Perfis plásticos manter morfologia do tecido verdadeiro em seções de tecido fino que pode ser imunocoloração com fluorescentes anticorpos secundários, tornando este método mais útil do que seções parafina ou congelados para muitos tipos de tecido. O método para a coloração, a incorporação de plástico, e secção é demonstrada neste vídeo.
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Artigo de método
Incorporação de plástico e secção de embriões Xenopus laevis
Neste artigo
Resumo
Protocolo
Fixação
- Transferência de embriões todo ou explantes dissecado em MEMFA ou 3,7% FA + PBS em um pequeno frasco de vidro de cintilação (Fisher cat # 03-339-25B). Incubar frasco na nutator na RT, somente por 2 horas, e não mais do que isso. Não deixe o embrião na FA por mais de duas horas. Mais incubação em FA fará o tecido embrionário mais difícil e resultar em uma penetração pobres de anticorpos no processo de detecção.
- Aspirar a maioria das FA e adicionar fixador Dent até o topo do frasco (~ 4,5 ml). Inverta suavemente o frasco para algumas vezes para lavar os embriões em Dent, a troca com outro 4.5ml de fresco Dent, e ....
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Materiais
Anticorpo primário contra o antígeno ou epítopo etiquetas: Faça uma diluição adequada em PBT. Biotina conjugado anticorpo secundário: biotina vários fornecedores vendem anticorpos conjugados.
Reimpressões e permissões
