Implantação de Ferumoxides identificadas células-tronco mesenquimais em defeitos da cartilagem

Resumo

Objetivo da apresentação é mostrar um método altamente reprodutível para gerar matriz associada implantes de células-tronco em defeitos da cartilagem, que pode ser visualizado com ressonância magnética. As células estaminais são rotulados com FDA-approved Ferumoxides, misturado com agarose, implantado em defeitos da cartilagem e fotografada com um scanner MR 7T.

Resumo

O campo da engenharia de tecidos integra os princípios da engenharia de biologia celular e medicina para a regeneração de células e tecidos específicos funcional. Matriz associada implantes de células-tronco (MASI) visam regenerar defeitos da cartilagem devido à artrite traumática ou lesões nas articulações. Células-tronco adultas mesenquimais (CTMs) têm a capacidade de se diferenciar em células da linhagem condrogênicos e têm mostrado resultados promissores para celular baseado em tecnologias de reparação da cartilagem articular. Autólogo MSCs pode ser isolado de uma variedade de tecidos, pode ser expandida em culturas de células, sem perder seu potencial de diferenciação, e demonstraram diferenciação condrogênicos in vitro e in vivo ^{1, 2.}

A fim de proporcionar a retenção local e viabilidade de MSCs transplantado em defeitos de cartilagem, um andaime é necessário, que também suporta a diferenciação e proliferação subsequente. A arquitetura da formação de tecido scaffold guias e permite a matriz extracelular, produzida pelas células-tronco, a se expandir. Investigações anteriores demonstraram que a 2% agarose andaime pode apoiar o desenvolvimento de cartilagem hialina estável e não induzir respostas imunes ^3.

Retenção a longo prazo de células-tronco transplantadas em MASI é fundamental para a regeneração da cartilagem. Rotulagem de CTMs com nanopartículas de óxido de ferro permite a longo prazo no rastreamento vivo com técnicas não invasivas RM ^4.

Esta apresentação vai demonstrar técnicas para a rotulagem MSCs com nanopartículas de óxido de ferro, a geração de células-agarose construções e implantação dessas construções em defeitos da cartilagem. As construções rotulado pode ser rastreado de forma não invasiva com MR-Imaging.

Protocolo

1. Rotulagem de hMSCs com Endorem

1. As células são cultivadas a 80% confluência pelo menos 18 horas antes de rotulagem.
2. Durante este tempo, a mídia rotulagem é preparada adicionando Endorem à amostra com uma dose de 100 ug Fe / ml de soro livre de mídia.
3. Depois que as células são cultivadas de confluência, a cultura da mídia é aspirado e as células são lavadas com PBS 1x ou soro livre de mídia.
4. Em seguida, enxágüe a solução é aspirada e da mídia rotulagem previamente preparado é adicionado. As células são então incubados a 37 ° C, 5% de CO ₂ para 4 horas.
5. Após a incubação de 4 horas, rotulagem mídia é aspira....

Discussão

O protocolo descrito fornece uma maneira reproduzível para rotular MSCs com nanopartículas de óxido de ferro e implante essas MSCs rotulados em defeitos da cartilagem. Essa técnica permite não-invasivo representação de transplantes de células-tronco em defeitos da cartilagem com ressonância magnética, que permite uma detecção precoce de falha MASI. A luxação ou de efluxo das células marcadas pode ser diagnosticada com base em um desaparecimento do rótulo do site transplante em imagens de MR. Um diagnóstico precoce desse.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
D-MEM Alto Teor de Glicose	Reagente	Sigma-Aldrich	D5648
PBS (sem Ca++, Mg++)		GIBCO, por Life Technologies	14190-144
Tripsina-EDTA 0,05%		Invitrogen	25399-120
SFB		Hyclone	SH30071.03
Penicilina/Estreptomicina		GIBCO, por Life Technologies	15140-122
Ferumoxidas (Endorem)		Guerbet
Agarose Tipo VII		Sigma-Aldrich	A9045	Diluir agarose em PBS até concentração final de 4%