ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie zostało wspierane przez Narodowe Fundusz Nauki Przyrodniczej Chin (U24A20790), Ministerstwo Nauki i Technologii (2022YFF0712500 i 2023YFF0722600), oraz Prowincjonalny Departament Nauki i Technologii Jiangsu (BK20250540).

1. Makrofagowa kultura 
UWAGA: Przeprowadź wszystkie procedury w szafie biobezpieczeństwa, nosząc rękawiczki laboratoryjne i fartuch laboratoryjny.
<ol>
	<li>Przygotuj pełne medium kulturowe (modyfikowane medium Eagle Dulbecco z wysoką zawartością glukozy (DMEM) uzupełnione o 10% płodowe surowica wołowa (FBS) i 1% penicylinę-streptomycynę).</li>
	<li>Rozmrażaj fiolkę komórek makrofagów RAW264.7 w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C przez mniej niż 1 min.</li>
	<li>Przenieś zawiesinę komórek do DMEM z wysoką zawartością glukozy uzupełnionego o 10% FBS i 1% penicylinę-streptomycynę.</li>
	<li>Wiruj przez 5 min z prędkością 300 x g.</li>
	<li>Wyrzuć nadstan.</li>
	<li>Resuspenduj komórki w świeżym pełnym medium.</li>
	<li>Zasiej komórki do 60 mm naczyń w ilości 2-5 x 105 komórek na naczynie.</li>
	<li>Inkubatoruj komórki w temperaturze 37 °C z 5% CO2.</li>
	<li>Nie zmieniaj medium w ciągu 12-24 godzin po rozmrażaniu.</li>
	<li>Wymieniaj medium co 2-3 dni.</li>
	<li>Monitoruj morfologię komórek za pomocą mikroskopu inwertowanego.</li>
	<li>Przeprowadź przesiewy komórek w 80-90% konfluencji przez delikatne pipetowanie. 
	UWAGA: Unikaj używania trypsyny. Używaj komórek na przesiewach 6-18. Wybierz komórki o jednolitej morfologii i bez wakuolizacji do eksperymentów. Linia komórkowa została uwierzytelniona przez profilowanie STR i poddana testom kontroli jakości. Szczegółowe raporty i angielskie podsumowanie są dostępne w Plikach uzupełniających.</li>
</ol>
2. Leczenie komórek
<ol>
	<li>Zbierz komórki w fazie wzrostu logarytmicznego przez delikatne pipetowanie.</li>
	<li>Resuspenduj komórki w pełnym medium.</li>
	<li>Zmierzyj gęstość komórek za pomocą licznika komórek.</li>
	<li>Dostosuj gęstość komórek do 4 x 104 komórek/mL.</li>
	<li>Zasiej 2 mL zawiesiny komórek do każdego 35 mm naczynia.</li>
	<li>Przypisz naczynia do dwóch grup: (i) grupa LPS, (ii) grupa BAI + LPS.</li>
	<li>Inkubatoruj komórki w temperaturze 37 °C z 5% CO2 przez 12-16 godzin.</li>
	<li>Przygotuj 50 mM roztwór BAI w DMSO. Przechowuj roztwór BAI w temperaturze -20 °C.</li>
	<li>Dodaj BAI do grupy BAI + LPS do końcowej koncentracji 100 μM. Rozcieńcz roztwór BAI bezpośrednio w medium kulturowym, aby osiągnąć końcową koncentrację roboczą.</li>
	<li>Dodaj równą objętość DMSO do grupy LPS.</li>
	<li>Przygotuj roztwór LPS (1 mg/mL) w pełnym medium.</li>
	<li>Dodaj LPS do obu grup do końcowej koncentracji 1 μg/mL. Rozcieńcz roztwór LPS bezpośrednio w medium kulturowym, aby osiągnąć końcową koncentrację roboczą.</li>
	<li>Natychmiast przystąp do obrazowania i nie zmieniaj medium podczas obrazowania.</li>
</ol>
3. Pozyskiwanie tomografii dyfrakcyjnej optycznej
<ol>
	<li>Włącz system obrazowania ODT i uruchom moduł kontroli środowiska.</li>
	<li>Ustaw temperaturę stołu na 37 °C.</li>
	<li>Ustaw stężenie CO2 na 5%.</li>
	<li>Pozwól systemowi na równowagę przez co najmniej 20 min.</li>
	<li>Otwórz oprogramowanie do pozyskiwania danych.</li>
	<li>Umieść naczynie kulturowe na etapie obrazowania.</li>
	<li>Użyj obiektywu 60x (NA = 1,42), aby zlokalizować komórki.</li>
	<li>Wybierz izolowane komórki z jasnymi granicami do obrazowania.</li>
	<li>Ustaw przedział obrazowania na 8 min.</li>
	<li>Ustaw całkowitą liczbę klatek na 181.</li>
	<li>Włącz funkcję automatycznego ustawiania ostrości, aby utrzymać ostrość podczas obrazowania time-lapse.</li>
	<li>Rozpocznij pozyskiwanie time-lapse.</li>
	<li>Monitoruj stabilność systemu podczas pozyskiwania. 
	UWAGA: Stabilizacja automatycznego ustawiania ostrości była stosowana przez cały eksperyment, aby zminimalizować dryft ogniskowania.</li>
</ol>
4. Rekonstrukcja obrazu i analiza ilościowa
<ol>
	<li>Po pozyskaniu obrazu, oprogramowanie automatycznie wykonuje rekonstrukcję obrazu.</li>
	<li>Za pomocą wbudowanego standardowego algorytmu. </li>
	<li>Poczekaj, aż pasek postępu się zakończy.</li>
	<li>Otwórz oprogramowanie analityczne (Intellyseg, v2.1.0).</li>
	<li>Importuj zestaw danych surowych, wybierając Importuj dane surowe.</li>
	<li>Przeglądaj docelową folder.</li>
	<li>Wybierz docelowy plik i zaimportuj zestaw danych. </li>
	<li>Kliknij “Komórka” aby wykonać automatyczną segmentację przy użyciu spójnych ustawień między zestawami danych13.</li>
	<li>Wybierz komórki na podstawie następujących kryteriów: (i) bez nakładania się na sąsiednie komórki, (ii) nie w kontakcie z granicami obrazu, (iii) ciągle śledzone przez całą serię czasową.</li>
	<

<ol>
	<li>Murray, P. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization.">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome-based+network+analysis+reveals+a+spectrum+model+of+human+macrophage+activation.">Transcriptome-based network analysis reveals a spectrum model of human macrophage activation.</a> Immunity. 40 (2), 274-288 (2014).</li><li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+monocytes+to+M1/M2+macrophages:+phenotypical+vs.+functional+differentiation.">From monocytes to M1/M2 macrophages: phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514 (2014).</li><li>Locati, M., Curtale, G., Mantovani, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity,+mechanisms,+and+significance+of+macrophage+plasticity.">Diversity, mechanisms, and significance of macrophage plasticity.</a> Annu Rev Pathol. 15, 123-147 (2020).</li><li>Luo, M., Zhao, F., Cheng, H., Su, M., Wang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization:+an+important+role+in+inflammatory+diseases.">Macrophage polarization: an important role in inflammatory diseases.</a> Front Immunol. 15, 1352946 (2024).</li><li>Cossarizza, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+of+flow+cytometry+and+cell+sorting+in+immunological+studies+(third+edition).">Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (third edition).</a> Eur J Immunol. 51 (12), 2708-3145 (2021).</li><li>Unuvar Purcu, D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stimulation+time+on+the+expression+of+human+macrophage+polarization+markers.">Effect of stimulation time on the expression of human macrophage polarization markers.</a> PLoS One. 17 (3), e0265196 (2022).</li><li>Icha, J., Weber, M., Waters, J. C., Norden, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototoxicity+in+live+fluorescence+microscopy,+and+how+to+avoid+it.">Phototoxicity in live fluorescence microscopy, and how to avoid it.</a> BioEssays. 39 (8), 1700003 (2017).</li><li>Laissue, P. P., Alghamdi, R. A., Tomancak, P., Reynaud, E. G., Shroff, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+phototoxicity+in+live+fluorescence+imaging.">Assessing phototoxicity in live fluorescence imaging.</a> Nat Methods. 14 (7), 657-661 (2017).</li><li>Park, Y., Depeursinge, C., Popescu, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+phase+imaging+in+biomedicine.">Quantitative phase imaging in biomedicine.</a> Nat Photonics. 12, 578-589 (2018).</li><li>Dong, D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+fluorescence-assisted+diffraction+computational+tomography+reveals+the+three-dimensional+landscape+of+the+cellular+organelle+interactome.">Super-resolution fluorescence-assisted diffraction computational tomography reveals the three-dimensional landscape of the cellular organelle interactome.</a> Light Sci Appl. 9, 11 (2020).</li><li>Kim, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+diffraction+tomography+techniques+for+the+study+of+cell+pathophysiology.">Optical diffraction tomography techniques for the study of cell pathophysiology.</a> J Biomed Photonics Eng. 2 (2), 020201 (2016).</li><li>Falk, T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=U-Net:+deep+learning+for+cell+counting,+detection,+and+morphometry.">U-Net: deep learning for cell counting, detection, and morphometry.</a> Nat Methods. 16 (1), 67-70 (2019).</li><li>Jaqaman, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+single-particle+tracking+in+live-cell+time-lapse+sequences.">Robust single-particle tracking in live-cell time-lapse sequences.</a> Nat Methods. 5, 695-702 (2008).</li></ol>

Autorzy deklarują, że Jie-jie Zhu i Yan-qing Yang są związani z Pellucid Optics (Nantong) Co., Ltd. System obrazowania ODT użyty w tym badaniu jest powiązany z tą firmą. Jednakże to przynależenie nie wpłynęło na projekt eksperymentalny, pozyskiwanie danych, analizę, ani interpretację wyników. Pozostali autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

To studium ustanawia bezznacznikową pracę przepływową opartą na ODT do ciągłego obrażania i ilościowej analizy morfodynamiki makrofagów na poziomie pojedynczej komórki. Podejście to umożliwia czasowo rozdzielcze pomiary przewidzianej powierzchni, obwodu i średniej prędkości migracji podczas długotrwałego obrażania żywych komórek. Gęstość wysiewu komórek jest kluczowym czynnikiem wpływającym na wydajność segmentacji i śledzenia. Wysoka gęstość prowadzi do nakładania się komórek, podczas gdy niska gęstość zmniejsza liczbę ...

Makrofagi odgrywają centralną rolę w odpowiedziach odpornościowych wrodzonych i homeostazie tkankowej, a ich stany funkcjonalne mogą dynamicznie zmieniać się w reakcji na bodźce mikrośrodowiskowe. Tradycyjnie makrofagi opisywano jako przyjmujące fenotypy prozapalne lub przeciwzapalne/związane z naprawą1,2. Jednak rosnące dowody sugerują, że aktywacji makrofagów jest to proces ciągły i elastyczny, a nie dyskretny, binarny stan3,4. W różnych warunkach makrofagi ulegają stopniowym zmianom w czasie, towarzyszącym zmianom w morfologii komórek i zachowaniu migracyjnym5. Dlatego czasowo rozdzielona charakterystyka zmian morfologicznych i migracyjnych na poziomie pojedynczych komórek zapewnia ważne podejście do badania dynamicznych odpowiedzi komórkowych.
Obecne podejścia do badania stanów makrofagów polegają głównie na immunobarwieniu, cytomierzu przepływowym oraz analizach transkryptomowych i proteomicznych6. Metody te są zwykle oparte na fiksowanych próbkach lub dyskretnych punktach czasowych, co ogranicza ich zdolność do śledzenia ciągłych zmian w tej samej komórce w warunkach żywych7. Obrazowanie żywych komórek oparte na fluorescencji umożliwia dynamiczne obserwacje, ale może być ograniczone przez fototoksyczność i fotoblanszowanie podczas długotrwałych eksperymentów8,9. Optyczna tomografia dyfrakcyjna (ODT) to bezznacznikowa technika obrazowania, która rekonstruuje trójwymiarową dystrybucję wskaźnika załamania światła w komórkach, dostarczając ilościowych informacji strukturalnych10. Ponieważ nie wymaga egzogennego znacznikowania, ODT nadaje się do długotrwałego obrazowania żywych komórek i zmniejsza zakłócenia w zachowaniu komórkowym. W ostatnich latach ODT został zastosowany do dynamicznych badań w różnych modelach komórkowych11, przy czym wcześniejsze badania koncentrowały się głównie na zdolności obrazowania i charakterystyce strukturalnej. W przeciwieństwie do tego, obecne badanie ustanawia standaryzowany, bezznacznikowy przepływ do długotrwałej, czasowo rozdzielczej analizy pojedynczych komórek morfodynamiki makrofagów w warunkach zdefiniowanej in vitro stymulacji.
Przepływ jest demonstrowany za pomocą in vitro modelu makrofagów RAW264.7 z stymulacją lipopolisacharydem (LPS) i wstępnym stosowaniem Baicalin (BAI). BAI został użyty jako reprezentatywny modulator eksperymentalny do ustanowienia zdefiniowanych warunków do demonstracji przepływu. Ciągłe obrazowanie umożliwia wyodrębnienie ilościowych parametrów pojedynczych komórek, w tym rzutowanej powierzchni, obwodu i średniej prędkości migracji, pozwalając na czasowo rozdzieloną charakterystykę zmian morfologicznych i zachowań. To podejście ma na celu dostarczenie opisowej analizy dynamicznych zmian fenotypu, a nie definiowanie stanów funkcjonalnych lub polaryzacji, i może służyć jako uzupełniająca metoda do testów opartych na punkcie końcowym, dostarczając informacji czasowych. Przepływ jest zweryfikowany w tym systemie modelowym i jest potencjalnie stosowany do innych adhezywnych typów komórek.

<table><tbody><tr><td>ODT imaging system</td><td>Pellucid Optics</td><td>MH-PanoView</td><td>Stosowane do obrazowania żywych komórek bez znaczników</td></tr><tr><td>Oprogramowanie do pozyskiwania</td><td>Pellucid Optics&nbsp;</td><td>Lucida-Pano v2.1.0</td><td>Stosowane do pozyskiwania obrazów</td></tr><tr><td>Oprogramowanie do analizy</td><td>Pellucid Optics&nbsp;</td><td>Intellyseg v2.1.0</td><td>Stosowane do rekonstrukcji obrazu, segmentacji i śledzenia</td></tr><tr><td>RAW264.7</td><td>Wuhan Zishan Biotechnology&nbsp;</td><td>STCC20020P</td><td>Murzyńska linia komórek makrofagów służąca do eksperymentów polaryzacji i obrazowania in vitro.</td></tr><tr><td>Baikalin (BAI)</td><td>Shanghai Yuanye&nbsp;</td><td>JB246114</td><td>Stosowane do pretretmentu komórek</td></tr><tr><td>Lipopolysacharyd (LPS)</td><td>Solarbio</td><td>L8880</td><td>Stosowane do stymulacji makrofagów</td></tr><tr><td>Środkowisko DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Środowisko do hodowli komórek</td></tr><tr><td>Surowica łożyskowa bydlęca</td><td>Procell</td><td>164210</td><td>Suplement do hodowli komórek</td></tr><tr><td>Penicylina&ndash;Strepromicyny (100x)</td><td>Procell</td><td>PB180120</td><td>Antybiotyki do hodowli komórek</td></tr><tr><td>35 mm szklana podłoga do hodowli</td><td>Corning</td><td>CLS430166</td><td>Stosowane do hodowli komórek</td></tr><tr><td>35 mm szklana podłoga do obrazowania</td><td>Cellvis</td><td>D35-10-1.5-N</td><td>Stosowane do obrazowania ODT</td></tr><tr><td>Mikroskop odwrócony</td><td>OLYMPUS</td><td>CKX53</td><td>Stosowane do rutynowej obserwacji i monitorowania komórek podczas hodowli.</td></tr><tr><td>Licznik komórek</td><td>RWD Life Science</td><td>C100</td><td>Stosowane do określania gęstości komórek</td></tr></tbody></table>

obrazowanie w czasie rzeczywistym bez etykiet i analizy ilościowej morfodynamiki makrofagów z wykorzystaniem tomografii dyfrakcyjnej optycznej

Real-Time Label-Free Imaging and Quantitative Analysis of Macrophage Morphodynamics Using Optical Diffraction Tomography

To badanie ustanawia etykietowo-wolną metodę tomografii dyfrakcyjnej optycznej (ODT) do obrazowania i analizy żywych komórek w celu obserwacji zależnych od czasu zmian morfologicznych w makrofagach. Metoda ta umożliwia ciągłe rejestrowanie morfologii i ruchu pojedynczych komórek przez dłuższy czas w stabilnych warunkach środowiskowych i pozwala na wyodrębnienie parametrów ilościowych, w tym przekroju rzutowego, obwodzie i średniej prędkości migracji. Ten przepływ pracy zapewnia praktyczne podejście do rejestrowania dynamicznych zachowań komórkowych na poziomie pojedynczych komórek bez egzogennego znacznikowania. Używając makrofagów RAW264.7 jako modelu, wykonano zdjęcia time-lapse pod stymulacją lipopolisacharydem z wstępnym stosowaniem baikalin, aby uchwycić dynamiczne zmiany komórkowe w różnych warunkach. Wybrane reprezentatywne komórki zostały poddane śledzeniu i analizie ilościowej. Wyniki pokazują, że ten przepływ pracy wspiera stabilne długoterminowe śledzenie pojedynczych komórek i odzwierciedla zmiany czasowe w morfologii i ruchliwości komórek. To podejście zapewnia metodę bez znacznikowania do obserwacji dynamicznych zachowań komórkowych w odpowiedzi na różne bodźce i może służyć jako użyteczne uzupełnienie konwencjonalnych testów opartych na punkcie końcowym. Może być również stosowane do innych przylegających typów komórek w badaniach morfodynamiki komórkowej.

Aby ocenić wydajność przepływu pracy opartego na ODT, wykonano obrazowanie time-lapse dla dwóch grup badawczych (LPS oraz BAI + LPS), przy pięciu niezależnych próbkach w każdej grupie. Wszystkie próbki pozyskano w identycznych warunkach obrazowania. Ze względu na duży nakład pracy związany z długoterminowym śledzeniem pojedynczych komórek i analizą ilościową, do analizy i wizualizacji pojedynczych komórek wybrano jedną reprezentatywną próbkę z każdej grupy. Wyniki przedstawiono w sposób opisowy i nie służą one do wniosko...

Ten protokół opisuje bezznacznikowy przepływ pracy oparty na optycznej tomografii dyfrakcyjnej do obrazowania w czasie rzeczywistym i ilościowej analizy morfodynamiki makrofagów. Metoda umożliwia ciągłe śledzenie morfologii pojedynczych komórek i ich migracji, zapewniając pomiary w czasie rzeczywistym powierzchni rzutowanych, obwodu i średniej prędkości migracji podczas długotrwałego obrazowania żywych komórek.

Obrazowanie w czasie rzeczywistym bez etykiet i analizy ilościowej morfodynamiki makrofagów z wykorzystaniem tomografii dyfrakcyjnej optycznej

This study establishes a label-free optical diffraction tomography (ODT)-based workflow for live-cell imaging and analysis to observe time-dependent ...

real-time-label-free-imaging-quantitative-analysis-macrophage

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Mikroskopia fluorescencyjna z całkowitym wewnętrznym odbiciem (TIRF) to potężna metoda obserwacji struktur znajdujących się blisko powierzchni komórki przy wysokim kontraście i rozdzielczości czasowej. Demonstrujemy, w jaki sposób TIRF może być wykorzystany do badania dynamiki białek w korze bakterii i grzybów otoczonych ścianą komórkową.

Wizualizacja organizacji i dynamiki kory mikroorganizmów z wykorzystaniem mikroskopii fluorescencyjnej z całkowitym wewnętrznym odbiciem

Opisujemy użycie standardowego mikroskopu optycznego do wykonywania ilościowych pomiarów masy, objętości i gęstości komórek poprzez kombinację jasnego pola i różnicowego kontrastu interferencyjnego.

Ilościowa mikroskopia optyczna: pomiar cech biofizycznych komórek za pomocą standardowego mikroskopu optycznego

Przestrzenny rozkład i czasowa dynamika białek błony komórkowej i lipidów to gorący temat w biologii. W tym przypadku problem ten został rozwiązany za pomocą czasoprzestrzennej analizy fluktuacji obrazu, która zapewnia koncepcyjnie te same fizyczne wielkości śledzenia pojedynczych cząstek, ale wykorzystuje małe znaczniki molekularne i standardowe konfiguracje mikroskopowe.

Od szybkiego obrazowania fluorescencyjnego do prawa dyfuzji molekularnej na żywych błonach komórkowych w komercyjnym mikroskopie

Ten protokół opisuje implementację systemu mikroskopii optycznej z asymetrycznym wykrywaniem i rozciąganiem w czasie do obrazowania pojedynczych komórek w ultraszybkim przepływie mikroprzepływowym oraz jego zastosowania w obrazowaniu cytometrii przepływowej.

Obrazowanie mikroprzepływowe Cytometria przepływowa za pomocą mikroskopii optycznej z asymetrycznym wykrywaniem i rozciąganiem w czasie (ATOM)

Sondy specyficzne dla celu stanowią innowacyjne narzędzie do analizy mechanizmów molekularnych, takich jak ekspresja białek w różnych typach chorób (np. zapaleniu, infekcji i nowotworzenia). W tym badaniu opisano ilościową trójwymiarową ocenę tomograficzną infiltracji makrofagów jelitowych w mysim modelu zapalenia jelita grubego przy użyciu tomografii fluorescencyjnej specyficznej dla F4 / 80.

Tomografia fluorescencyjna do wykrywania i ilościowego oznaczania mysiego zapalenia jelit związanego z makrofagami

Ten protokół opisuje wytwarzanie powierzchni szklanych o jakości optycznej, zaadsorbowanych związkami zawierającymi długołańcuchowe węglowodory, które mogą być używane do monitorowania fuzji makrofagów żywych próbek i umożliwiają super-rozdzielczość mikroskopii utrwalonych próbek.

Wytwarzanie powierzchni szklanych o jakości optycznej do badania fuzji makrofagów

Tutaj opisujemy metody wykorzystujące mikroskopię konfokalną z wirującym dyskiem do obrazowania pojedynczych zdarzeń fagocytarnych przez makrofagi otrzewnowe rezydujące u myszy. Protokoły można rozszerzyć na inne komórki fagocytarne.

Poklatkowe obrazowanie 3D fagocytozy przez makrofagi myszy

Opisujemy protokół do bezznacznikowej identyfikacji podtypów limfocytów za pomocą ilościowego obrazowania fazowego i algorytmu uczenia maszynowego. Pomiary tomogram 3D indeksu refrakcji limfocytów prezentują informacje morfologiczne i biochemiczne 3D dla poszczególnych komórek, które są następnie analizowane za pomocą algorytmu uczenia maszynowego w celu identyfikacji typów komórek.

Bezznacznikowa identyfikacja podtypów limfocytów przy użyciu trójwymiarowego ilościowego obrazowania fazowego i uczenia maszynowego

Mikroskopia optyczna oparta na chipach jest nowatorskim podejściem do mikroskopii fluorescencyjnej i oferuje korzyści w zakresie efektywności kosztowej i przepustowości. W tym miejscu przedstawiono protokoły przygotowania i obrazowania chipów dla mikroskopii TIRF i mikroskopii superrozdzielczej opartej na lokalizacji.

Wysokoprzepustowa mikroskopia fluorescencji całkowitego wewnętrznego odbicia i bezpośredniej stochastycznej rekonstrukcji optycznej z wykorzystaniem chipa fotonicznego

Analiza średniego kwadratu (iMSD) wyprowadzona z obrazowania jest stosowana do makropinosomów, aby podkreślić ich wewnętrzną, ewoluującą w czasie naturę pod względem właściwości strukturalnych i dynamicznych. Makropinosomy są następnie porównywane z granulkami wydzielniczymi insuliny (ISG) jako odniesienie dla struktur subkomórkowych o niezmiennych w czasie średnich właściwościach strukturalnych/dynamicznych.

Badanie właściwości strukturalnych i dynamicznych transportujących nanostruktur subkomórkowych za pomocą spektroskopii fluktuacji czasoprzestrzennej

Przedstawiamy protokół do implementacji mikroskopii interferencyjno-refleksyjnej i mikroskopii totalno-wewnętrznej-refleksyjno-fluorescencyjnej do jednoczesnego obrazowania dynamicznych mikrotubul i fluorescencyjnie znakowanych białek związanych z mikrotubulami.

Mikroskopia fluorescencyjna z jednoczesnym odbiciem interferencyjnym i całkowitym odbiciem wewnętrznym do obrazowania dynamicznych mikrotubul i powiązanych białek

Chengdu University of Traditional Chinese Medicine.  This protocol describes a label-free optical diffraction tomography-based workflow for real-time imaging and quantitative analysis of macrophage morphodynamics. The method enables continuous tracking of single-cell morphology and migration, providing time-resolved measurements of projected area, perimeter, and average migration speed during long-term live-cell imaging.

Obrazowanie w czasie rzeczywistym bez etykiet i analizy ilościowej morfodynamiki makrofagów z wykorzystaniem tomografii dyfrakcyjnej optycznej

Przeglądaj więcej filmów