Este protocolo demonstra como executar imunohistoquímica em dissecados larva Drosophila.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Drosophila larval MNJ Imunohistoquímica
Neste artigo
Resumo
Protocolo
Antes de começar a
- Prepare as seguintes soluções: PBT (0,1% Triton X100 em 1X PBS), PBTB (0,2% BSA em PBT), e PBTN (NGS 2% em PBTB).
- Dissecar as larvas Drosophila. Consulte Drosophila larval Dissection MNJ.
Imuno-histoquímica
- Mover as larvas a um tubo de 1,5 ml contendo PBT. Lavar as larvas duas vezes por 15 minutos no PBT. Nota: para lavar, coloque o tubo de 1,5 ml em um misturador nutator. Remover o líquido com um pippetor e substituí-lo com o líquido fresco.
- Remover o PBT. Lave em PBTB duas vezes por 30 minutos.
- Remover o PBTB. Lave em PBTN duas vezes p....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Imuno-histoquímica (IHQ) é vital para o estudo da biologia MNJ, pois permite a visualização do MNJ. Isto é conseguido usando anticorpos que reconhecem a membrana neuronal (por exemplo, HRP), o presynapse (por exemplo, CSP, SYT), e / ou o postsynapse (por exemplo, DLG). Moléculas sinalizadoras, proteínas estruturais, ou novas proteínas de interesse também pode ser manchada. Então, os genes podem ser mutado ou missexpressed e IHC pode detectar perturbação da estrutura sináptica e / ou de sinalização neuronal.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Stereomicroscópio “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| Fonte de luz KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Pinça Dumont SS | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Pinça Dumont nº 5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Misturador Nutator Adams™ | BD Biosciences | 421105 | |
| Faca de precisão nº 1 | X-Acto | 3201 | |
| Lâminas nº 16 | X-Acto | 216 | |
| Reagente antidesvanecimento ProLong Gold | Invitrogen | 36930 |
Referências
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
