$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
IL-8 ensaio:
- A mistura de reação foram as seguintes quatro componentes em 100 mL de volume final de tampão de ensaio em suas respectivas concentrações. 10 ml de esferas magnéticas com anticorpo de captura menos 100 esferas / mL concentrações final, 2 l da IL-8 anticorpo biotinilado em 1 nano-gram/μl concentração final, 1 ml de estreptavidina proteína fluorescente em 20 nano-gram/μl concentração final, e 1 mL de IL-8-alvo em 0,48 pico-gram/μl. Os componentes são adicionados um por um para o tampão de ensaio e são em seguida agitado por 30 minutos.
- A reação de controle é preparado da mesma maneira sem a IL-8 alvo.
- As reacções são depois colocados sem qualquer separação ou etapa de lavagem na cubetas e inspecionados utilizando o sistema de MMB.
Sistema de MMB:
- Coloque a cubeta na sua posição entre os dois pólos eletromagnéticos.
- Operar o atual modulação e aguarde 30 segundos para permitir a agregação e condensação das esferas
- Medir o sinal do amplificador lock-in usando um osciloscópio.
Resultados representativos:
Inspeção visual das contas agregadas apresentou uma nítida diferença entre a reação com o destino ea reação sem o alvo. Em todas as reações com o alvo, os grânulos formado um agregado único e denso que se movia dentro e fora do raio laser de forma unir. No entanto, em toda a reação sem o alvo, as contas eram menos agregadas e seu movimento era menos unir (ver Figura 1).
Figura 1: inspecção visual de imunoensaio o sanduíche '(a) sem o alvo IL-8 (b) Com o objectivo de IL-8.
O relógio de modulação pole (amarelo) eo sinal de saída PMT (magenta), enquanto a detecção de 0,48 IL-8 pico gram-alvo são apresentados na Figura 1 (a). A freqüência de modulação para cada pólo é a 2 Hz. No entanto, como era teoricamente esperado, quando as contas passar o feixe de laser, a PMT detecta a luz fluorescente e há um pico na tensão de saída PMT. Portanto, a frequência de demodulação é a 4 Hz. Quando o sinal de PMT eo relógio dobrou modulação (a 4 Hz) são alimentados para o bloqueio no amplificador, o detector de fase sensível detecta a sincronização e resultados com alta tensão (ver figura 2).
Figura 2: (a) do relógio, a modulação (amarelo) eo sinal de PMT (magenta) quando a detecção de 0,48 pico gram-IL-8 alvo. (B) O bloqueio resultou em tensão do amplificador de dois exames diferentes.
O bloqueio no amplificador não detectaram qualquer sinal quando a amostra controle foi testado. Este facto, juntamente com a diferença visual na agregação sugere que o sistema MMB pode identificar claramente a presença de IL-8 alvo.