Ensaio Metástase Experimental

Summary

Este artigo descreve os procedimentos de um ensaio de metástase experimental que é usado para determinar o potencial metastático de linhagens de células humanas de câncer.

Abstract

Metástase é a principal causa de morte em pacientes com câncer. Para entender o mecanismo de metástases, um ensaio de metástase experimental foi estabelecida usando camundongos imunodeficientes. Este artigo delineia os procedimentos envolvidos neste ensaio, incluindo a preparação da amostra, injeção intravenosa, e a cultura de células de metástases pulmonares. Resumidamente, um número pré-determinado de células humanas de câncer foram preparados

Protocol

1. Preparação da Amostra

1. Cultivar células confluentes para ~ 70% em seus meios específicos, com fatores de crescimento ou FBS (por exemplo, DMEM com SFB 10% para MC-1 células). Aspirar a mídia da placa e lavar cuidadosamente várias vezes com um x PBS (8 g / L de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na ₂ HPO ₄ .7 H ₂ O, 0,2 g / L de KH ₂ PO _4, pH 7,3).
2. Aspirar PBS e adicionar 2 ml de tripsina 0,05% em versene (0,014 g / L de vermelho de fenol e 0,2 g / L de EDTA-Na em 1 x PBS, pH 7,2). Agite levemente placa para facilitar o desapego célula de prato. Observe as células sob um microscópio. Ele ....

Discussion

Metástase é a principal causa de morte em pacientes com câncer. Trata-se de quatro etapas principais: separação de células de câncer de seus loci primários, sua entrada em circulação (intravasation), sua saída de circulação (extravasamento), e sobrevivência e crescimento em um órgão distante. Metástase em humanos é considerada um processo lento e muitas vezes se manifesta após anos de latência. Para estudar a sua progressão em tempo hábil, o ensaio relativamente rápido acima experimental foi estabelecida em ratos imunod.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM	Invitrogen	10313-021
FBS	Hyclone	SH30088.03
HBSS	Invitrogen	14175-095
NaCl	Sigma-Aldrich	S9888
KCl	Mallinckrodt Baker Inc.	6838-04
Na2 HPO4.7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	7896-04
KH2PO4	Mallinckrodt Baker Inc.	7100-12
Vermelho de fenol	Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na	EMD Millipore	4010
Azul de tripano	Invitrogen	15250-061
Tripsina 2,5%	Invitrogen	15090-046
Etanol	Ultrapuro	200-CSGP
50 ml Falcon Tube	VWR international	89039-656
Tubos de Microcentrífuga	Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70μ Filtro de células m	BD Biosciences	352350
Tubo de cultura de falcão de 5 ml	VWR international	60818-576
Hemacitômetro	Hausser Scientific	15170-208
Seringa de 1 ml	BD Biosciences	329650
30 ½ agulha de calibre	BD Biosciences	305106
Conector de mouse	Plas Labs Inc.	551-BSRR
Tesoura cirúrgica	Fisher Scientific	08-940
Fórceps	Fisher Scientific	08-902
Microscópio de dissecação	Nikon Instruments	SMZ1500
Centrífuga de bancada	Thermo Fisher Scientific, Inc.