Hipóteses: A hipótese experimental é que em fatias de pontas de raiz que foram tratadas com nocodazol, um produto químico que interfere na polimerização microtubular, todas as células serão presas no mesmo estágio do ciclo celular e que em fatias de ponta de cebola não tratadas todos os diferentes estágios do ciclo celular serão visualizados. A hipótese nula é que não haverá diferenças na mitose entre os dois grupos e que diferentes estágios do ciclo celular serão visualizados.
Para se preparar para este experimento, você usará uma cebola que foi colocada na água por vários dias até que novas pontas de raízes brancas comecem a brotar. Use uma lâmina de barbear para cortar um pedaço de 1 cm da ponta de uma das pontas da raiz.
Coloque a fatia de cebola em um tubo de microcentrífuga rotulado como "N" para a condição de nocodazol.
Em seguida, corte um segundo pedaço de 1 cm de ponta de raiz de cebola e coloque em um tubo de microcentrífuga rotulado como "C" para a condição de controle.
Adicione 2 μL de nocodazol de 5 mg/mL a 1 mL de água no tubo da microcentrífuga rotulado como N e 1 mL de água apenas no tubo rotulado como C.
Deixe os tubos contendo as pontas das raízes incubarem por 12 horas e limpe o espaço de trabalho com etanol a 70%.
Quando a incubação estiver concluída, defina um bloco de calor para 60 ºC.
Lave as pontas tratadas com nocodazol com água e aspire o líquido.
Repita esta lavagem mais duas vezes, para um total de três lavagens.
Encha ambos os tubos com 1 mL de um ácido clorídrico normal. Incubar os tubos em um bloco de calor a 60 ºC por 12 a 15 minutos e, em seguida, descartar o ácido em um frasco de resíduos.
Agora, adicione 1 mL de gota de água destilada aos tubos pelo menos três vezes para enxaguar as amostras.
Agora adicione um microlitro de coloração DAPI a 10 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS).
Em seguida, coloque 50 μL deste corante DAPI diluído em cada tubo e deixe-os em temperatura ambiente para incubar por 12 min.
Depois disso, faça três lavagens com água destilada como na etapa 10.
Rotule uma lâmina de microscópio como 'Controle' e outra como 'Nocodazol'.
Transfira as raízes coradas para suas respectivas lâminas de microscópio e adicione uma gota de água à lâmina de controle e uma gota de nocodazol à lâmina de nocodazol.
Use a lâmina de barbear para remover as partes não manchadas de cada ponta da raiz e coloque uma lamínula de vidro sobre cada amostra.
Pressione cuidadosamente cada lamínula com a ponta do dedo enluvado e deixe as lâminas descansarem por 10 min.
Por fim, visualize as lâminas sob a objetiva de 40X de um microscópio de fluorescência e capture imagens de suas preparações de células da ponta da raiz.
