Name: Dissection z larw CNS na Drosophila melanogaster (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Poznaj metodę preparacji ośrodkowego układu nerwowego z larw Drosophila melanogaster. Technika ta umożliwia zachowanie struktur nerwowych do badań neurobiologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Dissect 3 larwy III stadium, pozostawiając CNS dołączone do naskórka. Miejsce w 1,5 ml probówce. </li><li> Fix w PBS (1x) zawierający 2% formaldehydu do 40 min z biegunach. ; Użyj 250ul za co 5-10 CNS rozcięta. </li><li> Usuń formaldehydu i krótko przemyć 3 razy PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Użyj drobno wyciągnął pipety Pasteura, aby uniknąć utraty tkanki. </li><li> Blok niespecyficzne białka wiążącego strony i permeabilize błon komórkowych przez inkubację tkanki 08/01 godzin w PBST + 5% BSA, kołysanie w temperaturze 4 ° C. </li><li> Inkubować w pierwszym przeciwciałem rozcieńczony w PBST + 5% BSA kołysanie w temperaturze 4 ° C przez noc. Optymalnego rozcieńczenia przeciwciał będzie różny dla różnych przeciwciał. </li><li> Spłukać 3x w PBST przez dwie 30min zmywa w temperaturze 4 ° C. </li><li> Inkubować w drugim przeciwciałem rozcieńczony w PBST + 5% BSA na 1-3 godziny kołysania w 4 ° C. Spłukać 3x w PBST przez dwie 30min zmywa w temperaturze 4 ° C. Jeśli drugi jest sprzężony wrażliwy na światło związek, zawinąć w folię aluminiową rurę. </li><li> Dissect tkanki dalej (w razie potrzeby) i zamontować na slajdach. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

Autorzy nie mają żadnych konfliktów interesów do ujawnienia.

Ten film pokazuje, jak wnikliwie CNS z państw larw Drosophila stadium. Po sekcji zwłok, OUN może być barwiony przy użyciu standardowego protokołu immunohistochemiczne. Obecnie wiele jest jeszcze znany, jak dla dorosłych układu nerwowego jest generowany, a także w jaki sposób przechowuje i przesyła informacje. Badania rozwoju Drosophila CNS larwy powinny poszerzyć naszą wiedzę na okablowanie systemu nerwowego i funkcji. Larw Drosophila wykazują szereg stereotpyed zachowania, takie jak reakcja na bodźce środowiska. Jak dowiedział się ...

<table><tbody><tr><td>Pinceta</td><td>z cienkimi końcówkami</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szkło zegarowe z 9 wgłębieniami</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastikowa szalka Petriego</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection z larw cns na drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Ośrodkowego układu nerwowego (CNS) larw Drosophila jest złożone i słabo rozumiane. Jednym ze sposobów zbadania CNS jest użycie immunohistochemiczne badanie ekspresji różnych powieści i białka znacznika. Barwienie całego larw jest niepraktyczne, ponieważ twardy naskórek zapobiega przenikaniu przeciwciał wewnątrz jamy ciała. W celu plamy tych tkanek należy wnikliwie zwierząt przed układaniem i przebarwienia. W tym artykule pokazujemy, jak wnikliwie larwy muszki owocowej bez uszkodzenia OUN. Zacznij od rozdarcia larwa na pół parę drobnych szczypiec, a następnie włącz naskórka &quot;inside-out&quot;, aby odsłonić CNS. Jeśli rozwarstwienie jest wykonywane dokładnie CNS pozostanie podłączony do naskórka. Zwykle utrzymanie CNS dołączone do naskórka na całym utrwalania i barwienia kroki i tylko całkowicie usunąć CNS z naskórka tuż przed zamontowaniem próbki na szkiełku. Pokazujemy także kilka reprezentatywnych obrazów larw CNS barwione z Ewą, czynnik transkrypcyjny wyrażone w podgrupie neuronów w OUN. Artykuł kończy się omówieniem niektórych praktycznych zastosowań tej techniki i potencjalne trudności, które mogą powstać.

W tym artykule pokazujemy, jak wnikliwie ośrodkowego układu nerwowego z państw larw Drosophila stadium.

Dissection z larw CNS na Drosophila melanogaster

Ośrodkowy układ nerwowy (OUN) larw Drosophila jest złożony i słabo poznany. Jednym ze sposobów badania OUN jest wykorzystanie immunohistochemii do ...

Nazywam się Nate Fer. Jestem studentem studiów doktoranckich tutaj, w Princeton. Dobrze. To, co należy zrobić, to odnaleźć nicienie, a następnie przenieść je do szalki z PBS.Tak właśnie będą wyglądać; rozrywa się je na pół, a wtedy wszystkie wnętrzności wypadają. Tutaj mam kutykulę wraz z całością struktur wewnętrznych i staram się upewnić, że została wywinięta na lewą stronę oraz że CNS jest nadal przymocowany. Więc... Mam go. Tak. Jest właśnie tutaj.Właśnie tutaj. Który? Widać go w moich prawych pęsetach.Mamy tutaj dwa różne płaty, a następnie sam OUN, który rozciąga się w dół niczym korzeń palowy i znajduje się tutaj, po prawej stronie ciemnych haczyków gębowych i pozostałej części kutykuli. Czy chciałbyś oddzielić OUN w ten sposób? Tak, oczywiście.Mogę to odsunąć. I to patrząc od góry. Widać zatem dwa płaty, a następnie sam OUN.Dlaczego zatem przeprowadzamy ten eksperyment? Chcemy zbadać ekspresję białka w układzie nerwowym larw. Najlepszym sposobem na osiągnięcie tego celu jest rozdzielenie tkanek larwalnych.Ponieważ przeciwciała z trudnością przenikają przez kutykulę w obrębie całej tkanki, najpierw wypreparowujemy OUN larwy, a następnie wykorzystujemy wypreparowaną tkankę do

dissection-of-larval-cns-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Niniejszy protokół demonstruje sposób przeprowadzania sekcji larw Drosophila w celu przygotowania ich do immunohistochemii i/lub obrazowania złącza nerwowo-mięśniowego.

Disekcja NMJ larw Drosophila

Drosophila melanogaster larwy stanowią idealny model badawczy do analizy mechanizmów transportu aksonalnego w nerwach segmentowych larw. Stosując tę procedurę, 3Badania i rozwój larwy w stadium poczwarki niosące różne mutacje można porównać z larwami typu dzikiego.

Wizualizacja nerwów segmentowych larw w preparatach larw Drosophila w 3rd stadium zasiedlenia

Opisujemy metodę Flippase-induced intersectional Gal80/Gal4 repression (FINGR), która pozwala wykorzystać tkankowo specyficzną FLP do określania wzorców ekspresji Gal80. W każdym miejscu, w którym Gal4 i FLP nakładają się na siebie, ekspresja Gal4 zostaje włączona (Gal80 zostaje usunięte – „flipped out”) lub wyłączona (Gal80 zostaje wstawione – „flipped in”). Metoda FINGR jest wszechstronnym narzędziem do analizy klonalnej i mapowania obwodów neuronalnych.

Mapowanie i zastosowanie ekspresji flippazy w pułapkach enhancerów w OUN larw i dorosłych osobników Drosophila

Ten film opisuje, jak przeprowadzić sekcję i wyizolować mózg dorosłego Drosophila - procedura niezbędna do wizualizacji narządu, który w przeciwnym razie jest zasłonięty przez naskórek, oko i tkankę tchawicy. Przykładowy protokół przedstawia szczegółową demonstrację dającą wysokiej jakości preparaty, które można stosować do barwienia immunologicznego i metod obrazowania w neurobiologii Drosophila.

Drosophila Sekcja mózgu osoby dorosłej: metoda w neurobiologii much

Ten film pokazuje sekcję i montaż eksplantatów mózgowych larw Drosophila. Ośrodkowy układ nerwowy (OUN), przyczepiony do krążków oka, jest ekstrahowany z larw, a następnie umieszczany na szkiełku podstawowym w roztworze soli fizjologicznej.

Rozwarstwienie i montaż eksplantatów mózgu larw muszki owocowej

Opisano paradygmat uszkodzeń wykorzystujący brzuszny rdzeń nerwowy larw Drosophila do badania regeneracji i naprawy ośrodkowego układu nerwowego. Dźganie, a następnie laserowa skaningowa mikroskopia konfokalna w próbkach poklatkowych i utrwalonych, w połączeniu z analizą ilościową za pomocą celowo opracowanego oprogramowania i genetyki, są wykorzystywane do badania molekularnych mechanizmów regeneracji i naprawy OUN.

Paradygmat urazów do badania naprawy ośrodkowego układu nerwowego u Drosophila

Ten protokół szczegółowo opisuje uproszczoną metodę używaną do przeprowadzania obrazowania żywych komórek w kontekście nienaruszonego mózgu larwy. Metody obrazowania żywych komórek są nieocenione w badaniu asymetrycznych podziałów nerwowych komórek macierzystych, a także innych procesów neurogennych i rozwojowych, konsekwentnie odkrywając mechanizmy, które wcześniej były pomijane.

Obrazowanie na żywo neuroblastów larw Drosophila

Ten protokół opisuje sekcję i barwienie immunologiczne tkanek mózgowych dorosłych Drosophila melanogaster. W szczególności protokół ten podkreśla wykorzystanie ciała grzyba Drosophila i neuronów fotoreceptorowych jako przykładowych podzbiorów neuronów, które można dokładnie wykorzystać do odkrycia ogólnych zasad leżących u podstaw wielu aspektów rozwoju neuronów.

Rozwarstwienie i barwienie immunofluorescencyjne neuronów ciała grzyba i fotoreceptorów w mózgach dorosłych Drosophila melanogaster

Ten protokół opisuje metodę rejestrowania malejącej aktywności elektrycznej ośrodkowego układu nerwowego Drosophila melanogaster, aby umożliwić ekonomiczne i wygodne testowanie środków farmakologicznych, mutacji genetycznych białek nerwowych i/lub roli niezbadanych ścieżek fizjologicznych.

Elektrofizjologiczny zapis aktywności ośrodkowego układu nerwowego Drosophila melanogaster w trzecim stadium rozwojowym

Ten protokół opisuje trzy kroki przygotowania płatów wzrokowych larw i dorosłych Drosophila do obrazowania: 1) preparacje mózgu, 2) immunohistochemia i 3) montaż. Nacisk położono na krok 3, ponieważ do wizualizacji określonych struktur płatów optycznych wymagane są różne orientacje montażowe.

Rozwarstwienie, immunohistochemia i montaż mózgów larw i dorosłych osobników Drosophila w celu wizualizacji płata wzrokowego

Tutaj omawiamy proces przygotowania, sekcji, montażu i obrazowania żywych mózgów eksplantatów z larw trzeciego stadium rozwojowego Drosophila melanogaster, aby obserwować dynamikę komórkową i subkomórkową w warunkach fizjologicznych.

Obrazowanie żywymi komórkami mózgów larwalnych Drosophila melanogaster

Poznaj metodę preparacji ośrodkowego układu nerwowego z larw Drosophila melanogaster. Technika ta umożliwia zachowanie struktur nerwowych do badań neurobiologicznych.

Dissection z larw CNS na Drosophila melanogaster

Przeglądaj więcej filmów