Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis</em

Summary

Xenopus embrionárias epitélios são um sistema modelo ideal para estudar os comportamentos das células, como o desenvolvimento de polaridade e mudar de forma durante a morfogênese epitelial. Histologia tradicional de amostras fixa é cada vez mais sendo complementado por live-célula de imagem confocal. Aqui nós demonstrar os métodos para isolar os tecidos de rã e visualizar ao vivo as células epiteliais e seus citoesqueleto usando live-célula microscopia confocal.

Abstract

Embrionárias células epiteliais servir como um modelo ideal para estudar a morfogênese em tecidos multicelulares sofrer alterações em sua geometria, tais como mudanças na área da superfície celular e altura da célula, e onde as células sofrem mitose e migram. Além disso, as células epiteliais também podem regular os movimentos morfogenéticos em tecidos adjacentes

Protocol

Antes de começar

1. Sintetizar mRNA capped do modelo linearizado de DNA que codifica a proteína fluorescente etiquetado e mRNA purificar por métodos padrão (AmpliCap kit de transcrição; Biotecnologias Epicentro, Madison WI). mRNA devem ser aliquotado para utilização única vez em 0,2 ml tubos de centrifugação e armazenadas a -80 ° C.
2. Métodos padronizados para obtenção dos ovos, fertilização in vitro, e remoção da camada de ovos foram descritos anteriormente ^2. Um procedimento para obtenção dos ovos de Xenopus laevis um sapo fêmea tem sido demonstrado anteriormente ^3. Fertilizar óvulos

Discussion

Nós apresentamos protocolos experimentais usados ​​regularmente em nosso laboratório para citoesqueleto imagem dinamicamente mudando no córtex celular apical e oscilantes membranas celulares das células epiteliais em embriões Xenopus. Deve-se usar estes protocolos como ponto de partida para geração de imagens ao vivo de formas de células epiteliais; otimização deste protocolo é essencial e algumas das configurações irá mudar, dependendo do tipo de sistema de microscópio tem uma e do tipo de proteínas é um inter.......