Seccionamento fina de Preparações Slice para Imunohistoquímica

Resumo

O presente método permite criostato reprodutíveis corte de pequenas peças, difíceis de gerenciar, de tecidos, tais como biópsias e fatias de cérebro. Nós utilizamos um estágio de congelamento simples de alumínio para facilitar a manipulação de tecido e um criostato padrão para produzir seções rotineiramente micron 10/05 de série a partir de 400 micron fatias de cérebro de espessura.

Resumo

Muitas investigações em neurociência, assim como outras disciplinas, envolvem o estudo pequeno, ainda peças macroscópicas ou secções do tecido que foram preservados, recém-retirado, ou cortado, mas manteve viável, como em preparações fatia de tecido cerebral. Subseqüentes estudos microscópicos deste material pode ser um desafio, como as amostras de tecido pode ser difícil de manusear. Demonstrado aqui é um método para a obtenção de seções criostato fina de tecido com uma espessura que pode variar 0,2-5,0 mm. Rotineiramente cortar 400 micron fatias de cérebro de espessura Vibratome série em 50-10 micron seções criostato coronal. As fatias são normalmente utilizados pela primeira vez para experimentos de eletrofisiologia e, em seguida, exigem uma análise microscópica da citoarquitetura da região a partir do qual as gravações foram observados. Construímos um dispositivo simples que permite a preparação controlada e reprodutível e posicionamento da fatia de tecido. Este dispositivo consiste de um cilindro de 5 cm de comprimento com um diâmetro de 1,2 cm, que serve como um estágio de congelamento da fatia. Um anel confortavelmente desliza sobre as paredes do cilindro em torno do fornecimento de fatia permitindo que o tecido a ser imerso em composto de congelamento (por exemplo, OCT). Este é, então, rapidamente congelados em gelo seco esmagado eo wafer resultante pode ser facilmente para a posição de corte do criostato. Seções finas podem ser descongelar montado em lâminas revestidas para permitir que novos estudos a serem realizados, como vários métodos de coloração, hibridização in situ, ou imuno-histoquímica, como demonstrado aqui.

Protocolo

1. Prepare o molde da fita para a plataforma de outubro
2. Preencha o molde com outubro Congelar dentro criostato ou usando gelo seco esmagado.
3. Retire a fita em torno da plataforma outubro congelados.
4. Alinhe as marcas de congelamento e chuck estágio criostato de montagem e fechamento de mandril.
5. Secção da plataforma de outubro até a superfície é plana.
6. Remover ressurgiu plataforma de outubro e coloque em criostato estágio de congelamento.
7. Colocar a amostra de tecido (previamente criopreservados com glicerol 30% ou sacarose em PBS), em outubro
8. Preparar a coluna de congelamento com anel externo projetando cerca de 5 mm ac....

Discussão

O protocolo apresentado aqui fornece aos pesquisadores uma concisa, fácil de seguir esboço de como obter seções criostato fina de pequenas peças, difíceis de gerenciar, de tecidos, tais como biópsias e fatias de cérebro de novos estudos a serem realizados, tais como vários métodos de coloração, hibridização in situ, ou imuno-histoquímica.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
O. C. T.	Ted Pella, Inc.	27050
Solução de Glicerol			30% Glycerol Solution in PBS w/v
Solução de Sacarose			30% Sucrose Solution in PBS w/v