Alcançar alta qualidade e quantidade adequada de ilhotas humanas é um dos pré-requisitos importantes para o transplante de ilhotas bem sucedido. Neste vídeo, descrevemos passo a passo os procedimentos para o isolamento de ilhotas pancreáticas humanas (parte II: purificação e cultura de ilhotas humanas) utilizando um método modificado automatizado.
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Artigo de método
Isolamento Islet humana Pancreatic: Parte II: Purificação e Cultura de Ilhotas Humanos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Gestão da diabetes tipo 1 é onerosa, tanto para o indivíduo ea sociedade, custando mais de 100 bilhões de dólares anualmente. Apesar do uso generalizado de monitoramento de glicose e insulina novas formulações, muitas pessoas ainda desenvolvem devastadoras complicações secundárias. Transplante de ilhotas pancreáticas pode restaurar controle quase normais de glicose em pacientes diabéticos
Protocolo
1. Purificação de ilhotas
- Para iniciar o processo de purificação de ilhotas, carregar o saco de COBE, braçadeira todos os tubos exceto o tubo verde, e defina a velocidade para 1.500 e os super fora a 0.
- Na capa configurar os copos bomba e gradiente e conectar o tubo de coleta para o tubo verde.
- Agora o carregamento do Ficoll 1,100 pode começar: push "spin" em seguida, adicione 110 ml de Ficoll 1,100 para o copo da frente, e começar a bomba, a fim de carregar o saco de COBE. Como o Ficoll é carregado, pressione super-out, parar a bomba, unclamp a cabeça da bomba e definir a velocidade com super 100.
- Quando o Ficoll atinge o cop....
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Discussão
Apesar de avanços significativos nas técnicas de isolamento de ilhotas humanas, o rendimento de ilhotas permanecem altamente variável e imprevisível. Purificação do tecido pancreático digeriu é crucial para recuperar uma massa isle suficiente após digestão enzimática de sucesso para transplante. O método de purificação UIC é recomendado porque uma recuperação superior de alta pureza ilhotas humanas foi demonstrada usando este método. Além disso, até 50 ml de tecido digerido pode ser carregado em uma única Cobe correr pa.......
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Agradecimentos
Suportado pela fundação da Universidade de Illinois em Chicago, bem como celular Islet Resource Center NIH subvenção (RFA-RR 05-003), a Fundação Christopher, a Fundação Efroymson, ea Fundação Tellabs.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Centrífuga | equipamento | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Processador Celular Cobe 2991 | equipamento | Gambro. BCT | 2556 | purificação de ilhotas |
| Microscópio Invertido MZ6 TLBD4.1 | equipamento | Leica Microsystems | 4103 | |
| Placa de Cultivo com Grade de 2 mm | equipamento descartável | Nalge Nunc international | 174926 | contagem de ilhotas |
| Digital Sight DS L1 | equipamento | Nikon Instruments | 217267 | |
| Bolsa COBE | equipamento descartável | O.R. Solution | 66707003 | |
| Frasco de cultura T175 | equipamento descartável | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| Solução da Universidade de Wisconsin (UW) | reagente | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Solução Tamponada de Sais de Hank’s (HBSS) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reagente | Bichrom AG | L6155 | |
| Meio M199 (solução de lavagem) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Meio Final de Lavagem/Cultura | reagente | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| Ditizona | reagente | Sigma-Aldrich | D5130 |
Referências
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
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Reimpressões e permissões
