Este protocolo ilustra a técnica para extrair óvulos ou embriões em estágio inicial fertilizado do oviduto de camundongos. A capacidade de identificar o infindibulum e inserir uma agulha na extremidade sem corte, é essencial a correta execução do procedimento.
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Artigo de método
Recuperação de oócitos de camundongos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Até o momento, poucos estudos têm relatado manipulações sucesso da embriogênese Peromyscus ou biologia reprodutiva. Juntamente com o Peromyscus genética de Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), estamos caracterizando as diferenças importantes necessários para desenvolver este sistema. A meta principal tem sido a de otimizar oócito / recuperação embrionária precoce.
Protocolo
Embrião / oócito de recuperação
- Pelo menos duas horas antes da recuperação de embriões / óvulos, KSOM é colocado na 37 º C incubadora de CO 2 e FHM devem ser descongeladas de -20 °. Um prato de vidro contendo três poços rasos côncava é usada para casa de gotas KSOM na incubadora. Para evitar a desidratação, o KSOM e prato são colocados em um recipiente com tampa que tem água no fundo. Este aparelho evita a evaporação, sem o uso de óleo mineral.
- As tubas uterinas de uma fêmea a ovular são colocados na mídia FHM. Para garantir a orientação e um infindibulum intacto, uma pequena seção do ovário é cortado juntamente com a seção....
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Discussão
Neste artigo, demonstramos a recuperação de ovócitos de ovulação induzida (superovuladas) Peromyscus. O uso de superovulação (em oposição ao ciclo estral natural) é comum, devido ao número muito maior resultante. No entanto, o cuidado deve ser tomado na interpretação dos resultados utilizando oócitos tais / embriões, já que ambos os hormônios usados para induzir a ovulação e cultura podem ter efeitos.
Quando estral foi confirmado, as fêmeas são euthenized e tubas uterinas recuperados, juntamente com uma pequena porção de ovário. A.......
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Agradecimentos
Gostaria de agradecer a Mike Dewey do Centro de Ações Peromyscus Genéticos para a sua ajuda, paciência e conhecimento.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Agulha de lavagem | Ferramenta | Zephyrtronics | ZT5-130-L | 30 G cega |
| Pinceta (2) | Ferramenta | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5060 | |
| Peromyscus | Animal | Peromyscus Genetic Stock Center | ||
| Tesoura | Ferramenta | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5880 | |
| Meio tamponado com HEPES FHM | Reagente | Specialty Media | MR-025-d | |
| Meio de cultura embrionária KSOM (5x 10 mL) | Reagente | Specialty Media | MR-020P-5F | |
| Pipeta bucal | Ferramenta | Puxada de capilares de vidro e conectada a tubo de borracha | ||
| Placa de contenção de ovócitos | Ferramenta | Recipiente de vidro com reentrâncias côncavas |
Reimpressões e permissões
