Lisado de plaquetas humanas é uma fonte rica em fatores de crescimento e um suplemento potente em cultura de células. Este protocolo apresenta o processo de preparação de um grande pool de lisado de plaquetas humanas por a partir de plasma rico em plaquetas, realizando diversos ciclos de congelamento e descongelamento e esgotando os fragmentos de plaquetas.
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Artigo de método
Preparação de pool de plaquetas Lysate Humanos (pHPL) como um suplemento eficiente para animais de soro livre de culturas de células estaminais humanas
Neste artigo
Resumo
Resumo
Fatores de crescimento plaquetário derivados têm sido mostrados para estimular a proliferação celular de forma eficiente
Protocolo
1. Material de partida
Comece com plaquetas plasma rico (PRP) unidades preparadas por Citaferese ou derivados de buffy casacos.
2. Verificar a esterilidade
Para verificar a esterilidade tirar uma amostra de 20 mL de cada unidade PRP, transferindo o volume para uma bolsa pequena conectado (Baxter). Desconecte este saco com solda.
3. Congelamento de unidades PRP
Imediatamente após a preparação, congelar as unidades PRP até pelo menos -20 ° C no saco de armazenamento original, sem manipulação posterior.
4. ....
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Discussão
Em algumas regiões de plaquetas plasma rico (PRP) podem ser obtidas buffy-coats de outra forma de ser um produto embalado resíduos de produção de glóbulos vermelhos a partir de doações de sangue testadas (Figura 1). Idealmente, PRP é usado imediatamente para melhor preparação de pHPL, como em plaquetas desatualizado concentra a disponibilidade de fatores de crescimento pode ser reduzido devido a lesões de armazenamento de plaquetas e degradação 20. Recomenda-se ainda para produzir PRP combinando as plaquetas .......
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Agradecimentos
Este trabalho tem sido apoiada pelo austríaco Research Foundation (FWF, conceder N211-NAN para DS) ea Agência de Promoção Austrian Research (FFG, conceder N200 para DS). Os autores agradecem a Claudia Url para assistência técnica excelente e Farrell Monica para a edição de linguística.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Saco duplo (2 x 3,5 L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originalmente para punção de ascite |
| Tubo Falcon de 50 mL | Falcon BD | 2098 | |
| Stripettes de 50 mL | Costar | 4501 | |
| Bolsas de plasma (600 mL) | Baxter Internationl Inc. | R4R2021 | |
| Soldador de tubos estéreis | Terumo Medical Corp. | TSCD-II | |
| Equipamento de soldagem | Fresenius Kabi | Compo Seal | |
| Banho-maria | |||
| Tesouras estéreis | |||
| Grampos | |||
| Centrífuga |
Referências
- Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. Platelets and wound healing. Front Biosci. 13, 3532-3548 (2008).
- Barrientos, S., Stojadinovic, O., Golinko, M. S., Brem, H., Tomic-Canic, M. Growth factors and cytokines in wound healing. Wound Repair Regen. 16, 585-601 (2008).
- Giacco, F.....
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Reimpressões e permissões
