Artigo de método

Preparação das Culturas cérebro de um rato Aggregate para Neuron Glia e Estudos de Desenvolvimento

DOI:

10.3791/1304

⸱

30 de setembro de 2009

 , 
1Department of Veterinary Integrative Biosciences, Texas A&M University (TAMU)

Neste artigo

Resumo

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A protocolos para um sistema cerebral de ratos embrionários cultura agregada é descrita. Progenitores multipotentes nos agregados podem se desenvolver e se diferenciar em neurônios, astrócitos e oligodendrócitos.

Resumo

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Um sistema in vitro que recapitula o desenvolvimento e diferenciação de progenitores em neurônios maduros e células gliais no sistema nervoso central (SNC) proporcionaria uma plataforma poderosa para os neurocientistas para investigar axo-glial interações, propriedades e diferenciação de células progenitoras multipotentes, ea progressão da oligodendroglial células da linhagem no nível celular e molecular. Descrevemos aqui um sistema de cultura CNS agregado de prosencéfalo embrionárias de ratos, que podem ser mantidos em um meio isento de soro até 3-4 semanas e é usado em nosso laboratório como modelo para estudar a interação neurônio glia e mielinização do SNC. Este vídeo vai demonstrar como isolar e cultivar essas culturas CNS agregado de E16 cérebro de rato. Além disso, a partir da dissecção mesmo cérebro, altamente enriquecido regulares dissociada culturas neuronais podem ser facilmente obtidos e utilizados para vários estudos sobre os neurônios do SNC ou utilizados para co-culturas com outras células.

Protocolo

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Preparação antes da dissecação

Instrumentos cirúrgicos: esterilizar todas as tesouras e pinças de dissecção por autoclave

Lamela de limpeza:

  1. Mergulhe todos lamínulas (15mm de diâmetro por 24 bem-placa) em 1L copo de grama em 33% HCl durante pelo menos 24 h
  2. Lavar com água corrente durante 10 min com agitação ocasional para remover todos os HCl residual
  3. Enxágüe com água Millipore
  4. Drenar a água fora
  5. Mergulhe lamínulas em etanol 95-98%
  6. Lamínulas transferência para um tecido limpo em uma placa plana e ar seco as lamelas
  7. Transfe....

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Discussão

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Os primeiros estudos relataram a formação de sinapses e de mielina maduras em rotação mediada livre de culturas agregada flutuante 1. O SNC sistema de cultura agregada descrita aqui combina sem soro crescimento de células progenitoras multipotentes em três agregados dimensional com a conveniência de culturas tradicionais em 2D para facilitar a análise de migração celular, desenvolvimento e diferenciação in vitro. O sistema pode ser modificado e usado para precursoras neurais pesquisas com células e p.......

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Agradecimentos

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Este estudo foi financiado em parte por fundos start-up da Universidade Texas A & M

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Referências

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  1. Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neuroscience. 3, 565-56 (1978).
  2. Chen, Y. ing Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
  3. Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe....

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