Este protocolo demonstra métodos para a extração de espermatozóides dos testículos dos machos e depois inseminação camundongos fêmeas. Este procedimento é útil quando o tempo preciso é necessário em estudos de desenvolvimento bem como o trabalho transgênicos.
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Artigo de método
Sperm colheita e Inseminação Artificial de Ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Roedores do gênero Peromyscus (ratos de cervos) são os mais prevalentes mamíferos nativos da América do Norte. Peromyscus espécies são usadas em uma ampla gama de investigação, incluindo toxicologia, epidemiologia, ecologia, comportamento, e estudos genéticos. Aqui eles fornecem um modelo útil para demonstrações de inseminação artificial.
Métodos semelhantes aos apresentados aqui foram usadas anteriormente em estudos com ratos vários veados, mas nenhum protocolo detalhado foi publicado. Aqui demonstramos o método básico de inseminação artificial. Este método consiste na extração dos testículos dos roedores, em seguida, isolar os espermatozóides do epidídimo e canal deferente. O espermatozóide maduro, agora em uma mistura de leite, são colocados no aparelho reprodutivo da fêmea no momento da ovulação. Fertilização é contado como 0 dias para o sincronismo do desenvolvimento embrionário. Embriões pode ser recuperado no tempo desejado ponto-e manipulado.
A inseminação artificial pode ser usado em uma variedade de espécies de roedores onde o tempo exato de embriões é crucial ou difícil de obter. Esta técnica é vital para as espécies ou variedades (incluindo a maioria Peromyscus) que não podem companheiro imediatamente e / ou onde o acasalamento é difícil de avaliar. Além disso, a inseminação artificial proporciona tempo exato para o desenvolvimento do embrião ou no mapeamento progresso do desenvolvimento e / ou trabalho transgênicos. Redução do número de animais pode ser usado desde a fecundação é garantida. Este método tem sido vital para promover o sistema Peromyscus, e esperamos beneficiar os outros também.
Protocolo
Inseminação artificial
A inseminação artificial é usado em vez de cruzamentos naturais para aumentar as chances de que todas as fêmeas têm ficará grávida. Dois do sexo masculino foi usado para cada um fêmeas superovuladas ou uma mulher conhecida por estar no cio. Os epidídimos caudae de camundongos machos adultos foram colocados em uma suspensão de leite 9% e cortados aberto com 18 agulhas. O esperma foi permitido nadar livremente por alguns minutos e depois o epidídimos foram tomadas a partir da mistura. A suspensão foi avaliada com um microscópio de confluência e espermatozóides móveis. A bitola 22 blunt 1 ½ polegada de comprimento agulha....
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Agradecimentos
Gostaria de agradecer a Mike Dewey do Centro de Ações Peromyscus Genéticos para a sua percepção de valor, paciência e conhecimento sobre a reprodução de roedores.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Placa de Petri | Ferramenta | Fisher Scientific | 08-772-30 | |
| Agulha 18 G | Ferramenta | BD Biosciences | 305195 | |
| Leite em pó | Reagente | Qualquer fornecedor | ||
| Seringa de 1 mL | Ferramenta | National Scientific Company | S7510-1 | |
| Pinça | Ferramenta | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5060 | |
| Tesoura | Ferramenta | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5882 | |
| Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco’s | Reagente | GIBCO, por Life Technologies | 14200-075 | |
| Agulha romba 22 G | Ferramenta | Give to me |
Reimpressões e permissões
