Este artigo descreve os procedimentos de um ensaio de metástase experimental que é usado para determinar o potencial metastático de linhagens de células humanas de câncer.
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Resumo
Resumo
Metástase é a principal causa de morte em pacientes com câncer. Para entender o mecanismo de metástases, um ensaio de metástase experimental foi estabelecida usando camundongos imunodeficientes. Este artigo delineia os procedimentos envolvidos neste ensaio, incluindo a preparação da amostra, injeção intravenosa, e a cultura de células de metástases pulmonares. Resumidamente, um número pré-determinado de células humanas de câncer foram preparados
Protocolo
1. Preparação da Amostra
- Cultivar células confluentes para ~ 70% em seus meios específicos, com fatores de crescimento ou FBS (por exemplo, DMEM com SFB 10% para MC-1 células). Aspirar a mídia da placa e lavar cuidadosamente várias vezes com um x PBS (8 g / L de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3).
- Aspirar PBS e adicionar 2 ml de tripsina 0,05% em versene (0,014 g / L de vermelho de fenol e 0,2 g / L de EDTA-Na em 1 x PBS, pH 7,2). Agite levemente placa para facilitar o desapego célula de prato. Observe as células sob um microscópio. Ele ....
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Discussão
Metástase é a principal causa de morte em pacientes com câncer. Trata-se de quatro etapas principais: separação de células de câncer de seus loci primários, sua entrada em circulação (intravasation), sua saída de circulação (extravasamento), e sobrevivência e crescimento em um órgão distante. Metástase em humanos é considerada um processo lento e muitas vezes se manifesta após anos de latência. Para estudar a sua progressão em tempo hábil, o ensaio relativamente rápido acima experimental foi estabelecida em ratos imunod.......
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Agradecimentos
Este protocolo foi testado e otimizado inicialmente no laboratório do Dr. Richard Hynes (MIT). Financiamento é assegurado pelo Prêmio IDEA NYSTEM (para LX) e Ruth L. Kirschstein Prêmio Nacional de Serviço de Investigação (para LX).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| Fenol vermelho | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| Azul de tripano | Invitrogen | 15250-061 | |
| Tripsina 2,5% | Invitrogen | 15090-046 | |
| Etanol | Ultrapuro | 200-CSGP | |
| Tubo Falcon de 50 ml | VWR international | 89039-656 | |
| Tubos de microcentrífuga | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| Peneira celular Falcon de 70μm | BD Biosciences | 352350 | |
| Tubo de cultura Falcon de 5 ml | VWR international | 60818-576 | |
| Hemocitômetro | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| Seringa de 1 ml | BD Biosciences | 329650 | |
| Agulha de calibre 30 ½ | BD Biosciences | 305106 | |
| Restritor para camundongo | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| Tesoura cirúrgica | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pinça | Fisher Scientific | 08-902 | |
| Microsscópio de dissecação | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| Centrífuga de bancada | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
Referências
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
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Reimpressões e permissões
