Agressão a estudar em Drosophila (mosca da fruta)

Resumo

Agressão é um comportamento inato que evoluiu no âmbito de defesa ou a obtenção de recursos. Este complexo comportamento social é influenciado por fatores genéticos, hormonais e ambientais. Em muitos organismos, a agressão é crítica para a sobrevivência, mas a agressão controle e repressão em contextos distintos também se tornou cada vez mais importante. Nos últimos anos, os invertebrados têm se tornado cada vez mais útil como sistemas modelo para investigar a base genética e os sistemas biológicos do comportamento social complexo. Isto é em parte devido ao repertório diversificado de comportamentos exibidos por estes organismos. No vídeo que acompanha, esboçamos um método para analisar a agressão em Drosophila cujo projeto engloba importantes eco-etológicas restrições. Detalhes incluem os passos para: fazer uma câmara de luta; isolamento e pintura moscas; acrescentando voa para a câmara de luta, e luta gravação de vídeo. Esta abordagem está sendo utilizada para identificar genes candidatos importante na agressividade e na elaboração do circuito neuronal que subjaz a saída de agressão e outros comportamentos sociais.

Protocolo

1. Montagem das paredes da câmara

1. Tome duas lâminas de vidro liso, marca o meio nas duas extremidades e usando uma régua reta gumes como um guia, a pontuação do vidro com o cortador de diamante.
2. Deslize o cortador de diamante e para trás algumas vezes até ouvir um ruído de raspagem.
3. Lavar o vidro, e segurando-a com duas toalhas de papel sobre um recipiente de vidro quebrado, aplique uma leve pressão para fechar a linha marcou com o lado marcado
   de costas para você quebrar o slide em duas metades.
4. Generosamente aplicar o adesivo de vidro ao longo de uma borda de um pedaço de vidro e empurrar um segundo pedaço de vidro contra o adesivo em um ângulo reto com a primeira peça. Coloque sobre uma superfície plana (papel alumínio, papel encerado ou papel regular) e deixar solidificar por pelo menos uma hora.
5. Depois de uma hora, repita a aplicação do adesivo passo para formar uma câmara quadrada e deixar endurecer durante a noite.
   
   
   

2. Colocando as paredes em uma placa de Petri

1. Leve o topo de uma placa de Petri e preencher a uma profundidade de pelo menos 5 mm com uma solução aquecida de agarose 2% (microondas a agarose em água deionizada até que ele se dissolve totalmente).
2. Aguarde alguns minutos, mas ao mesmo tempo dissolvido, colocar as paredes da câmara no centro do prato. Tomar parte inferior da placa de Petri, coloque-o lado de baixo para cima. Usando uma agulha chama-aquecido em linha reta de dissecação, fazer um conjunto de pequenos orifícios (> 1 mm) no centro do prato para ventilação. Faça um buraco maior (~ 4 mm de diâmetro) ligeiramente para o lado para a introdução de moscas para a câmara. Coloque um pedaço de fita de etiqueta removível sobre o buraco maior.
   
   
   
   
   
   
   

3. Fazer o copo de alimentos

1. Aqueça um frasco de comida voar para o ponto onde a comida é derretido. Use uma pipeta Pasteur para transferência de alimentos para um frasco de cintilação fechamento de preenchê-lo para formar uma superfície plana na parte superior. Ter cuidado para evitar bolhas de ar e deixe esfriar.
2. Fazer colar fermento fresco por trituração uma pequena quantidade de fermento seco e algumas gotas de água em um almofariz e um pilão. Adicionar mais fermento ou água até que a consistência é espessa o suficiente para permitir que uma pequena gota visível para ser apanhada por um palito e aplicada para o centro da superfície do alimento.
3. Coloque o frasco de comida no centro da câmara e coloque no fundo da placa de Petri, invertida para que os lados estão em alta e não obscurecendo a vista, no topo da câmara. Introduzir dois dias 05/03 moscas velhas por aspiração dentro da câmara através do maior buraco no topo. Cobrir o buraco com fita adesiva e coloque um pedaço de papel de filtro preto com um buraco cortado 2 cm de la em cima do prato.
4. Coloque uma lâmpada de mesa acima da câmara, longe o suficiente para que ele não vai aquecer a câmara, e posicionado de modo que ele vai iluminar a superfície de alimentos. Todo o conjunto deve idealmente ser colocada em um ambiente com alta umidade e uma temperatura de 22-25 ° C.
   
   
   

4. Começar a filmagem através da parede da frente da câmara quando ambos moscas estão no foodsurface.