Respiração celular

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  1. Quantificando a respiração usando microrrespirômetros
    • NOTA: Neste experimento, você medirá a taxa de respiração celular para sementes em germinação medindo a taxa de troca por oxigênio. À medida que o oxigênio é consumido para fornecer energia, as sementes em germinação liberam dióxido de carbono. Este dióxido de carbono é absorvido pelo carbonato de potássio e, portanto, a pressão gasosa geral do respirômetro será reduzida. HIPÓTESES: A hipótese experimental é que as sementes em germinação apresentarão uma taxa de respiração maior do que as contas de vidro controle. Além disso, em temperaturas mais altas, a taxa de respiração celular nas sementes aumentará. As hipóteses nulas são que tanto as contas de vidro quanto as sementes em germinação exibirão uma taxa semelhante de respiração celular e que a temperatura não tem efeito sobre a respiração.
    • Para configurar o controle, primeiro remova o êmbolo de um microrrespirômetro preparado e etiquete-o com um "CR" ou "CH", respectivamente, dependendo se é a temperatura da sala de controle ou o tratamento aquecido.
    • Adicione as microesferas de vidro a cada um dos microrrespirômetros até a marca de 0.5 mL e empurre o êmbolo da seringa até a marca de 1 mL.
    • Coloque 3 - 4 arruelas na extremidade alargada de cada microrrespirômetro para pesá-las enquanto estiver no banho-maria. NOTA: O microrrespirômetro ficará com o tubo capilar para cima.
    • Coloque os dispositivos de controle de lado.
    • Para configurar os respirômetros sentados experimentais, remova o êmbolo de um microrrespirômetro preparado e etiquete-o com "ER" ou "EH", respectivamente, dependendo se é a temperatura ambiente experimental ou o tratamento aquecido.
    • Meça 0,5 mL de sementes em germinação na seringa de tuberculina do microrrespirômetro.
    • Em seguida, empurre a seringa até a marca de 1 mL.
    • Coloque 3 - 4 arruelas na extremidade alargada de cada microrrespirômetro para pesá-las enquanto estiver no banho-maria.
    • Para usar os microrrespirômetros, pressione cuidadosamente os microrrespirômetros "CR" e "ER" no banho-maria em temperatura ambiente. Toda a seringa deve ser submersa, mas os tubos capilares devem estar totalmente expostos. Remova a água do banho até que esta posição seja alcançada. Certifique-se de que a parte superior do tubo capilar esteja aberta.
    • Execute o mesmo procedimento (etapa 9) para os microrrespirômetros "CH" e "EH" para configurar o grupo experimental de temperatura mais alta.
    • Aguarde 5 minutos antes de prosseguir para permitir que a temperatura nos microrrespirômetros se iguale ao banho-maria.
    • Adicione uma única gota de fluido manômetro ao topo de cada um dos quatro tubos capilares que vedam as câmaras do microrrespirômetro. NOTA: Se as câmaras estiverem funcionando corretamente, o fluido do manômetro será sugado para dentro da câmara capilar.
    • Use o êmbolo colocado no banho para sugar o fluido do manômetro para o capilar. Pare quando o fluido estiver na metade do tubo capilar. IMPORTANTE: Os microrrespirômetros não devem ser perturbados depois de adicionados ao banho. Não bata na mesa nem insira ou remova nada do banho-maria depois que as câmaras forem seladas e equalizadas.
    • Marque a borda inferior do fluido do manômetro que está mais próxima da câmara. Isso representa o ponto de tempo zero.
    • Defina um cronômetro para soar em 5 minutos.
    • Após 5 minutos, crie uma nova marca onde o fluido do manômetro está em cada microrrespirômetro. Repita a cada 5 minutos até que 25 minutos tenham se passado ou até que o fluido do manômetro tenha percorrido todo o comprimento do tubo capilar.
    • Em seguida, remova os respirômetros dos banhos-maria.
    • Meça a distância entre cada uma das marcas e registre-as na Tabela 1 ao lado do ponto de tempo correto. Clique aqui para baixar a Tabela 1
    • Durante a limpeza, os manômetros devem ser desconstruídos para serem reutilizados ou descartados no lixo.
  2. Resultados
    • Para analisar os dados coletados, primeiro plote os pontos de dados com o eixo x como tempo e o eixo y como a distância que o manômetro se moveu, representando o consumo de oxigênio.
    • Calcule a inclinação de cada linha usando esta equação.
    • Registre esses valores para cada microrrespirômetro na Tabela 2. NOTA: Este valor representa a quantidade de respiração celular que ocorreu ao longo do experimento. Clique aqui para baixar a Tabela 2
    • Plote as taxas de respiração como um gráfico de barras.
    • Examine os dois gráficos. Considere como seus resultados se encaixam nas hipóteses. Observe quaisquer diferenças observadas na taxa de respiração entre as contas de controle e as sementes em germinação. Determine se o aumento da temperatura teve algum efeito na taxa de respiração.

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