Este vídeo vai demonstrar como obter hemócitos (células sangüíneas) a partir do Hawaiian bobtail lula, Euprymna scolopes Para utilização em ensaios biológicos de células bacterianas e aderência. Hemócitos serão marcadas com um corante fluorescente e expostos a GFP-rotulados bactérias.
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Artigo de método
Obtenção Hemócitos do Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes Observando e sua adesão a bactérias simbióticas e não-simbióticas
Neste artigo
Resumo
Resumo
Estudos sobre o papel do sistema imunológico na mediação de sinalização molecular entre bactérias benéficas e os seus anfitriões têm, nos últimos anos, fez contribuições significativas para a nossa compreensão da co-evolução dos eucariotos com sua microbiota. A associação simbiótica entre o havaiano bobtail lula,
Protocolo
- Prepare 500 mL de 0,22 M esterilizada por filtração, a água do mar artificial (FSW; salinidade 35 ppt). Filtro de água do mar artificial ou natural através de um filtro de 0,22 micron M para remover partículas e bactérias.
- Anestesiar um adulto Hawaiian bobtail squid (Euprymna scolopes), colocando em uma solução 2% de etanol na FSW. Colocar o animal na anestesia por aproximadamente 10 minutos. A lula deixará de natação e não responder ativamente ao toque. Respiração contínua, indicado pelo movimento do manto, ea atividade chromatophore ainda deve ser observado.
- Lugar squid com o lado ventral para cima em uma bandeja padrão de cera dissecção. Submergir o a....
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Discussão
Estudos sobre o papel do sistema imunológico na mediação de sinalização molecular entre bactérias benéficas e os seus anfitriões têm, nos últimos anos, fez contribuições significativas para a nossa compreensão da co-evolução dos eucariotos com sua microbiota. O sistema squid / vibrio provou-se como um sistema modelo tratável para responder a perguntas fundamentais neste campo 2,3,5,6,8. A luz de órgãos do Euprymna squid scolopes permite a colonização exclusivamente pela bactéria Vibrio f.......
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Agradecimentos
Fontes de financiamento: Universidade de Connecticut Research Foundation e do Departamento de Biologia Molecular e Celular para SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid de Pesquisa e H. e R. Antonio Majorie
Romano de Pós-Graduação Educação Fellowship para AJC
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sistema de lamínulas de borossilicato nº 1.0 com câmara (8 câmaras) | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 155411 | |
| Seringa de insulina sem látex de 1 ml, 26,5 G | BD Biosciences | C34551 | |
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | |
| Microscópio SteREO Discovery V20 | Carl Zeiss, Inc. | ||
| Microscópio Confocal SP2 | Leica Microsystems |
Referências
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol.
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Reimpressões e permissões
