Name: Liczenie i określanie żywotności hodowanych komórek (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-23T15:41:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Naucz się liczenia komórek w hodowli przy użyciu hemocytometru oraz oceny ich żywotności testem Trypan Blue. Ta metoda pozwala dokładnie wyznaczyć stężenie komórek w zawiesinie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Pełny tekst protokołu dla tego podejścia eksperymentalnego jest dostępny w <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">Current Protocols in Cell Biology</a>.

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

liczenie i określanie żywotności hodowli komórkowych

Counting and Determining the Viability of Cultured Cells

Wyznaczenie liczby komórek w hodowli jest istotne dla standaryzacji warunków hodowli oraz przeprowadzania dokładnych eksperymentów ilościowych. Hemacytometr to grube szkiełko przedmiotowe z obszarem centralnym zaprojektowanym jako komora licznikowa. Zawiesinę komórkową nanosi się na wyznaczony obszar, a następnie dokonuje zliczenia, co pozwala na obliczenie gęstości komórek.

Oznaczanie liczby komórek w hodowli jest istotne dla standaryzacji warunków hodowli oraz przeprowadzania dokładnych eksperymentów ilościowych. W tym filmie demonstrujemy sposób zliczania komórek przy użyciu hemacytometru.

Liczenie i określanie żywotności hodowli komórkowych

Oznaczanie liczby komórek w hodowli jest istotne dla standaryzacji warunków hodowli oraz przeprowadzania dokładnych eksperymentów ilościowych. A ...

Oznaczanie liczby komórek oraz kultury jest istotne w standaryzacji warunków hodowli oraz podczas przeprowadzania eksperymentów, w których wymagana jest precyzyjna liczba komórek. W niniejszym materiale pokażemy, jak zliczać komórki przy użyciu komory countingowej (hemocytometru) oraz jak obliczyć stężenie komórek w zawiesinie. Przedstawimy również sposób oznaczania liczby żywych komórek w kulturze za pomocą testu żywotności z użyciem błękitu trypanu.Cześć, jestem Ricky z laboratorium Dr.LAN w sieci Molecular Pathology Laboratories Network we wschodnim Tennessee. Dzisiaj pokażę wam, jak zliczać komórki w zawiesinie oraz jak określać ich żywotność. Aby przygotować komorę countingową do liczenia komórek, należy najpierw oczyścić jej powierzchnię oraz dołączone szkiełko nakrywkowe 70% ethanol.Kryszka i szkiełko powinny być czyste, suche i wolne od kłaczków, odcisków palców oraz śladów wody. Następnie należy lekko zwilżyć kranową wodą krawędzie hemocytometru i docisnąć na nim kryszkę. Kryszka powinna równomiernie przylegać do srebrnego pola zliczania.Jesteśmy teraz gotowi do przygotowania zawiesiny komórkowej do zliczenia. Najpierw, jeśli komórki były hodowane w kulturach monowarstwy, odspój je od powierzchni płytki za pomocą trypsyny, zgodnie z instrukcją pokazaną w filmie dotyczącym pasażowania komórek. Po odspójeniu komórek z płytki, rozcieńcz je w razie potrzeby, aby uzyskać jednorodną zawiesinę.Podczas korzystania z cytometru hematologicznego należy upewnić się, że wszelkie grudki w zawiesinie zostały rozproszone. Zalecana maksymalna liczba komórek wynosi od 20 do 50 komórek na jeden milimetr kwadratowy. Po przygotowaniu próbki komórkowej do załadowania do cytometru hematologicznego, należy za pomocą mikropipety przenieść zawiesinę komórkową na krawędź komory pomiarowej cytometru.Przytrzymaj końcówkę pipety pod szkiełkiem nakrywnym i nanieś jedną kroplę zawiesiny. Zawiesina zostanie wciągnięta pod szkiełko nakrywne dzięki działaniu kapilarnemu. Po wypełnieniu pierwszej komory, wypełnij drugą komorę liczącą; teraz można przystąpić do liczenia komórek.Należy pozostawić komórki na kilka minut, aby osiadły. Po osadzeniu komórek warto również odsączyć nadmiar cieczy. Preparat można oglądać pod mikroskopem przy powiększeniu 100x.Powinien być widoczny duży obszar centralny siatki, ograniczony zestawem trzech równoległych linii. Podziały wewnątrz dużego obszaru centralnego są również ograniczone trzema równoległymi liniami, a każdy podział jest podzielony na 16 mniejszych kwadratów pojedynczymi liniami. Komórki w tym obszarze powinny być rozmieszczone równomiernie, bez tworzenia skupisk.Jeśli komórki nie są rozmieszczone równomiernie, należy je wypłukać i nanieść ponownie. W przypadku korzystania z hemocytometru używa się licznika ręcznego do policzenia komórek w każdym z czterech narożnych oraz w środkowym kwadracie. Komórki dotykające linii środkowej z potrójnych linii na górze i po lewej stronie kwadratu są liczone; nie liczy się komórek dotykających linii środkowej z potrójnych linii na dole lub po prawej stronie kwadratu.Powtórz zliczanie dla drugiej komory licznikowej. Po zliczeniu komórek można określić ich liczbę na mililitr. Aby to zrobić, oblicz średnią liczbę komórek na pole i pomnóż ją przez czynnik rozcieńczenia oraz przez 10 000, aby uzyskać liczbę komórek w próbce.Pomnóż liczbę komórek na mililitr przez całkowitą objętość zawiesiny komórkowej, z której pobrano próbkę. Teraz możemy przystąpić do określenia żywotności naszej zawiesiny. Aby wyznaczyć liczbę żywych komórek w próbce, użyjemy błękitu trypanu. Najpierw połącz 0,5 ml 4% błękitu trypanu, 0,03 ml HBSS oraz 0,1 ml zawiesiny komórkowej w małej probówce, wymieszaj dokładnie i pozostaw probówkę na pięć minut przed napełnieniem hemocytometru.Żywe komórki powinny pozostać niebarwione, natomiast martwe komórki będą miały kolor niebieski pod cytometrem hemocytometrycznym. Policz całkowitą liczbę komórek oraz całkowitą liczbę komórek żywych (niebarwionych), a następnie oblicz procent żywych komórek w próbce. Po zakończeniu pracy zdezynfekuj szkiełko nakrywkowe w cytometrze hemocytometrycznym, płucząc je 70% etanolem, a następnie wodą dejonizowaną.Pozostaw do wyschnięcia na powietrzu i przechowuj do przyszłego użycia. Właśnie pokazaliśmy, jak określić liczbę i żywotność hodowanych komórek. To wszystko.Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia we wszystkich eksperymentach.

counting-and-determining-the-viability-of-cultured-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Liczenie i określanie żywotności hodowanych komórek

Znajomość dokładnej liczby żywych komórek jest niezbędna przy wielu manipulacjach w hodowlach tkankowych. Niniejszy protokół opisuje sposób rozróżniania komórek żywych od martwych oraz ilościowego oznaczania komórek przy użyciu hemacytometru. Choć opisano w nim liczenie ludzkich neuralnych komórek macierzystych/prekursorowych (hNSPCs), można go zastosować również do innych typów komórek.

Liczenie ludzkich neuralnych komórek macierzystych

Scepter Cell Counter to przenośne, zautomatyzowane urządzenie, które umożliwia zliczanie komórek, monitorowanie ich średnicy i objętości oraz sprawdzanie stanu zdrowia i jakości populacji komórkowych w kolejnych kulturach.

Oznaczanie liczby komórek podczas hodowli komórkowej przy użyciu licznika komórek Scepter

Zastosowanie testu kolonogennego do oceny żywotności reprodukcyjnej jest uznane od ponad 50 lat. W niniejszym materiale przedstawiamy ogólną procedurę przeprowadzania testu kolonogennego z wykorzystaniem komórek adherentnych.

Test klonogenny: komórki adherentne

Miniaturowy automatyczny licznik komórek Moxi Z to nowoczesny instrument, który łączy zasadę Coultera z opatentowaną technologią cienkowarstwowych czujników oraz autorskim algorytmem oprogramowania, aby umożliwić pomiar rozmiaru i zliczanie cząstek z szerokiego zakresu wielkości, a także ocenę ogólnego stanu hodowli monodyspersyjnych komórek ssaków. Niniejszy protokół opisuje zastosowanie tego urządzenia do zliczania i oceny kondycji hodowli komórkowych.

Oznaczanie liczby komórek ssaczych, wielkości komórek i stanu zdrowia komórek przy użyciu automatycznego licznika komórek Moxi Z Mini

Związki terapeutyczne są często najpierw badane in vitro za pomocą testów żywotności. Zliczanie ślepych komórek przez ludzkiego obserwatora może być bardzo wrażliwe na niewielkie zmiany liczby komórek, ale nie ocenia funkcji. Komputerowe testy żywotności, jak opisano tutaj, mogą ocenić zarówno strukturę, jak i funkcję w obiektywny sposób.

Testy żywotności komórek w hodowli

Ten protokół opisuje użycie trzech różnych metod analizy proliferacji komórek w liniach komórkowych raka piersi. Obejmuje to stosowanie konwencjonalnego zliczania komórek, żywotności komórek na podstawie luminescencji oraz zliczania komórek za pomocą obrazowania komórek. Każdy z nich oferuje korzyści w zakresie powtarzalnego pomiaru proliferacji komórek.

Porównanie trzech różnych metod określania proliferacji komórek w liniach komórkowych raka piersi

Ten artykuł opisuje kwantyfikację hemocytometru i mikrofotografii migracji/inwazji za pomocą dwóch nowych wtyczek ImageJ o otwartym kodzie źródłowym: Kalkulatora Stężenia Komórek i Licznika Testu Migracji.  Ponadto opisano w nim protokoły akwizycji i kalibracji obrazu, a także szczegółowo omówiono wymagania wejściowe wtyczek.

Zautomatyzowana kwantyfikacja i analiza procedur zliczania komórek za pomocą wtyczek ImageJ

Często konieczne jest oszacowanie potencjalnej cytotoksyczności zestawu związków na hodowanych komórkach. W tym miejscu opisujemy strategię niezawodnego badania przesiewowego pod kątem toksycznych związków w formacie 96-dołkowym.

Strategia identyfikacji związków, które wpływają na wzrost i przeżycie komórek w hodowanych komórkach ssaków przy niskiej lub umiarkowanej przepustowości

Opisujemy podejście do wykrywania i przechwytywania inwazyjnych subpopulacji komórek w czasie rzeczywistym. Projekt eksperymentalny wykorzystuje analizę komórkową w czasie rzeczywistym poprzez monitorowanie zmian impedancji elektrycznej komórek. Można wychwycić inwazyjne komórki nowotworowe, immunologiczne, śródbłonkowe lub zrębowe w złożonych tkankach i ocenić wpływ kokultur.

Wykrywanie i wychwytywanie w czasie rzeczywistym inwazyjnych subpopulacji komórek z kokultur

Ten protokół dostarcza wyczerpujących wytycznych dotyczących konfiguracji i ilościowego monitorowania kokultur, w tym fotoautotroficznych cyjanobakterii wydzielających cukier i drożdży heterotroficznych.

Składanie i kwantyfikacja kokultur łączących drożdże heterotroficzne z fototroficznymi cyjanobakteriami wydzielającymi cukier

Naucz się liczenia komórek w hodowli przy użyciu hemocytometru oraz oceny ich żywotności testem Trypan Blue. Ta metoda pozwala dokładnie wyznaczyć stężenie komórek w zawiesinie.

Liczenie i określanie żywotności hodowli komórkowych

Przeglądaj więcej filmów