiol. , (2025).</li>
<li>Lavelle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baseline+microbiota+composition+modulates+antibiotic-mediated+effects+on+the+gut+microbiota+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Baseline microbiota composition modulates antibiotic-mediated effects on the gut microbiota and host.</a> Microbiome. 7 (1), 111(2019).</li>
<li>Russell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+housing+density+improves+statistical+power+of+murine+gut+microbiota+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Reduced housing density improves statistical power of murine gut microbiota studies.</a> Cell Rep. 39 (6), 110783(2022).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+Routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: Routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Harnack, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+mucosal+disruption+enables+colibactin-producing+E.+coli+to+cause+long-term+perturbation+of+colonic+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Short-term mucosal disruption enables colibactin-producing E. coli to cause long-term perturbation of colonic homeostasis.</a> Gut Microbes. 15 (1), 2233689(2023).</li>
<li>Gurbatri, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+tumor-colonizing+E.+coli+Nissle+1917+for+detection+and+treatment+of+colorectal+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Engineering tumor-colonizing E. coli Nissle 1917 for detection and treatment of colorectal neoplasia.</a> Nat Commun. 15 (1), 646(2024).</li>
<li>Yang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+expression+of+antitoxin+on+engineered+bacteria+neutralizes+genotoxic+colibactin+in+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Surface expression of antitoxin on engineered bacteria neutralizes genotoxic colibactin in the gut.</a> Nat Microbiol. 11 (1), 53-66 (2026).</li>
<li>Tronnet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Genotoxin+colibactin+shapes+gut+microbiota+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">The Genotoxin colibactin shapes gut microbiota in mice.</a> mSphere. 5 (4), (2020).</li>
<li>Condamine, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+phylogroup+and+environmental+constraints+shape+Escherichia+coli+dynamics+and+diversity+over+a+20-year+human+gut+time+series%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">Strain phylogroup and environmental constraints shape Escherichia coli dynamics and diversity over a 20-year human gut time series.</a> ISME J. 19 (1), (2024).</li>
<li>Cougnoux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+genotoxin+colibactin+promotes+colon+tumour+growth+by+inducing+a+senescence-associated+secretory+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Bacterial genotoxin colibactin promotes colon tumour growth by inducing a senescence-associated secretory phenotype.</a> Gut. 63 (12), 1932(2014).</li>
<li>Oliero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+pks+%2B+bacteria+and+enterotoxigenic+Bacteroides+fragilis+in+patients+with+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Pathog%22%5BJournal%5D)">Prevalence of pks + bacteria and enterotoxigenic Bacteroides fragilis in patients with colorectal cancer.</a> Gut Pathog. 14 (1), 51(2022).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+commensal-encoded+genotoxin+drives+restriction+of+Vibrio+cholerae+colonization+and+host+gut+microbiome+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">A commensal-encoded genotoxin drives restriction of Vibrio cholerae colonization and host gut microbiome remodeling.</a> PNAS. 119 (11), e2121180119(2022).</li>
</ol>

Autorzy nie mają żadnych konfliktów interesów do zgłoszenia.

Pro-rakotwórcze skutki pks+ E. coli produkującego kolibactynę są ostatnio powiązane zarówno ze wzrostem wczesnego zakażenia CRC9, jak i przyjęciem diety "zachodniej"12, czynniki, które będą kształtować trendy CRC w nadchodzących dekadach. Większość modeli kolonizacji pks+ E. coli jest przedstawiona w kontekście nowotworów związanych z zapaleniem jelita grubego, które nie pozwalają na scharakteryzowanie pks+ E. coli w warunkach niezapalnych. Protok...

Mikrobiota jelitowa odgrywa istotną rolę w zdrowiu i chorobie gospodarza, z dysbiozą mikrobiologiczną jelit, czyli nadmiernym rozrostem niektórych potencjalnie patogennych bakterii (patobiontów), które są charakterystyczne dla kilku stanów chorobowych, w tym chorób sercowo-naczyniowych, zapalnych jelit (IBD) oraz nowotworów1. pks+ Escherichia coli to patobiont wzbogacony w próbki tkanki okrężnicy u pacjentów z IBD2 i rakiem jelita grubego (CRC)3 w porównaniu z osobami zdrowymi. Pronowotworowa aktywność pks+ E. coli jest powiązana z ekspresją klastra genów syntazy polipetydowej (pks) oraz produkcją genotoksyny kolibaktyny4. Kolibaktyna translokuje się do jądra komórek nabłonkowych jelita grubego, prowadząc do powstawania podwójnych pęknięć DNA5 oraz mutacji w kluczowych szlakach związanych z CRC6. Wykazano, że kolonizacja pks+ E. coli przyczynia się do inicjacji guza7 oraz progresji guza3 w przedklinicznych modelach CRC (CAC) związanej z zapaleniem grubo. Ostatnio mutageneza wywołana kolibaktyną została powiązana z wczesnym początkiem CRC 8,9. Częstość występowania wczesnego CRC, występującego u osób poniżej 50. roku życia, wzrasta w ostatnich dekadach i może odwrócić obecny ogólny spadek wskaźników CRC9.
Rola pks+ E. coli w rozwoju CRC, a także w innych aspektach zdrowia gospodarza pośredniczonych przez mikrobiotę, jest nadal wyjaśniana. Ponadto wykazano, że na ekspresję genów pks wpływa kilka czynników, w tym stan zapalny10, stężenia żelaza luminalne11 oraz czynnikidietetyczne 12,13, co otwiera drzwi do interwencji ukierunkowanych na mikrobiotę. Opisano tutaj metodę kolonizacji jelit pks+ E. coli przez doustne gavage u myszy, z użyciem mysiego szczepu szczepu pks+ E. coli NC101 (E. coli NC101). Inne modele oceniły wpływ E. coli NC101 na stan zapalny i karcynogenezę u myszy wolnych od zarazków (GF) monokolonizowanych przez doustny gavage i wymaz z odbytu3, w modelach genetycznie podatnych (IL-10-/-) na zapalenie jelitagrubego 3,14 oraz w modelach chemicznie indukowanych zapalenia jelita grubego i zaburzenia bariery jelitowej15. Jednak opłacalna kolonizacja pks+ E. coli może być również uzyskana w warunkach niezapalnych u myszy wolnych od patogenów specyficznych (SPF) poddanych antybiotykom, aby stworzyć niszę do kolonizacji i ekspansji 14,16,17. Przedstawiono również różne metody wykrywania i ilościowego wykrywania i ilościowego wykrywania pks+ E. coli w odchodach myszy, w tym ilościową amplifikację genu clbP (qPCR), ocenę liczebności rodziny Enterobacteriaceae qPCR oraz odzyskiwanie jednostek tworzących kolonie (CFU) na mediach MacConkey agar specyficznych dla bakterii fermentujących laktozę Gram-ujemną. Metody te mogą być stosowane zamiennie lub w połączeniu z potwierdzeniem obecności pks+ E. coli oraz produkcji kolibaktyny w celach walidacyjnych lub oceny różnic w ekspansji pks+ E. coli w odpowiedzi na interwencje ukierunkowane na mikrobiotę.
Protokół ten służy do oceny wpływu inuliny błonnika pokarmowego na kolonizację i ekspansję pks+ E. coli przez qPCR oraz odzyskiwanie CFU. Inulina to prebiotyk, który wykazano, że sprzyja rozwojowi korzystnych gatunków Bifidobacterium i Lactobacillus w jelitach, a także zwiększa produkcję krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych, które odgrywają ważną rolę w homeostazie jelit. Jednak wykazano, że inulina sprzyja również wzrostowi produkcji pks+ E. coli oraz kolibaktyny, co prowadzi do zwiększonej nowotworów w modelu leczonym przez DSS gruczolacznego poliporozy coli (Apc)+ CRC. Eksperyment ten ocenia ekspansję pks+ E. coli w odpowiedzi na dietetyczną inulinę w modelu mysim bez stanu zapalnego lub uszkodzonej bariery jelitowej.

<table><tbody><tr><td>0,9% bezpłodnej soli fizjologicznej</td><td>Baxter</td><td>JF7634</td><td></td></tr><tr><td>10% Inulina na własną dietę</td><td>Teklad</td><td>TD.240286</td><td>Wyniki reprezentatywne</td></tr><tr><td>Dieta na zamówienie 50 ppm FeS04 (bez błonnika)</td><td>Teklad</td><td>TD.120515</td><td>Wyniki reprezentatywne</td></tr><tr><td>8-12 tygodniowe samice myszy B6</td><td>Laboratoria Charles River</td><td>C57BL/6</td><td>Reprezentatywne wyniki&nbsp;</td></tr><tr><td>Ampicylina sodowa sól i nbsp;</td><td>Wisent Inc</td><td>400-110 XG</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka stołowa</td><td>Fisher Scientific</td><td>75004381</td><td></td></tr><tr><td>Miernik gęstości komórek</td><td>Biochrom</td><td>80-2116-30</td><td></td></tr><tr><td>Tubka do hodowla, 13 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62.515.006</td><td></td></tr><tr><td>EcNC101</td><td>Nie ma</td><td>Nie ma</td><td>Dar od dr. Christiana Jobina z University of North Carolina at Chapel Hill&nbsp;</td></tr><tr><td>Igła gavage, 38mm x 22 G</td><td>Aparat Harvarda Kanada</td><td>34-024</td><td>Niedostępne – Potencjalna alternatywa dostępna jest w Instech Labs (FTP-22-38)&nbsp;</td></tr><tr><td>Inkubujący orbitalny potrząsacz</td><td>VWR</td><td>980153</td><td></td></tr><tr><td>Pętla inokulacyjna</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-595</td><td></td></tr><tr><td>Rozrzutnik w kształcie litery L</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-665-230</td><td></td></tr><tr><td>Lizogeniczny bulion & nbsp;</td><td>Wisent Inc</td><td>800-060 LG</td><td>Dodaj 35g proszku LB, 1L wody. Autoklaw przed użyciem.</td></tr><tr><td>Agar z bulionem lizogenicznym &nbsp;</td><td>Wisent Inc</td><td>800-011 LG</td><td>Dodaj 35g proszku LB, 1L wody. Autoklaw przed użyciem.</td></tr><tr><td>Agar MacConkey</td><td>Becton Dickinson</td><td>211387</td><td>Dodaj 50g proszku MacConkey do 1L wody. Autoklaw przed użyciem.</td></tr><tr><td>Zestaw do ekstrakcji DNA mikrobiologicznego</td><td>Qiagen</td><td>47016</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator mikrobiologiczny</td><td>Fisher Scientific</td><td>150152633</td><td></td></tr><tr><td>Rurka mikrowirówkowa, 1,5 mL&nbsp;</td><td>UltiDent Scientific</td><td>73-M150-C</td><td></td></tr><tr><td>PCR Rotor - rurki z taśmą genową&nbsp;</td><td>UltiDent Scientific</td><td>73-V100-RG</td><td></td></tr><tr><td>Szalka Petriego</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472.001</td><td></td></tr><tr><td>Real-time PCR SYBR Green Master Mix</td><td>ThermoFisher&nbsp;</td><td>A25742</td><td></td></tr><tr><td>Cykler termiczny PCR w czasie rzeczywistym</td><td>Badania Corbett</td><td>RG-3000A</td><td></td></tr><tr><td>Rurka z zakrętką, 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Sodium colistimethate&nbsp;</td><td>Fresenius Kabi</td><td>C309306</td><td></td></tr><tr><td>Sól siarczanowa streptomycyny</td><td>Millipore Sigma</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>Rurka ślizgowa tuberkulina, 1 mL</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Wir</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-812</td><td></td></tr></tbody></table>

kolonizacja przez myszą pks+ escherichia coli w warunkach niezapalnych

Colonization with Murine pks+ Escherichia coli under Non-Inflammatory Conditions

pks+ Escherichia coli jest coraz częściej powiązana z rozwojem raka jelita grubego (CRC), szczególnie wśród szybko rosnącej grupy młodszych pacjentów z wczesnym początkiem CRC. Szczepy pks+ E. coli produkują genotoksynę kolibactynę, znaną z powodowania podwójnych pęknięć DNA oraz mutacji w proliferacji i różnicowaniu komórek związanych z CRC. Niniejszy artykuł opisuje metodę kolonizacji pks+ E. coli u myszy w warunkach niezapalnych, od przygotowania szczepionki bakteryjnej aż po walidację kolonizacji. Po inkubacji przez noc szczep pks+ E. coli NC101 jest podawany myszom poddanym antybiotykiem za pomocą gavage doustnego. Kolonizację ocenia się w stolcu poprzez ilościowe określenie liczby jednostek tworzących kolonie gram-ujemne fermentujące laktozę (CFU) oraz poprzez ilościową amplifikację PCR. Stosując ten protokół, wykazano, że po udanej kolonizacji myszy C57BL/6 bakterią E. coli NC101, suplementacja inuliną zawierającą błonnik pokarmowy sprzyjała wzrostowi pks+ E. coli, co odzwierciedla zwiększona regeneracja CFU, większa liczebność rodziny Enterobacteriaceae oraz wzrost poziomu clbP Gene. Podsumowując, model ten umożliwia badanie terapii profilaktycznych i terapeutycznych skierowanych na kluczowy patobiont zaangażowany w rozwój CRC.

Amplifikacja i wizualizacja genów clbA i E. coli 16S w kałach na końcu za pomocą elektroforezy PCR i żelu wykazała, że choć oba geny były widoczne u myszy skolonizowanych przez E. coli NC101, to tylko gen E. coli 16S był widoczny u myszy kontrolnych, co potwierdza, że E. coli NC101 nie występuje (Rysunek 2B).
Jak można się spodziewać,15 myszy skolonizowanych przez E. coli NC101, które ot...

Protokół ten opisuje niezbędne kroki kolonizacji myszy z pks+ Escherichia coli w warunkach niezapalnych, a także nieinwazyjne metody walidacji kolonizacji i oceny ekspansji pks+ E. coli w kału.

Kolonizacja przez myszą pks+ Escherichia coli w warunkach niezapalnych

pks+ Escherichia coli is increasingly implicated in the development of colorectal cancer (CRC), particularly among a rapidly expanding subset of younger ...

Ten protokół opisujący kolonizację i ilościową kolonizację E. coli z PKS u myszy umożliwia badanie interakcji mikrobioty gospodarza w ewolucji kluczowych patogenów związanych z rozwojem raka jelita grubego. W porównaniu z innymi metodami wykorzystującymi genetycznie lub chemicznie indukowane modele zapalenia jelita grubego, protokół ten opisuje kolonizację w warunkach niezapalnych. Na początek dodaj ampicylinę, kolistinę i streptomycynę do pojemnika.A potem wlewam sterylną wodę pitną, żeby rozcieńczyć antybiotyki. Podaj antybiotyk zawierający wodę pitną samicy myszy C57 BL6 w wieku od ośmiu do dwunastu tygodni przez trzy dni. Następnie usuwam antybiotyk zawierający wodę pitną i przywracam dostęp do sterylnej wody na 24-godzinny okres płukania przed gavage.Za pomocą sterylnej pętli inokulacyjnej wybierz pojedynczą kolonię Escherichia coli NC101 z płyty agarowej i zaszczep pięć mililitrów jałowego bulionu lizogenetycznego. Inkubuj hodowlę przez noc w 37 stopniach Celsjusza w wstrząsance inkubacyjnej przy 150 obrotach na minutę. Następnie wiruj rurkę hodowlę w 1500 G przez cztery pięć minut w temperaturze pokojowej.Usuń i wyrzuć supernatant, unikając zakłóceń w osadach bakteryjnych. Granulat bakteryjny pojawia się jako kremowobiały osad u podstawy rurki. Ponownie zawiesij granulat bakteryjny w pięciu mililitrach soli fizjologicznej 0,9% sterylnej.Powtórz etap wirowania i ponownie przemyj granulat w 0,9% sterylnej soli fizjologicznej. Po drugim płukaniu zmierz gęstość optyczną zawiesiny na 600 nanometrów za pomocą miernika gęstości komórek. Dostosuj gęstość optyczną w 600 nanometrach do 0,625, co odpowiada około jeden razy dziesięć do mocy ośmiu jednostek tworzących kolonie na mysz przy użyciu sterylnej soli fizjologicznej.Wybierz odpowiednią igłę gavage w zależności od rozmiaru zwierzęcia. Delikatnie poruszaj inokulum bakteryjne, aby zapewnić równomierny rozmieszczenie bakterii. Napełnij strzykawkę 0,2 mililitra szczepionki bakteryjnej i usuń wszelkie pęcherzyki powietrza.Wyjmij mysz z klatki. Złap mysz, chwytając skórę tuż za uszami aż do łopatek za pomocą poduszki kciuka i boku palca wskazującego. Zabezpiecz ogon środkowym lub serdecznym palcem tej samej ręki.Trzymaj mysz w pozycji pionowej. Włóż igłę gavage do boku ust. Przesuwaj czubek igły gavage wzdłuż podniebienia do przełyku i żołądka, delikatnie odpychając głowę myszy do tyłu, aby wyprostować szyję.Powoli wstrzykuj 0,2 mililitra bakteryjnego inokulum i wyjmij igłę gavage pod tym samym kątem, co przy włożeniu. Obserwuj mysz pięć minut po gavage pod kątem objawów niedogodności oddechowej i dyskomfortu. Wróć mysz do klatki.I umieść je na diecie z dodatkiem inuliny lub diety bez błonnika. Pobierz od każdej myszy granulat kałowy w mikrowirówce o pojemności 1,5 mililitra, chwytając mysz za szyję, jak wcześniej pokazano. Alternatywnie, umieść mysz w czystej, pustej klatce i poczekaj do 30 minut na oddanie się.Próbkę zamroz na szybko, umieszczając probówkę mikrowirówki w ciekłym azocie. Jeśli zajdzie taka potrzeba, zamroz próbkę w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza do czasu dalszej analizy. Następnie zważ pustą mikrowirówkę o pojemności 1,5 mililitra.Dodaj około 20 miligramów stolca do rurki mikrowirówki o pojemności 1,5 mililitra i zapisz wagę. Dodaj do rurki 200 mikrolitrów soli fizjologicznej 0,9% sterylnej i inkubuj w temperaturze pokojowej, aby zmiękczyć stolec. Po 10 do 15 minutach wykonaj wir w rurze przez pięć minut z maksymalną prędkością, aby uzyskać jednorodną zawiesię.Małe cząsteczki niestrawionego materiału pokarmowego mogą pozostać widoczne. Przelej 100 mikrolitrów każdej zawiesiny na płytę agarową MacConkey i równomiernie rozprowadz homogenat za pomocą rozprowadzacza w kształcie litery L. Inkubuj płytki przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza.Następnego dnia policz liczbę różowych kolonii na każdej tablicy. Znormalizuj wyniki jelita grubego według wagi każdego osadu kałowego i objętości pokrytej kału. Ekstrakt genomowego DNA z próbek kału za pomocą zestawu do ekstrakcji DNA.Ilościowo określić geny CLB i liczebność enterobacteriaceae za pomocą ilościowego PCR z primerami specyficznymi dla genów i rodzin. Punkt końcowy, PCR i elektroforeza żelowa wykryły zarówno geny kolibaktyny A, jak i E.coli 16S w kałach myszy skolonizowanych E.coli NC101. U myszy kontrolnych wykryto jedynie gen E.coli 16S, co potwierdza brak kolonizacji PKS i E. coli.Po tygodniu myszy skolonizowane E.coli NC101, które otrzymały dietę uzupełnioną inuliną, wykazały większą regenerację jednostki tworzącą kolonie dzięki homogenatom kałowym hodowanym na agarze MacConkey niż myszy stosujące dietę bez kontroli błonnika. W tym samym czasie myszy karmione inuliną wykazywały również podwyższony poziom genu kolibaktyny P. I większą liczebność enterobacteriaceae niż myszy bez kontroli błonnika.Protokół ten opisuje kilka metod walidacji kolonizacji E.coli z PKS pozytywną oraz ilościowego określenia wzrostu E.coli z PKS poprzez hodowlowanie bakterii i amplifikację PCR. Protokół ten może być połączony z jednym z kilku modeli raka jelita grubego, co pozwala na ocenę mutagenezy związanej z PKS dodatnim E.coli w tkance jelita grubego. Protokół ten może być wykorzystywany do badania metod targetowania mikrobioty ograniczających rozszerzanie PKS pozytywnego E. coli oraz potencjału mutagennego u zdrowych gospodarzy.

colonization-with-murine-pks-escherichia-coli-under-non-inflammatory

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Źródło: Morrill, S. R., et al. Modele kolonizacji pochwy przez bakterie hodowane beztlenowo. J. Vis. Exp. (2022)Ten film przedstawia protokół modelowania kolonizacji pochwy u myszy przy użyciu bakterii beztlenowych opornych na antybiotyki. Rozpoczyna się od leczenia hormonalnego w celu zwiększenia podatności nabłonka, a następnie inokulacji dopochwowej i koinokulacji w warunkach beztlenowych. Procedura kończy się pobraniem próbek po inokulacji i hodowlą w celu oceny kolonizacji bakteryjnej i...

Modelowanie kolonizacji pochwy myszy przez bakterie beztlenowe

Źródło: Taylor, M. N., et.al. Wykorzystanie danych dotyczących pojedynczego robaka do ilościowego określenia niejednorodności interakcji Caenorhabditis elegans z bakteriami. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje narażenie wolnych od zarazków, dopasowanych do wieku robaków Caenorhabditis elegans na szczep bakteryjny w celu kolonizacji jelit. Wyjaśnia selektywne usuwanie nieprzylegających i zewnętrznych bakterii, pozostawiając tylko żywe bakterie przylegające do nabłonka jelitowego w celu...

Ocena kolonizacji bakteryjnej jelit u C. elegans wolnych od zarazków

Zakażenie gryzoniami Citrobacter stanowi cenny model do badania infekcji bakteryjnych jelit, jak również odpowiedzi immunologicznych gospodarza i zapalenia jelita grubego u myszy. Protokół ten określa pomiar integralności bariery, obciążenia patogenem i uszkodzeń histologicznych, co pozwala na dokładne scharakteryzowanie udziału patogenu i gospodarza w zakaźnym zapaleniu jelita grubego u myszy.

Mysi model Citrobacter rodentium: badanie udziału patogenów i gospodarza w zakaźnym zapaleniu jelita grubego

Opisano kolonizację mysiego nosogardzieli Streptococcus pneumoniae i późniejszą ekstrakcję przylegających lub zrekrutowanych komórek. Technika ta polega na przepłukiwaniu nosogardzieli i zbieraniu płynu przez nozdrza i można ją dostosować do różnych odczytów, w tym różnicowej kwantyfikacji komórek i analizy ekspresji mRNA in situ.

Charakterystyka reakcji zapalnych podczas kolonizacji donosowej Streptococcus pneumoniae

Tutaj opisana jest procedura przeprowadzania infekcji ogólnoustrojowej u noworodka szczura za pomocą kultur Escherichia coli K1. Ten nieinwazyjny zabieg pozwala na kolonizację przewodu pokarmowego, translokację patogenu do krążenia ogólnoustrojowego oraz inwazję ośrodkowego układu nerwowego w splocie naczyniówkowym.

Nieinwazyjny model neuropatogennego zakażenia Escherichia coli u nowonarodzonego szczura

W tym modelu zapalenia jelita grubego napędzanego antygenem, limfocyty T OT-II CD4+ wyrażające białko czerwonej fluorescencji zostały adoptywnie przeniesione do myszy RAG-/-, które wyrażają zielone białko fluorescencyjne w fagocytach jednojądrzastych (MP). Gospodarzom poddano prowokację Escherichia coli (E. coli) wykazującej ekspresję białka albuminy jaja kurzego (OVA) połączonego z cyjanowym białkiem fluorescencyjnym (CFP).

Opracowanie modelu zapalenia jelita grubego sterowanego antygenem w celu zbadania prezentacji antygenów przez komórki prezentujące antygen limfocytom T

Przedstawiono szczegółowy protokół mysiego modelu kolonizacji enterokwotocznej E. coli (EHEC) przy użyciu bakterii znakowanych bioluminescencyjnie. Wykrycie tych bioluminescencyjnych bakterii za pomocą nieinwazyjnego systemu obrazowania in vivo u żywych zwierząt może poszerzyć naszą obecną wiedzę na temat kolonizacji EHEC.

Wykrywanie enterokrwotocznej kolonizacji Escherichia coli u mysiego gospodarza za pomocą nieinwazyjnego systemu bioluminescencji in vivo

Protokół przedstawia mysi model kolonizacji pochwy za pomocą beztlenowo hodowanych ludzkich bakterii pochwy. Skupiamy się na Gardnerella vaginalis, jednocześnie zamieszczając sugestie dotyczące Prevotella bivia i Fusobacterium nucleatum. Protokół ten może być również stosowany jako przewodnik do inokulacji dopochwowych i realnego odzyskiwania innych bakterii hodowanych beztlenowo.

Modele kolonizacji pochwy myszy przez bakterie hodowane beztlenowo

Opisujemy protokół szczegółowo opisujący izolację mysich krypt okrężnicy w celu opracowania 3-wymiarowych kolonoidów. Ustalone okokrody mogą być następnie ostatecznie różnicowane, aby odzwierciedlić skład komórkowy nabłonka gospodarza przed otrzymaniem prowokacji zapalnej lub skierowaniem do utworzenia monowarstwy nabłonka.

Badanie nabłonkowego wpływu zapalenia jelit in vitro na ustalone mysie kolonoidy

Bakteriofagi (fagi), wirusy infekujące bakterie, są integralnym składnikiem mikrobiomu jelitowego. Chociaż ci symbiotyczni mieszkańcy napędzają sprawność bakterii i dynamikę populacji, niewiele wiadomo o tym, jak wpływają na homeostazę i choroby jelit. W tym protokole bada się izolowane fagi T4 w modelu mysim, które można dostosować do innych par-bakteria.

Interakcja bakteriofaga T4 i E. coli w jelicie myszy: prototypowy model do badania dynamiki gospodarz-bakteriofag in vivo

Wcześniaki (poród &lt; 37. tygodniu) to pilny globalny problem zdrowotny z nieoptymalnymi opcjami profilaktyki i leczenia. Przedstawiamy myszy model wcześnianego porodu wywołanego infekcją bakteryjną pochwy oraz opisujemy, jak analizować wynikającą z tego chorobność i śmiertelność noworodków.

Modelowanie wznoszącej się infekcji pochwy, przedwczesnych porodów i noworodkowej zachorowalności u myszy

Poznaj metodę kolonizacji myszy bakterią pks+ Escherichia coli w warunkach niezapalnych, wykorzystującą podawanie doustne i suplementację inuliną. Protokół umożliwia badanie interakcji gospodarz-mikrobiota w kontekście rozwoju raka jelita grubego.

Kolonizacja przez myszą pks+ Escherichia coli w warunkach niezapalnych

Przeglądaj więcej filmów