Artigo de método

Determinação da Reatividade e Titre de soro usando um ensaio de hemaglutinação

DOI:

10.3791/1752

29 de janeiro de 2010

Neste artigo

Resumo

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Hemaglutinação é uma forma de aglutinação, onde anticorpos se ligam às células vermelhas do sangue. Os glóbulos vermelhos são facilmente disponíveis e os resultados são facilmente observáveis ​​a olho nu. Este vídeo mostra os passos envolvidos em um ensaio de hemaglutinação, interpretando os resultados e determinar o título.

Resumo

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Hemaglutinação é uma forma específica de aglutinação e é usado quando os anticorpos se ligam a células vermelhas do sangue, que funcionam como um antígeno particulado. Os glóbulos vermelhos são alvos particularmente úteis como eles são facilmente disponíveis e de aglutinação é observável a olho nu. Esta técnica é comumente usado para determinar o título de um anticorpo (Ab), para tipagem de sangue e quantificação viral. Neste vídeo, as etapas envolvidas na preparação e realização de um ensaio de hemaglutinação é demonstrada utilizando anticorpos específicos para antígenos de grupo sanguíneo A-adicionados às células vermelhas do sangue (Revercells). O anti-soro é diluído em uma série de 96 poços de microtitulação bandeja de U-inferior, à qual é adicionada uma suspensão de Revercells. As amostras são misturados e, em seguida, incubados a 37 ° C por 60 minutos. Após este período, as amostras podem ser facilmente marcados para ve, ve + e reações de hemaglutinação intermediária (-/+). Esta abordagem permite a reatividade e título de uma amostra de soro a ser avaliados através de uma técnica rápida e simples. O vídeo irá cobrir a teoria por trás do ensaio, como os resultados são lidos e interpretados, como a determinação do título, como o ensaio pode ser modificado e problemas associados com o uso desta técnica.

Protocolo

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Preparação de Saline Veronal 5x Buffered (VBS)

  1. Para preparar a solução salina Veronal Buffered (VBS), três soluções distintas precisa estar preparado.
  2. Prepare uma solução através da dissolução de NaCl e 21.25gm 0.94gm de Barbitone de sódio em 350ml de água destilada. A concentração final das Barbitone NaCl e de sódio são 1,02 e 13mm, respectivamente.
  3. Prepare a solução 2, dissolvendo 1.44gm de Barbitone em 125ml de água destilada quente. A concentração final de Barbitone é 62,5 mm.
  4. Prepare a solução 3 dissolvendo 20.33gm de MgCl 2 e 4.41gm de CaCl 2 em 100ml de água destilada. A concentração final de MgCl ....

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Discussão

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O ensaio de hemaglutinação é uma técnica muito simples que permite um grande número de amostras de soro para ser avaliado dentro de um curto período de tempo. Ele também tem a vantagem de ser lido sem a necessidade de equipamentos especializados, com o olho que está sendo adequado. Esta técnica também pode ser modificada para a detecção do hormônio gonadotrofina coriônica humana presentes na urina, como parte de um teste de inibição da hemaglutinação. Em relação a um teste de hemaglutinação padrão, há algumas áreas onde.......

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Agradecimentos

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O autor gostaria de agradecer a senhorita Lora Matthews para executar a técnica eo Sr. Paul Pastor para a cinematografia. Este projeto foi financiado pela Universidade da Austrália do Sul, Laboratório curso de Medicina.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
RevercellsCSL02490201Use a 1% final
Anti-A soroCSL02611305
96 bem U placa inferiorTRP92097Deve ser U-bottom
Veronal tamponado salinaUse a 1x final
37° Sala C/incubadora
Luvas
descartáveis

Reimpressões e permissões

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Etiquetas

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