Magnética modulação do sistema biosensoriamento é utilizada para rapidamente, com sensibilidade e simplesmente detectar ensaios biológicos, tais como moléculas de DNA e proteínas.
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Artigo de método
Detecção rápida de Homogêneos Ensaios Biológicos Usando o sistema de modulação Biossensoriais Magnetic
Neste artigo
Resumo
Resumo
A modulação do sistema magnético biosensoriamento (MMB) [1,2] de forma rápida e homogênea alvos biológicos detectados em baixas concentrações sem lavar ou etapa de separação. Quando a IL-8 alvo estava presente, um "ensaio sandwich baseado esferas magnéticas associadas com IL-8 anticorpo de captura para estreptavidina acoplado a proteína fluorescente através da IL-8 alvo e um IL-8 biotinilado de anticorpos. O esferas magnéticas são manobrados em movimento oscilatório, aplicando um gradiente de campo magnético alternado através de dois pólos eletromagnéticos. As proteínas fluorescentes, que são ligados às esferas magnéticas são condensados para a área de detecção e seu movimento dentro e fora de um feixe de laser ortogonal produz um sinal periódico fluorescente que é demodulado usando a detecção síncrona. O sistema de modulação biosensoriamento magnética foi usada anteriormente para detectar as seqüências de codificação das proteínas não estruturais do vírus Ibaraki 3 (NS3) DNA complementar (cDNA) [2]. As técnicas que são demonstradas neste trabalho para manipulação externa e condensação das partículas pode ser usado para outras aplicações, por exemplo, entrega de medicamentos magneticamente acoplada
Protocolo
IL-8 ensaio:
- A mistura de reação foram as seguintes quatro componentes em 100 mL de volume final de tampão de ensaio em suas respectivas concentrações. 10 ml de esferas magnéticas com anticorpo de captura menos 100 esferas / mL concentrações final, 2 l da IL-8 anticorpo biotinilado em 1 nano-gram/μl concentração final, 1 ml de estreptavidina proteína fluorescente em 20 nano-gram/μl concentração final, e 1 mL de IL-8-alvo em 0,48 pico-gram/μl. Os componentes são adicionados um por um para o tampão de ensaio e são em seguida agitado por 30 minutos.
- A reação de controle é preparado da mesma maneira sem a IL-8 alvo.
- As reacções são depois c....
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Discussão
Em resumo, nós mostramos que o sistema MMB pode ser usado para detectar a presença de IL-8-alvo em baixas concentrações (0,5 pico gram-é o limite de detecção do Bio-Plex Precision ensaios de citocinas Pro [3,4]). A capacidade do sistema não se limita a IL-8 e pode ser usado para detectar outras proteínas. As vantagens do sistema de MMB são a capacidade de detectar o alvo rapidamente e sem qualquer separação ou lavagem. Assim, facilita o processo de detecção e permite que o sistema a ser utilizado em aplicações de campo.
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Agradecimentos
Este trabalho foi parcialmente financiado pelo Fundo Horowitz Isha.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Conjunto Bio-Plex Pro Citoquina Humana IL-8 | Bio-Rad | 171-B5008M | |
| Alvo recombinante humano IL-8 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | R202625 | |
| Anticorpo monoclonal biotinilado de camundongo anti IL-8 humano G265-8 | BD Biosciences | 554718 | |
| Proteína fluorescente conjugada à estreptavidina | Bio-Rad | Streptavidin PE |
Referências
- Danielli, A., Arie, A., Porat, N., Ehrlich, M. Detection of fluorescent-labeled probes at sub-picomolar concentrations by magnetic modulation. Optics Express. 16, 19253-19259 (2008).
- Danielli, A., Porat, N., Arie, A., Ehrlich, M.
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Reimpressões e permissões
