ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie zostało sfinansowane przez Narodową Fundację Nauki Przyrodniczej (82174407 dla YJZ), Program Szkolenia Liderów Dyscypliny Komisji Zdrowia Nowej Dzielnicy Pudong w Szanghaju (PWRd2020-05), Projekt Liderów Dyscypliny Komitetu Zdrowia Nowej Dzielnicy Pudong (PWRq2020-56) oraz Projekt Medyczny Sanming w Shenzhen (nr. SZZYSM202311006).

Doświadczenia na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Wykorzystania w Centrum Modeli Organizmów w Szanghaju (Numer zgody NMB-SMP-IACUC-01-0002-R02-03). W badaniu tym użyto myszy samców C57BL/6 z modelem złamań (w wieku 6–8 tygodni). Stosowany sprzęt i reagenty są wymienione w Tabeli Materiałów. 
1. Opieka przedoperacyjna
<ol>
	<li>Aklimatyzuj myszy przez co najmniej 1 tydzień z ad libitum dostępem do jedzenia i wody. Losowo przypisz zwierzęta do grupy z złamaniem lub do grupy kontrolnej za pomocą listy losowych przypisań wygenerowanej przez komputer.</li>
	<li>Umieść myszy na podgrzewanej poduszce dla zwierząt i utrzymuj stałą temperaturę 37 °C.</li>
	<li>Włącz aparat do znieczulenia gazowego i umieść mysz w komorze indukcyjnej na 5 min przy 2%–3% izofluranu.</li>
	<li>Po indukcji, przełącz na 1%–2% izofluranu i utrzymuj znieczulenie via czujnik nosowy aż do końca zabiegu. Potwierdź, że mysz straciła refleksy i że mięśnie są w pełni zrelaksowane. Zweryfikuj brak reakcji na ucisk palców i odruchy rogówkowe, i upewnij się, że oddech brzuszny jest stabilny. Nalotuj maść z erytromycyną do obu oczu, aby zapobiec wysychaniu rogówki podczas znieczulenia.</li>
</ol>
2. Procedura eksperymentalna
UWAGA: Standardyzuj ustawienia znieczulenia, dawkę i objętość ICG, miejsce i głębokość wstrzyknięcia, czas ekspozycji, definicję ROI oraz parametry skanowania ultradźwiękowego na wszystkich sesjach, aby zminimalizować zmienność między zwierzętami.
<ol>
	<li>NIR-ICG imaging 
	UWAGA: Krok po kroku procedura dotycząca ICG obrazowania w podczerwieni jest pokazana na Rysunku 1.
	<ol>
		<li>Waż 0,2 mg indocyanine green (ICG), przenieś do mikroprobówki o pojemności 1,5 mL i rozpuść w 1 mL PBS, aby przygotować 0,2 mg/mL roztwór ICG. Owinąć probówkę folią aluminiową, aby chronić ją przed światłem.</li>
		<li>Włącz system obrazowania i otwórz FluoBeam v1.46. Wyreguluj wysokość kamery zgodnie z potrzebami.</li>
		<li>Zwilż wacik alkoholem 75% i zdezynfekuj powierzchnię podeszwy modelowanej tylnej łapy.</li>
		<li>Za pomocą 10 μL mikrostrzykawki pobierz 6 μL roztworu ICG. Wsuń igłę około 1 mm w powierzchnię podeszwy i wstrzyknij roztwór z stałą prędkością, aż zostanie dostarczona pełna objętość.</li>
		<li>W oprogramowaniu, aktywuj zarówno funkcję “kamera”, jak i “laser”. Kliknij “modyfikuj” aby utworzyć nowy folder i ustawić go jako katalog zapisu. Zachowaj identyczny czas ekspozycji podczas akwizycji obrazu o 0 h i 24 h.</li>
		<li>Umieść mysz pod kamerą w pozycji brzusznej z modelowaną tylną łapą centralnie w polu widzenia. Upewnij się, że modelowana tylna łapa jest centralnie w polu widzenia.</li>
		<li>Ustaw czas ekspozycji na 30 ms i zachowaj go identyczny dla obrazów o 0 h i 24 h. Zdobądź obrazy tej samej ROI po wstrzyknięciu do podeszwy w 0 h i 24 h po wstrzyknięciu, aby zmierzyć intensywność sygnału ICG. Zachowaj identyczny czas ekspozycji o 0 h i 24 h.</li>
		<li>Kiedy naczynia limfatyczne tylnej łapy są wyraźnie widoczne w polu widzenia, kliknij “zdjęcie” aby uchwycić obrazy.</li>
		<li>Po akwizycji obrazu, eksportuj dane i użyj oprogramowania do analizy obrazu, aby sprecyzować intensywność fluorescencji o 0 h i 24 h, a następnie oblicz wskaźnik usuwania fluorescencji.</li>
		<li>Otwórz oprogramowanie do analizy obrazu.</li>
		<li>Zaimportuj obrazy fluorescencji klikając Plik → Otwórz, i otwórz 0 h obraz podeszwy odpowiadający temu samemu zwierzęciu i temu samemu dniowi badania (następnie otwórz dopasowany 24 h obraz później).</li>
		<li>Wybierz Owal, a następnie kliknij Edycja → Wybór → Określ; ustaw Szerokość = 30 i Wysokość = 30, wybierz Owal, i kliknij OK.</li>
		<li>Umieść okrąg na obszarze tła.</li>
		<li>Kliknij Analizuj → Zmieraj, i zapisz wartość Średnia w oknie Wyniki jako intensywność fluorescencji na tle o 0 h (FI0hbg).</li>
		<li>Umieść okrąg na docelowym obszarze obserwacji, kliknij Analizuj → Zmieraj, i zapisz wartość Średnia w oknie Wyniki jako FI0h.</li>
		<li>Oblicz skorygowaną intensywność fluorescencji o 0 h jako Skorygowana FI0h = FI0h - FI0hbg.</li>
		<li>Otwórz dopasowany 24 h obraz i powtórz kroki 3–7

<ol><li>Zhang, S., Sheng, H., Xu, B., Lao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+external+iliac+artery+thrombosis+following+pelvic+fractures%3A+Two+case+reports%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Acute external iliac artery thrombosis following pelvic fractures: Two case reports.</a> Medicine (Baltimore). 100 (6), e24710(2021).</li>
<li>Szczesny, G., Olszewski, W. L., Gewartowska, M., Zaleska, M., Gorecki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+healing+of+tibial+fracture+and+response+of+the+local+lymphatic+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">The healing of tibial fracture and response of the local lymphatic system.</a> J Trauma. 63 (4), 849-854 (2007).</li>
<li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+therapy+for+fracture+healing+by+increasing+lymphatic+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Translat%22%5BJournal%5D)">A novel therapy for fracture healing by increasing lymphatic drainage.</a> J Orthop Translat. 45, 66-74 (2024).</li>
<li>Thomas, C., Le, J. T., Benson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Managing+lymphedema+in+fracture+care%3A+Current+concepts+and+treatment+principles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">Managing lymphedema in fracture care: Current concepts and treatment principles.</a> J Am Acad Orthop Surg. 28 (18), 737-741 (2020).</li>
<li>Jiang, X., Nicolls, M. R., Tian, W., Rockson, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+dysfunction%2C+leukotrienes%2C+and+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lymphatic dysfunction, leukotrienes, and lymphedema.</a> Annu Rev Physiol. 80, 49-70 (2018).</li>
<li>Biswas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+vessels+in+bone+support+regeneration+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lymphatic vessels in bone support regeneration after injury.</a> Cell. 186 (2), 382-397.e24 (2023).</li>
<li>Dimitriou, R., Tsiridis, E., Giannoudis, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+concepts+of+molecular+aspects+of+bone+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">Current concepts of molecular aspects of bone healing.</a> Injury. 36 (12), 1392-1404 (2005).</li>
<li>Arslan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+lymphedema+on+the+recovery+of+fractures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of lymphedema on the recovery of fractures.</a> J Orthop Sci. 12 (6), 578-584 (2007).</li>
<li>Cheon, H., Kim, S. A., Kim, B., Jeon, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+optimizing+indocyanine+green+solution+for+in+vivo+lymphatic+research+using+near-infrared+fluorescence+indocyanine+green+lymphangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Investigation of optimizing indocyanine green solution for in vivo lymphatic research using near-infrared fluorescence indocyanine green lymphangiography.</a> Sci Rep. 13 (1), 14966(2023).</li>
<li>Polomska, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+method+for+the+point-of-care+quantification+of+lymphatic+vessel+function%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive method for the point-of-care quantification of lymphatic vessel function.</a> JCI Insight. 4 (4), e126515(2019).</li>
<li>Wang, F., Weng, Y., Geng, J., Zhu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+narrative+review+of+indocyanine+green+near-infrared+fluorescence+imaging+technique%3A+A+new+application+in+thoracic+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Challenges+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">A narrative review of indocyanine green near-infrared fluorescence imaging technique: A new application in thoracic surgery.</a> Curr Challenges Thorac Surg. 3, 35-35 (2021).</li>
<li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+platelet+thrombosis+limits+bone+repair+by+precluding+lymphatic+transporting+damps%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lymphatic platelet thrombosis limits bone repair by precluding lymphatic transporting damps.</a> Nat Commun. 16 (1), 829(2025).</li>
<li>Kim, K. M., Kim, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphangiogenesis+after+nonvascularized+lymph+node+transplantation%3A+Lymphangiographic+findings+in+mice+and+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphangiogenesis after nonvascularized lymph node transplantation: Lymphangiographic findings in mice and minipigs.</a> PLoS One. 18 (12), e0295836(2023).</li>
<li>Zhang, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+pulmonary+lymphatic+drainage+is+necessary+for+inflammation+resolution+in+ARDS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Efficient pulmonary lymphatic drainage is necessary for inflammation resolution in ARDS.</a> JCI Insight. 9 (1), e173440(2024).</li>
<li>Kenney, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+popliteal+lymphatic+muscle+cell+coverage+defects+despite+amelioration+of+arthritis+and+recovery+of+popliteal+lymphatic+vessel+function+in+TNF-TG+mice+following+anti-TNF+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Persistent popliteal lymphatic muscle cell coverage defects despite amelioration of arthritis and recovery of popliteal lymphatic vessel function in TNF-TG mice following anti-TNF therapy.</a> Sci Rep. 12 (1), 12751(2022).</li>
</ol>

Autorzy nie mają konfliktów interesów do zadeklarowania.

Protokół obejmuje kilka łatwo przeoczonych szczegółów. Na przykład czas ekspozycji nie jest ustalony i musi być określony na podstawie konkretnej intensywności fluorescencji. Jednak czas ekspozycji dla tej samej grupy myszy o 0 h i 24 h musi pozostać spójny; w przeciwnym razie wyniki mogą być niewiarygodne. Podczas obserwacji za pomocą ultradźwięków istotne jest, aby w pełni pokryć dolne kończyny myszy środkiem sprzęgającym, ponieważ wszelkie odsłonięte obszary powodują zniekształcenie powstałych obrazów, gdy sonda skanu...

Złamania traumatyczne często powodują znaczne uszkodzenie tkanek i obrzęk, zwiększając ryzyko powikłań, takich jak zakażenie, martwicę i niegojenie się kości1,2. Grzegorz Szczesny i in. wykazali, że dysfunkcja drenażu limfatycznego, prowadząca do obrzęku tkanek, jest związana z opóźnionym gojeniem3. Badania wskazują, że podczas procesu gojenia złamań, oprócz naprawy tkanki kostnej, układ limfatyczny w miejscu złamenia odgrywa również ważną rolę. Naczynia limfatyczne są odpowiedzialne nie tylko za odprowadzanie płynu międzykomórkowego i zapobieganie obrzękowi4, ale także za regulację migracji komórek immunologicznych i usuwanie odpadów metabolicznych. Jednak we wczesnych stadiach złamań, czynniki prozapalne takie jak TNF-α, IL-1, IL-6 i Makrofagowy Czynnik Stymulujący Kolonie (MCSF) mogą uszkadzać komórki śródbłonka limfatycznego5, prowadząc do zmian patologicznych takich jak zwyrodnienie, obrzęk i zwłóknienie6. Odpowiednie badania wykazały obecność komórek śródbłonka limfatycznego w kości i okostnej, jak również w otaczających tkankach tłuszczowych i mięśniowych. Ponadto drenaż limfatyczny uczestniczy również w regulacji mikrośrodowiska krwiaka po złamaniu; skuteczny drenaż limfatyczny ułatwia przeżycie osteoblastów i proliferację komórek macierzystych tkanki łącznej szpiku kostnego (BMSC)7. Podczas złamań, czynniki prozapalne (TNF-α, IL-1 i IL-6) oraz czynniki wzrostu (TGFβ1 i PDGF) wytwarzane przez komórki odpornościowe w uszkodzonym miejscu są ważnymi czynnikami regulacyjnymi apoptozy osteoblastów i proliferacji BMSC8. Hüseyin Arslan i inni naukowcy potwierdzili negatywny wpływ obrzęku limfatycznego na osteoblasty. Te wyniki badań podkreślają ważną rolę drenażu limfatycznego w gojeniu złamań. Ostatnie osiągnięcia w zakresie obrazowania fluorescencyjnego ICG w podczerwieni (NIR) umożliwiły nieinwazyjne, czasowe obserwowanie dynamiki przepływu limfy zarówno w modelach zwierzęcych, jak i u ludzi9,10,11. Technika ta pozwala na ilościową ocenę kurczliwości naczyń limfatycznych, prędkości drenażu i integralności ścieżek10,11. Badanie przeprowadzone na mysich modelach zapalenia stawów i zapalenia wykazało, że obrazowanie ICG-NIR może rozróżniać ostre i przewlekłe reakcje limfatyczne, podkreślając odrębne wzorce drenażu podczas uszkodzenia tkanek i regeneracji. Ponadto obrazowanie limfatyczne NIR okazało się skuteczne w monitorowaniu funkcjonalnego powrotu po manualnym drenażu limfatycznym i ocenie skuteczności terapii ukierunkowanych na układ limfatyczny. Ultrasonografia zapewnia uzupełniającą ilościową modalność oceny morfologii i objętości węzłów limfatycznych, jak również obrzęku tkankowego związanego z upośledzonym drenażem limfatycznym. Integracja obrazowania fluorescencyjnego NIR z ultrasonografią umożliwia jednoczesną ocenę funkcji limfatycznych i zmian anatomicznych, zapewniając multimodalne podejście do badania dynamiki limfatycznej in vivo. Pomimo rosnącej świadomości krytycznej roli dysfunkcji limfatycznej w gojeniu pourazowym, nadal brakuje znormalizowanych i powtarzalnych metod oceny drenażu limfatycznego po złamaniach. Wiele obecnych metod obrazowania jest inwazyjnych, cierpi na niedostateczną rozdzielczość przestrzenną lub nie umożliwia dynamicznego monitorowania przepływu limfy. Dlatego opracowanie protokołu łączącego obrazowanie ICG-NIR i ultrasonograficzne jest przewidywane jako rozwiązanie tego metodologicznego niedostatku i zapewnienie efektywnego narzędzia do oceny regeneracji limfatycznej i jej wkładu w naprawę kości.
Niniejsze badanie przedstawia innowacyjną ramę łączącą obrazowanie fluorescencyjne ICG-NIR z ultrasonografią wysokiej rozdzielczości w celu oceny drenażu limfatycznego po złamaniach kości strzałkowej u myszy. Takie podejście umożliwia półilościową analizę wydajności drenażu i mierzy objętość węzłów limfatycznych podczas procesu gojenia złamań. Ma również pewne ograniczenia. Po pierwsze, ICG-NIR jest głównie stosowany do oceny powierzchownych naczyń limfatycznych, a jego zdolność obrazowania głębszych struktur jest ograniczona. Po drugie, chociaż zmiany w objętości węzłów limfatycznych dostarczają pewnych informacji, brakuje im specyficzności i nie mogą w pełni zastąpić bezpośrednich pomiarów funkcjonalnych. Ta metodologia ma znaczący potencjał translacyjny i poprawia nasze rozumienie funkcji limfatycznych w regeneracji kości.

<table><tbody><tr><td>10 Microliter Microsyringe</td><td>Hamilton Company</td><td>80330/00</td><td>The Hamilton 80330/00 microsyringe is a precision instrument with a 10<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/70466/70466eq1.jpg" style="margin: auto;"/>L capacity, featuring a 26s gauge needle, 51mm length, and point style 2. It is designed for accurate delivery of small volumes in chromatography, sample injection, and analytical chemistry applications.</td></tr><tr><td>3D Ultrasound Vevo 3100 Imaging System</td><td></td><td>Vevo 2100</td><td>The Vevo 2100 is a high-frequency ultrasound imaging system for preclinical research, providing real-time 3D visualization of small animals. It offers superior resolution for cardiovascular, oncology, and developmental biology studies, integrated with Vevo LAB software for data analysis.</td></tr><tr><td>75% Ethanol</td><td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td><td>G73537O</td><td>75% ethanol is a disinfectant solution widely used in laboratories for surface sterilization, equipment cleaning, and antisepsis. It effectively kills bacteria, viruses, and fungi through protein denaturation and is commonly applied in biological and clinical settings.</td></tr><tr><td>Cotton Swab</td><td>Hebei Kangji Medical Equipment Co., Ltd.</td><td>20250303</td><td>Cotton swabs are sterile, absorbent applicators used for precise sample collection, application of solutions, or cleaning in medical, diagnostic, and laboratory procedures. They feature wooden or plastic sticks with cotton tips for hygienic handling.</td></tr><tr><td>Coupling Agent</td><td>Tianjin Jinya Technology Development Co., Ltd.</td><td>20241029</td><td>Coupling agent, commonly known as ultrasound gel, is a water-based medium used to enhance acoustic transmission between the ultrasound transducer and skin. It eliminates air pockets for clear imaging, is non-irritating, and supplied in a 250mL container for medical and diagnostic use.</td></tr><tr><td>Graphpad Prism</td><td>GraphPad Software</td><td>Prism 10</td><td>A scientific graphing and statistical analysis software used for data analysis, visualization, and presentation.</td></tr><tr><td>Image J</td><td>National Institutes of Health</td><td>ImageJ 1.54d</td><td>A public-domain, Java-based image processing and analysis program widely used for biological and medical image analysis.</td></tr><tr><td>indocyanine green</td><td>Dandong Yichuang Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>8305128</td><td>Indocyanine green is a water-soluble anionic dye used in medical diagnostics for determining cardiac output, hepatic function, liver blood flow, and ophthalmic angiography. It is supplied in 25mg vials for intravenous administration and exhibits fluorescence in the near-infrared spectrum for imaging purposes.</td></tr><tr><td>isoflurance&nbsp;</td><td>RWD&nbsp;</td><td>R650-IE</td><td>Isoflurane is an inhaled general anesthetic. It has a small blood/gas partition coefficient. When used for animal anesthesia, it can induce anesthesia smoothly, rapidly and comfortably, with a quick recovery, good muscle relaxation, and no excitatory effect on the sympathetic nervous system. The metabolic rate of isoflurane in the liver is low, so it has little toxicity to the liver, and there are no obvious side effects even with repeated use. To avoid the adverse effects of anesthetic waste gas on the environment and laboratory personnel, it is recommended to use it together with a gas recovery system.&nbsp;</td></tr><tr><td>Microbalance</td><td>Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.</td><td>FA1004B</td><td>The FA1004B microbalance is a high-precision analytical instrument designed for accurate weighing of small samples, offering readability up to 0.0001g and suitable for laboratory applications requiring precise measurements in research and quality control.</td></tr><tr><td>Near-Infrared Imaging System</td><td>Olympus</td><td>MVX10</td><td>The Olympus MVX10 is a macro zoom fluorescence microscope system optimized for near-infrared imaging. It offers high-resolution visualization of large specimens with a wide zoom range, advanced optics for deep tissue penetration, and compatibility with fluorescence techniques in biological and materials research.</td></tr><tr><td>Vevo lab</td><td>\</td><td>Vevo LAB</td><td>An imaging analysis software package used for analyzing Vevo imaging data, including measurement, calculation, and report generation.</td></tr></tbody></table>

ocena drenażu limfatycznego z wykorzystaniem obrazowania icg w bliskiej podczerwieni i ultradźwięków po złamaniu

The Assessment of Lymphatic Drainage Using ICG Near-Infrared Imaging and Ultrasound After Fracture

Urazowe złamania często towarzyszy upośledzona funkcja drenażu limfatycznego. Zmniejszony drenaż limfatyczny i powiększenie węzłów chłonnych po złamaniu wskazują na trwające, dynamiczne procesy ostrej reakcji zapalnej i rekrutacji komórek immunologicznych. W tym artykule opisano metodę, w której 6 µL 0,2 mg/mL indocyaninowej zieleni wstrzykiwano śródskórnie w okolicę podeszwową myszy poddawanych operacji udanej lub złamaniu kości piszczelowej. Za pomocą bliskiego podczerwieni fluorescencyjnego obrazu zmierzono sygnał ICG w podeszwie w godzinach 0 i 24, aby obliczyć wskaźnik klirensu w ciągu 24 godzin jako odczyt drenażu limfatycznego u myszy. Równocześnie wykorzystano ultradźwięki do 3D-rekonstrukcji węzłów chłonnych podkolanowych (PLNs), porównania ich objętości i oceny powiększenia wywołanego złamaniem.  Wyniki wykazały, że po złamaniu wskaźnik klirensu limfatycznego znacząco spadł, intensywność fluorescencji ICG w okolicy podeszwy była znacząco wyższa, a objętość PLNs była znacząco powiększona.  W porównaniu z poprzednimi metodami pomiaru układu limfatycznego, takimi jak przekroje histopatologiczne lub limfoscyntygrafia, które często nie pozwalają na in vivo, dynamiczne i ciągłe obserwacje, ta metoda wykazuje wysoką stabilność i powtarzalność. Należy zauważyć, że umożliwia dynamiczne in vivo monitorowanie funkcji drenażu limfatycznego, zapewniając solidne wsparcie techniczne do badania zmian w refluksie limfatycznym w modelach złamań.

W dniach 1., 7. i 14. po utworzeniu modelu złamania intensywność fluorescencji ICG w stopie po 24 h (FI24h) w grupie ze złamaniem była konsekwentnie wyższa niż w grupie po operacji pozornej (Rysunek 3). Względna analiza ilościowa intensywności fluorescencji ICG z zebranych obrazów stóp wykazała, że szybkość klirensu limfatycznego ICG w grupie ze złamaniem była znacząco niższa niż w grupie po operacji pozornej (p &lt; 0,05) (Rysunek 4). Jednoc...

Ten protokół ocenia drenaż limfatyczny po złamaniu poprzez łączenie obrazowania w bliskiej podczerwieni z użyciem zielonej indokyaninowej (ICG) z ultrasonografią w celu ilościowego określenia usuwania ICG podeszwowego i powiększenia węzłów chłonnych okołokolanowych u myszy.

Ocena drenażu limfatycznego z wykorzystaniem obrazowania ICG w bliskiej podczerwieni i ultradźwięków po złamaniu

Traumatic fractures are often accompanied by impaired lymphatic drainage function. Reduced lymphatic drainage and lymph node enlargement after fracture ...

Nasze badania oceniają refluks limfatyczny po złamaniach z wykorzystaniem obrazowania w bliskiej podczerwieni oraz ultradźwięków typu B w celu monitorowania drenażu, funkcji i obrzęku węzłów chłonnych. Istniejące metody nie posiadają ustandaryzowanej dynamicznej oceny in vivo, dlatego nasz protokół porównuje obrazowanie ICG w bliskiej podczerwieni z ultrasonografią w celu zapewnienia powtarzalnego monitorowania. Na początek odważ 0,2 mg zieleni indocyjaninowej, czyli ICG.Przenieś go do probówki do mikrocentryfugi o pojemności 1,5 ml i rozpuść w 1 ml PBS, aby przygotować roztwór ICG o stężeniu 0,2 mg/ml. Owiń probówkę folią aluminiową, aby chronić ją przed światłem. Następnie włącz system obrazowania i uruchom program FluoBeam w wersji 1.46.Dostosuj wysokość kamery zgodnie z potrzebami. Po znieczuleniu samców myszy szczepu C57 z modelem złamania, zwilż patyczek watny 75% etanolem i zdezynfekuj powierzchnię podeszwową modelowanej tylnej łapy. Za pomocą mikrosyringi o pojemności 10 µL pobierz 6 µL roztworu ICG.Wprowadź igłę na głębokość około jednego milimetra w powierzchnię podeszwową i wstrzyknij roztwór ze stałą prędkością, aż do podania pełnej objętości. W oprogramowaniu aktywuj funkcje kamery oraz lasera. Kliknij Modify, aby utworzyć nowy folder i ustawić go jako katalog zapisu.Umieść mysz pod kamerą w pozycji brzusznej, tak aby modelowana kończyna tylna znajdowała się w centrum pola widzenia. Ustaw czas naświetlania na 30 milliseconds zarówno dla obrazów w punkcie zero, jak i po 24 godzinach. Pozyskaj obrazy tego samego obszaru zainteresowania w miejscu wstrzyknięcia podeszwowego w czasie zero oraz 24 godziny po wstrzyknięciu, aby zmierzyć intensywność sygnału ICG.Gdy naczynia limfatyczne kończyny tylnej są wyraźnie widoczne w polu widzenia, kliknij Photo, aby zarejestrować obrazy. Po pozyskaniu obrazów wyeksportuj dane. Otwórz oprogramowanie do analizy obrazu i zaimportuj obrazy fluorescencyjne, klikając File i wybierając Open.Otwórz obraz podeszwy stopy z godziny zero, odpowiadający temu samemu zwierzęciu i temu samemu dniu badania. Następnie wybierz Oval, kliknij Edit, wybierz Selection, a następnie Specify. Ustaw Width i Height na 30, wybierz Oval i kliknij OK. Umieść okrąg na obszarze tła.Kliknij Analyze i wybierz Measure. Zapisz wartość średnią w oknie Results jako tło intensywności fluorescencji w zertej godzinie. Następnie umieść okrąg nad docelowym miejscem obserwacji i zapisz wartość średnią, zgodnie z wcześniejszą instrukcją.Oblicz skorygowaną intensywność fluorescencji w zerowej godzinie jako FI0 hour. Otwórz odpowiadający jej obraz z 24. godziny i powtórz poprzednie kroki, aby uzyskać skorygowaną intensywność fluorescencji po 24 godzinach. Oblicz szybkość oczyszczania, wykorzystując skorygowaną o tło intensywność fluorescencji zgodnie z przedstawioną tutaj metodą.Włącz system ultradźwiękowy, podłącz przetwornik i ustaw mysz tak, aby kończyna tylna była wyraźnie widoczna. W stanie ciągłej anestezji ułóż mysz na platformie obrazującej w pozycji brzusznej, z głową skierowaną w stronę przeciwną do operatora, a ogonem w stronę operatora. Zgnij kolano tak, aby dół podkolanowy był skierowany ku górze i lekko bocznie.Następnie umieść przetwornik nad zagłębieniem dołu podkolanowego. Nałóż żel sprzęgający do badań USG na modelowaną kończynę tylną i obróć przetwornik tak, aby jego kąt pozostał równoległy do osi podłużnej kończyny tylnej. Ustaw dystans skanowania (Scan Distance) na 4 mm oraz wielkość kroku (Step Size) na 0,04 mm.Zidentyfikuj węzeł chłonny podkolanowy na obrazie zgodnie z jego lokalizacją anatomiczną. Unieruchom mysz, trzymając ogon i modelowaną kończynę tylną obiema rękami, unikając jakiegokolwiek ruchu podczas skanowania przetwornikiem. Pozyskaj obrazy i zidentyfikuj węzeł chłonny podkolanowy jako małą strukturę o kształcie owalnym lub fasolowatym o echogeniczności od średniej do niskiej.Wyeksportuj obrazy do oprogramowania do rekonstrukcji trójwymiarowej w celu przeprowadzenia trójwymiarowego przetwarzania obrazów. Zapisz identyfikator zwierzęcia, kod grupy oraz punkt czasowy 0 h lub 24 h. Otwórz oprogramowanie do rekonstrukcji trójwymiarowej.Kliknij Study, aby wejść do modułu, a następnie wybierz Import. Następnie kliknij folder z danymi, zaznacz dane do importu i kliknij dwukrotnie, aby je otworzyć. W trybie Display wybierz Image Processing.Następnie wybierz Load into 3D. Wybierz Transverse View. Wybierz Volume Measurement i kliknij Start.Należy potwierdzić, że orientacja przekrojów oraz parametry kroku są zgodne z ustawieniami akwizycji. Następnie, używając kółka myszy lub suwaka przekrojów, należy przesuwać widok od końca proksymalnego do dystalnego i zidentyfikować pierwszy przekrój, na którym pojawia się węzeł chłonny podkolanowy. Obrysowywanie należy rozpocząć na pierwszym przekroju, na którym widoczny jest węzeł chłonny podkolanowy, klikając lewym przyciskiem myszy w celu rozpoczęcia wyznaczenia konturu.Obrysuj punkt po punkcie zamknięty kontur wzdłuż krawędzi węzła chłonnego, prowadząc go blisko zewnętrznej torebki i wykluczając otaczającą tkankę tłuszczową oraz światło naczyń krwionośnych. Używając kółka myszy, przejdź do przekroju wykazującego maksymalną powierzchnię poprzeczną węzła chłonnego podkolanowego i powtórz poprzedni krok obrysowywania konturu, aby ukończyć drugi kontur. Następnie przejdź do przekroju bezpośrednio poprzedzającego znikanie węzła chłonnego podkolanowego i powtórz czynność obrysowywania konturu, aby ukończyć trzeci kontur.Następnie kliknij Finish, aby wygenerować trójwymiarową segmentowaną objętość i wyświetlić pomiar objętości. Zapisz objętość węzła chłonnego podkolanowego w milimetrach sześciennych w panelu Results. W panelu Measurement Results wybierz Export i wyeksportuj wyniki do pliku CSV lub XLS.Wybierz typ pliku i wyeksportuj obraz jako TIFF Image Area. Po zakończeniu eksperymentu umieść mysz na podgrzewanej podkładce i poczekaj, aż wybudzi się z narkozy. W pierwszym, siódmym i czternastym dniu po utworzeniu modelu złamania 24-godzinna intensywność fluorescencji ICG w podeszwie była konsekwentnie wyższa w grupie ze złamaniem niż w grupie po zabiegu pozorowanym.Szybkość limfatycznego oczyszczania z ICG w grupie z 골 złamaniem była znacznie niższa niż w grupie po operacji pozorowanej. Objętość węzłów chłonnych podkolanowych u myszy w grupie z złamaniem była istotnie większa niż w grupie kontrolnej w pierwszym, siódmym i czternastym dniu. Niniejszy protokół służy do pomiaru wydajności drenażu limfatycznego oraz powiększenia węzłów chłonnych podkolanowych po złamaniu u myszy.Kluczowym wyzwaniem jest utrzymanie spójnych parametrów obrazowania, dokładności iniekcji oraz stabilnego ustawienia lampy podczas skanowania ultradźwiękowego. Przyszłe badania mogą łączyć markery immunologiczne z histologią w celu walidacji mechanizmów limfatycznych podczas gojenia złamań.

the-assessment-lymphatic-drainage-using-icg-near-infrared-imaging

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ocena drenażu limfatycznego za pomocą obrazowania ICG w bliskiej podczerwieni i ultradźwięków po złamaniu

Obrazowanie fluorescencyjne jest obiecującą, innowacyjną metodą chirurgii sterowanej obrazem w onkologii chirurgicznej. W niniejszym materiale wideo opisujemy procedurę techniczną wykrywania węzła chłonnego wartowniczego z wykorzystaniem obrazowania fluorescencyjnego, zaprezentowaną na przykładzie onkologii ginekologicznej. Zastosowano wielospektralny system kamer fluorescencyjnych wraz z kontrastem fluorescencyjnym w postaci zieleni indocyjaninowej.

Wielospektralne obrazowanie fluorescencyjne w czasie rzeczywistym do śródoperacyjnego wykrywania węzła chłonnego strażnika w onkologii ginekologicznej

Niedawno opracowane techniki obrazowania z wykorzystaniem fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF) mogą pomóc w wyjaśnieniu roli, jaką układ limfatyczny odgrywa w przerzutowaniu nowotworów, odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran oraz innych chorobach związanych z układem limfatycznym.

Nieinwazyjne obrazowanie optyczne naczyń limfatycznych myszy

Ten film wykorzystuje ultrasonografię do diagnozy i badań uzupełniających w celu określenia skuteczności leczenia Progresywnego Ćwiczenia Oporowego (PRE) w obrzęku limfatycznym związanym z rakiem piersi (BCRL). Ultrasonografia może być skutecznie stosowana w celu zapewnienia diagnozy i leczenia obrzęku limfatycznego.

Ultrasonografia obrzęku limfatycznego: technika pomiaru zmiany grubości dotkniętej tkanki

Ten protokół opisuje zastosowanie ultradźwięków o wysokiej częstotliwości (HFUS) do obrazowania węzłów chłonnych szyjnych myszy. Technika ta optymalizuje wizualizację i kwantyfikację morfologii, objętości i przepływu krwi węzłów chłonnych szyjnych. Przedstawiono również biopsję węzłów chłonnych szyjnych pod kontrolą obrazu oraz przetwarzanie tkanki limfatycznej do oceny histologicznej.

Obrazowanie ultrasonograficzne o wysokiej częstotliwości węzłów chłonnych szyjnych myszy

To badanie wykorzystywało ultrasonografię do diagnozy i badań kontrolnych, aby potwierdzić skuteczność leczenia Progresywnym Oporem (PRE) w obrzęku limfatycznym związanym z rakiem piersi (BCRL). Ultrasonografia może być skutecznie stosowana w celu zapewnienia diagnozy i leczenia obrzęku limfatycznego.

Ocena ultrasonograficzna obrzęku limfatycznego związanego z rakiem piersi

Przedstawiono protokół łączący oczyszczanie tkanek z mikroskopią fluorescencyjną (LSFM) w celu uzyskania trójwymiarowych i komórkowych obrazów naczyń limfatycznych i węzłów chłonnych (LN) zbierających płyn mózgowo-rdzeniowy (CSF) i płyn zewnątrzoponowy rdzeniowy.

Trójwymiarowe obrazowanie układu naczyniowego i drenażu limfatycznego kręgów przy użyciu iDISCO+ i mikroskopii fluorescencyjnej arkuszy świetlnych

Mikrotomografia komputerowa (μCT) jest nieniszczącym narzędziem do obrazowania, które jest instrumentalne w ocenie struktury kości w badaniach przedklinicznych, jednak nie ma zgody co do procedur μCT do analizy modzeli gojącej się kości. Badanie to zapewnia krok po kroku protokół μCT, który umożliwia monitorowanie gojenia się złamań.

Ocena gojenia złamań kości za pomocą mikrotomografii komputerowej

Ten protokół opisuje etapy cholecystektomii laparoskopowej pod kontrolą fluorescencji i wyjaśnia rolę nawigacji fluorescencyjnej w różnych scenariuszach chirurgicznych.

Rola fluorescencji zieleni indocyjaninowej w złożonej nawigacji po cholecystektomii laparoskopowej

Szczegółowo opisujemy nowy cewnik do fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF), służący do dwuwymiarowego wewnątrznaczyniowego obrazowania molekularnego biologii blaszki miażdżycowej in vivo. Cewnik NIRF umożliwia wizualizację kluczowych procesów biologicznych, takich jak zapalenie, poprzez wykrywanie obecności aktywowalnych i celowanych fluorochromów NIR wykazujących powinowactwo do blaszki miażdżycowej. Cewnik spełnia wymogi inżynieryjne i energetyczne stosowane w klinice i jest...

In vivo wewnątrznaczyniowe obrazowanie molekularne blaszek zapalnych z wykorzystaniem fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF) – multimodalne podejście do obrazowania miażdżycy

Dokładna i praktyczna metoda pomiaru parametrów takich jak odkształcenie (strain) w tkance mięśnia sercowego ma dużą wartość kliniczną, ponieważ wykazano, że odkształcenie jest czulszym i wcześniejszym markerem dysfunkcji kurczliwości niż często stosowany parametr EF.

Ocena odkształcenia mięśnia sercowego w rezonansie magnetycznym z wykorzystaniem śledzenia cech (feature tracking)

108 Views.  Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. Nasze badania oceniają refluks limfatyczny po złamaniach za pomocą obrazowania w podczerwieni bliskiej i ultrasonografii typu B, aby monitorować drenaż, funkcję i obrzęk węzłów chłonnych. Istniejące metody nie posiadają zstandaryzowanej dynamicznej oceny in vivo, dlatego nasz protokół porównuje obrazowanie w podczerwieni bliskiej ICG z ultrasonografią dla reproduktywnego monitorowania. Na początek, odważyć 0,2 miligramów Indocyjaniny Zielonej, czyli ICG.Przenieść...

Ocena drenażu limfatycznego z wykorzystaniem obrazowania ICG w bliskiej podczerwieni i ultradźwięków po złamaniu

Przeglądaj więcej filmów