Xenopus embrionárias epitélios são um sistema modelo ideal para estudar os comportamentos das células, como o desenvolvimento de polaridade e mudar de forma durante a morfogênese epitelial. Histologia tradicional de amostras fixa é cada vez mais sendo complementado por live-célula de imagem confocal. Aqui nós demonstrar os métodos para isolar os tecidos de rã e visualizar ao vivo as células epiteliais e seus citoesqueleto usando live-célula microscopia confocal.
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Artigo de método
Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis
Neste artigo
Resumo
Resumo
Embrionárias células epiteliais servir como um modelo ideal para estudar a morfogênese em tecidos multicelulares sofrer alterações em sua geometria, tais como mudanças na área da superfície celular e altura da célula, e onde as células sofrem mitose e migram. Além disso, as células epiteliais também podem regular os movimentos morfogenéticos em tecidos adjacentes
Protocolo
Antes de começar
- Sintetizar mRNA capped do modelo linearizado de DNA que codifica a proteína fluorescente etiquetado e mRNA purificar por métodos padrão (AmpliCap kit de transcrição; Biotecnologias Epicentro, Madison WI). mRNA devem ser aliquotado para utilização única vez em 0,2 ml tubos de centrifugação e armazenadas a -80 ° C.
- Métodos padronizados para obtenção dos ovos, fertilização in vitro, e remoção da camada de ovos foram descritos anteriormente 2. Um procedimento para obtenção dos ovos de Xenopus laevis um sapo fêmea tem sido demonstrado anteriormente 3. Fertilizar óvulos
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Discussão
Nós apresentamos protocolos experimentais usados regularmente em nosso laboratório para citoesqueleto imagem dinamicamente mudando no córtex celular apical e oscilantes membranas celulares das células epiteliais em embriões Xenopus. Deve-se usar estes protocolos como ponto de partida para geração de imagens ao vivo de formas de células epiteliais; otimização deste protocolo é essencial e algumas das configurações irá mudar, dependendo do tipo de sistema de microscópio tem uma e do tipo de proteínas é um inter.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por um dos Institutos Nacionais de Saúde (R01-HD044750), uma doação de CARREIRA do National Science Foundation e apoio da American Heart Association (Começando Grant-in-aid). Os autores agradecem membros Davidson Lab: HY Kim, M. e J. von Dassow Zhou (para ajudar com as responsabilidades do laboratório por dia), e Lin Zhang por sua assistência em biologia molecular e síntese de mRNA. Reconhecemos os esforços experimentais de todos os laboratórios de sapo (especialmente Ray Keller e Doug DeSimone), que têm contribuído para alguma parte deste protocolo, através do desenvolvimento e teste de vários métodos ao longo dos anos. Agradecemos a Ric....
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Referências
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , Academic Press. New York. (1991).
- Cross, M. K., Powers, M.
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Reimpressões e permissões
