Nós descrevemos um método rápido e eficaz para a purificação de mitocôndrias da levedura Saccharomyces cerevisiae. Este método permite o isolamento de alto rendimento de mitocôndrias puro que são essencialmente livres de contaminação por outras organelas e manter sua integridade estrutural e funcional após a sua purificação.
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Artigo de método
Purificação de mitocôndrias de células de levedura
Neste artigo
Resumo
Resumo
As mitocôndrias são o principal local de produção de ATP durante o metabolismo aeróbico em eucariotas não fotossintéticos células
Protocolo
Materiais e métodos
Cepas de leveduras e condições de crescimento
A cepa do tipo selvagem BY4742 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) foi cultivado em meio YEPD rica (1% extrato de levedura, peptona 2%, 2% de glicose). Células foram cultivadas a 30 ° C com rotação agitação a 200 rpm em Erlenmeyers em um "volume frasco de volume / médio" proporção de 5:1.
Isolamento da fração mitocondrial crude
- Crescer 1 L da cultura BY4742 tipo selvagem tensão por 48 h.
- Despeje cultura em 500 ml tubos de centrífuga Nalgene. Equilibrar a carga e células de colheita por centrif....
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Discussão
Este método permite o isolamento de alto rendimento de mitocôndrias puro de células de levedura. Mitocôndrias purificadas por esse método são essencialmente livres de contaminação por outras organelas e manter sua integridade estrutural e funcional após a sua purificação. O método descrito rendimentos mitocôndrias, que são adequados para células livres reconstituição de processos essenciais mitocondrial. Estas mitocôndrias altamente puro pode também ser usado para a análise da estrutura mitocondrial e funções, proteoma .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por concessões do CIHR e NSERC do Canadá. VIT é um CIHR New Investigator e Concordia University, em Cátedra de Investigação Genómica, Biologia Celular e Envelhecimento.
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Referências
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. (2004).
- Suen, D. -F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &, Hardwick, J. M.
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Reimpressões e permissões
