Acasalamento e separação tetrad são necessários para análise genética em Chlamydomonas reinhardtii. Aqui demonstramos métodos padrão para a gametogênese, o acasalamento de germinação, zigoto e dissecção tétrade. Este protocolo consiste de uma série fácil de seguir de etapas que farão abordagens genéticas passíveis de cientistas que estão menos familiarizados com Chlamydomonas.
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Artigo de método
Acasalamento e separação da Tétrade Chlamydomonas reinhardtii Para análise genética
Neste artigo
Resumo
Resumo
A alga verde unicelular
Protocolo
Parte 1: Preparação de cepas de gametogênese
Nota: Todas as manipulações devem ser realizadas à temperatura ambiente. Temperaturas superiores ou inferiores irá afetar a velocidade de germinação zigoto e pode afetar adversamente a viabilidade.
Consideração importante: é essencial que as cepas de ser acoplado estão crescendo robustamente e estão livres de contaminação de fungos ou bactérias. Se as cepas não foram transferidos regularmente, passagem em meio rico deve preceder geração de gametas.
- Cepas para ser acoplado são transferidos para placas TAP (100 × 15 mm), 1-2 cepas por placa. As células devem ser cultivadas em um....
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Discussão
Análise genética é simples em Chlamydomonas, mas exige técnicas específicas para gerar gametas e progênie tetrad separado. Com cepas saudável, as técnicas são facilmente adquiridos. Com alguns mutantes, torna-se mais de uma arte, e os leitores devem consultar Volume 1 do Livro de Chlamydomonas recentemente publicado por notas históricas e dicas práticas. Além disso, deve-se notar que há muitas variações sobre o tema básico descrito acima, que vão desde o método para induzir gametogênese, para .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Agradecimentos
Este protocolo é baseado em técnicas aprendidas no laboratório de Francis-André Wollman na França Institut de Biologie Physico-Chimique, Paris,. Os autores têm uma dívida de gratidão para com Jacqueline Girard-Bascou, que originalmente introduzido DBS para Chlamydomonas técnicas genéticas. Chlamydomonas pesquisa no laboratório dos autores é suportado pelo National Science Foundation prêmio MCB-0646350.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Estirpe do tipo de acasalamento plus | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Estirpe do tipo de acasalamento minus | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Meio de crescimento | |||
| N10 | Meio de crescimento | |||
| Difco agar | Reagente | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Ferramentas | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Ferramentas | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Ferramentas | Fisher Scientific | 08-920A |
Referências
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 2nd Edition, Academic Press. San Diego, CA. Volume 1 119-273 (2005).
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Reimpressões e permissões
